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UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS Formatted: Font: 15 pt, Bold

(Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA) Formatted: Line spacing: single


Formatted: Font: 13 pt
Formatted: Font: 13 pt
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
Formatted: Font: 14 pt

E.A.PSCUELA PROFESIONAL . DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Formatted: Font: 12 pt


Formatted: Font: 12 pt
Formatted: Font: 12 pt

CARACTERIZACIÓN DE ACTINOMICETOS RIZOSFÉRICOS

AISLADOS DE CULTIVOS ORGÁNICOS DE PAPA NATIVA

Solanum tuberosum, L., L Y EVALUACIÓN DE SUS Formatted: Font: 15 pt, Italic


Formatted: Font: 15 pt, Not Italic

ACTIVIDAD ANTAGONISTA FRENTE A Phytophthora

infestans (MONT) DE BARY(MONT.) de BARY Formatted: Font: 15 pt, Not Italic

TESIS

Para optar al Título Profesional de

Bióloga Microbióloga Parasitóloga

Para optar el Título Profesional de Bióloga Microbióloga

Parasitóloga

AUTOR

Bach. Astrid Carolina Chumpitaz Bermejo

ASESOR
Formatted: Right
Jorge León Quispe

Lima - Perú

2019

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS Formatted: Font: 15 pt, Bold

(Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA) Formatted: Line spacing: single


Formatted: Font: 13 pt
Formatted: Font: 14 pt
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

E.A.PSCUELA PROFESIONAL . DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Formatted: Font: 12 pt


Formatted: Font: 12 pt

CARACTERIZACIÓN DE ACTINOMICETOS RIZOSFÉRICOS

AISLADOS DE CULTIVOS ORGÁNICOS DE PAPA NATIVA

Solanum tuberosum, L., L Y EVALUACIÓN DE SUS Formatted: Font: 15 pt, Italic


Formatted: Font: 15 pt, Not Italic

ACTIVIDAD ANTAGONISTA FRENTE A Phytophthora

infestans (MONT) DE BARY(MONT.) de BARY Formatted: Font: 15 pt, Not Italic

TESIS

Para optar al Título Profesional de

Formatted: Right
Bióloga Microbióloga ParasitólogaPara optar el Título Profesional de

Bióloga Microbióloga

Parasitóloga

AUTOR

Bach. Astrid Carolina Chumpitaz Bermejo

ASESOR

Magíster Jorge León Quispe

ASESOR

Jorge León Quispe

Lima - Perú

2019

Formatted: Right
Formatted: Left, Tab stops: 3.97", Left + 5.91", Right

Lima - P

Formatted: Right

Dedico esta tesis a mis padres Amparo y Gabriel, a mi abuelita Tomasa, a mi tía María

y y a César, por su apoyo constante durante mis 5 años de carrera. Los amo mucho.

A mis maestros por ser los que me enseñaron y motivaron a seguir estudiando

microbiología.

Solo un verdadero científico ama lo que hace.

A mi asesor por decir SI PUEDES, y creer en mí a pesar que me sentía sin fuerzas.

Este logro es para ustedes, el sacrificio a pesar de las dificultades siempre da buenos

frutos, Los amo mucho.

Formatted: Justified

Formatted: Centered

Formatted: Centered
Formatted: Left

Formatted: Centered

AGRADECIMIENTOS

 A mi Alma Máter, la Universidad Nacional Mayor de San Marcos por el Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: List Paragraph, Bulleted + Level: 1 + Aligned at:
financiamiento a través del Vicerrectorado de Investigación y Posgrado (VRIP) 0.25" + Indent at: 0.5"

en el Programa de Tesis de Pregrado (RR N° 06369-R-17). . Formatted: Font: (Default) Arial

A mi asesor Mag. Jorge León por darme la oportunidad de formar parte del Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: List Paragraph, Left, Adjust space between Latin
Laboratorio de Ecología Microbiana, por sus conocimientos y enseñanzas, por and Asian text, Adjust space between Asian text and numbers
Formatted: Font: (Default) Arial
permitirme conocer parte de su pueblo, Cabana-Ayacucho y por la confianza Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: Font: (Default) Arial
depositada para salir adelante.
Formatted: Font: (Default) Arial
 Formatted: List Paragraph, Bulleted + Level: 1 + Aligned at:
0.25" + Indent at: 0.5"
 A Dios por haberme dado todo, una familia, amistades, personas que amo y Formatted: Font: (Default) Arial

por darme la alegría para ver el lado positivo de las cosas, siempre sacar una

sonrisa a los demás.


Formatted: Centered
 Al Sr. Alejandro Delgado León de la comunidad de Cabana, agricultor de papas

por cultivos orgánicos, por las muestras proporcionadas y la identificación de

las variedades de papas nativas.

 Al Dr. Julio Santiago y a su colaboradora Marlene Velásquez del Laboratorio de Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: List Paragraph, Bulleted + Level: 1 + Aligned at:
Investigación de Química Orgánica de la UNMSM por el gran apoyo brindado. 0.25" + Indent at: 0.5"
Formatted: Font: (Default) Arial
 Al Blgo Wilbert Cruz Hilacondo de la Universidad Nacional Federico Villarreal

por su gran apoyo en el manejo de la cepa de Phytophthora infestans. Formatted: Font: Italic

 A mis amigos tesistas y compañeros del laboratorio de Ecología Microbiana:

Sarita, Carolina, Verónica, Junior y a todos los demás. Gracias por ser mi

segunda familia, gracias por todo lo compartido y por la ayuda brindada.

 A los miembros del Jurado de Tesis, por sus consejos, sus enseñanzas en mi Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: Font: (Default) Arial
época universitaria y en la revisión de la etapa final de este trabajo. Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: Justified, Line spacing: Double
 Finalmente, agradecer a todo aquel que en alguna forma ha contribuido a la
Formatted: Font: (Default) Arial
realización y culminación de este trabajo

Formatted: List Paragraph, Bulleted + Level: 1 + Aligned at:


0.25" + Indent at: 0.5"

A mis padres Amparo y Gabriel por ser mi fortaleza y mi ejemplo, gracias Formatted: Font: 12 pt

por haberme dado la oportunidad de estudiar y cumplir mis metas. Formatted: List Paragraph, Left, Line spacing: single, Adjust
space between Latin and Asian text, Adjust space between
A mi abuelita Tomasa por ser como una madre para mí y acogerme Asian text and numbers
cuando me sentía sola , a mis tíos en especial a mi tía María por
influenciar en mí en el mundo de biología.
A Cody por ser mi mejor amigo de cuatro patas y mi confidente.
A César por ser mi compañero, y enseñarme tanto del amor.
A mi asesor Jorge León por permitirme ser parte de su historia, de su
pueblo, de Cabana-Ayacucho, por la confianza depositada, por creer en
mi a pesar de todo.
A mis amigos del laboratorio de Ecología microbiana, especialmente a
Sarita por ser un gran apoyo y una gran amiga, a Carolina por ser como
mi hermana, su apoyo es inmenso, a Junior por ser un excelente guía en
la realización de mi tesis, y a todos los demás chicos por ser como mi
familia, los valoro demasiado.
A los profesores Pedro Castellanos, Abad Flores, Fernando de la Cruz,
por sus consejos, sus enseñanzas en mi época universitaria y en la
etapa final de la revisión de este trabajo.

Formatted: Centered
A mis “amiwis” de base y de fiestas Alys, Xio, Luchito. Gracias por enseñarme

una amistad sincera y por los ánimos, siempre podrán contar conmigo.

Finalmente, agradecer a todo aquel que en alguna forma ha contribuido a la

realización y culminación de este tra

ABREVIATURAS Formatted: Font: Bold

APD: Agar de patata y dextrosa CMI: Concentración mínima inhibitoria CPD: Caldo de Formatted: Font: (Default) Arial

patata y dextrosa CO2:AAC: Agar Almidón Caseína

DMSO: Dimetilsulfóxido

Dióxido de carbono CXC: Carboximetil celulosa DMSO: Dimetilsulfóxido DNA: Ácido Formatted: Font: (Default) Arial

desoxirribonucleico E.E.U.U: Estados Unidos g: Gramo G-CSF: Granulocyte Colony

Stimulating Factor (Factor estimulador de colonias de granulocitos). GM-CSF:

Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor (Factor estimulador de colonias de

granulocitos y madrófagos). i.p: Por via intraperitoneal i.v: Intravenosamente kg:

Kilogramo

m3 :m3: Metro cúbico Formatted: Font: (Default) Arial


Formatted: Superscript
M-CSF: Macrophages Colony Stimulating Factor (Factor estimulador de colonias de Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: Font: (Default) Arial
macrófagos). ml: Mililitro NCCLS:

National Comitee for Clinical Laboratory Standards PEG 200: Polietilenglicol 200 p.o: Formatted: Font: (Default) Arial

Por via oral RNA: Ácido ribonucleico

°C: Grados centígrados

A.C: Antes de Cristo

ADEX: Asociación de exportadores

Mm: Milímetro

µm: micrómetro

RFLP: Polimorfismo en la longitud de fragmentos de restricción


Formatted: Centered
Ssr: Repeticiones de secuencias simples o microsatélites

Km2: Kilómetro cuadrado Formatted: Superscript

CIP: Centro Internacional de la Papa

Ml: Mililitro

ISP: Internacional Streptomyces Project

CAB: Cabana

m.s.n.m: Metros sobre el nivel del mar

mg: Miligramo

MINCETUR: Ministerio de Comercio Exterior y Turismo

FAO: Food and Agriculture Organization

CONAM: Consejo Nacional del Ambiente

INTA: Instituto Nacional de Investigaciones Agropecuarias (ECUADOR)

Formatted: Centered
ÍINDICEContenido Formatted: Font: 14 pt, Bold, English (United States)

I Formatted: Centered, Indent: Left: 0.3", No bullets or


numbering
RESUMEN……………………………………………………………………………………………………………………………………....….1¡Er
Formatted: Font: (Default) +Body (Calibri), 11 pt, Not Bold,
ror! Referencia de hipervínculo no válida. Font color: Auto, English (United States)

1. ................................................................................................................................................................... 1 Formatted: Font: (Default) +Body (Calibri), 10 pt, Not Bold,


Font color: Auto, English (United States)
II INTRODUCCIÓN ................................................................................................................................... 6 Formatted: Font: (Default) +Body (Calibri), 10 pt, English
(United States)
III MARCO TEÓRICO ................................................................................................................................. 9
Field Code Changed
3.1 LA PAPA (Solanum tuberosum) ................................................................................................... 9
Field Code Changed
3.2 AGRICULTURA DE LA PAPA ....................................................................................................... 11 Formatted: Font: 10 pt, English (United States)

3.3 CULTIVOS ORGÁNICOS .............................................................................................................. 12 Field Code Changed


Formatted: Font: (Default) +Body (Calibri), 10 pt, Not Bold,
3.3.1 PAPAS NATIVAS .................................................................................................................. 7 English (United States)
3.3.2 VARIEDADES DE PAPAS NATIVAS ....................................................................................... 8 Field Code Changed
Formatted: Font: 10 pt, English (United States)
3.4 3.4 PROBLEMAS QUE AFECTAN EL DESARROLLO DEL CULTIVO DE Formatted: Font: (Default) +Body (Calibri), 10 pt, Not Bold,
PAPA…………………....……………….14 Italic, Spanish (Peru)

3.5 EL TIZÓN TARDÍO DE LA PAPA ..................................................................................................... 9


3.5.1. Phytophthora infestans..192
3.5.1.1 TAXONOMÍA…………………………………………………………………………………………..…………………12 Formatted: Normal, Tab stops: Not at 0.61" + 5.9"

3.5.1.2 MORFOLOGÍA…………………………………………………………………………………………………..……….13

3.5.1.3 CICLO BIOLÓGICO……………………………………………………………………………………..………………13

3.5.1.3.1 CICLO ASEXUAL……………………………………………………………………………………..…….14

3.5.1.3.2 CICLO SEXUAL………………………………………………………………………………………….…..14

3.5.1.4 VARIABILIDAD GENÉTICA DE Phytophthora infestans……………………………………………….15 Formatted: Font: 10 pt, Italic, No underline, Font color: Auto
Formatted: Font: 10 pt, Not Italic, No underline, Font color:
3.6 ACTINOMICETOS ..................................................................................................................... 235 Auto

3.6.1 EL ORDEN ACTINOMYCETALES ...............................................................................................235 Formatted: Font: 10 pt, Check spelling and grammar
Formatted: Tab stops: 0.61", Left
3.6.2 GÉNERO Streptomyces ................................................................................................... 16
Formatted: Font: 10 pt, No underline
3.6.2.1 GENERALIDADES TAXONÓMICAS…………………………………………………..……………………..…….16 Formatted: Normal, Tab stops: Not at 0.92" + 5.9"
Formatted: Default Paragraph Font, Font: 10 pt, Check
3.6.2.2 MORFOLOGÍA, Y CICLO DE VIDA ………………………..…….…………………………………………..…….17
spelling and grammar

3.6.2.3 ECOLOGÍA …………………………………………………………………………………………………………………18

3.7 COMPUESTOS BIOACTIVOS PRODUCIDOS POR Streptomyces SP…………...…………………................19 Formatted: Normal, Tab stops: Not at 0.61" + 5.9"
Formatted: Font: 10 pt, Check spelling and grammar
3.7.1 METABOLITOS SECUNDARIOS .......................................................................................... 19
3.7.2 ENZIMAS EXTRACELULARES ............................................................................................. 19
3.7.3 METABOLITOS CON CAPACIDAD ANTAGÓNICA ............................................................. 270
IV HIPÓTESIS Y OBJETIVOS ..................................................................................................................... 21
Formatted: Right
4.1. Hipótesis.......................................................................................................................................... 21
V FORMULACIÓN DE OBJETIVOS, GENERAL Y ESPECÍFICOS ...............................................................301
5.1 Objetivo general: .................................................................................................................... 301
5.2 Objetivos específicos: ............................................................................................................. 301
VI MATERIALES Y MÉTODOS ................................................................................................................ 312
6.1 MATERIALES ............................................................................................................................ 312
6.1.1 Material biológico ............................................................................................................ 22
6.2 MÉTODOS ....................................................................................................................................... 322
6.2.1 LOCALIDAD DE MUESTREO ............................................................................................ 322
6.2.2 TOMA DE MUESTRAS Y TRANSPORTE AL LABORATORIO DE TRABAJO .......................... 332
6.2.3 AISLAMIENTO ................................................................................................................. 333
6.2.4 SELECCIÓN DE COLONIAS DE ACTINOMICETOS ............................................................. 343
6.2.5 CONSERVACIÓN DE LOS CULTIVOS PUROS DE ACTINOMICETOS ..................................... 24
6.2.6 CARACTERIZACIÓN MORFOLÓGICA DE ACTINOMICETOS AISLADOS ............................... 24
6.2.7 DETERMINACIÓN HIDROLÍTICA Y ASIMILACIÓN DE CARBOHIDRATOS ............................ 24
6.2.8 CARACTERIZACIÓN FISIOLÓGICA ...................................................................................... 25
6.2.9 CARACTERIZACIÓN DE Phytophthora infestans ............................................................. 376
6.2.10 PRUEBA DE ANTAGONISMO DE ACTINOMICETOS VS. Phytophthora infestans............. 376
6.2.11 OBTENCIÓN DEL EXTRACTO ORGÁNICO ........................................................................ 387
6.2.12 DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTI- Phytophthora DE LOS EXTRACTOS ORGÁNICOS
27
VII RESULTADOS ...................................................................................................................................... 28
7.1 COLONIAS DE ACTINOMICETOS ................................................................................................ 28
7.2 CARACTERIZACIÓN FENOTÍPICA DE LOS AISLAMIENTOS .......................................................... 28
7.3 DETERMINACIÓN HIDROLÍTICA Y ASIMILACIÓN DE CARBOHIDRATOS ................................... 462
7.4 CARACTERIZACIÓN FISIOLÓGICA DE LOS ACTINOMICETOS .................................................... 547
7.4.1 Rango de crecimiento en función de la temperatura .................................................... 547
7.4.2 Rango de crecimiento en función del pH ...................................................................... 557
7.5 CARACTERIZACIÓN DE Phytophthora infestans ........................................................................ 39 Formatted: Font: 10 pt, Not Italic

7.6 PRUEBA DE ANTAGONISMO EN PLACA ................................................................................... 620


7.7 ACTIVIDAD ANTI-Phytophthora DE LOS EXTRACTOS ORGÁNICOS ......................................... 673
VIII DISCUSIÓN ....................................................................................................................................... 704
IX CONCLUSIONES ............................................................................................................................ 800
X RECOMENDACIONES ................................................................................................................... 821
XI REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ................................................................................................... 832
XII ANEXOS ......................................................................................................................................... 68

Formatted: Right
............................................................................................................................... RESUMEN Formatted: Font: 10 pt, No underline, Font color: Text 1
...................................................................................................................................................... 1 Formatted: Font: 10 pt
2 .................................................................................................................................................................... 1 Formatted: Heading 1, Outline numbered + Level: 1 +
Numbering Style: I, II, III, … + Start at: 1 + Alignment: Right
3 INTRODUCCIÓN ................................................................................................................................... 3 + Aligned at: 0" + Indent at: 0.3"
4 MARCO TEÓRICO ................................................................................................................................. 6
4.1 LA PAPA (Solanum tuberosum) ................................................................................................... 6
4.2 AGRICULTURA DE LA PAPA ......................................................................................................... 7
4.3 CULTIVOS ORGÁNICOS ................................................................................................................ 8
4.3.1 PAPAS NATIVAS .................................................................................................................. 9
4.3.2 VARIEDADES DE PAPAS NATIVAS ....................................................................................... 9
4.4 PROBLEMAS POR LOS QUE ATRAVIESA EL CULTIVO DE PAPA .................................................. 10
4.5 EL TIZÓN TARDÍO DE LA PAPA ................................................................................................... 12
Phytophthora infestans ............................................................................................................. 15
4.5.1 ................................................................................................................................................... 15
4.6 ACTINOMICETOS ....................................................................................................................... 19
El Orden Actinomycetales ......................................................................................................... 19
4.6.1 ................................................................................................................................................... 19
4.6.2 GÉNERO Streptomyces ..................................................................................................... 19
4.7 COMPUESTOS BIOACTIVOS PRODUCIDOS POR Streptomyces SP. ............................................ 22
4.7.1 METABOLITOS SECUNDARIOS .......................................................................................... 22
4.7.2 ENZIMAS EXTRACELULARES ............................................................................................. 22
4.7.3 METABOLITOS CON CAPACIDAD ANTAGÓNICA ............................................................... 23
5 HIPÓTESIS Y OBJETIVOS ..................................................................................................................... 25
4.1. Hipótesis.......................................................................................................................................... 25
6 FORMULACIÓN DE OBJETIVOS, GENERAL Y ESPECÍFICOS ................................................................. 25
6.1 Objetivo general: ...................................................................................................................... 25
6.2 Objetivos específicos: ............................................................................................................... 25
7 MATERIALES Y MÉTODOS .................................................................................................................. 26
7.1 MATERIALES .............................................................................................................................. 26
7.1.1 Material biológico ............................................................................................................ 26
MÉTODOS ...................................................................................................................................... 26
7.2 .......................................................................................................................................................... 26
7.2.1 LOCALIDAD DE MUESTREO .............................................................................................. 26
7.2.2 TOMA DE MUESTRAS Y TRANSPORTE AL LABORATORIO DE TRABAJO ............................ 26
7.2.3 AISLAMIENTO ................................................................................................................... 27
7.2.4 SELECCIÓN DE COLONIAS DE ACTINOMICETOS ............................................................... 27
7.2.5 CONSERVACIÓN DE LOS CULTIVOS PUROS DE ACTINOMICETOS ..................................... 28
Formatted: Right
7.2.6 CARACTERIZACIÓN MORFOLÓGICA DE ACTINOMICETOS AISLADOS ............................... 28
7.2.7 CARACTERIZACIÓN HIDROLÍTICA Y ASIMILACIÓN DE CARBOHIDRATOS .......................... 28
7.2.8 CARACTERIZACIÓN FISIOLÓGICA ...................................................................................... 29
7.2.9 CARACTERIZACIÓN DE Phytophthora infestans ............................................................... 30
7.2.10 PRUEBA DE ANTAGONISMO DE ACTINOMICETOS VS. Phytophthora infestans............... 30
7.2.11 OBTENCIÓN DEL EXTRACTO ORGÁNICO .......................................................................... 31
7.2.12 DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTI- Phytophthora DE LOS EXTRACTOS ORGÁNICOS
31
8 RESULTADOS ...................................................................................................................................... 32
8.1 COLONIAS DE ACTINOMICETOS ................................................................................................ 32
8.2 CARACTERIZACIÓN FENOTÍPICA DE LOS AISLAMIENTOS .......................................................... 32
8.2.1 Caracterización morfológica............................................................................................. 32
8.3 CARACTERIZACIÓN HIDROLÍTICA Y ASIMILACIÓN DE CARBOHIDRATOS .................................. 36
8.4 CARACTERIZACIÓN FISIOLÓGICA DE LOS ACTINOMICETOS ...................................................... 40
8.4.1 Rango de crecimiento en función de la temperatura ...................................................... 40
8.4.2 Rango de crecimiento en función del Ph.......................................................................... 40
8.5 CARACTERIZACIÓN DE Phytophthora infestans ........................................................................ 42
8.6 PRUEBA DE ANTAGONISMO EN PLACA ..................................................................................... 43
8.7 ACTIVIDAD ANTI-Phytophthora DE LOS EXTRACTOS ORGÁNICOS ........................................... 45
...................................................................................................................................................... DISCUSIÓN
.................................................................................................................................................................... 47
9 .................................................................................................................................................................. 47
8. DISCUSIÓN ......................................................................................................................................... 47
10 CONCLUSIONES ............................................................................................................................. 53
11 RECOMENDACIONES ..................................................................................................................... 54
12 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ..................................................................................................... 55
13 ................................................................................................................................................................ 55

