PRINCIPIO ACTIVO INNOVADOR Y HUMANISTA

INFORME DE PRACTICA

CARRERA PROFESIONAL DE AGRONOMIA

ASIGNATURA

FISIOLOGIA VEGETAL

DOCENTE

JORGE MUÑOZ MARTICORENA

PRESENTADO POR
GALVEZ VICERREL KEYLA

MANRIQUE ROMERO EDWIN

JOAQUIN FERNANDEZ JOFFRE

V CICLO – NOCHE

2019
 EXTRACCIÓN, SEPARACIÓN Y PROPIEDADES DE LOS
PIGMENTOS QUE INTERVIENEN EN LA FOTOSINTESIS

I. INTRODUCCION

La fotosíntesis cumple un papel importante en el metabolismo de las plantas, por medio

de la cual se realizan una serie de procesos físicos – químicos para transformar la energía
solar, el CO2 en partes constitutivas de las plantas a través de las reducciones
incorporándolos en hidratos de carbono.

La primera etapa (procesos primarios) consideran acción coordinada de los pigmentos

pigmentarios (fotosistema I y II) en la fotolisis del agua y en el transporte electrónico
(cíclico y no cíclico) con el objeto de formar compuestos de alta energía ATP y de gran
poder reductor NADPH necesarios en los procesos secundarios proporcionando energía ,
reduciendo CO2 fijado mediante una serie de reacciones y de compuestos intermedios
secuenciales con la finalidad de fomentar finalmente los diferentes fotosintatos para la
nutrición de la planta .

Para demostrar la importancia de este proceso se han diseñado tres experimentos

sencillos, pero bastante prácticos para entender mejor este proceso.

II. OBJETIVO
 Extraer y separa de hojas, los pigmentos que participan en la fotosíntesis: clorofila
a, clorofila b, caroteno y xantofila.
 Determinar el color, fluorescencia y espectro de absorción
III. MATERIALES Y METODOS
 Hojas frescas
 Mortero de porcelana
 Embudo de buchner
 Bomba de vacío
 Material de vidrio (tubos de ensayo y frasquitos con tapa, beakers, pipetas, pipetas
Pasteur, etc.)
 Solventes orgánicos: acetona, éter de petróleo, metanol, éter etílico
 Hidróxido de potasio
 Lámpara de luz ultravioleta
 Cámara oscura
  Espectrofotómetro

Procedimiento:

Para este experimento usamos la hoja de acalifa roja.

Se lavó las hojas, se cortó en pequeños tamaños y se separó las nervaduras para que
facilite al momento de moler. La cantidad a utilizar fue 10 gramos.

Moler las hojas en un mortero de porcelana, hasta que quede bien la masa luego verter
20ml de acetona al 80% fría (de 0° a 40°C).

La preparación consistente vertida con acetona debe ser filtrada con la bomba al vacío
con el embudo de buchner (para acelerar la filtración), luego se debe lavar mientras filtra
con 20ml más de acetona al 80% fría. El extracto acetónico contendrá los pigmentos
fotosintetizantes y otras sustancias.
Verter 10ml de éter de petróleo a un tubo de ensayo y luego 10ml del extracto acetónico,
agitar por unos segundos con mucho cuidado, dejar reposar por dos minutos y observar
las capas bien definidas. por lo general la capa superior se encuentra de color verde oscuro
y contendrá las clorofilas (a y b) y carotenoides (caroteno, xantofila) disueltos en éter de
petróleo, mientras que la capa inferior es acetona conteniendo otros pigmentos
(antocianinas y betalainas) y sustancias hidrosolubles. Esta capa inferior se descarta.
Agregar 10ml de etanol al 92%, con mucho cuidado (alcohol es altamente tóxico),
mezclar cuidadosamente, otra vez se forma dos capas. En la capa superior contendrá
disueltas en éter de petróleo (no polar) la clorofila a y el caroteno (hidrofóbicos), mientras
que en la capa inferior estarán la clorofila b y la xantofila disueltas en metanol, que es un
solvente polar.
La capa inferior se transfiere al tubo de ensayo sin dejar caer liquido de la parte superior.
Ahora se tienen dos tubos. En el tubo A esta la clorofila a y el caroteno que por su carácter
hidrofóbico están disueltos en un solvente no polar, el éter de petróleo. En el tubo b se
tiene clorofila b y xantofila disueltos en un solvente polar.

Al tubo B se le agrego 10ml de éter etílico y se formó dos capas, en la parte superior
clorofila b y xantofila y en la capa inferior queda metanol más agua.

Se pone en la pera de decantación para separar la parte superior de la inferior. En el tubo

de ensayo solo va la parte superior, que contiene éter con clorofila b más xantofila.
En ambos tubos se vierten A Y B se vierten a cada uno 5ml de KOH (hidróxido de potasio)
al 30% en metanol recientemente preparado, sacudir vigorosamente y dejar reposar
durante dos minutos. en cada tubo se formarán dos capas bien definidas.

En el tubo A: éter de petróleo en la capa superior conteniendo disuelto el caroteno y en

la capa inferior metanol con la capa de clorofila a.

En el tubo B: en la parte superior éter de petróleo y xantofila mientras que en la parte

inferior contiene clorofila b más metanol.

Los diferentes pigmentos se separan usando la pera de decantación y se trasvasa a otros

tubos de prueba o pomitos y se observaran las ondas electromagnéticas a través del
espectrofotómetro.
Espectros de absorción:

Con el espectrofotómetro, medir la absorción de cada pigmento a diferentes longitudes

de onda entre (400 a 700).

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Pigmento / 400 nm 410 nm 420 nm 440 nm 460 nm

longitud
Clorofila a 1.916 1.739 1.607 1.47 1.3
Clorofila b 3.948 3.384 3.67 3.126 0.742
Xantofila -0.056 -0.044 -0.037 -0.027 -0.020
Caroteno -0.016 -0.029 -0.016 -0.025 -0.010

Pigmento / 480 nm 500nm 550 nm 600nm 650 nm 700 nm

longitud
Clorofila a 1.201 1.284 1.306 1.361 1.372 1.257
Clorofila b 0.111 0.076 0.099 0.174 0.001 -0.013
Xantofila -0.016 -0.014 -0.012 -0.008 -0.007 -0.006
Caroteno -0.007 -0.014 -0.014 -0.001 -0.007 -0.016

IV. CONCLUSIONES
V. REFERENCIAS