Formatted: Font: Not Bold, Not Italic


Formatted: Left

Formatted: Right
Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt, Bold
Formatted: List Paragraph, Centered, Line spacing: single,
Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
at: 0.75", Adjust space between Latin and Asian text, Adjust
1. RESUMEN space between Asian text and numbers
I. Formatted: Right: 0.98", Top: 0.98", Bottom: 1.38",
Header distance from edge: 0.49", Footer distance from
edge: 0.49"
Formatted: Font: 12 pt, Not Italic
Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt, Bold, No underline,
Font color: Auto
Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt, Bold
Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: Normal, No bullets or numbering, Adjust space
between Latin and Asian text, Adjust space between Asian
text and numbers

Formatted: Right

1
Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Heading 1, Numbered + Level: 1 + Numbering
Style: 1, 2, 3, … + Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at:
0.25" + Indent at: 0.5", Adjust space between Latin and
Asian text, Adjust space between Asian text and numbers

Formatted: Right

2
RESUMEN Formatted: Font: Not Bold, No underline, Font color: Text 1
Formatted: Heading 1, Adjust space between Latin and Asian
text, Adjust space between Asian text and numbers

El cultivo deLa papa (Solanum tuberosum L.) es el cuarto cultivo más consumido y

utilizado en el mundo. El Perú , en el que cuenta con más de 600 000 agricultores de 19

departamentos de este cultivo, Pequienes ven y ve disminuir su producción debido a los

altos costos y efectos tóxicos de los fertilizantes químicos, enfermedades de plantas, la

erosión de los suelos y otros problemas en el ecosistemasu cultivo. En el la presente

investigacióntrabajo, se buscó determinar la capacidad antagonista de actinomicetos

aislados de la rizósfera de papa nativa colectadas en el distrito de Cabana, provincia de


Formatted: Right

3
Lucanas -– Región de Ayacucho, frente al Ooomiceto Phytophthora infestans, por ser el

principal causante de la enfermedad conocida como el Tizón Tardío de la papa de

pérdidas económicas y daños al cultivo de papa a nivel mundial. Mediante cultivos

convencionales en el laboratorio se lograron aislar

Se aislaron 32 cepas de actinomicetos utilizando agar Avena, agar Almidón Caseína, Formatted: Font: (Default) Arial, No underline, Font color:
Auto
agar Czapeck y agar Asparragina. Las pruebas se realizaron en agar Avena y agar

Centeno, den las que el 71,9% de las cepas de actinomicetos mostraron antagonismo a

Phytophthora infestans . El 71,9% y 31.,3% de estas cepas inhibieron el crecimiento del

oomiceto Phytophthora infestans en agar Avena, mientras que soloa y el 31,3% de

actinomicetos inhibieron en agar Centeno .

respectivamente. . Se realizaron pruebas bioquímicas tales como de hidrólisis de almidón

e en agar y la hidrólisis de celulosa en el Agar Mandel y Reese , siendo el 100% de

actinomicetos con capacidad de las cuales el 100% es amilolíticao y solo el 50,.0 % es

celulolíticao. También Además, se realizaron pruebas para de caracterización fisiológica

mediante sua través del crecimiento a diferentes en rangos de pH y temperatura, las

cuales demostraron que crecen mejor a pH básicos de 7,5- 8,5 y a temperaturas

alrededor dede 28°C - los 30°C. Se concluye que los actinomicetos de la rizósfera de

papa son productores de compuestos bioactivos capaces de inhibir el crecimiento de

Phytophthora infestans, por lo que se considera que son microorganismos potenciales

para ser utilizados como control biológico de enfermedades que afectan a la papa.

Formatted: Font: Bold

Palabras claves: RizobacteriasActinobacterias, Phytophthora infestans, papa nativa, Formatted: Font: Bold, No underline, Font color: Auto
Formatted: Normal, Justified, Line spacing: Double, Don't
biocontrol de plagas, antagonismo. adjust space between Latin and Asian text, Don't adjust space
between Asian text and numbers, Pattern: Clear

Formatted: Normal, Justified, Line spacing: Double, Pattern:


Clear

Formatted: Right

4
Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt, Bold

Formatted: Spanish (Peru)


Formatted: Normal, Pattern: Clear
Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt, Bold, No underline,
ABSTRACT Font color: Auto, English (United States)
Formatted: Normal, Centered, Pattern: Clear
Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt, Bold, English (United
States)
The potatoThe potato (Solanum tuberosum L.) isis the fourth most consumed crop Formatted ...
Formatted ...
worldwide. I Peru, more than 600,000 farmers from 19 departments of the country are
Formatted ...

involved , who see their production performance diminishing due to the high costs of Formatted ...
Formatted ...
chemical fertilizers, phytosanitary problems, soil deterioration and other problems in their Formatted ...
Formatted ...
cultivationfarming. In the present workjob, we triedsought to determine the antagonistic
Formatted ...
Formatted ...
capacity of actinomycetes isolated from the native potato rhizosphere, collected in the
Formatted ...
district of Cabana, province of Lucanas - Ayacucho Region , in front of theagainst the Formatted ...
Formatted ...
Oomycete Phytophthora infestans which , causes of the disease known as the “Late Formatted ...
Formatted ...
bBlight of the potato”. By means ofUsing conventional cultures in the laboratory, 32
Formatted ...
strains of actinomycetes were isolated usingisolated utilizing OatAvena agar, Casein Formatted ...
Formatted ...
Starch agar, Czapeck agar and Asparagine agar. The t tests were performed on OAvenat Formatted ...
Formatted ...
agar and RyeCenteno agar, in which 71.9% of the actinomycete strains showed
Formatted ...
antagonism to Phytophthora infestans on Avena agar, while only 31.3% of actinomycetes Formatted ...
Formatted ...
inhibited on RyeCenteno agar. Formatted ...
Formatted ...
Starch hydrolysis and cellulose hydrolysis tests were performed, and , 100% ofbeing
Formatted ...
actinomycetes showed with amylolitic capacity and only 50,% cellulolytic activity. Also, we Formatted ...
Formatted ...
carried out physiological characterization tests through their growth at different pH and Formatted ...
Formatted ...
temperature ranges, which showed that they grow better at basic pH of 7,5- 8,5 and
Formatted: No underline, English (United States)
temperatures of 28°C - 30°Cclose to 30 °C. We conclude potato rhizospheric Formatted ...
Formatted ...
actinomycetes are excellent producers of bioactive compounds capable of significantly Formatted ...
Formatted ...
inhibiting the development of Phytophthora infestans, which is why they are considered as
Formatted ...
Formatted ...
Formatted: Right

5
potential candidates to be used in biological control programs for pests that affect

potatoes.

Physiological characterization tests were also carried out by means of their growth at Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, No underline, English
(United States)
different pH and temperature ranges, which showed that they grow better at basic pH and

at temperatures close to 30 ° C. It is concluded that potato rhizospheric actinomycetes are

excellent producers of bioactive compounds capable of significantly inhibiting the

development of Phytophthora infestans, which is why they are considered as potential

candidates to be used in biological control programs for pests that affect potatoes. Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, English (United
States)
. Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, No underline, English
(United States)
Key words: Actinobacteria, Phytophthora infestans, native potato, biocontrol of Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, English (United
States)

pests, antagonism Formatted: Font: 11 pt, Bold, No underline


Formatted: Font: 11 pt, No underline
. Formatted: Font: 11 pt, Italic, No underline
Formatted: Font: 11 pt, No underline
Formatted: HTML Preformatted, Numbered + Level: 1 +
Numbering Style: 1, 2, 3, … + Start at: 1 + Alignment: Left +
Aligned at: 0.25" + Indent at: 0.5", Adjust space between
Latin and Asian text, Adjust space between Asian text and
numbers, Pattern: Clear (White)
Formatted: Font color: Custom Color(RGB(33,33,33))
Formatted: English (United States)

II. INTRODUCCIÓÓN Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,


Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
at: 0.75", Adjust space between Latin and Asian text, Adjust
space between Asian text and numbers
Formatted: Font: Not Bold
2. INTRODUCCIÓN
Formatted: Left, Line spacing: Multiple 1.15 li, Adjust space
El Perú es uno de los diez países megadiversos en el mundoen flora y fauna a nivel between Latin and Asian text, Adjust space between Asian
text and numbers
mundial. La variedad de altitudes y climas han permitido el desarrollo de ecosistemas Formatted: Heading 1, Left, Line spacing: single, Outline
numbered + Level: 1 + Numbering Style: 1, 2, 3, … + Start
donde habitan numerosas especies de flora y fauna, estas características han permitido at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0" + Indent at: 0.25",
Adjust space between Latin and Asian text, Adjust space
between Asian text and numbers
la domesticación de la papa (Solanum tuberosum L.) ;, donde aproximadamente se

registra con 3000 variedades (CONAM, 2001).

La papa es el cuarto cultivo más consumido a nivel mundial, después del trigo, maíz y

arroz. Aunque nutricionalmente la papa supera a estos cultivos. Las regiones más

productivascon mayor producción de papade este tubérculo se ubican en estos La Formatted: Right

6
Libertad, Huánuco, Puno, Junín y Ayacucho, los lugares donde todavía se practican

cultivos ancestrales (Ministerio de Agricultura, 2011).

El cultivo de papa posee factores limitantes, como el uso excesivo de agroquímicos, la

presencia de insectos plaga y microorganismos fitopatógenos, ya que ocasionan baja

productividad y poca rentabilidad del producto (Rico, 2009). Las sustancias químicas

usadas utilizadas frecuentemente de manera tradicional son tóxicas y peligrosas tanto

para el agricultor, el cultivo y el medio ambiente (Ramírez et al., 2014). La efectividad de

un agroquímico depende del conocimiento del patógeno, de la enfermedad y la

resistencia a las enfermedades.su resistencia por parte de la planta.

De losLos fitopatógenos que afectan a los cultivos de papa pueden ser nematodos,

hongos, oomicetos y virus. Aquellos causados por los hongos y oomicetos son las más

estudiadas en la actualidad. Solanum tuberosum es afectado por diversos patógenos, los

cuales destacan Phytophthora infestans, Rhizoctonia solani, Fusarium solani y Alternaria

solani, entre otros (Pérez et al., 2015). Hoy Actualmente en día se utilizan Formatted: Font: Not Italic, No underline, Font color: Auto,
Spanish (Peru)
microorganismos antagonistas para controlar hongos y oomicetos fitopatógenos en los

diferentes tipos de cultivo, reduciendo el uso de agroquímicos que ocasionan

consecuencias negativas en el ambiente que a posteriori puedaen provocar la resistencia Formatted: Font: 11 pt, Italic, No underline, Font color:
Auto, Spanish (Peru)
de plagas (Marín et al., 2013). El “tizón tardío de la papa”, ocasionado por Phytophthora

infestans, es la enfermedad más devastadora reportada en papa, ya que ocasiona la

destrucción o quemazón del follaje y la pudrición seca de los tubérculos (Monsalve-

Fonnegra et al., 2012).

Formatted: Font color: Text 1

En la actualidad se estudian microorganismos que se sitúan en la rizósfera de las plantas,

los cuales producen compuestos bioactivos que controlan el crecimiento de fitopatógenos

(Franco-Correa, 2009). Los actinomycetales especialmente el género Streptomyces son

Formatted: Right

7
potencialmente productores de metabolitos, es decir presentan actividad antagónica

contra hongos y oomicetos fitopatógenos (Sadeghi et al., 2006).

Cabe destacar que cultivo orgánico de papa nativa en el Perú tiene un gran potencial por Formatted: No underline, Font color: Auto
Formatted: Space After: 10 pt, Adjust space between Latin
ser un país muy diverso, debido a su riqueza geográfica, posee más de tres mil and Asian text, Adjust space between Asian text and numbers
Formatted: No underline, Font color: Auto
variedades de papa de las cinco mil que existen en el mundo. Nuestro país es

considerado el principal productor de papa en América Latina, produciendo más de 4,5

millones de toneladas. Las papas nativas representan una oportunidad única en cuanto a Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, No underline, Font
color: Auto
los alimentos de origen 100% libres de pesticidas y transgénicos. Es por ello la Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, No underline, Font
color: Auto
importancia de estos cultivos como motivo de estudio a nivel biológico (SENASA, 2015). Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, No underline, Font
color: Auto
Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, No underline, Font
En nuestro país, hay muy pocos trabajos de investigación que se han realizado sobre la color: Auto
Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, No underline, Font
estos temasactividad antagonista de la microbiota rizosférica frente a fitopatógenos de la color: Auto

papa, y es mucho menos frente al Oomiceto Phytophthora infestans. En el caso de la

papa, tenemos los el trabajos realizados por Rico (2009) sobre quien aisló cepas de

actinomicetos y Azotobacter sp. productores de metabolitos secundarios; los de ; y los el

aporte de Pérez et al.(2015) quienes aíslaron actinomicetos de compost frente a sus

fitopatógenos, y entre ellos al Oomiceto Phytophthora infestans; los de Caro (2016) quien

aísla actinomicetos de rizósfera de papa con capacidad antagonista; igualmente Medina

(2014) que enfrenta cepas de actinomicetos frente a Phytophthora infestans. Con elEl Formatted: Font: 11 pt, Italic, No underline, Font color: Auto

presente estudio se pretende contribuircontribuye con el concepto y uso de cepas nativas

de actinomicetos como posibles biocontroladores del oomiceto Phytophthora infestans

que afectan a los cultivos orgánicos de papa.

Formatted: Right

8
Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,
Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
at: 0.75", Adjust space between Latin and Asian text, Adjust
space between Asian text and numbers

Formatted: Font: Not Bold

Formatted: No underline, Font color: Text 1


Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Line spacing: single, Adjust space between Latin
III. 3. MARCO TEÓRICO and Asian text, Adjust space between Asian text and numbers
Formatted: No underline, Font color: Auto
Formatted: Heading 2, Justified, Indent: Left: 0", First line:
3.1 3.1 LA PAPA (Solanum tuberosum L) 0", Line spacing: single, Outline numbered + Level: 2 +
Numbering Style: 1, 2, 3, … + Start at: 1 + Alignment: Left +
Aligned at: 2.76" + Indent at: 3.01", Adjust space between
La papa es una planta originaria de origen andinode los Andes. El procesamiento Latin and Asian text, Adjust space between Asian text and
numbers
artesanal y domesticación de este cultivo fueron realizados por las culturas Formatted: Font: Italic, No underline, Font color: Auto
Formatted: No underline, Font color: Auto
precolombinas, constituyendo su dieta alimentaria. Además, tuvo un papel significativo en
Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Right

9
la tradición y cultura ancestral de los habitantes peruanos (Rico, 2009). Es una planta

dicotiledónea herbácea, perteneciente a la familia de las solanáceas, presenta tres tipos

de tallos, uno aéreo, circular o angular en sección transversal, sobre el cual se disponen

las hojas compuestas y dos tipos de tallos subterráneos: los rizomas y los tubérculos.

(Faiguenbaum et al., 1998)

El tubérculo es un tallo subterráneo modificado, provisto de yemas latentes. Varían en

sabor, tamaño, forma y color de la cáscara, esto depende de la variedad de la papa

(Ministerio de Agricultura, 2006). La importancia de la papa radica en que sus tubérculos

son comestibles y saludables, contiene 80% de agua y la materia seca constituida por

carbohidratos, proteínas, celulosa, minerales, vitaminas A y C, además son utilizadas en

la industria del almidón, comidas rápidas, hojuelas y puré (INTA 2004).

El crecimiento del cultivo de la papa es óptimo en condiciones de bajas temperaturas con

presencia de luz solar y registra altitudes de 2 000 a 4 000 m.s.n.m, en general las

temperaturas máximas o diurnas se encuentran entre 16 a 25 ºC y mínimas o nocturnas

de 8 a 13 ºC (Manrique, 2001). Los mayores rendimientos se dan en los suelos franco

arenosos, drenados y con un pH de 5,5 a 7,0 (Cutter, 1978).

La producción de papa a nivel mundial se está desarrollando rápidamente. Seis países Formatted: Justified

producen cerca del 60% de la producción mundial de papa, siendo China quien el que

encabeza la lista. El Perú, principal centro de origen de la papa, ocupa la posición 19 de

productores de papa a nivel mundial, aunque es el que posee la mayor diversidad de

variedades, siendo estas alrededor de 3 000. Aquí se cultiva en 19 de las 25 regiones del

país (Ministerio de Agricultura, 2011). Formatted: Right

10
3.2 3.2 AGRICULTURA DE LA PAPA Formatted: No underline, Font color: Auto
Formatted: Heading 2, Indent: Left: 0", First line: 0", Line
Según restos arqueológicos encontrados en distintos puntos del país. Los cultivos spacing: single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering
Style: 1, 2, 3, … + Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at:
2.76" + Indent at: 3.01", Adjust space between Latin and
andinos tienen más de 10 mil años. Los primeros vestigios provienen del año 8,000 a.C. y Asian text, Adjust space between Asian text and numbers
Formatted: Font: Not Bold
fueron encontrados en la cueva Tres Ventanas, en el valle de Chilca, Lima. Su presencia

es fue segura segura hacia 4,400 y 3,100 a.C. en Ayacucho. (Ministerio de agricultura,

2011).

El origen y la domesticación de Solanum tuberosum tuvo lugar en la sierra del Perú. Sin

embargo, el cultivo intensivo de este tubérculo fue en la región ubicada cerca al Lago

Titicaca, asociado al desarrollo a la cultura Tiwanaku (700-1100 a.c) (Morales, 2007)

La papa es el principal cultivo utilizado en Perú y representa el 25% del PBI agropecuario.

Es producida por 600 mil unidades agrarias y es el principal alimento de las comunidades

andinas, puesto que contiene en 100 gramos; 78 gr. de humedad; 18,5 gr. de almidón,

potasio (560 mg) y vitamina C (20 mg) (. Cárdenas, 2009).

El Perú es el país con mayor diversidad de papas en el mundo, posee 8 especies nativas

domesticadas y 2,301 de las más de 4,000 variedades que existen en América Latina.

Además, nuestro país Pposee 91 de las 200 especies que crecen de manera silvestre en

América (y que generalmente no son comestibles). Los departamentos con mayor

producción de papa son Puno, Huánuco, La Libertad, Junín, Cajamarca, Cusco,

Arequipa, Lima, Apurímac, Ancash, Ayacucho, Pasco e Ica lugares donde todavía se

llevan a cabo prácticas ancestrales como el ayni, donde las comunidades campesinas

aúnan esfuerzos en pos de una buena cosecha. (Ministerio de agricultura, 2011). La papa

es originaria de los países andinos, siendo para pequeños agricultores un cultivo

tradicional sin pesticidas (FAO, 2017).

Formatted: Right

11
La producción de papa a nivel mundial , llegó a 381,7 millones de toneladas, con una alta

concentración en la China continental, que aportóa la cuarta parte de la producción.

Formatted: Adjust space between Latin and Asian text,


Adjust space between Asian text and numbers

3.3 3.3 CULTIVOSs ORGÁNICOSs Formatted: Heading 2, Left, Indent: Left: 0", First line: 0",
Line spacing: single, Outline numbered + Level: 2 +
Numbering Style: 1, 2, 3, … + Start at: 1 + Alignment: Left +
La agricultura orgánica es un sistema de gestión que fomenta y mejora la situación del Aligned at: 2.76" + Indent at: 3.01", Adjust space between
Latin and Asian text, Adjust space between Asian text and
agroecosistema, basados en el cuidado de la biodiversidad, los ciclos biológicos, y la numbers

actividad biológica del suelo. Por consiguiente se apuesta por métodos culturales,

biológicos y mecánicosbiológicos y mecánicos, evitando el uso de materiales químicos y

artificiales (Comisión del Codex Alimentarius, 1999). Es uno de los enfoques más

relevantes de la agricultura sostenible.

La agricultura orgániLa agricultura orgánica difiere de la agricultura convencional

principalmente porque se reglamenta en leyes y programas de certificación, se prohíbe

materiales sintéticos y se fomenta la rotación de cultivos (FAO, 1999).

En el Perú, los productos con Certificación Orgánica más importantes son café; , algodón;

hortalizas y frutas frescas, como mango, banano, uvas y papaya; , frutales nativos y

exóticos,; tubérculos y granos andinos como quinua, kiwicha, yacón, maca y papa;

semillas de sésamo; aceite de oliva y aceitunas,; palmito, limón sutil, tomate y pasta de

tomate, miel, aceites esenciales, colorantes, plantas para la medicina alternativa

(MINCETUR, 2016).

El SENASA (Servicio Nacional de Sanidad Agraria), es la Autoridad Nacional encargada Formatted: Normal, Justified, None, Space Before: 0 pt, Line
spacing: Double, No bullets or numbering, Don't keep with
next, Don't keep lines together, Pattern: Clear (White)
de la fiscalizar y promover la producción orgánica nacional. El Decreto Supremo Nº 044-

2006-AG, establece requisitos para los Productos Orgánicos que toman como referencia

Formatted: Right

12
el Codex Alimentarius y normas de países consumidores producción orgánica (SENASA,

2015). Formatted: Font: 11 pt, Not Bold, Not Hidden

3.3.1 3.3.1 PAPAS NATIVAS Formatted: Font: Not Bold, No underline, Font color: Text 1
Formatted: Heading 3, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Font Alignment: Auto, Pattern: Clear
Formatted: Heading 3, Left, Line spacing: single, Adjust
space between Latin and Asian text, Adjust space between
Asian text and numbers
Formatted: Heading 3, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Font Alignment: Auto, Pattern: Clear
Formatted: Space After: 0 pt
Actualmente el 16% de la producción anual de papa nativa es de 16%, y se exporta

alrededor de 500 toneladas en presentaciones pre-cocidas congeladas y chipsfritas;

siendo Estados Unidos, España y Alemania los principales compradores. Según la

Asociación de Exportadores (Adex), en los últimos cincos años, este ancestral insumo

natural ha incrementado su exportación en 211%, alcanzando en el 2015 el monto de

US$ 2,5 millones. (MINCETUR, 2013).

3.3.2 3.3.1.2 VARIEDADES DE PAPAS NATIVAS Formatted: Heading 3, Left, Space After: 0 pt, Font
Alignment: Auto, Pattern: Clear
De las 3000Nuestro país posee aproximadamente 3000 variedades existentes en nuestro Formatted: Font: Not Italic, Border: : (No border)

país. A continuación, Se detallan, las papas nativas más conocidas:

a) Sumac Soncco: de pulpa tiene una aureola y su piel puede ser roja – guinda, pulpa Formatted: Font: 11 pt, Not Bold, Italic

amarilla – crema con rojo.

b) Qeqorani: pulpa amarilla y morada. Formatted: Font: 11 pt, Not Bold, Italic

c) Leona: pulpa azulada, piel de color oscuro con trazas de color crema.

d) Wenccos: tubérculo alargado, de cáscara acero azulado y pulpa de color morado con Formatted: Font: 11 pt, Not Bold, Italic

un color secundario blanco.

e) Peruanita: de cáscara rojo con amarillo y pulpa amarilla.

f) Limeña: de cáscara y pulpa amarilla.

g) Conda Huagallina: cáscara de color rojo con manchas amarillas y pulpa amarillo fuerte. Formatted: Font: 11 pt, Not Bold, Italic

Formatted: Right

13
h) Huayro: cáscara roja y centro amarillo encendido. Formatted: Font: 11 pt, Not Bold, Italic

i) Cacho de buey: cáscara rojo suave, de pulpa morada con machas cremas.

j) Amachi: de piel negruzco con pulpa morada.

k) Azul Sunqu: de piel negruzco con pulpa morada y blanca. Formatted: Font: 11 pt, Not Bold, Italic

l) Caspas: de piel negruzco con jaspes rojos y pulpa amarilla con amillo morado.

m) Gaspar: de cáscara morada con pulpa blanca.

n) Yawar Wayku: de cáscara roja con piel violeta. Formatted: Font: 11 pt, Not Bold, Italic

3.4 3.4 PROBLEMAS QUE AFECTAN EL DESARROLLLO DEL CULTIVO DE PAPA Formatted: Heading 2, Left, Indent: Left: 0", First line: 0",
Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2, 3, … +
Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 2.76" + Indent at:
3.01", Adjust space between Latin and Asian text, Adjust
Los principales problemas observados en el campo son la falta de riego, mala utilización space between Asian text and numbers

de la semilla, falta de rotación con otros cultivos, el poco control a las plagas que afecten

a la papa; así como también heladas, sequías y otros efectos ambientales que dañarían

al tubérculo (Caro, 2016).

Fuera del campo, el mal almacenamiento y poco cuidado en el transporte de los

tubérculos antes de su comercialización, es un problema que causa alto déficit

económico (UNALM, 2011).

El Perú existen numerosas enfermedades y plagas, que son difíciles de enfrentar. La

presencia e intensidad de estos problemas varían de una zona ecológica a otra, por lo

que los mecanismos de control también son diferentes (Ministerio de Agricultura y Riego,

2013)

Cabe destacar, que el uso de plaguicidas químicos en la papa está aumentando en los

países tercermundistas, estas a menudo son muy tóxicas y se aplican con insuficiente o
Formatted: Right

14
ningún equipo de protección; el resultado es la intoxicación por plaguicidas en las

comunidades de agricultores (FAO, 2008). Estos han conllevado a la aparición de

resistencia en los microrganismos que actúan como agentes causantes de las

enfermedades (Juárez et al., 2010).

Formatted: Heading 2, Left, Indent: Left: 0", First line: 0",


Line spacing: single, Outline numbered + Level: 2 +
Numbering Style: 1, 2, 3, … + Start at: 1 + Alignment: Left +
3.5 3.5 EL TIZÓN TARDÍO DE LA PAPA Aligned at: 2.76" + Indent at: 3.01", Adjust space between
Latin and Asian text, Adjust space between Asian text and
Los Ooomicetos son la más importante causa de enfermedades en la papa, puesto que numbers

pueden ocasionar la destrucción total de la planta. El “tizón tardío de la papa”, causado

por Phytophthora infestans, es la enfermedad más devastadora reportada en papa, ya

que ocasiona la destrucción o quemazón del follaje y la pudrición seca de los tubérculos

(Monsalve-Fonnegra et al., 2012).

El tizón tardío afecta se manifiesta principalmente ena la papa (Solanum tuberosum),

tomate (S. lycopersicum) y pepino dulce (S. muricatum). Se ha reportado infección natural

en 47 especies solanáceas (Garry et al., 2005)

El cultivo in vitro de Phytophthora infestans es influenciado por diversos factores tales Formatted: Font: Not Bold, Not Italic
Formatted: Space After: 10 pt, Adjust space between Latin
como la composición del medio, nutrientes, temperatura y pH. En placa Petri, presenta and Asian text, Adjust space between Asian text and numbers

micelio aéreo blanco radiado. Microscópicamente, las hifas son cenocíticas. Los

esporangios característicos de la especie tienen forma de limón (Fry, 2008).

El patógeno e Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold, Font color: Text 1

n condiciones de lluvia y poco cuidado en el almacenamiento, puede producir

esporangios que afectarían cultivos sanos, el micelio del oomiceto se desarrollará

invadirá el tejido vascular Este tipo de infección es la más devastadora, porque afecta

plantas sanas en el mismo

campo de cultivo

Formatted: Right

15
(Torres, 2002).

Los síntomas ocasionados por Phytophthora infestans se ven en de toda la planta. En las

hojas, la enfermedad se presenta con manchas irregulares oscuras que a medida que

pase el tiempo, formarán necrosis, en el envés se puede observar al oomiceto

blanquecino. En la Figura 1 se observa el un tallo que, se presentan lesiones oscuras a

nivel media de la planta. En la Figura 2, en los tubérculos, se evidencian manchas en la

superficie, de consistencia dura y diferente tamaño Si se realiza un raspado en la zona

afectada, el tejido que se observa es de color marrón. Si se realiza un corte transversal,

se observaría una necrosis de forma irregular (Castro y Contreras, 2011).

Formatted: Centered
Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Font: Bold
Formatted: Centered, Line spacing: Double
Formatted: Font: (Default) Arial
Figura 1. Tallo con presencia de lesiones oscuras a nivel superior de la planta (Infoagro, 2018)
Formatted: Font: (Default) Arial, Font color: Black
Formatted: Justified
Formatted: Font: Bold
Formatted: Font: (Default) Arial, Font color: Text 1
Formatted: List Paragraph, Justified, Numbered + Level: 1 +
A B Numbering Style: A, B, C, … + Start at: 1 + Alignment: Left +
Aligned at: 0.25" + Indent at: 0.5"

Figura 2. (Cornell University, 2005) Formatted: Font: (Default) Arial, Font color: Text 1
Formatted: Font: (Default) Arial, Font color: Text 1
A. El tejido interno del tubérculo es de color marrón. Formatted: List Paragraph, Justified
Formatted: List Paragraph, Justified, Numbered + Level: 1 +
B. En el corte transversal se observa necrosis de forma irregular que avanza de la periferia Numbering Style: A, B, C, … + Start at: 1 + Alignment: Left +
Aligned at: 0.25" + Indent at: 0.5"
del tubérculo hacia el centro medular
Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: Right

16
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted Table ...
En el Perú el tizón tardío es el problema más importante del cultivo de papa que
Formatted ...
enfrentan los agricultores en la zona de Cajamarca, Contumazá y San Miguel (Ortiz et., Formatted ...
Formatted ...
al 1999). El nivel de incidencia en la Tabla 1: Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Tabla 1. Estimaciones sobre la superficie cultivada con papa (ha) en las que incide Formatted ...
Formatted ...
Phytophthora infestans en los departamentos productores de papa del Perú (Egúsquiza, Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
2001):
Formatted ...
Formatted ...
Departamento Superficie (ha) Nivel de incidencia de rancha y área (ha) afectada
Formatted ...
Muy baja Baja Alta Muy alta
Cajamarca 29733 0 6735 12810 10188 Formatted ...
Amazonas 2650 0 343 1060 1247 Formatted ...
La Libertad 28015 225 1972 11161 14657 Formatted ...
Áncash 29630 2669 23602 3359 0
Formatted ...
Huánuco 30562 325 12465 12838 4934
Formatted ...
Lima 10489 4201 4492 1346 0
Junín 37738 1188 16557 13532 6461 Formatted ...
Ica 1822 1490 332 0 0 Formatted ...
Huancavelica 33233 5226 14502 11412 2093 Formatted ...
Ayacucho 8909 2165 2945 2158 1641
Formatted ...
Apurímac 9646** 1169 7848 639 0
Formatted ...
Arequipa 5325 650 3745 930 0
Puno 33200**** 33200 4800 0 0 Formatted ...
Moquegua 900 280 620 0 0 Formatted ...
Tacna 1076 141 935 0 0 Formatted ...
Totales ha 267729 52930 102333 71245 41227
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
17
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
% 100 19,8 38,2 26,7 15,3 Formatted: Font: 8 pt, Not Bold
(*) INCIDENCIA DE RANCHA: Muy baja (ocasional), Baja (Requiere de 2 a 4 aplicaciones), Alta (Requiere de 6 a 8 Formatted: Font: 8 pt

aplicaciones), Muy alta (Requiere de 10 a más a aplicaciones).(**) Considera solamente las provincias de Andahuaylas y Formatted: Font: 8 pt, Not Bold
Formatted: Font: 8 pt
Chincheros (****) Superficie departamental redondeada
Formatted: Font: 8 pt, Not Bold
Formatted: Font: 8 pt
Formatted: Font: 8 pt, Not Bold
Formatted: Font: 8 pt
Formatted: Font: 8 pt, Not Bold
Formatted: Font: 8 pt
Formatted: Font: 8 pt, Not Bold
Formatted: Font: 8 pt
Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Font: 9 pt, Not Bold
Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Font: 9 pt
Formatted: Font: (Default) +Body (Calibri), 8 pt, Not Bold
Formatted: Left, Space After: 10 pt, Don't add space
between paragraphs of the same style, Line spacing: Multiple
1.15 li, Adjust space between Latin and Asian text, Adjust
space between Asian text and numbers
Formatted: Font: 14 pt

A nivel mundial la primera pérdida masiva de cultivos de papa se presentó en 1844‐1845,

cuando el tizón tardío, arrasó los cultivos en toda Europa continental, desde Bélgica hasta

Rusia. Pero lo peorLa situación más grave se registró enfue en Irlanda ya que el

consumo de papa era alto. Entre 1845 y 1848 el tizón tardío destruyó tres cosechas de

papa, lo que produjo una hambruna devastadora. La catástrofe irlandesa motivó a

buscar nuevas técnicas en la papa para contrarrestar la sensibilidad a fitopatógenos. Los

mejoradores de Europa y América del Norte, con nuevo germoplasma, produjeron nuevas

variedades durante el siglo XX (Ministerio de Agricultura, 2011).

Formatted: Right

18
3.5.1. 3.5.1 Phytophthora infestans Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Heading 3, Left, Line spacing: single, Adjust
space between Latin and Asian text, Adjust space between
Asian text and numbers
3.5.1.1 3.5.1 TAXONOMÍA

Formatted: Font: Not Bold


Según Hawksworth et al. (1995), Phytophthora infestans presenta la siguiente Formatted: Left, Line spacing: Multiple 1.15 li, Adjust space
between Latin and Asian text, Adjust space between Asian
text and numbers
clasificación:
Formatted: Font: Not Bold, Italic

Reino: Chromista Formatted: Font: 11 pt, Not Bold


Formatted: Font: 11 pt
División: Oomycota Formatted: Font: 11 pt, Not Bold
Formatted: Font: 11 pt
Clase: Oomycetes
Formatted: Font: 11 pt, Not Bold
Orden: Peronosporales Formatted: Font: 11 pt
Formatted: Font: 11 pt, Not Bold
Familia: Pythiaceae Formatted: Font: 11 pt
Formatted: Font: 11 pt, Not Bold
Género: Phytophthora
Formatted: Font: 11 pt
Especie: Phytophthora infestans Formatted: Font: 11 pt, Not Bold
Formatted: Font: 11 pt, Not Bold
Formatted: Font: 11 pt, Not Bold, Italic
Formatted: Font: Not Bold, Italic
El nombre de Phytophthora infestans, proviene de las palabras griegas phyto = planta,

phthora= destructor. Este patógeno, miembro de la clase Ooomycetes, pertenece al reino

cromista y está relacionado filogenéticamente con las algas pardas y diatomeas

(Phaeophytas) (Pérez y Forbes, 2008).

La pared celular de los oomycetes contiene principalmente celulosa y ß-glucanos antes

que quitina y no sintetizan los esteroles. Estas características nos permiten suponer que

los Ooomycetes han coevolucionado a partir de líneas diferentes de los hongos

superiores como Aascomycetos y Bbasidiomycetos. (Llácer et al., 1996; Judelson, 1997) Formatted: Font: Not Bold, Italic

Formatted: Right

19
Debido a su morfología filamentosa, inicialmente se le incluyó en el Reino Fungi (Raven

et al., 1999), pero estudios posteriores presentaron otras características que diferencian a Formatted: Font: Not Bold, Italic

este género de los hongos verdaderos, incluyéndose finalmente en el Reino Cromista,

Clase Oomycetes (Rossman y Palm, 2007).

3.5.1.2 3.5.2 MORFOLOGÍA Formatted: Heading 4, Left, Adjust space between Latin and
Asian text, Adjust space between Asian text and numbers
El micelio es cenocítico, puesto que no presenta septas que separen el miceliola hifa; los

esporangios son elipsoidales, ovoides, a limoniformes, ahusados en la base, caducos,

con un pedicelo menor de 3 mm. Su tamaño varía de 36 x 22 µm a 29 x 19 µm.

Los esporangióforos son de crecimiento continuo, con un pequeño ligero hinchamiento

justo debajo del esporangio.

Las hormonas A1 y A2 estimulan la formación de oosporas a partir del grupo de

apareamiento opuesto. En P. infestans los aislamientos de cada tipo son bisexuales y

autoincompatiblesautocompatibles y bisexuales, Así, aislamientos serán más

“masculinos” cuando poseen más anteridios que oogonios, y más “femeninos” cuando

poseen más oogonios que anteridios. También pueden poseer ambos aislamientos

(Pérez y Forbes, 2008).

Formatted: Heading 4, Left, Adjust space between Latin and


Asian text, Adjust space between Asian text and numbers

3.5.1.3 3.5.3 CICLO BIOLÓGICO

El genoma de P. infestans fue secuenciado en 2009 en el Laboratorio Sainsbury de Formatted: Font: Not Bold, Italic

Norwich (Reino Unido). Su estudio reveló que es su genoma es muy largo, más del doble
Formatted: Right

20
que las especies de oomicetos más cercanas. Este gran tamaño se debe a la enorme

cantidad de secuencias repetidas que posee (Hass et al., 2009). Formatted: Font: Not Bold, Italic
Formatted: Font: Italic
El patógeno, al igual que la mayoría de las especies de oomicetos, puede reproducirse

sexual o asexualmente. La reproducción sexual, mediante formación de oosporas, da

lugar a un comportamiento de parásito obligado, lo que implica la infección de células

vegetales, causando la enfermedad. Por otro lado, la reproducción asexual a través de

los esporangios, le permite generar un estado de supervivencia de las oosporas y

variabilidad de genes (Jaramillo, 2003).

Formatted: Heading 5, Left, Adjust space between Latin and


Asian text, Adjust space between Asian text and numbers

3.5.1.3.1 3.5.3.1 CICLO ASEXUAL

El ciclo asexual involucra sólo un solo tipo de apareamiento. En este caso no se produce

recombinación meiótica, por lo que la variabilidad se originaría por mutaciones (Fry,

2008). Este tipo de reproducción se produce a través de esporangios, zoosporas e hifas.

Las zoosporas se forman dentro del esporangio y son estructuras hialinas con morfología

de limón, s. Siendo liberadas cuando se rompe la pared esporangial. Se dispersan por el

viento, lo que les permite alcanzar los tejidos de las plantas huéspedes y germinar

cuando las condiciones ambientales son apropiadas (Pérez y Forbes, 2008). En

presencia de agua, las zoosporas, nadan libremente en busca de superficies sólidas

dónde ubicarse. Posteriormente, éstas pueden desarrollar un tubo germinativo y penetrar

en la hoja por las estomas o también pueden formar apresorios, en cuyo caso la hifa de

penetración ingresa a través de la cutícula. Una vez dentro de la planta, el micelio se

desarrolla dentro de la célula formando haustorios. Tras 10 días de infección, los

esporangios emergen a través de los estomas de la planta huésped (Jaramillo, 2003).

Tras 10 días de infección, los esporangios emergen a través de los estomas de la planta

huésped.

Formatted: Right

21
3.5.1.3.2 3.5.3.2 CICLO SEXUAL Formatted: Heading 5, Left, Line spacing: single, Adjust
space between Latin and Asian text, Adjust space between
Asian text and numbers
Phytophthora infestans es una especie heterotálica, por lo tanto, necesita dos tipos de Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Left, Line spacing: Multiple 1.15 li, Adjust space
apareamiento (A1 y A2). A pesar de ello, la diferencia entre ambos grupos no radica está between Latin and Asian text, Adjust space between Asian
text and numbers
en unen el dimorfismo sexual, sino en la autoincompatibilidad de éstos y la necesidad de

una estimulación hormonal del tipo de apareamiento (Pérez y Forbes, 2008). La meiosis

ocurre inmediatamente antes del desarrollo de los gametangios, representando siendo el

único estadío haploide del ciclo de vida de este organismopatógeno.

La cariogamia se da entre estos dos núcleos haploides, formando una oospora diploide

uninucleada de paredes gruesas, que puede servir además, como estructura de

supervivencia resistencia para el invierno en las zonas templadas y frías en condiciones

de estrés (Smart et al., 2000). Cuando las condiciones son favorables, las oosporas Formatted: Font: Not Bold, Italic

forman un tubo germinativo sobre el cual se origina un zoosporangio similar a los de la

reproducción asexual, el cual germina, iniciando un nuevo ciclo de vida debido a la

formación de las zoosporas (Henflig, 1987).

3.5.1.4 3.5.4 FACTORES DE VIRULENCIAVARIABILIDAD GENÉTICA DE Formatted: Heading 4, Left, Line spacing: single, Adjust
space between Latin and Asian text, Adjust space between
Phytophthora infestans Asian text and numbers
Formatted: Font: Not Bold
La genética poblacional describe y cuantifica la variación genética en determinadas Formatted: Left, Line spacing: Multiple 1.15 li, Adjust space
between Latin and Asian text, Adjust space between Asian
poblaciones del patógeno. Esta variación se usa para hacer inferencias acerca de los text and numbers

procesos de evolución que las afectan. Las posibles fuentes de variación de P. infestans

son reproducción sexual, mutación, recombinación mitótica, parasexualidad, migración y

selección.

La virulencia se refiere a la habilidad genética de una raza de P. infestans para vencer la

resistencia del hospedante causando compatibilidad, es decir, se produce la enfermedad.

La resistencia a fungicidas en el patógeno se determina por una menor sensibilidad y

especificidad de estos productos. Esta resistencia es el resultado de mutaciones estables

y heredables. La resistencia al ingrediente activo metalaxyl y a otras fenilamidas ha sido


Formatted: Right

22
reportada dentro de poblaciones de P. infestans a nivel mundial, constituyéndose en un

problema en el uso de esta clase de fungicidas (Pérez y Forbes, 2008).

3.6 3.6. ACTINOMICETOS Formatted: Heading 2, Left, Line spacing: single, Outline
numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2, 3, … + Start
at: 5 + Alignment: Left + Aligned at: 0" + Indent at: 0.46",
3.6.1 3.6.1 EL ORDEN ACTINOMYCETALES Adjust space between Latin and Asian text, Adjust space
between Asian text and numbers
Formatted: Heading 3, Left, Line spacing: single, Adjust
space between Latin and Asian text, Adjust space between
Asian text and numbers
Este taxón es uno de los 15 órdenes clasificados en la Clase Actinobacteria. Los Formatted: Font: Not Bold, Not Italic
Formatted: Font: Not Bold
actinomicetos forman un grupo de microorganismos morfológicamente muy heterogéneo,
Formatted: Line spacing: 1.5 lines

desde bacilos hasta filamentos ramificados, pertenecientes al dominio Bacteria, formado

por bacterias generalmente aerobias, Gram-positivas, con alto contenido en G+C.. Dos

de las propiedades más significativas de los actinomicetos son su capacidad para

desarrollarse sobre sustratos muy diversos, como la quitina y celulosa y su aptitud para

sintetizar numerosos metabolitos bioactivos (Goodfellow et al., 1997). La fácil

segmentación de los filamentos conlleva a la producción de bacilos y cocos. Las colonias

pueden ser filamentosas dando una apariencia micelial, sin que se forme un micelio

aéreo verdadero. La mayoría de especies producen colonias blancas o grises, pero

también hay rojas, amarillas (Singh et al.2012).

La mayoría de sus miembros son anaerobios facultativos y quimioorganótrofos. Los

productos finales de la fermentación de la glucosa pueden ser ácido acético, succínico y

láctico, con variación en la cantidad de estos ácidos producidos (Gonzales et al., 2010).

Formatted: Font: Not Italic


Formatted: Font: Not Italic
3.6.2. 3.6. REVISIÓN DEL GÉNERO Streptomyces Formatted: Heading 3, Left, Line spacing: single, Adjust
space between Latin and Asian text, Adjust space between
3.6.2.1 Asian text and numbers
Formatted: Heading 4, Indent: Left: 0", Hanging: 0.5", Line
3.6.1. GENERALIDADES TAXONÓMICAS spacing: single, Adjust space between Latin and Asian text,
Adjust space between Asian text and numbers
Formatted: Right

23
Los estreptomicetos son los microorganismos más estudiados dentro del orden de los

Actinomycetales, siendo el género Streptomyces el más conocido (Locci, 1989). Este

género agrupa bacterias miceliares Gram positivas y fundamentalmente aerobias, aunque

en determinadas condiciones se ha descrito que pueden crecer en anaerobiosis (van

Keulen et al., 2003).

Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold


El género Streptomyces es el grupo de microorganismos más estudiado entre los Formatted: Line spacing: Multiple 1.15 li, Adjust space
between Latin and Asian text, Adjust space between Asian
text and numbers
actinomicetos debido a su amplia gama de síntesis de metabolitos secundarios de interés

en la salud, en el ambiente y en la industria comercial, ; sin embargo, otros géneros del

Orden, tales como Nocardia, Micromonospora, Rhodococcus y Actinoplanes también han

sido reportados como productores de nuevos metabolitos (Uzcátegui et al., 2013). Se ha

estimado que las especies de Streptomyces producen más del 50 % de los compuestos

bioactivos microbianos que se han descubierto en los últimos 50 años (Berdy, 2012).

Inicialmente las colonias tienen una superficie lisa y sin esporas, pero luego desarrollan

un micelio granulado, aterciopelado o pulverulento. Pueden producir pigmentación en el

micelio aéreo (Manteca y Sánchez, 2010).

Dentro de sus características particulares, presentan un olor típico a tierra húmeda,

debido a la producción de un metabolito llamado geosmina.

Las bacterias del género Streptomyces también son productoras de enzimas

extracelulares de interés en el sector industrial, entre las que destacan: proteasas

(Henderson et al., 1987), celulasas, nucleasas, amilasas (Long et al., 1987), quitinasas,

xilanasas (Morosoli et al., 1986) y lipasas (Jiménez et al., 1987),

Algunas especies son capaces de desarrollar un metabolismo anaeróbico facultativo

basado en la respiración del nitrato (Kumon y et al., 2002). S. coelicolor es capaz de

crecer en condiciones de estrés anaeróbico (van Keulen et al., 2007). El pH de

Formatted: Right

24
crecimiento óptimo de Streptomyces se encuentra entre 6.5 y 8 (Crawford et al., 1993),

aunque se han aislado especies acidófilas y alcalófilas (Williams y Flores, 1978;

Chaphalkar y Dey, 1998).

3.6.2.2. 3.6.2. MORFOLOGÍA Y CICLO DE VIDA Formatted: Heading 4 Char


Formatted: Heading 4, Left, Indent: Left: 0", Hanging:
Este proceso de diferenciación ha sido ampliamente estudiado en medio sólido, debido 0.5", Adjust space between Latin and Asian text, Adjust space
between Asian text and numbers

principalmente a que en cultivos líquidos la mayoría de las cepas no son capaces de

esporular (Yepes, 2010). Las estructuras diferenciadas en cultivos de superficie son: un

micelio sustrato, producto de la fase vegetativa del ciclo y un micelio aéreo o

reproductivo, que culminará su desarrollo con la formación de esporas. Una de las

peculiaridades de este género es que sólo se encuentran como microorganismos

unicelulares en la fase de espora (Chater y Losick, 1997).

Las esporas están formadas por la desarticulación de hifas pre-existentes. La pared de la

espora se forma a partir de capas de la pared de la hifa de los padres, mecanismo

denominado holotálico, el cual es típico para la gran mayoría de actinomicetos (Hasani et

al., 2014).

La diversidad morfológica de cadenas de esporas es extensa y actualmente se tienen

categorías de clasificación, conocida como grupos morfológicos. Pero, aunque a veces

sea posible clasificar una cepa en base a criterios morfológicos completamente

evidentes, estos no son suficientes para establecer una determinación correcta y es

indispensable considerar otros caracteres (Lechevalier et al., 1980).

En el caso del desarrollo de colonias aisladas así como del desarrollo de Streptomyces

en suelos y en cultivos sumergidos, la fase vegetativa del ciclo se alarga en el tiempo

siendo la predominante oponiéndose a lo que ocurre en medios de cultivo complejos y

condiciones estándar de laboratorio (ej. densos inóculos de esporas y temperatura de

crecimiento de 28-30º C) (Manteca y Sánchez, 2009). Tanto la formación como la

Formatted: Right

25
metamorfosis de las hifas aéreas reproductivas, que recuerda al comportamiento de los

hongos filamentosos, permite la dispersión y colonización de nuevos nichos.

3.6.2.3. ECOLOGIA Formatted: Heading 4, Line spacing: single, Adjust space


3.6.3. ECOLOGÍA between Latin and Asian text, Adjust space between Asian
text and numbers
El interés ecológico de Streptomyces radica en su intervención en los procesos de
Formatted: Font: Not Bold

descomposición del suelo, específicamente de materia orgánica y también en su uso Formatted: Heading 4, Indent: Left: 1.2", Line spacing:
single, Adjust space between Latin and Asian text, Adjust
space between Asian text and numbers
potencial en biorremediación (Polti et al., 2009). Frecuentemente se encuentran en suelos

fértiles con concentraciones de 106 UFC/g de suelo seco (Tate, 2000).

Cuando se aíslan actinomicetos del suelo mediante medios de cultivo sólidos, el género

predominante suele ser Streptomyces, con el 70 al 90% de las colonias, seguido por

Nocardia con 10 a 30%, y el tercero puede ser Micromonospora que constituye del 1 al

15% de actinomicetos (Quiñones et al.,2017)

3.7 3.7. COMPUESTOS BIOACTIVOS PRODUCIDOS POR Streptomyces sp. Formatted: Heading 2, Left, Line spacing: single, Outline
numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2, 3, … + Start
at: 5 + Alignment: Left + Aligned at: 0" + Indent at: 0.46",
3.7.1. 3.7.1. METABOLITOS SECUNDARIOS Adjust space between Latin and Asian text, Adjust space
between Asian text and numbers

Los metabolitos secundarios son compuestos complejos no esenciales para el Formatted: Heading 3, Left, Line spacing: single, Adjust
space between Latin and Asian text, Adjust space between
Asian text and numbers
crecimiento en el cultivo de producción, pero cumplen un papel importante en funciones
Formatted: Font: Not Italic
Formatted: Left, Line spacing: Multiple 1.15 li, Adjust space
de supervivencia en la naturaleza, son producidos exclusivamente por algunas especies
between Latin and Asian text, Adjust space between Asian
text and numbers
de un género (Sutton, 1996). Miles de estos compuestos se han aislado y caracterizado,

son utilizados en el tratamiento de enfermedades en los seres humanos, así como en

agricultura y en la medicina veterinaria (Spandari et al., 2013).

De los 100.000 productos naturales producidos por microorganismos y plantas solo se

han caracterizado molecularmente 2500, y alrededor de 50.000 son producidos por Formatted: Right

26
microorganismos, de los 12000 antibióticos conocidos el 55% son producidos por

bacterias filamentosas del género Streptomyces, 11% de otras bacterias filamentosas y

22% por hongos filamentosos (Demain, 1999).

3.7.2. Formatted: Heading 3, Left, Line spacing: single, Adjust


space between Latin and Asian text, Adjust space between
Asian text and numbers
3.7.2. ENZIMAS EXTRACELULARES
Formatted: Font: Not Italic
Formatted: Left, Line spacing: Multiple 1.15 li, Adjust space
Las actinobacterias son un grupo de bacterias saprófitas y de crecimiento filamentoso between Latin and Asian text, Adjust space between Asian
text and numbers
que son capaces de producir una amplia variedad de enzimas extracelulares (León,

2007). No sorprende, por lo tanto, que el genoma de Streptomyces codifique un alto

número de proteínas que son liberadas al medio exterior (Ghanem et al., 2000).

Los actinomicetos producen diversas enzimas extracelulares como las lipasas, amilasas,

quitinasas, celulasas (Chaudhary et al., 2013). Estas son importantes en la industria del

papel, textil, farmaceútica, alimentaria y del combustible. (Sharma, 2014).

3.7.3. 3.7.3. METABOLITOS CON CAPACIDAD ANTAGÓNICA Formatted: Heading 3, Left, Line spacing: single, Adjust
space between Latin and Asian text, Adjust space between
Asian text and numbers
Formatted: Font: Not Italic
Los biactivos más conocidos con capacidad antagónica son los antibióticos. Durante los

años 50 y 60 se descubrieron la gran mayoría de antibióticos, esta época se denominó

como la “Edad de Oro del descubrimiento de antibióticos” (Hopwood, 2007).

Dos tercios de los antibióticos son de origen natural, incluyendo muchos de los que son

importantes en la medicina, como los aminoglucosidos, cloramfenicol, antraciclinas,

macrólidos, betalactámicos y tetraciclinas (Deepa et al., 2011).

La mayoría se obtienen a partir de actinomicetos de origen marino y terrestre, siendo los

de origen marino mejores antagonistas (Vimal et al., 2009). Entre los 140 géneros de
Formatted: Right

27
actinomicetos descritos, algunos poseen más de 10 000 compuestos bioactivos en uso

clínico (Adegboye y Babalola, 2013).

La necesidad de nuevos agentes antimicrobianos, son uno de los desafíos que se Formatted: Space After: 0 pt, Don't adjust space between
Latin and Asian text, Don't adjust space between Asian text
and numbers
proponen la industria farmaceútico, ya que cada vez más existen casos de infecciones

oportunistas en hospederos inmunosuprimidos y cepas multidrogorresistentes, tales

como Staphylococcus aureus, Enterococcus spp y Pseudomonas aeruginosa (Singh et

al., 2012).

Además existen antibióticos con la capacidad de producir compuestos antagónicos en la

agricultura frente a bacterias, hongos y oomicetos fitopatógenos, que causan grandes

pérdidas económicas. Para considerar que un microorganismo sea un buen antagonista y

así aplicarlo a campo se debe tomar en cuenta que pueda expandirse sin afectar al

ecosistema y que sea muy selectivo para afectar únicamente a los patógenos, y no a los

usuarios ni a los alrededores de la zona. Diversos ensayos han sido probados con éxito

con muy buenos resultados (Quiñones et al., 2016). Por ejemplo de un actinomiceto con

potencial aplicación agrícola es el caso de Streptomyces setonii 'UFV-RD1' aislado de

tomate, capaz de inhibir la germinación de conidios de los hongos, y del Oomiceto

Phytophthora infestans, probado tanto in vitro como in vivo (Carrer Filho, 2009) Formatted: Font: Not Bold, Italic
Formatted: Font: Not Bold, Italic
Formatted: Font: Not Bold, Italic

Formatted: Right

28
Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,
Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
at: 0.75"

IV. 4. HIPÓTESIS Y OBJETIVOS Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,


Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
at: 0.75", Adjust space between Latin and Asian text, Adjust
space between Asian text and numbers

4.1. Hipótesis

4.1. Hipótesis
Formatted: Justified
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Los actinomicetos nativos presentes en la rizósfera de la papa (Solanum tuberosum) son
Formatted: List Paragraph, Justified, Bulleted + Level: 1 +
Aligned at: 0.25" + Indent at: 0.5"
productores de compuestos bioactivos con capacidad antagónica frente a Phytophthora
Formatted: Font: (Default) Arial
infestans. Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
 Variables Independientes: Actinomicetos, Phytophthora infestans , medios de Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
cultivo, tipo de suelo, pH, T°, potencial redox..
Formatted: Font: (Default) Arial

Variables dependientes: Producción de cCompuestos bioactivos, actividad Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Formatted: Font: (Default) Arial
antagónica de actinomicetos frente a Phytophthora infestans Formatted: Font: (Default) Arial, Bold
Formatted: List Paragraph, Bulleted + Level: 1 + Aligned at:
0.25" + Indent at: 0.5", Don't adjust space between Latin
and Asian text, Don't adjust space between Asian text and
numbers
Formatted: List Paragraph, Left, Line spacing: single
Formatted: Right

29
 Formatted: List Paragraph, Bulleted + Level: 1 + Aligned at:
0.25" + Indent at: 0.5", Don't adjust space between Latin
and Asian text, Don't adjust space between Asian text and
numbers

V. 5. FORMULACIÓN DE OBJETIVOS, GENERAL Y ESPECÍFICOS Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,
Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
at: 0.75"
5.1 5.1. Objetivo general:
Formatted: Font: Not Bold

 Aislar, caracterizar y Aislar y caracterizarcContar con una colección Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Space After: 0
pt, Line spacing: Multiple 1.15 li, Outline numbered + Level: 2
+ Numbering Style: 1, 2, 3, … + Start at: 1 + Alignment: Left
(germoplasma) de actinomicetos rizosféricos de cultivos orgánicos de papa nativa + Aligned at: 0" + Indent at: 0.25"

(Solanum tuberosum spp. andigena) y evaluar su con actividad antagonista frente

al patógeno Phytophthora infestans.

5.2 5.2. Objetivos específicos: Formatted: Heading 2, Left, Indent: Left: 0", First line: 0",
Line spacing: single, Outline numbered + Level: 2 +
Numbering Style: 1, 2, 3, … + Start at: 1 + Alignment: Left +
 Aislar cepas de actinomicetos nativos presentesnativos de la rizósfera de 6 Aligned at: 0" + Indent at: 0.25"

variedades de papa nativa (Solanum tuberosum spp. andigena) cultivadas en la

localidad de Cabana – Lucanas – Ayacucho - Perú.

 Evaluar la capacidad antagonista de los actinomicetos aislados frente al principal

patógeno Oomiceto Phytophthora infestans que afecta a los cultivos orgánicos de

papa. nativa.

 Realizar la caracterización fenotípica mediante procedimientos macroscópicos y Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold, Font color: Black
Formatted: Indent: Left: -0.25", Space After: 0 pt
microscópicos de actinomicetos seleccionados con potencial aplicación como Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold, Font color: Black

biocontrolador del “tizón tardío de la papa”. Formatted: Font: (Default) Arial, Font color: Black

Formatted: Left, Indent: Left: 0.5", Line spacing: Multiple


1.15 li, No bullets or numbering

Formatted: Right

30
Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,
Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
at: 0.75"
Formatted: Font color: Text 1

Formatted: Font: Not Bold

VI. 6. MATERIALES Y MÉTODOS


Formatted: Left, Space After: 0 pt, Line spacing: Multiple
1.15 li

6.1 Formatted: Heading 2, Left, Line spacing: single


Formatted: Font: Not Bold
6.1. MATERIALES

6.1.1. 6.1.1. Material biológico Formatted: Font: Not Italic


Formatted: Left, Space After: 0 pt, Line spacing: Multiple
1.15 li
Los materiales biológicos que se emplearon fueron:

a. Actinomicetos aislados de muestras de rizósfera de cultivos orgánicos de papa nativa

recolectados en la localidad de Cabana – Lucanas – Ayacucho - Perú.

b. Cepario de oomicetoOomiceto fitopatógeno Phytophthora infestans, cepa PHU-117,

mantenido mantenida en el cepario del Laboratorio de Ecología Microbiana de la

Universidad Nacional Mayor de San Marcos (UNMSM) proveniente del cultivo de papa de

Huánuco. (proporcionada por el Blgo. Wilbert) Centro Internacional de la Papa (CIP).

Formatted: Right

31
6.1.2. Medios de cultivo y material químico Formatted: Heading 2, Left, Indent: Left: -0.25", Line
 Medios de cultivo: spacing: single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering
Style: 1, 2, 3, … + Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at:
Agar Centeno 0" + Indent at: 0.25"
Agar Czapeck
Agar Asparragina
Agar Avena
Agar Almidón Caseína
Agar ISP 9
Medio extracto de levadura glucosa
Agar almidón
Agar carboximetilcelulosa
 Antibióticos:
Nistatina
Ácido Nalidíxico.
 Batería de coloración Gram.

 Sustancias químicas:
Fenol
Cloruro de sodio
Alcohol 70o
Agua destilada
Glicerol
Azul de lactofenol
6.1.3. Material de vidrio:
Placas Petri
Tubos de ensayo
Pipetas, matraces
Espátula de Drigalsky
Láminas
Laminillas
Viales
6.1.5. Equipos:
Cabina de seguridad biológica
Incubadora
Autoclave
Estufa
Horno microondas Formatted: Font: Not Bold
Baño de maría y Balanza de precisión Formatted: Heading 3, Left, Line spacing: single
Formatted: Font: Not Italic
Balanza de precisiónMmicroscopio óptico Formatted: Left, Space After: 0 pt, Line spacing: Multiple
6.2. MÉTODOS 1.15 li
6.2 Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
6.2.1. 6.2.1. LOCALIDAD DE MUESTREO
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
La localidadEl distrito de Cabana se encuentrbatar ubicada ……. al noreste de la
Formatted: Font: 11 pt, Not Bold

provincia de Lucanas, en el Sureste de la región Ayacucho, zona de Sierra comprendida Formatted: Font: 11 pt, Not Bold
Formatted: Font: 11 pt, Not Bold
entre las coordenadas 14°17'10'' Latitud Sur y 73°57'51'' Longitud Oeste, a una altitud de Formatted: Font: Not Bold, Superscript
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
3,288 msnm con un área total de 402,63 Km2 (León y León, 2017).
Formatted: Right

32
6.2.2. TOMA DE MUESTRAS Y TRANSPORTE AL LABORATORIO DE TRABAJO Formatted: Font: Not Italic
Formatted: Heading 3, Left, Line spacing: single
El muestreo se realizó en los campos de cultivo de papa en el liugar denominado de la Formatted: Left, Space After: 0 pt, Line spacing: Multiple
1.15 li
localidad HWuashaswualaca (3,7408 msnm) , siendo la parte más alta de la región

Quechua de Cabana (León y León, 2017).de Cabana-Lucanas-Región de Ayacucho,

Perú. Se muestreó las rizósferas (raíces y el suelo que rodea a cada planta) de 2 plantas

al azar de cada uno de los campos de cultivo siendo estos pertenecientes a las

variedades de papa nativa Canchán, Futis, Huayro, Cuchipa-akan, y Jompis y Chaska, Formatted: Font: Not Bold, Italic
Formatted: Font: Not Bold, Italic
realizando una mezcla de las mismas. De aquella mezcla, se colectó aproximadamente Formatted: Font: Not Bold, Italic
Formatted: Font: Not Bold, Italic
200 g de muestra, las cuales se colocaron en bolsas Ziploc rotuladas y posteriormente se
Formatted: Font: Not Bold, Italic
trasladaron al Laboratorio de Ecología Microbiana de la Facultad de Ciencias Biológicas Formatted: Font: Not Bold, Italic

de la UNMSM para su procesamiento según (Calvo et al. (, 2008).

6.2.3. Formatted: Heading 3, Left

6.2.2 AISLAMIENTO Formatted: Font: Not Italic


Formatted: Left, Space After: 0 pt
Se pesó 10 g de suelo de cada muestra seca compuesta por la rizósfera de los cultivos

de papa, los cuales se colocaron dentro de un frasco estéril con 90 mL de solución salina

con 1,5% de fenol, luego se agitó vigorosamente alrededor de 25 veces incubándolo por

30 minutos a 30 °C. Esta primera dilución fue considerada como 10 -1, de la cual se tomó Formatted: Font: Not Bold, Superscript

1 mL y se transfirió a 9 mL de solución salina, de esta manera realizando se realizó

diluciones seriadas hasta llegar a 10-4 (Hayakawa et al., 2004). Formatted: Font: Not Bold, Superscript
Formatted: Font: Not Bold, Italic

Luego, 100 μL de las diluciones 10-2, 10-3 y 10-4 se sembraron por duplicado en Agar Formatted: Font: Not Bold, Superscript
Formatted: Font: Not Bold, Superscript
Avena, Agar Asparragina, Agar Czapeck y Agar Almidón Caseína, todsos a pH de 7 y Formatted: Font: Not Bold, Superscript

suplementados con nistatina a una concentración de 50 μg/mL para inhibir la microbiota

micótica acompañante y Ácido nalidíxico a una concentración de 25 μg/mL para inhibir la

Formatted: Right

33
microbiota Gram negativa. Finalmente las placas fueron incubadas a 28° C por 15 a 20

días (León et al., 2007). Formatted: Font: Not Bold, Italic

6.2.4. Formatted: Heading 3, Left, Line spacing: single

6.2.3 SELECCIÓN DE COLONIAS CEPAS DE ACTINOMICETOS ANTAGÓNICOS Formatted: Font: Not Italic
: Formatted: Font: Not Italic
Las placas que presentaron crecimiento visible y distintos tipos de colonias de

actinomicetos fueron escogidas para la purificaciónel aislamiento de las cepas. De cada

una de las placas se seleccionaron colonias de morfologías diferentes pero con típicas

características de actinomicetos, las cuales son colonias secas, fuertemente adheridas al

agar y que tienen apariencia aterciopelada, granulosa o pulverulenta,; fueron sembradas

por estriado en Agar Avena suplementado con Nistatina y Ácido Nalidíxico, ya que hubo

mayor aislamientoun buen crecimiento en este agar, se incubaron a en las condiciones

anteriormente mencionadas. Todos los cultivos que estaban contaminados fueron

replicados hasta la obtención de cultivos puros (Rico, 2009).

6.2.5 Formatted: Heading 3, Left, Line spacing: single

6.2.4 CONSERVACIÓN DE LOS CULTIVOS PUROS DE ACTINOMICETOS Formatted: Font: Not Italic
Formatted: Left, Space After: 0 pt, Line spacing: Multiple
1.15 li
Una vez aisladas y purificadas las cepas de actinomicetos purificadas, se conservaron a

largo plazo hasta la realización de la prueba de antagonismo, sembrándolos en viales con

Formatted: Right

34
4 ml de Agar Avena con glicerol al 20 %. Estos fueron almacenados en un congelador a 4
o
C (Sánchez et al., 2011).

6.2.6. 6.2.5 CARACTERIZACIÓN MORFOLÓGICA DE ACTINOMICETOS AISLADOS Formatted: Font: Not Italic
Formatted: Heading 3, Left, Line spacing: single
Para caracterizar los cultivos de actinomicetos aislados se re-sembraron en agar Avena. Formatted: Left, Space After: 0 pt, Line spacing: Multiple
1.15 li
Los cultivos puros se describieron teniendo en cuenta características macroscópicas de

la colonia como superficie, forma, tamaño, así como la producción de pigmentos. Se

realizó coloración Gram y microcultivos para observar características microscópicas. Para

la identificación microscópica de género se realizará realizó un microcultivo, utilizando

como colorante de contraste al azul de lactofenol (Franco-Correa et al., 2010), teniendo

en cuenta características como micelio aéreo y vegetativo, fragmentación del micelio,

agrupación de esporas, entre otras, comparándolas con las descritas en el Manual de

Determinación Bacteriológica de Bergey (Whitman et al., 2012).

6.2.7. 6.2.6 CARACTERIZACIÓNDETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD Formatted: Heading 3, Left, Line spacing: single
BIOQUÍMICAHIDROLÍTICA Y ASIMILACIÓN DE CARBOHIDRATOS Formatted: Font: Not Italic
Formatted: Font: Not Italic
Se determinó la capacidad productiva de enzimas hidrolíticas para la utilización de Formatted: Left, Space After: 0 pt, Line spacing: Multiple
1.15 li
polisacáridos tales como almidón y celulosa. Se usaron medios de cultivo tales como

Agar Almidón y Agar Mandels y Reese, a los cuales se les colocó una concentración de

1% (p/v) de los carbohidratos almidón y carboximetilcelulosa respectivamente. Luego

sobre la superficie del medio, se sembraron por puntura y por duplicado a los

actinomicetos.

Las placas se incubaron a 28 °C por 7 días. Posteriormente, para la determinación de la

actividad amilolítica, se cubrió la superficie del medio con Lugol para observar la

formación de un halo que evidencie la producción de amilasas.

Formatted: Right

35
En el caso de la actividad celulolítica, a la superficie del medio se añadió solución de Rojo

de Congo para observar los halos producto de actividad de las celulasas (Caicedo, 2012).

La actividad enzimática se halla con la siguiente fórmula (Hankin et al., 1975). Formatted: Font: Not Bold

Dónde:

R: Radio del halo de actividad enzimática del actinomiceto


r: Radio de la colonia del actinomiceto
Formatted: Line spacing: single

Para la caracterización bioquímica del metabolismo de los actinomicetos, se realizaron

pruebas de asimilación y utilización de carbohidratos, tales como glucosa, manitol y

sacarosa (Rico, 2009) en base al agar ISP 9 como medio mínimo suplementado con los

azúcares ya mencionados.

6.2.8. 6.2.7 CARACTERIZACIÓN FISIOLÓGICA DE ACTINOMICETOS Formatted: Heading 3, Left, Line spacing: single
Formatted: Font: Not Italic
Formatted: Heading 3, Left, Indent: Left: 0.85", Line
Todos los actinomicetos aislados fueron caracterizados en función de pruebas fisiológicas spacing: single

según lo señalado por Calvo y Zúñiga (2010) modificado.

Rango de crecimiento en función de la temperatura: En placas de Agar Avena se

sembraron sembró por puntura y por duplicado un cultivo de 5 días de actinomicetos por

duplicado en medio Extracto de Levadura Glucosa, las cuales se incubaronluego fueron

incubados a las temperaturas de 4 y 45oC, usando el control de 28oC.

Se evaluó midiendo el diámetro de las colonias cada 48 horas durante 15 días, con la

finalidad de observar el crecimiento y adaptación de cada cepa de actinomicetos a las

diferentes temperaturas que están expuestas los cultivos de papa en el Perú.

Rango de crecimiento en función del pH: En placas de Agar Avena regulado a Formatted: Left, Space After: 10 pt, Line spacing: Multiple
1.15 li, Adjust space between Latin and Asian text, Adjust
diferentes gradientes de pH se sembraron por duplicado un cultivo de 5 días de space between Asian text and numbers
actinomicetos en Medio Extracto de Levadura Glucosa. Los medios fueron regulados a
Formatted: Right

36
pH 5,5; 7 y 8, utilizando el pH 7 como control. El crecimiento se evaluó cada 48 horas por
8 días midiendo el diámetro de las colonias con el fin de determinar su capacidad de
adaptación a suelos de diferente pH bajo que presentan algunas zonas de la serranía del
Perú como la localidad estudiada, Cabana-Ayacucho.

Formatted: Space After: 10 pt, Adjust space between Latin


and Asian text, Adjust space between Asian text and numbers

6.2.9. 6.2.8 REACTIVACIÓN CARACTERIZACIÓN DE Phytophthora infestans Formatted: Font: Not Italic
Formatted: Heading 3, Left, Line spacing: single, Adjust
space between Latin and Asian text, Adjust space between
El Oomiceto fitopatógeno de mayor importancia agrícola en los cultivos de papa para los Asian text and numbers
Formatted: Font: Not Italic
ensayos de antagonismo es Phytophthora infestans. Este oomiceto fue resembrado en
Formatted: Left, Line spacing: Multiple 1.15 li, Adjust space
between Latin and Asian text, Adjust space between Asian
Agar centeno para su reactivación, mantenimiento y observación en microcultivo con azul text and numbers

de lactofenol (Sánchez et al., 2011). Formatted: Font: Not Bold, Italic

La cepa PHU 117, proveniente de cultivo de papa de Huánuco, se incubó en Agar Avena

y en Agar Centeno a 28°C por 7 días, y se mantuvo a temperatura ambiente para su

caracterización microscópica.

6.2.10. Formatted: Heading 3, Left, Line spacing: single, Adjust


space between Latin and Asian text, Adjust space between
Asian text and numbers

6.2.9 PRUEBA DE ANTAGONISMO EN PLACADE ACTINOMICETOS VS. Formatted: Font: Not Italic
Phytophthora infestans
Formatted: Font: (Default) +Body (Calibri), Not Bold
Para el ensayo de antagonismo en placa, se usó la técnica del co-cultivo, las cepas de Formatted: Left, Line spacing: Multiple 1.15 li, Adjust space
between Latin and Asian text, Adjust space between Asian
text and numbers
actinomicetos se sembraron por puntura en 3 extremos equidistantes de una placa Petri

con Agar Avena y Agar Centeno, posteriormente en el centro de la placa se sembró por

puntura Phytophthora P.infestans y se incubó a 28°C por 10 días. (Castillo, 2004).

Además, se realizó una siembra por puntura de Phytophthora P. infestans en el centro de

una placa con Agar Avena y Centeno sin actinomicetos, las cuales sirvieron como control,

también fueron incubadas a 28°C por 10 días. Las pruebas se realizaron por triplicado..

Formatted: Right

37
Finalmente, al cabo de este tiempo, se tomaroán las medidas de las áreas alrededor de

cada cepa de actinomiceto para calcular el porcentaje de inhibición, resultado que se

expresóará en porcentaje siguiendo la técnica propuesta por Ahmed et al. (2007) como

se describe a continuación.

% de Actividad = (R-r)/R x 100 Formatted: Font: (Default) Calibri, 10 pt, Not Bold

Dónde:

R: Radio del halo de inhibición entre el actinomiceto y el oomiceto


r: Radio de la colonia del actinomiceto

6.2.11. Formatted: Heading 3

OBTENCIÓN DEL EXTRACTO ORGÁNICO Formatted: Font: Not Italic


Formatted: Space After: 0 pt
La obtención del extracto orgánico se realizó de acuerdo al procedimiento realizado por Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Font: Not Bold
Pérez et al. (2015). Una suspensión de 25 ml de los actinomicetos con capacidad Formatted: Justified, Line spacing: Double
Formatted: Font: Not Bold, Italic
antagónica en Caldo Extracto de Levadura Glucosa se inoculó en un matraz Erlenmeyer
Formatted: Font: Not Bold
de 500 mL con 225 mL del mismo medio. El matraz se incubó por 10 días a temperatura Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Font: Not Bold
ambiente con una agitación de sobre un agitador a 250 rpm. Transcurrido ese tiempo, el Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Font: Not Bold
cultivo fue centrifugado a 4000 rpm por 25 minutos, y el sobrenadante fue sometido al
Formatted: Font: Not Bold
método de extracción por solvente para recuperar y concentrar los metabolitos Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Font: Not Bold
antimicrobianos presentes en el cultivo. Los solventes utilizados fueron etil acetato, Formatted: Font: Not Bold

diclorometano, y butanol, los cuales se agregaron al sobrenadante en una proporción de Formatted: Font: Not Bold

1:1 (v/v), agitando la mezcla vigorosamente por 1 hora para completar la extracción. Formatted: Font: Not Bold

Después que los extractos orgánicos fueron separados de la fase acuosa, estos fueron Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Font: Not Bold, Superscript
llevados para evaporación con ayuda de un rotavapor a 40 oC; luego el residuo obtenido Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Right

38
fue pesado y re-suspendido en dimetilsulfóxido (DMSO) al 10% para su conservación y Formatted: Font: Not Bold

posterior análisis

6.2.12. DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTI- Phytophthora DE LOS Formatted: Font: Not Italic
Formatted: Font: Not Italic
EXTRACTOS ORGÁNICOS Formatted: Heading 3, Justified, Line spacing: Double

Formatted: Font: Not Bold


Un volumen conocido del extracto orgánico recuperado y re-suspendido en Formatted: Space After: 0 pt
Formatted: Justified, Space After: 10 pt, Adjust space
dimetilsulfóxido al 10%, se colocó en pocillos de 5 mm practicados sobre el medio Agar between Latin and Asian text, Adjust space between Asian
text and numbers

Avena, donde fueron previamente sembrado el oomiceto Phytophthora infestans. Las Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Font: Not Bold
placas fueron incubadas a temperatura ambiental por 5 días. La actividad anti Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Font: Not Bold, Italic
Phytophthora infestans se determinó por la medida del halo de inhibición según Pandey
Formatted: Font: Not Bold

et al. (2004). Formatted: Font: Not Bold, Italic


Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Font: Not Bold, Italic
Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Justified

Formatted: Right

39
Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,
Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
at: 0.75", Adjust space between Latin and Asian text, Adjust
space between Asian text and numbers

Formatted: Font: Not Bold

Formatted: Font: Not Bold


Formatted: Line spacing: Multiple 1.15 li, Adjust space
VII. 7. RESULTADOS between Latin and Asian text, Adjust space between Asian
text and numbers
Formatted: Heading 2, Left, Line spacing: single, Adjust
space between Latin and Asian text, Adjust space between
7.1. 7.1. Selección de coloniasCOLONIAS DE ACTINOMICETOS Asian text and numbers
Formatted: Right

40
Se logró aislar un total de 32 cepas de actinomicetos a partir Habiéndose cumplido el

tiempo de incubación, se revisaron las placas de aAgar Aavena, aAgar Aasparragina,

aAgar Aalmidón Ccaseína y aAgar Cczapeck. Las en busca de colonias típicas de

actinomicetos: colonias secas,presentan consistencia seca, fuertemente adheridas al

agar y de apariencia aterciopelada, granulosa o pulverulenta, con o sin producción de

pigmento. (Estas fueron sembradas por estriado en Agar avena con la finalidad de

obtener cultivos puros (Figura 13). En total se obtuvieron 32 aislamientos de

actinomicetos.

AISLAMIENTO Y REPICAJE

1
2

Figura 31. Cultivos puros de ocho cepas de actinomicetos aislados en Agar Avena Formatted: Font: Bold
Formatted: Font: Bold

7.2 Formatted: Heading 2, Line spacing: single, Adjust space


between Latin and Asian text, Adjust space between Asian
text and numbers
7.2 CARACTERIZACIÓN FENOTÍPICA DE LOS AISLAMIENTOS

Caracterización morfológica Formatted: Font: Not Italic


Formatted: Font: Not Bold
La caracterización morfológica de los actinomicetos se realizó en base a las Formatted: Line spacing: Multiple 1.15 li, Adjust space
between Latin and Asian text, Adjust space between Asian
text and numbers
observaciones macroscópicas y microscópicas de los cultivos.

Formatted: Right

41
En cuanto a las características macroscópicas, como se puede observar en la Tabla 21,

las colonias de actinomicetos presentan en su mayoría una coloración crema, forma

regular, elevación convexa, borde entero, consistencia dura y producción de pigmentos,

especialmente verde (Figura 42 y 3).

La caracterización microscópica mediante la técnica de microcultivos, permitió observar

detalles del micelio aéreo y vegetativo, la fragmentación del micelio y la agrupación de

esporas. En la mayor parte de las láminas de microcultivo de cada muestra, se apreció

una disposición de esporas a manera de espiral, típica del género Streptomyces (Figura

54).

CARACTERIZACIÓN MACROSCÓPICA DE
ACTINOMICETOS TERRESTRES

2
2

B Formatted: Font: Not Bold


A
.
.
7
7
Figura 4 Formatted: Font: Bold
.
. Formatted: Font: Bold
2.A. Caracterización macroscópica de las Ccolonias
3 de actinomicetos en Agar Avena a los 5 días Formatted: Justified
de cultivo
3 Formatted: Justified, Space Before: 12 pt, After: 0 pt, Line
. spacing: single
B. Colonia
. de la cepa CAB10_2
M
M
E
E Formatted: Right

T
T
A
A 42
3 B
B
2
O
O
FIGURA 3. Caracterización macroscópica de la cepa CAB10_J2
Formatted: Font: 12 pt
Formatted: Centered, Space After: 0 pt, Line spacing:
Double, Don't adjust space between Latin and Asian text,
Don't adjust space between Asian text and numbers, Tab
stops: 3.42", Left

4
3

4 4
A B

Figura 5 Formatted: Font: Bold


Formatted: Justified, Line spacing: Multiple 1.15 li
A. 4. Observación microscópica de un microcultivo de actinomicetos con formación de filamentos Formatted: Font: Bold
en espiral. Aumento: (4000x) (puntero) Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: List Paragraph, Justified, Numbered + Level: 1 +
B. Observación microscópica de los actinomicetos. Aumento (1000x). Numbering Style: A, B, C, … + Start at: 1 + Alignment: Left +
Aligned at: 0.25" + Indent at: 0.53"
Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: List Paragraph, Justified, Indent: Left: 0.53"
Formatted: List Paragraph, Justified, Numbered + Level: 1 +
Numbering Style: A, B, C, … + Start at: 1 + Alignment: Left +
Aligned at: 0.25" + Indent at: 0.53"

FIGURA 5. Observación microscópica GRAM de los


actinomicetos terrestres (1000x)

Formatted: Right

43
Tabla 21. caracterizaciónCaracterización macroscópica MORFOLÓGICA de Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt, Not Bold
Formatted: Font: 12 pt, Not Bold
colonias de actinomicetos aisladas de la rizósfera de papa nativa, cultivadas en Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt, Not Bold
Formatted: Centered
Formatted: Font: 12 pt, Not Bold
CARACTERIZACIÓN MACROSCÓPICA EN AGAR AVENA Formatted: Left, Position: Vertical: 1.87", Relative to: Page
N° DE CÓDIGO VARIEDAD
Formatted: Centered, Space After: 0 pt, Line spacing:
CEPA DE CEPA DE PAPA
single, Position: Vertical: 1.87", Relative to: Page
Formatted: Font: (Default) Arial, 9 pt
Formatted: Font: (Default) Arial, 9 pt, Bold
Formatted: Font: 9 pt
Formatted: Font: 9 pt
Formatted: Font: 9 pt
Formatted: Font: 9 pt, Bold
Formatted: Font: 9 pt, Bold
Formatted: Font: 9 pt, Bold

Cabana-Ayacucho, 2017 TERRESTRE Formatted: Font: 12 pt

Formatted: Right

44
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
FORMA PIGMENTO COLOR BORDE ELEVACIÓN Formatted ...

1 CAB3_1 Canchán Regular Verde Blanco Elevado Convexa Formatted ...


Formatted ...
2 CAB3_2 Canchán Regular Sp Blanco Entero Convexa
Formatted Table ...
3 CAB3_3 Canchán Regular Sp Plomo Entero Convexa
Formatted ...
4 CAB4_1 Canchán Irregular Sp Crema Entero Convexa
Formatted ...
5 CAB4_2 Canchán Irregular Sp Crema Entero Convexa
Formatted ...
6 CAB4_3 Canchán Regular Sp Crema Entero Convexa
Formatted ...
7 CAB4_4 Canchán Irregular Verde Blanco Entero Convexa
Formatted ...
8 CAB4_5 Canchán Irregular Verde Crema Elevado Convexa
Formatted ...
9 CAB4_6 Canchán Irregular Verde Crema Entero Convexa
Formatted ...
10 CAB5_1 Futis Regular Rojo Blanco Elevado Convexa
Formatted ...
11 CAB5_2 Futis Regular Verde Crema Elevado Convexa
Formatted ...
12 CAB5_3 Futis Regular Verde Crema Entero Convexa
Formatted ...
13 CAB5_4 Futis Irregular Verde Crema Entero Convexa
Formatted ...
14 CAB5_5 Futis Irregular Verde Blanco Entero Convexa
Formatted ...
15 CAB6_1 Futis Regular Sp Plomo Entero Convexa Formatted ...
16 CAB7_1 Huayro Irregular Amarillo Blanco Entero Convexa Formatted ...
17 CAB7_2 Huayro Regular Mostaza Crema Elevado Convexa Formatted ...
18 CAB7_3 Huayro Regular Mostaza Crema Elevado Convexa Formatted ...
19 CAB7_4 Huayro Regular Sp Plomo Elevado Pulviniforme Formatted ...
20 CAB7_5 Huayro Regular Sp Rojo Elevado Pulviniforme Formatted ...
21 CAB8_1 Huayro Regular Sp Crema Entero Convexa Formatted ...
22 CAB8_2 Huayro Regular Verde Crema Entero Convexa Formatted ...
23 CAB9_1 Cuchipa-akan Regular Sp Blanco Elevado Acuminada Formatted ...
24 CAB9_2 Cuchipa-akan Irregular Sp Crema Entero Convexa Formatted ...
25 CAB9_3 Cuchipa-akan Irregular Sp Crema Elevado Convexa Formatted ...
26 CAB9_4 Cuchipa-akan Regular Verde Crema Elevado Convexa Formatted ...
27 CAB10_1 Jompis Regular Rojo Blanco Elevado Convexa Formatted ...
28 CAB10_2 Jompis Irregular Amarillo Crema Entero Pulviniforme Formatted ...
29 CAB10_3 Jompis Irregular Amarillo Plomo Entero Pulviniforme Formatted ...
30 CAB10_4 Jompis Regular Mostaza Blanco Entero Convexa Formatted ...
31 CAB10_5 Jompis Regular Rojiza Crema Elevado Convexa Formatted ...
32 CAB10_6 Jompis Regular Sp Crema Elevado Convexa Formatted ...
Formatted ...
Sp: Sin pigmentación
Formatted ...
Sp: Sin pigmentación Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
45
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
7.3. 7.3 DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD HIDROLÍTICAbioquímica Y Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt
Formatted: Font: (Default) Arial
ASIMILACIÓN DE CARBOHIDRATOS Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt
Formatted: Font: (Default) Arial

La primera parte de la caracterización bioquímica fue en base a la prueba de asimilación

y utilización de carbohidratos. Tanto la utilización positiva como negativa de los azucares

se detectaron gracias al crecimiento del actinomicetos en agar ISP 9 (medio mínimo),

como se observa en la Figura 66.

GLUCOSA SACAROSA MANITOL


GLUCOSA

4
6
2

FIGURA 66. Crecimiento de los actinomicetos en el medio ISP 9 con glucosa, sacarosa Formatted: Font: (Default) Arial, Bold
y manitol respectivamente. Formatted: Justified
Formatted: Font: Bold
Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: Font: (Default) Arial

Los resultados de asimilación de carbohidratos por los actinomicetos fueron muy Formatted: Font: 11 pt, Not Bold

variables (Tabla 32). Por la cantidad de carbohidratos asimilados (Figura 77), los

actinomicetosel actinomiceto CAB7_5 fue el único que que no utilizaron ninguno de los Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, Not Bold
Formatted: Font: 11 pt, Not Bold
carbohidratos ensayados fueron 1no utilizó ninguno de los carbohidratos (3%), mientras
Formatted: Right

46
que los que usaron todos fueron 31 (97%). Por el tipo de azúcar asimilado, aquellos

actinomicetos que usaron la glucosa fueron 31 cepas (97%), los que utilizaron la

sacarosa fueron 31 (97%), y los que utilizaron el manitol fueron 31 (97%). Formatted: Font: 11 pt

Asimilación de carbohidratos Formatted: Font: 11 pt

3%
Ningun azucar

1 azúcar

2 azúcares
97%

Figura 77. Formatted: Justified, Line spacing: single


Formatted: Font: 11 pt
Porcentaje de cepas de actinomicetos en base a la cantidad de carbohidratos utilizados
Formatted: Font: 11 pt

Formatted: Right

47
Formatted: Right

48
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Tabla 3. Prueba de asimilación de carbohidratos
Tabla 2. Prueba de asimilación de carbohidratos Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
N° DE CÓDIGO VARIEDAD DE GLUCOSA SACAROSA MANITOL
N° DE CEPA CÓDIGO DE GLUCOSA SACAROSA MANITOL Formatted
CEPA DE CEPA
CEPA PAPA ...
1 1 CAB3_1 Canchán+ + + + Formatted ...
CAB3_CA1 + +
2 2 CAB3_2 Canchán+ + + + Formatted ...
CAB3_CA2 + +
3 3 CAB3_3 Canchán+ + + + Formatted ...
CAB3_CA3 + +
4 4 CAB4_1 Canchán+ + + + Formatted ...
CAB4_CA1 + +
5 5 CAB4_2 Canchán+ + + + Formatted ...
CAB4_CA2 + +
6 6 CAB4_3 Canchán+ + + + Formatted ...
CAB4_CA3 + +
7 7 CAB4_4 Canchán+ + + + Formatted ...
CAB4_CA4 + +
8 8 CAB4_5 Canchán+ + + + Formatted ...
CAB4_CA5 + +
Formatted ...
9 9 CAB4_6
CAB4_CA6 Canchán+ + + + + +
Formatted ...
1010 CAB5_1
CAB5_F1 Futis + + + + + +
Formatted ...
1111 CAB5_2
CAB5_F2 Futis + + + + + +
Formatted ...
1212 CAB5_3
CAB5_F3 Futis + + + + + +
Formatted ...
1313 CAB5_4
CAB5_F4 Futis + + + + + +
Formatted ...
1414 CAB5_5
CAB5_F5 Futis + + + + + +
Formatted ...
1515 CAB6_1
CAB6_F1 Futis + + + + + +
Formatted ...
1616 CAB7_1
CAB7_H1 Huayro + + + + + +
Formatted ...
1717 CAB7_2
CAB7_H2 Huayro + + + + + +
Formatted ...
1818 CAB7_3
CAB7_H3 Huayro + + + + + +
Formatted ...
1919 CAB7_4
CAB7_H4 Huayro + + + + + +
Formatted ...
2020 CAB7_5
CAB7_H5 Huayro - - - - - -
Formatted ...
2121 CAB8_1
CAB8_H1 Huayro + + + + + +
Formatted ...
2222 CAB8_2
CAB8_H2 Huayro + + + + + +
Formatted ...
2323 CAB9_CU1
CAB9_1 +
Cuchipa-akan + + + + +
Formatted ...
2424 CAB9_CU2
CAB9_2 +
Cuchipa-akan + + + + +
Formatted ...
2525 CAB9_CU3
CAB9_3 +
Cuchipa-akan + + + + +
26 CAB9_CU4 + + + Formatted ...
26 CAB9_4 Cuchipa-akan + + +
27 CAB10_J1 + + + Formatted
27 CAB10_1 Jompis + + + ...
28 CAB10_J2 + + + Formatted
2829 CAB10_2 Jompis + + + + ...
CAB10_J3 + +
2930 CAB10_3 Jompis + + + + Formatted ...
CAB10_J4 + +
3031 CAB10_4 Jompis + + + + Formatted ...
CAB10_J5 + +
3132 CAB10_5 Jompis + + + + Formatted ...
CAB10_J6 + +
32 CAB10_6 Jompis + + + Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Resultados: Positivo (+), Negativo (-).
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
49
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
La última parte de la caracterización bioquímica está relacionada a la capacidad para

sintetizar enzimas capaces de degradar polisacáridos tales como almidón y celulosa

(Tabla 4 y 53). Dentro de los resultados, encontramos que la totalidad de las cepas

(100%) son capaces de sintetizar amilasas, siendo la cepa CAB9_CU4 la que tiene

mayor actividad amilolítica (Figura 8 5); mientras que el 50% son capaces de sintetizar

celulasas, siendo la cepa CAB10_J2 la que tiene mayor actividad celulolítica (Figura 9);.

Formatted: Font: Not Bold

5
8

Figura 8. Actividad amilolítica de los actinomicetos en Agar Almidón revelada con lugol Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: Centered

6
9 Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: Right
Figura 99. Actividad celulolítica de los actinomicetos en Agar Mandels y Reese revelada con
rojo de congo al 1%

50
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Tabla 4: Producción de enzimas extracelulares de actinomicetos aislados de la
Formatted Table ...

rizósfera de diversas papas nativas frente a celulosa y almidón Formatted ...


Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Porcentaje de actividad enzimática Formatted ...
N° N° DE CÓDIGO DE extracelular (%±σ)
Formatted ...
CEPA CEPA CELULOSA ALMIDÓN
Formatted ...
Formatted ...
1 CAB3_1 Canchán - 82,25±0,1
Formatted ...
2 CAB3_2 Canchán - 79,73±0,1
Formatted ...
3 CAB3_3 Canchán 58,14±0,1 72,97±0,1
Formatted ...
4 CAB4_1 Canchán 57,40±0,1 80,55±0,2
Formatted ...
5 CAB4_2 Canchán 71,10±0,2 76±0,1
6 CAB4_3 Canchán 71,57±0,1 81,03±0,1 Formatted ...
7 CAB4_4 Canchán - 83,03±0,1 Formatted ...
8 CAB4_5 Canchán - 79,79±0,2 Formatted ...
9 CAB4_6 Canchán - 28,89±0,2 Formatted ...
10 CAB5_1 Futis 55,10±0,1 80,56±0,3 Formatted ...
11 CAB5_2 Futis - 70,49±0,1 Formatted ...
12 CAB5_3 Futis - 73,75±0,1 Formatted ...
13 CAB5_4 Futis - 58,74±0,1
Formatted ...
14 CAB5_5 Futis - 61,14±0,1
Formatted ...
15 CAB6_1 Futis 61,05±0,1 76,09±0,2
Formatted ...
16 CAB7_1 Huayro - 73,18±0,2
Formatted ...
17 CAB7_2 Huayro 58,33±0,2 7,14±0,1
18 CAB7_3 Huayro 30,50±0,1 70,69±0,3 Formatted ...
19 CAB7_4 Huayro 51,20±0,1 51,20±0,2 Formatted ...
20 CAB7_5 Huayro 37,50±0,3 37,50±0,1 Formatted ...
21 CAB8_1 Huayro 64,39±0,1 70,81±0,1 Formatted ...
22 CAB8_2 Huayro - 74,88±0,1 Formatted ...
23 CAB9_1 Cuchipa-akan 25,00±0,2 64,44±0,1 Formatted ...
24 CAB9_2 Cuchipa-akan - 12,16±0,2 Formatted ...
25 CAB9_3 Cuchipa-akan - 33,33±0,2
Formatted ...
26 CAB9_4 Cuchipa-akan - 83,80±0,1
Formatted ...
27 CAB10_1 Jompis - 61,93±0,1
Formatted ...
28 CAB10_2 Jompis - 78,31±0,1
Formatted ...
29 CAB10_3 Jompis 63,68±0,3 62,10±0,2
30 CAB10_4 Jompis 75,71±0,2 64,38±0,1 Formatted ...
31 CAB10_5 Jompis 73,12±0,1 63,71±0,1 Formatted ...
32 CAB10_6 Jompis 54,52±0,2 42,86±0,2 Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
51
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted: Heading 2, Outline numbered + Level: 2 +
Numbering Style: 1, 2, 3, … + Start at: 2 + Alignment: Left +
Aligned at: 0.2" + Indent at: 0.2"
TABLA 3 PRUEBA DEL ALMIDÓN + LUGOL 1:1
N° CEPA PRUEBA DE CARBOXIMETILCELULOSA A LOS 10 Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
DÍAS single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
Formatted: Font: (Default) +Headings (Cambria), Bold
Formatted: Font: (Default) +Headings (Cambria), Bold
Formatted: Font: (Default) +Headings (Cambria), Bold

Formatted: Heading 2, Left, Outline numbered + Level: 2 +


Numbering Style: 1, 2, 3, … + Start at: 2 + Alignment: Left +
Aligned at: 0.2" + Indent at: 0.2"
Formatted: Heading 2, Outline numbered + Level: 2 +
Numbering Style: 1, 2, 3, … + Start at: 2 + Alignment: Left +
Aligned at: 0.2" + Indent at: 0.2"
Formatted: Right

52
Radio de la Radio del Porcentaje de la Formatted: Font: Not Bold
colonia halo de actividad Formatted: Font: Not Bold
(mm) inhibición enzimática (%) Formatted: Font: Not Bold
(mm)
1 CAB3_CA1 4.74 No 0 Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
celulolítico single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
2 CAB3_CA2 3.4 No 0 Indent at: 0.2"
celulolítico Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
3 CAB3_CA3 4.73 11.30 58.14 single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
4 CAB4_CA1 4.6 10.8 57.40 Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
5 CAB4_CA2 3.8 13.15 71.10 3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
6 CAB4_CA3 2.53 8.90 71.57 single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
7 CAB4_CA4 3.5 No 0
celulolítico Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
8 CAB4_CA5 3.28 No 0 3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
celulolítico Indent at: 0.2"

9 CAB4_CA6 1.46 No 0 Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
celulolítico 3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
10 CAB5_F1 1.85 4.12 55.10 Indent at: 0.2"
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
11 CAB5_F2 4.57 No 0 single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
celulolítico Indent at: 0.2"
12 CAB5_F3 3.68 No 0 Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
celulolítico single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
13 CAB5_F4 7.16 No 0 Indent at: 0.2"
celulolítico
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
14 CAB5_F5 5.83 No 0 single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
celulolítico 3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
15 CAB6_F1 3.03 7.78 61.05
Formatted ...
Formatted ...
16 CAB7_H1 1.86 No 0
celulolítico Formatted ...
17 CAB7_H2 1.25 3 58.33 Formatted ...
Formatted ...
18 CAB7_H3 2.78 4 30.50 Formatted ...
Formatted ...
19 CAB7_H4 1.83 3.75 51.20 Formatted ...
Formatted ...
20 CAB7_H5 2 3.2 37.50
Formatted ...
Formatted ...
21 CAB8_H1 5.43 15.25 64.39
Formatted ...

22 CAB8_H2 4.3 No 0 Formatted ...


celulolítico
Formatted: Right

53
23 CAB9_CU1 6 8 25 Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
24 CAB9_CU2 1.75 No 0 Indent at: 0.2"
celulolítico Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
25 CAB9_CU3 1 No 0 single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
celulolítico Indent at: 0.2"
26 CAB9_CU4 2.65 No 0 Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
celulolítico single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
27 CAB10_J1 1.21 No 0 3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
celulolítico
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
28 CAB10_J2 3.75 No 0 single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
celulolítico 3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
29 CAB10_J3 5.63 15.50 63.68
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
30 CAB10_J4 4.25 17.50 75.71 3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"

31 CAB10_J5 2.15 8 73.12 Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
32 CAB10_J6 5.23 11.5 54.52 Indent at: 0.2"
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
7.4. single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
TABLA 4.PRUEBA DE LA CARBOXIMETILCELULOSA CMC + ROJO DE CONGO Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
Formatted: Heading 2, Left, Adjust space between Latin and
Asian text, Adjust space between Asian text and numbers
7.4 CARACTERIZACIÓN FISIOLÓGICA DE LOS ACTINOMICETOS Formatted: Heading 2, Left
Formatted: Heading 2
7.4.1. 7.4.1. Rango de crecimiento en función de la temperatura Formatted: Heading 2, Left
Formatted: Heading 2, Line spacing: single, Adjust space
between Latin and Asian text, Adjust space between Asian
Transcurrido el tiempo de incubación, se midió el diámetroobservó el crecimiento de las text and numbers
Formatted: Font: Not Italic
colonias en el Agar Avena, con la finalidad de hacer una comparación entre el tamaño Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Space After: 10 pt, Line spacing: Multiple 1.15
alcanzado en condiciones normales y en las modificadas, mediante una relación de li, Adjust space between Latin and Asian text, Adjust space
between Asian text and numbers
porcentaje con respecto al control (Tabla 565). Así, se llegó a determinar que a 4 °C, 28

cepas (87,.5%) no llegaron a crecer , y de las que sí lo hicieron, 4 de ellas (100%)

redujeron en más de 50% su crecimiento con respecto al control (Figura 8); a temperatura Formatted: Right

54
de 28°C, los 32 aislados (100%) lograron crecer, y mientras que a 45°C , 3 cepas (9.4%)

crecieron, y 2 de ellas redujeron en más de 50% su crecimiento con respecto al control

(Figura 89).solo 3 cepas (9,.4%) crecieron.

7.4.2. Crecimiento en función a temperatura Formatted: Font: Not Bold


Formatted: Heading 3, Left, Line spacing: single, Adjust
space between Latin and Asian text, Adjust space between
2.5 % Asian text and numbers

No crecieron

Crecieron con
eficiencia reducida
mayor al 50%

Rango de crecimiento en función del pH Formatted: Font: Not Italic


Formatted: Heading 3, Line spacing: single, Adjust space
between Latin and Asian text, Adjust space between Asian
text and numbers
Se sembró en agar Avena a pH 5.5, pH 7,0 y pH 8.5. Transcurrido el tiempo de
87.5 % Formatted: Font: Not Bold
crecimiento, se observaron las placas de agar avena (Tabla 5). . En este ensayo, se llegó Formatted: Space After: 10 pt, Line spacing: Multiple 1.15
li, Adjust space between Latin and Asian text, Adjust space
between Asian text and numbers
a determinar que a pH 5.5, pH 7,0 y pH 8.5, la totalidad detodas las cepas (100%)

crecieron. Formatted: Font: (Default) Arial, Bold

Formatted: Left, Line spacing: Double

Formatted: Right

55
Formatted: Font: 12 pt
Formatted: Centered

Formatted: Line spacing: Double

Formatted: Centered

Figura 10. Porcentaje de cepas de actinomicetos en base a su crecimiento a

4 °C. Formatted: Font: 12 pt, Bold

Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt


Formatted: Centered
Crecimiento en función a temperatura Formatted: Font: 12 pt
0.63% 0.37 %
No crecieron Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt, Bold
96 %
Formatted: Font: 12 pt

Crecieron con
eficiencia reducida
mayor al 50%

Crecieron con
eficiencia reducida
menor al 50%

Figura 11.

Porcentaje de cepas de actinomicetos en base a su crecimiento a 45 °C.

Tabla 565. Porcentaje de eficiencia de crecimiento de actinomicetos a diferentes Formatted: Line spacing: Double
Formatted: Font: Not Bold
temperaturas con respecto al control (28 °C) a los 15 días.Caracterización

fisiológica de los actinomicetos en agar avena


Formatted: Right

56
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Porcentaje de eficiencia de T°
CÓDIGO VARIEDAD DE crecimiento en Formatted Table ...
NRO DE CEPA PAPA función de la temperatura con Formatted ...
DE Código de cepa respecto al
Formatted ...
CEPA control (%)pH
Formatted ...
4° C5.5 45°C7.0 8.5 4°C 28°C 45°C Formatted ...
Formatted ...
1 CAB3_1 CanchánCAB3_ ++0.0 ++0.0 ++ - ++ - Formatted ...
CA1 Formatted ...
2 CAB3_2 CanchánCAB3_ ++0.0 ++0.0 ++ - ++ - Formatted ...
CA2 Formatted ...
3 CAB3_3 CanchánCAB3_ ++0.0 ++100. ++ - ++ ++
Formatted ...
CA3 0
Formatted ...
4 CAB4_1 CanchánCAB4_ ++0.0 ++0.0 ++ - ++ -
CA1 Formatted ...
5 CAB4_2 CanchánCAB4_ ++0.0 ++0.0 ++ - ++ - Formatted ...
CA2 Formatted ...
6 CAB4_3 CanchánCAB4_ ++0.0 ++0.0 ++ - ++ - Formatted ...
CA3 Formatted ...
7 CAB4_4 CanchánCAB4_ ++0.0 ++0.0 ++ - ++ -
Formatted ...
CA4
Formatted ...
8 CAB4_5 CanchánCAB4_ ++0.0 ++0.0 ++ - ++ -
CA5 Formatted ...
9 CAB4_6 CanchánCAB4_ ++0.0 ++0.0 ++ - ++ - Formatted ...
CA6 Formatted ...
10 CAB5_1 FutisCAB5_F1 ++0.0 ++0.0 ++ - ++ - Formatted ...
11 CAB5_2 FutisCAB5_F2 ++0.0 ++0.0 ++ - ++ - Formatted ...
12 CAB5_3 FutisCAB5_F3 ++0.0 ++0.0 ++ - ++ -
Formatted ...
13 CAB5_4 FutisCAB5_F4 ++0.0 ++0.0 ++ - ++ -
Formatted ...
14 CAB5_5 FutisCAB5_F5 ++0.0 ++0.0 ++ - ++ -
15 CAB6_1 FutisCAB6_F1 ++0.0 ++0.0 ++ - ++ - Formatted ...
16 CAB7_1 HuayroCAB7_H ++0.0 ++0.0 ++ - ++ - Formatted ...
1 Formatted ...
17 CAB7_2 HuayroCAB7_H ++0.0 ++0.0 ++ - ++ - Formatted ...
2 Formatted ...
18 CAB7_3 HuayroCAB7_H ++0.0 ++0.0 ++ - ++ -
Formatted ...
3
Formatted ...
19 CAB7_4 HuayroCAB7_H ++37.04 ++0.0 ++ + ++ -
4 Formatted ...
20 CAB7_5 HuayroCAB7_H ++0 ++39.0 ++ - ++ + Formatted ...
5 6 Formatted ...
21 CAB8_1 HuayroCAB8_H ++0.0 ++0.0 ++ - ++ - Formatted ...
1 Formatted ...
22 CAB8_2 HuayroCAB8_H ++0.0 ++0.0 ++ - ++ -
Formatted ...
2
Formatted ...
23 CAB9_1 Cuchipa- ++0.0 ++0.0 ++ - ++ -
akanCAB9_CU1 Formatted ...
24 CAB9_2 Cuchipa- ++0.0 ++0.0 ++ - ++ - Formatted ...
akanCAB9_CU2 Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
57
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
25 CAB9_3 Cuchipa- ++0.0 ++0.0 ++ - ++ -
Formatted ...
akanCAB9_CU3
26 CAB9_4 Cuchipa- ++0.0 ++0.0 ++ - ++ - Formatted ...
akanCAB9_CU4 Formatted ...
27 CAB10_1 JompisCAB10_J ++41.18 ++0.0 ++ + ++ - Formatted ...
1 Formatted ...
28 CAB10_2 JompisCAB10_J ++75.85 ++0.0 ++ ++ ++ - Formatted ...
2
Formatted ...
29 CAB10_3 JompisCAB10_J ++0.0 ++77.2 ++ - ++ ++
Formatted ...
3 7
30 CAB10_4 JompisCAB10_J ++0.0 ++0.0 ++ - ++ - Formatted ...
4 Formatted ...
31 CAB10_5 JompisCAB10_J ++0.0 ++0.0 ++ - ++ - Formatted ...
5 Formatted ...
32 CAB10_6 JompisCAB10_J ++21.43 ++0.0 ++ + ++ - Formatted ...
6
Formatted ...
Formatted ...
(++) Crecimiento regular
Formatted ...
(+) Poco crecimiento
Formatted ...
Formatted ...
(-) No hubo crecimiento,( Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
,( Formatted ...
Formatted ...
Rango de crecimiento en función del pH
Se sembró en agar Avena a pH 5.5, pH 7 y pH 8.5. Transcurrido el tiempo de Formatted ...
crecimiento, se realizaron las mediciones y se halló la relación de porcentaje con Formatted ...
respecto al control, que presentaba pH 7 (Tabla 6). En este ensayo, se llegó a Formatted ...
determinar que a pH 5.5, 32 cepas (100%) crecieron, de ellas, el 100% redujeron Formatted ...
en menos de 50% su eficiencia de crecimiento con respecto al control (Figura
Formatted ...
10); mientras que a pH 8,5, el 100% logró crecer, y todas ellas tuvieron una
eficiencia de crecimiento mayor al 50% respecto al control (Figura 11). Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
100 % Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Figura 12. Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
58
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Porcentaje de cepas de actinomicetos en base a su crecimiento a pH 5.5
Formatted: Font: Not Bold

Crecimiento en función al pH
100%
No crecieron

Crecieron con Figura


13. eficiencia Formatted: Font: 11 pt, Bold
reducida mayor al 50% Formatted: Font: Bold
Crecieron con Formatted: Font: Bold
eficiencia Formatted: Font: Bold
reducida menor al 50%
Formatted: Font: 11 pt, Bold
Formatted: Font: Bold
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
Porcentaje de cepas de actinomicetos en base a su crecimiento a pH 8.5 single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
Tabla 6. Porcentaje de eficiencia de crecimiento de actinomicetos a diferentes 3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
pHs con respecto al control (pH 7) a los 15 días. Indent at: 0.2"
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
PORCENTAJE DE EFICIENCIA DE Indent at: 0.2"
NRO DE Código de cepa CRECIMIENTO EN Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
CEPA FUNCIÓN DEL PH CON RESPECTO AL single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
CONTROL 3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
5.5 8.5 single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
1 CAB3_CA1 74.8 100.0
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
2 CAB3_CA2 78.0 95.3 3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"

3 CAB3_CA3 100.0 100.0 Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
4 CAB4_CA1 100.0 100.0 Indent at: 0.2"
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
5 CAB4_CA2 96.2 96.7 3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
6 CAB4_CA3 73.7 98.6 Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
7 CAB4_CA4 98.2 99.1 Indent at: 0.2"
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
8 CAB4_CA5 100.0 100.0 single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
9 CAB4_CA6 100.0 100.0
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
10 CAB5_F1 100.0 100.0 3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
Formatted: Right

59
11 CAB5_F2 100.0 100.0 Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
12 CAB5_F3 100.0 100.0 Indent at: 0.2"
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
13 CAB5_F4 90.0 100.0 single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
14 CAB5_F5 71.1 99.2 Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
15 CAB6_F1 53.5 91.4 3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
16 CAB7_H1 100.0 100.0 single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
17 CAB7_H2 63.4 100.0
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
18 CAB7_H3 100.0 100.0 3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"

19 CAB7_H4 58.6 99.4 Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
20 CAB7_H5 100.0 96.4 Indent at: 0.2"
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
21 CAB8_H1 76.4 100.0 single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
22 CAB8_H2 67.5 100.0 Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
23 CAB9_CU1 72.2 100.0 Indent at: 0.2"
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
24 CAB9_CU2 59.4 94.5 single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
25 CAB9_CU3 88.3 98.2
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
26 CAB9_CU4 65.6 91.1 3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"

27 CAB10_J1 78.3 96.4 Formatted ...


Formatted ...
28 CAB10_J2 75.8 90.3 Formatted ...
Formatted ...
29 CAB10_J3 69.6 100.0 Formatted ...
Formatted ...
30 CAB10_J4 78.1 94.6 Formatted ...
Formatted ...
31 CAB10_J5 86.9 95.9
Formatted ...
Formatted ...
32 CAB10_J6 72.5 90.6
Formatted ...
Formatted ...
7.5. Formatted ...

Formatted: Right

60
7.5 CARACTERÍSTICASIZACIÓN DE Phytophthora infestans

P. infestans en placa se presenta con un micelio aéreo blanco, algodonoso y radiado, Formatted: Font: Not Bold, Italic

fácil de retirar con el asa de siembra, crece en toda la placa aproximadamente en 7 días

de incubación a 28°C en Agar Avena y Agar Centeno.


A1 B1 Formatted: Centered
En el microscopio óptico se observan las 5hifas son cenocíticas transparentes. Los Formatted: Centered
5
esporangios tienen forma de limón (Fry, 2008). Formatted: Font: Not Bold, Not Italic

CARACTERÍSTICAS MACROSCÓPICAS Y
Figura 10 Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, Bold
Formatted: Font: (Default) Arial, Bold
A5. Phytophthora infestans en agar CentenoAvena. Formatted: Font: 11 pt
Formatted: Font: 11 pt
FIGURA 1B6. Phytophthora infestans en agar Avena.Centeno
Formatted: Font: 11 pt
Formatted: Font: 11 pt

Formatted: Centered

MICROSCÓPICAS DE Phytophthora infestans

Formatted: Centered
Formatted: Right
91
5

61
Formatted: Left, Space After: 10 pt, Line spacing: Multiple
1.15 li, Adjust space between Latin and Asian text, Adjust
space between Asian text and numbers

Formatted: Centered

Formatted: Left, Space After: 10 pt, Line spacing: Multiple


Figura 11 14. Observación microscópica de los esporangios de Phytophthora infestans en 1.15 li, Adjust space between Latin and Asian text, Adjust
forma de limón y del micelio en en azul de lactofenol (400x). space between Asian text and numbers
Formatted: Font: (Default) Arial, Bold
Formatted: Font: (Default) Arial, Bold
Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt
Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt
Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt
Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: Left, Space After: 10 pt, Line spacing: Multiple
7.6. 1.15 li, Adjust space between Latin and Asian text, Adjust
space between Asian text and numbers
Formatted: Heading 2, Left, Line spacing: single, Adjust
space between Latin and Asian text, Adjust space between
Asian text and numbers
Formatted: Heading 2, Left, Line spacing: single

FIGURA 15. Phytophthora infestans en agar Formatted: Font: 11 pt


Centeno. Formatted: Heading 2, Left, Line spacing: single, Adjust
space between Latin and Asian text, Adjust space between
FIGURA 16. Phytophthora infestans en agar Asian text and numbers

Avena.

7.6 PRUEBA DE ANTAGONISMO EN PLACA

Transcurrido el tiempo de incubación para este ensayo, se calcularon los porcentajes de

inhibición siguiendo la técnica propuesta por Ahmed et al. (2007), la cual consiste en

medir con ayuda de un calibrador Vernier la distancia del crecimiento entre el

actinomiceto-hongo fitopatógeno, a la cual se le resta el radio de la colonia del

actinomiceto, para finalmente dividirlo entre la distancia del crecimiento entre el

actinomiceto-hongo fitopatógeno y multiplicarlos por 100. Los resultados se pueden

apreciar en la Tabla 87 y Tabla 98.6. Formatted: Right

62
De las 32 cepas de actinomicetos aislados, el 71,9% (23) de estas cepas inhibieron el

crecimiento del oomiceto Phytophthora infestans.

Los porcentajes de inhibición obtenidos varían entre 13,33 y 80,05 %, siendo la cepa

CAB10_J2 aquella que presentó el porcentaje de inhibición más alto en Agar Avena y

Agar Centeno (Figura 1221 y Figura 1332).

PORCENTAJE DE INHIBICIÓN
NRO DE CÓDIGO VARIEDAD FRENTE A P, infestans (%)

Formatted: Right

63
CEPA DE CEPA DE PAPA
AGAR AVENA AGAR CENTENO

1 CAB3_1 Canchán 50 0
2 CAB3_2 Canchán 13,33 0
3 CAB3_3 Canchán 0 0
4 CAB4_1 Canchán 33,33 0
5 CAB4_2 Canchán 26,66 37,50
6 CAB4_3 Canchán 16,66 16,67
7 CAB4_4 Canchán 33,33 32,79
8 CAB4_5 Canchán 57,14 38,00
9 CAB4_6 Canchán 11,11 0
10 CAB5_1 Futis 16,66 0
11 CAB5_2 Futis 44,44 21,05
12 CAB5_3 Futis 16 0
13 CAB5_4 Futis 44,44 0
14 CAB5_5 Futis 37,5 0
15 CAB6_1 Futis 0 0
16 CAB7_1 Huayro 37,3 37.3
17 CAB7_2 Huayro 0 0
18 CAB7_3 Huayro 0 0
19 CAB7_4 Huayro 0 0
20 CAB7_5 Huayro 16,66 0
21 CAB8_1 Huayro 37,73 0
22 CAB8_2 Huayro 33,33 0
23 CAB9_1 Cuchipa-akan 30,43 0
24 CAB9_2 Cuchipa-akan 58,33 0
25 CAB9_3 Cuchipa-akan 0 0
26 CAB9_4 Cuchipa-akan 77,47 30,16
27 CAB10_1 Jompis 39,81 42,31
28 CAB10_2 Jompis 80,05 43,90
29 CAB10_3 Jompis 0 0
30 CAB10_4 Jompis 40 0
31 CAB10_5 Jompis 60 0
32 CAB10_6 Jompis 60 31,07
Tabla 6. 7.pruebaPrueba de antagonismo de los actinomicetos frente a Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt

Pphytophthora infestans en agar Aavena y en agar Centeno Formatted: Font: 12 pt, Not Bold
Formatted: Font: 12 pt, Not Bold

Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt, Italic

Formatted: Right

64
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
1B
15 Formatted ...
5
A Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Figura 12. Antagonismo frente a Phytophthora infestans en Agar Avena
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
TABLA 8.PRUEBA DE ANTAGONISMO DE LOS ACTINOMICETOS FRENTE A Phytophthora Formatted ...
infestans EN AGAR CENTENO Formatted ...
Formatted ...
NRO CÓDIGO ANTAGONISMO (10 DÍAS) EN AGAR CENTENO Formatted ...
RADIO DE LA COLONIA RADIO DEL HALO DE PORCENTAJE DE INHIBICIÓN Formatted ...
DE
(MM) INHIBICIÓN (MM) FRENTE A (%) Formatted ...
CEPA
Formatted ...
Formatted ...
1 CAB3_CA1 1.8 0 0
Formatted ...
2 CAB3_CA2 1.45 0 0
Formatted ...
3 CAB3_CA3 3.0 0 0
4 CAB4_CA1 3.2 0 0 Formatted ...
5 CAB4_CA2 5.0 8.0 37..50 Formatted ...
6 CAB4_CA3 5.0 6.0 16.67 Formatted ...
7 CAB4_CA4 4.1 6.1 32.79
Formatted ...
8 CAB4_CA5 3.1 5.0 38.00
Formatted ...
9 CAB4_CA6 1.4 0 0
10 CAB5_F1 5.0 0 0 Formatted ...
11 CAB5_F2 1.5 1.9 44.44 Formatted ...
12 CAB5_F3 1.19 0 0 Formatted ...
13 CAB5_F4 3.2 0 0
Formatted ...
14 CAB5_F5 2.1 0 0
Formatted ...
15 CAB6_F1 1.32 0 0
Formatted ...
16 CAB7_H1 3.3 5.1 37.3
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
65
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
17 CAB7_H2 2 0 0
FIGURA
18 1A7.CAB7_H3
Las cepas CAB4_CA2,
2.75 CAB4_CA4 0 y CAB4_CA5 son antagonistas
0 frente a Formatted ...
Phytophthora
19 infestans en Agar Avena.
CAB7_H4 3 0 0 Formatted ...
20 CAB7_H5 2.4 0 0 Formatted ...
FIGURA
21 1B8.CAB8_H1
La cepa CAB10_J2 2.1 con 80.05% de 0inhibición es la más antagonista
0 frente a
Formatted ...
Phytophthora
22 infestans de los 32 2.3
CAB8_H2 actinomicetos aislados
0 en Agar Avena. 0
Formatted ...
23 CAB9_CU1 1.45 0 0
Formatted ...
24 CAB9_CU2 1.44 0 0
25 CAB9_CU3 1.0 0 0 Formatted ...
26 CAB9_CU4 4.4 6.3 30.16 Formatted ...
27 CAB10_J1 4.5 7.8 42.31 Formatted ...
28 CAB10_J2 4.6 8.2 43.90 Formatted ...
29 CAB10_J3 4.1 0 0
Formatted ...
30 CAB10_J4 2.0 0 0
Formatted ...
31 CAB10_J5 5.0 0 0
32 CAB10_J6 7.1 10.3 31.07 Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
ANTAGONISMO FRENTE A Phytophthora infestans EN AGAR AVENA Y EN AGAR
Formatted ...
CENTENO
Formatted ...
Figura 11. Antagonismo frente a phytophthora infestans en agar avena y en agar Formatted ...
centeno. Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted FIGURA 18. La cepa CAB10_J2 con 80.05
...
Formatted
inhibición es la más antagonista fren
...
Phytophthora infestans de los
Formatted ...
actinomicetos aislados en Agar Avena.
Formatted ...
Formatted ...

17 18 Formatted ...

0 0 Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
66
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Figura 138. La cepa12 CAB10_J2 con 43.90% de inhibición es la más antagonista frente a Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, Bold
Phytophthora infestans90de los 32 actinomicetos aislados en Agar Centeno. Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, Bold
Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt

7.7. 7.7. OBTENCIÓN DEL EXTRACTO ORGÁNICOACTIVIDAD ANTI-Phytophthora Formatted: Font: Italic
DE LOS EXTRACTOS ORGÁNICOS Formatted: Heading 2
Formatted: Font: 11 pt
La cepaEl actinomiceto CAB10_2 fue escogida , cepa que fue elegida para probar la
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold

actividad de los extractos obtenidos con los solventes: acetato de etilo, diclorometano y Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
butanol; no mostraron actividad in la preparación de extractos orgánicos y su posterior Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
ensayo de determinación de actividadvitro antifúngica, debido a su capacidad antagonista
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
frente al cultivo de Phytophthora infestans (Figura 14). A pesar de que se determinó el
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold, Italic
peso seco a cada extracto (Tabla 7),, estos al ser resuspendidos en DMSO al 10% no Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
ffueron utilizadosactivos en las pruebas. Formatted: Font: Not Bold, Italic
Formatted: Font: Not Bold, Italic
y sus elevados porcentajes de inhibición frente a dos de las cuatro cepas. Los solventes Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
utilizados para la extracción de los metabolitos presentes en el medio de cultivo fueron Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold

elegidos tomando en cuenta su polaridad y su punto de ebullición. Las características

químicas básicas de cada uno de ellos se encuentran en la tabla 9.

Los extractos obtenidos fueron concentrados hasta la obtención de los pesos secos Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold

(Tabla 10). Posteriormente, los extractos se resuspendieron en dimetilsulfóxido (DMSO) Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold

al 10% para la realización del ensayo en placa de avena, la cual contenía pocillos de 5 Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold

mm de diámetro, donde se colocó 0,5 ml de extracto orgánico. Al término de los 5 días de

Formatted: Right

67
incubación, se realizó la lectura de las placas, siguiendo la técnica propuesta por Pandey

et al. (2004). Se tomó como control negativo al DMSO al 10%.

TABLA 9. ASPECTOS QUÍMICOS DE LOS SOLVENTES ORGÁNICOS UTILIZADOS Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: Font: Bold
Formatted: Centered
SOLVENTE ETIL ACETATO DICLOROMETANO BUTANOL
Formatted: Centered, Space After: 0 pt

NOMBRE IUPAC Acetato de Etilo Cloruro de metileno Butan-1-ol Formatted Table


Formatted: Centered, Space After: 0 pt
TIPO DE Éster Haloalcano Alcohol Formatted: Centered, Space After: 0 pt, Line spacing:
Multiple 1.15 li
COMPUESTO
Formatted: Centered, Space After: 0 pt
FORMULA CH3-COOCH2-CH3 CH2Cl2 CH3-CH2- CH2-CH2-
Formatted: Centered, Space After: 0 pt, Line spacing:
SEMIDESARROLLADA OH Multiple 1.15 li
POLARIDAD Polar aprótico Polar aprótico Polar prótico Formatted: Centered, Space After: 0 pt
Formatted: Centered, Space After: 0 pt, Line spacing:
PUNTO EBULLICIÓN 77 °C 40 °C 118 °C Multiple 1.15 li
Formatted: Centered, Space After: 0 pt
Formatted: Centered, Space After: 0 pt, Line spacing:
Multiple 1.15 li
Formatted: Centered, Space After: 0 pt

Tabla 710. Extracto orgánico obtenido del cultivo de la cepa CAB10_2 Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt
Formatted: Font: 12 pt
Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt
SOLVENTE ETIL ACETATO DICLOROMETANO BUTANOL LÍQUIDO
Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt, Not Bold
Peso seco (mg) 10.4 8.9 10.6 Formatted: Font: 12 pt, Not Bold
Formatted Table

Los extractos obtenidos con etil acetato, diclorometano y butanol no presentaron halos Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: Justified
de actividad antifúngica contra Phytophtora infestans. Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Formatted: Font: Not Bold, Italic

Formatted: Right

68
Formatted: Font: (Default) Arial, Bold
Formatted: Font: (Default) Arial
BUTANOL ETIL ACETATO Formatted: Centered
CAB10_2 CAB10_2
Formatted: Font: 8 pt
Formatted: Centered
Formatted: Font: 8 pt

DICLOROMETANO
DMSO 10% Formatted: Font: 7 pt
CAB10_2
Formatted: Centered
Formatted: Centered

DMSO 10%Phytophthora infestans Formatted: Font: 8 pt


Formatted: Font: 9 pt, Italic
Formatted: Centered
Figura 143. Formatted: Font: Bold

A. Los extractos de la cepa CAB10_2 en diclorometano, butanol y etilacetato en Agar Formatted: Line spacing: Multiple 1.15 li
Avena. Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold

Control negativo: DMSO AL 10% Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold

Control positivo: Phytophthora infestans Formatted: Font: (Default) Arial

Formatted: Line spacing: single

Formatted: Font: Not Bold


Formatted: Heading 1, Left, Line spacing: single, Adjust
space between Latin and Asian text, Adjust space between
Asian text and numbers

Formatted: Right

69
8. DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Line spacing: Multiple 1.15 li

VIII. DISCUSIÓN Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,


Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
at: 0.75", Adjust space between Latin and Asian text, Adjust
space between Asian text and numbers
A nivel mundial se reconoce el gran potencial que tienen los actinomicetos como
Formatted: Adjust space between Latin and Asian text,
Adjust space between Asian text and numbers
productores de metabolitos secundarios de importancia biotecnológica, tales como los

antibióticos y enzimas extracelulares (Arasu et al., 2008), en nuestro medio aún hay

pocos estudios de investigación sobre los grandes aportes que nos pueden proporcionar

estos microorganismos, tales como su posible aplicación en el control biológico de

fitopatógenos.

Se logró obtener una gran cantidad de cepas de actinomicetos provenientes de la

rizósfera de S. tuberosum. Autores como Tsavkelova et al. (2006) señalan que los

exudados de las raíces de las plantas atraen por quimiotaxis a una diversidad de géneros

bacterianos, tales como Agrobacterium, Azotobacter y Azospirillum, con los cuales las

plantas establecen una relación estrecha no simbiótica de colonización epifítica, la que

estimula y facilita el crecimiento vegetal directamente por la producción de moléculas

tales como las fitohormonas. Sin embargo, según lo mencionado por Franco (2009), a

diferencia del primer grupo mencionado anteriormente, los actinomicetos presentan un

segundo tipo de relación con las plantas, la cual se produce por la síntesis de moléculas

con actividad antimicrobiana que protegen a la raíz de la planta de la invasión de ciertos

patógenos, por lo que los actinomicetos se consideran promotores de crecimiento vegetal

indirecto.

Aunque existe una amplia gama de microorganismo pertenecientes al Orden de los

Actinomycetales, los métodos de aislamiento convencionales han demostrado que por lo

menos el 90% de los actinomicetos aislados a partir del suelo pertenecen al género

Streptomyces (Smaoui et al., 2011).


Formatted: Right

70
Se concuerda con losLos resultados obtenidos en la caracterización morfológica de los

actinomicetos, puesto que la gran mayoría presentaba característicasson compatibles al

género Streptomyces, las cuales presentan pigmentación verde, roja, naranja, gris y

consistencia dura y pulvurulenta, microscópicamente posee cadenas de conidias que no

se fragmentan que coinciden con las características propuestas por (Reddy et al., 2011).

Lo cual coincide con las características presentadas de los actinomicetos aislados en

esta investigación.

La prueba de utilización de azucares demostró que más de la mitad de los aislados de

este trabajoun buen número de actinomicetos (97%) pueden utilizar glucosa, manitol y

sacarosa. En el trabajo de Rico (2009) se muestra que solo el 15% puede utilizar los

azúcares ya mencionados. En ambos estudios se trabajaron con muestras de rizósfera

de papa, pero la diferencia en la utilización de azúcares es abismal. Esto se puede

explicar a que las muestras provienen de distintos lugares, Rico (2009) colectó tierras

provenientes de Huánuco, Huancavelica, Cajamarca y Junín; mientras que en el presente

trabajo las muestras fueron colectadas en Ayacucho. Por tanto distintos climas y

condiciones ambientales. Cada factor físico y químico del suelo influye en el crecimiento

o actividad de los microorganismos (Benintende et al., 2000).

En cuanto a la hidrólisis de enzimas extracelulares, los resultados con respecto a la

actividad amilolítica son del 100 %, lo que comprueba el porcentaje alto de síntesis de

amilasas León (2007). A su vez Caro (2016) con un porcentaje menor (89,9%) Gutiérrez

(2017), tiene resultados parecidos con un 62% de actinomicetos amilolíticos siendo estas

cepas de origen terrestre. En cuanto a cepas marinas (León et al., 2016) reporta un

resultado menor del 50 % de cepas con capacidad de sintetizar almidón.

Formatted: Right

71
Una diferencia sustancialgran diferencia se observa en cuanto a la producción de

amilasas con respecto a las celulasas de las cepas ensayadas.

Se determinó que un 50% tenía actividad celulolítica; un valor muy parecido a lo

reportado por Gutiérrez (2017) menciona que el 53% de las cepas eran celulolíticas

respectivamente, En contraste con Caro (2016) que solo obtuvo un 26,5% de cepas

celulolíticas

Los resultados con respecto a la caracterización fisiológica demuestran que es factible un

bioinóculo en papa. Los resultados mostraron que a 4 °C, un 87,.5% y a 45 °C un 90,6%

no pudieron crecer luego de un periodo de 15 díaass, mientras que a 45 °C un 90.6% no

pudo crecer luego de un periodo de 15 días. La temperatura de la tierra evaluada

(CABANA, AYACUCHO) fue 7,5°C, quizás habría dificultad en el bioinóoculo ya que los

actinomicetos aislados en el presente trabajo son capaces de crecer en condiciones

psicrófilas (12,.5%)

Rico (2009), reporta que a 10°C, el 65% de sus aislados crecieron, pero a menor tamaño.

A 15°C y 20°C, el 100% de las cepas crecieron y aumentaron el tamaño de las colonias.

Cisneros (2016) reporta que a 5°C ninguno de sus aislados creció, y que en el rango de

20°C-37°C los actinomicetos crecieron en un 100 %.

En cuanto a la evaluación del crecimiento a diferentes pH. A pH 5,5, las cepas crecieron

en un 100% en menos de 8 días con respecto al control. Muy parecidos similares con

estos resultados, Rico (2009) quien encuentra que todos los actinomicetos pudieron

crecer a pH 5,5. A diferencia de Cisneros (2016) que determina que ninguna de sus

cepas crecía a pH 5.5. Ambos estudios tienen mucho que ver con las características

fisicoquímicas del suelo de donde se aislaron los actinomicetos, ya que provienen de la

rizósfera de papa, y de suelos fértiles y fríos de Rico (2009) obtiene muestras de suelo

con pHs bastante muy bajos, menores a 5. Formatted: Right

72
Además de ellos, los actinomicetos frente a un pH de 8,5, crecieron eficientemente

puesto que el 100% se desarrolló en menos de 8 días. Se puede decir que los

actinomicetos encontrados en la rizósfera de los cultivos de papa de Cabana son

capaces de tolerar pH ácidos y pH básicos, coincidentemente con el Ministerio de

agricultura y Riego (2014), ya que los suelos con pHs entre 5,2 a 7,5 son óptimos para el

cultivo de papa.

Las pruebas más importantes del estudio fueron los el ensayos de antagonismo en placa

frente a Phytophthora infestans.

Un 71,9% de los actinomicetos que se aislaron presentaron actividad positiva contra

Phytophthora infestans en agar Avena, la cepa CAB10_2 obtuvo halos de inhibición de

80.05% cabe resaltar que no se han encontrado estudios basados en antagonismo sobre

este agar y solo un 31.3 % demostró actividad en Agar Centeno con el máximo halo de

inhibición de 43.90%. . Presentado como el agente causal de la enfermedad más

devastadora de los cultivos de papa denominada el tizón tardío, viene siendo uno de los

importantes temas de estudio en el campo de la sanidad agrícola (Fry, 2008). Realizando

un análisis comparativo, Fonseca et al. (2011) encuentran que del total de actinomicetos

que evalúanevaluaron, solo el 32% presenta actividad in vitro positiva frente a P.

infestans. Cabe

mencionar que los actinomicetos de su estudio fueron aislados de residuos orgánicos

de chipaca (Bidens pilosa). ) y el antagonismo fue realizado en Agar Centeno. Los

porcentajes de inhibición están dentro del rango de 33.3% - 77.8%. En cuanto al trabajo

realizado por Pérez et al. (2015), los reportes dados mencionan un 42,4% del total de

aislados con actividad antifúngicainhibitoria

frente a P. infestans también en Agar Centeno. El presente estudio posee un 43.90% en

el máximo halo de inhibición mientras que para Pérez et al. (2015) el máximo valor

alcanza los 22%. Por su parte Caro (2016), obtuvo un porcentaje del 46,9% de los Formatted: Right

73
actinomicetos aislados tienen actividad positiva contra Phytophthora infestans en Agar

Centeno, con halos de inhibición hasta de 30 %, siendo mayor el porcentaje en la

cantidad de actinomicetos antagonista pero menor los halos de inhibición con respecto al

trabajo realizado.

Medina (2014) obtuvo resultados utilizando la técnica dúal (Verner y Martín, 2009) en el

medio Agar Extracto de levadura a 20 ° C por 22 días, donde las cepas con mayores halo

de inhibición fueron 77,65% y 75,33%, mientras que en nuestro trabajo los halos de

inhibición en agar Avena fueron 80,05% y 77,47% con el método de cocultivo.

La explicación a esta diferencia de resultados se podría deber a que esta especie

presenta los denominados grupos de anastomosis, donde algunos grupos son más

patógenos que otros y que podrían generar resistencia a los antibióticos (Cherepennikova

et al., 2002).

En el 2009, un actinomiceto Streptomyces setonii 'UFV-RD1' aislado de tomate inhibió la Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold

germinación de los conidios de los hongos (Alternaria solani ,Phytophthorasolani,

Phytophthora infestans , Corynespora cassiicola , Stemphylium solani ) básicamente para Formatted: Font: Not Bold, Italic
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
el biocontrol in vitro, para que luego el inóculo sea aplicado en un campo invernadero, En

este trabajo el medio de cultivo utilizado fue Agar Papa Dextrosa (Carrer Filho,2009) en el

caso del trabajo realizado fue en placas de Agar Avena y Centeno.

Evaluando en conjunto los resultados anteriores, pero en especial los altos valores de

porcentajes de inhibición frente a los Phytophthora infestans, la cepa CAB9_J2 fue

que mayores halos tuvo en avena y centenoEl método de cultivo dual que se utilizó para Formatted: Justified, Space After: 0 pt, Don't adjust space
between Latin and Asian text, Don't adjust space between
Asian text and numbers
investigar el antagonista de S. rubrolavendulae S4 indicó que se utilizó como
Formatted: Font: Not Bold, Italic

microorganismo antagonista para la supresión del crecimiento de micelios de P. infestans Formatted: Font: Not Bold, Italic

en el agar V8. Después de incubarse durante 3 días a temperatura ambiente, los radios
Formatted: Font: Not Bold, Italic

de crecimiento de P. infestans en la placa de control y el crecimiento de P. infestans Formatted: Font: Not Bold, Italic
Formatted: Font: Not Bold, Italic
hacia S. rubrolavendulae S4 se midieron aproximadamente 4,5cm y 0,75cm, Formatted: Right

74
respectivamente. Por lo tanto, el 83,33% de la inhibición del crecimiento ha demostrado

claramente que S. rubrolavendulae S4 mostró una buena inhibición del crecimiento de los Formatted ...

hongos patógenos, P. infestans (Loliam, 2012), esto se debe a que Streptomyces

lavendulae se caracteriza por su capacidad para producir una amplia gama de

metabolitos biológicamente activos (Ikea et al., 2003). S. lavendulae produce muchos

antibióticos de utilidad médica incluyendo estreptotricina (Waksman,

1944) y lavendamicina (Balitz,1982, 1982) Formatted ...


Formatted ...
Formatted: Font: Not Bold, Font color: Custom
Color(RGB(33,33,33)), Pattern: Clear (White)
Un estudio realizado en Corea menciona que los antibióticos de aminoglucósidos como la Formatted: Normal (Web), Justified, Space Before: 3.75 pt,
After: 12 pt, Line spacing: Double, Tab stops: Not at 0.64"
+ 1.27" + 1.91" + 2.54" + 3.18" + 3.82" + 4.45" + 5.09"
paromomicina producida por Streptomyces sp son efectivos contra Phytophthora + 5.73" + 6.36" + 7" + 7.63" + 8.27" + 8.91" + 9.54" +
10.18"
infestans in vitro en un medio sólido jugo V8 por 10 días. Si bien se sabe que los Formatted ...

aminoglucósidos interfieren con la traducción en los ribosomas procarióticos, su modo de

acción contra los eucariotas no está bien definido. Algunos protozoos ciliados eucariotas

( Tetrahymena thermophila ) y parásitos intestinales ( Giardia lamblia ) son sensibles a los

aminoglucósidos con un grupo hidroxilo en 6 ', como lo ha hecho la paromomicina

( Palmer y Wilhelm 1978 ; Edlind 1989 ). Parece posible que los oomycetes reportan un Formatted ...

grupo bastante especial en la filogenia que tiene sensibilidad procariota a la acción de los

antibióticos aminoglucósidos. Además, la sensibilidad puede ser diferente dentro de las

especies o géneros de oomycetes. ( Ann y Ko 1988). En el 2014 Streptomyces plicatus Formatted ...

mostró una inhibición significativa del crecimiento contra patógenos fúngicos

Phytophthora infestans (80-100% en 2000-5000 ppm) y Sclerotium rolfsii (86-94% al

2000-5000ppm). Los microorganismos productores de quitinasa tienen demostrado ser

uno de los buenos agentes de control biológico en patógenos de la pared celular de

proteínas tales como como Phytophthora y Pythium (Lima et al., 1998). Ciertos

metabolitos producidos por los actinomicetos podrían ser antifúngicos, inhibiendo el

crecimiento de hifas, según lo informado por Gopalakrishnan et al. (2011) y Kavitha et al


Formatted: Right

75
Alabama. (2010). En general, casi todos sustancias antimicrobianas producidas son Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, No underline
Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, No underline
metabolitos secundarios extracelulares (Hacene et al., 2000) Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, No underline
Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, Italic, No underline

.Evaluando en conjunto los resultados anteriores, pero en especial los altos valores de Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, No underline
Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, Font color: Text 1,
porcentajes de inhibición frente a los Phytophthora infestans, la cepa CAB9_2 obtuvo Spanish (Peru)

mayores halos en Agar Avena y Centeno, con capacidad psicrófila, utilización de

azúcares y producción de enzimas extracelulares, hacen de esta cepa potencial

candidata a pruebas en campo.

En cuanto a ensayos de evaluación de solventes por otros autores, Pérez et al. (2015) Formatted: Font: (Default) Arial, No underline, Font color:
Auto
obtiene extractos con dos solventes, los cuales son etil acetato y diclorometano. En etil Formatted: Font: (Default) Arial, No underline, Font color:
Auto

acetato obtiene mejores resultados. Formatted: Font: (Default) Arial, Italic, No underline, Font
color: Auto

Leiva et al. (2004) seleccionaron 13 cepas de un total 31 actinomicetos para obtener Formatted: Font: (Default) Arial, No underline, Font color:
Auto

extractos con 5 solventes de polaridad creciente; utilizó éter de petróleo, cloroformo, Formatted: Font: (Default) Arial, No underline, Font color:
Auto

etilmetilcetona, acetato de etilo y butanol; siendo los extractos más activos los obtenidos Formatted: Font: (Default) Arial, No underline, Font color:
Auto

con etilmetilcetona y acetato de etilo. Cabe resaltar que la polaridad es una característica Formatted: Font: (Default) Arial, No underline, Font color:
Auto

muy importante de los solventes debido a que determina la solubilidad (Vijayakumar et

al., 2010). Asimismo, Remya y Vijayakumar (2008) utilizaron extractos orgánicos de

actinomicetos salinos con acetato de etilo, metanol, cloroformo y etanol frente a bacterias

Gram positivas como Staphylococcus aureus y Bacillus subtilis; y frente a bacterias Gram

negativas como Escherichia coli y Salmonella typhi, también frente a levadura como

Cryptococcus neoformans y Candida albicans; siendo el extracto de acetato de etilo el de

mayor capacidad de inhibición compatible con Dhanasekaran et al. (2005), quienes

obtuvieron a partir de extractos de actinomicetos de ecosistemas salinos, utilizaron como

solventes, anilina, cloroformo, piridina y acetato de etilo frente a E. coli, K. pneumoniae,

Formatted: Right

76
Ps. aeruginosa, V. cholerae, S. typhi, Sh. disentirae, S. aureus, P. mirabilis y B.

subtilis; sin embargo, los extractos de acetato de etilo generaron mejores resultados.

El extracto orgánico a partir de acetonitrilo y hexano de hongos nativos frente a bacterias Formatted: Justified, Space After: 0 pt, Don't adjust space
between Latin and Asian text, Don't adjust space between
Asian text and numbers
Gram positivas, negativas y levaduras en cromatogtrafía, resultaron ser buenos solventes

para esta técnica (De la Rosa, 2007). Todos estos resultados señalan que el etil acetato Formatted: Font: (Default) Arial, No underline, Font color:
Auto
es el mejor solvente en la recuperación de los metabolitos activos producidos por Formatted: Font: (Default) Arial, No underline, Font color:
Auto

actinomicetos, ya que el etilacetato arrastra a las sustancias que son más polares, y Formatted: Font: (Default) Arial, No underline, Font color:
Auto

estas a su vez tienen mayor capacidad antagonista frente a microrganismos patógenos Formatted: Font: (Default) Arial, No underline, Font color:
Auto

(Okeleye et al., 2010). Formatted: Font: (Default) Arial, No underline, Font color:
Auto
Formatted: Font: (Default) Arial, No underline, Font color:
Auto
Formatted: Font: (Default) Arial, No underline, Font color:
Auto

, equivalente a un 77,3%. La explicación a esta diferencia de resultados podría estar en el Formatted: Font: (Default) Arial, No underline, Font color:
Auto
Formatted: Font: (Default) Arial, Italic, No underline, Font
hecho que esta especie presenta los denominados grupos de anastomosis, de los cuales color: Auto
Formatted: Font: (Default) Arial, No underline, Font color:
se puede mencionar que algunos grupo son más patógenos que otros, e incluso se Auto

menciona que ciertos grupos son mucho más resistentes a los antibióticos

(Cherepennikova et al., 2002). De haberse dado este posible escenario, puede que en

ambos trabajos se haya utilizado gruposde anastomosis que conllevaron a esta variación

en los resultados de las pruebas de antagonismo.

En el presente trabajo ninguno de los solventes fue capaz de arrastrar los metabolitos

con posibilidad de generar halos de inhibición, esto quizás es debido a la escasa o nula

afinidad entre metabolito-solvente..Evaluando en conjunto los resultados anteriores, pero

en especial los altos valores de

porcentajes de inhibición frente a los Phytophthora infestans, la cepa CAB9_J2 fue

Formatted: Right

77
que mayores halos tuvo en avena y centeno. Formatted: No underline, Font color: Text 1
Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,
Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
https://repositorio.espe.edu.ec/bitstream/21000/8346/1/T-ESPE- at: 0.75"
047817.pdf Formatted: No underline, Font color: Text 1

https://revistas.unal.edu.co/index.php/refame/article/viewFile/29373 Formatted: No underline, Font color: Text 1

/29612

http://www.scielo.org.mx/pdf/rmfi/v33n2/2007-8080-rmfi-33-02- Formatted: No underline, Font color: Text 1

00116.pdf

http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0102- Formatted: No underline, Font color: Text 1

05362009000300014

http://www.revista.unam.mx/vol.16/num11/art92/art92.pdf Formatted: No underline, Font color: Text 1

http://dspace.udla.edu.ec/bitstream/33000/9080/1/UDLA-EC-TIB- Formatted: No underline, Font color: Text 1

2018-09.pdf

https://intellectum.unisabana.edu.co/bitstream/handle/10818/17433/ Formatted: No underline, Font color: Text 1

Natalia%20Pastrana%20Camacho%20%20%28tesis%29.pdf?seque
nce=1&isAllowed=y

Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,


Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
at: 0.75", Tab stops: Not at 5.44"
Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,
Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
at: 0.75"

Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,


Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
at: 0.75", Tab stops: Not at 5.44"
Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,
Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
at: 0.75"
Formatted: Right

78
Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,
Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
at: 0.75", Tab stops: Not at 5.44"
Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,
Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
at: 0.75"

Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,


Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
at: 0.75", Tab stops: Not at 5.44"
Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,
Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
at: 0.75"
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Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
at: 0.75", Tab stops: Not at 5.44"
Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,
Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
at: 0.75"

Formatted: Right

79
Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,
Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
at: 0.75", Tab stops: Not at 5.44"

Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,


Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
at: 0.75"

Formatted: Font: Not Bold


Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,
Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
at: 0.75", Tab stops: Not at 5.44"
Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,
Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
at: 0.75"

IX. 9. CONCLUSIONES. Formatted: No underline, Font color: Text 1


Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,
Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
1. Es posible aislar gran cantidadLa zona rizosférica de la papa nativa (Solanum + Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
at: 0.75", Tab stops: Not at 5.44"
tuberosum sp. andigena) en cultivos orgánicos, presenta actinomicetos con potencial Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Font: Italic, No underline, Font color: Auto
actividad de bacterias nativas del grupo de los actinomicetos de la rizósfera de Solanum

tuberosum sp. andigena de las zonas altoandinas del Perú con potencial antagonismo

frente al oomiceto más devastador de la papa Phytophthora infestans.

2. La cepa CAB10_2 (80.05% de inhibición) fue el actinomiceto más antagonista frente a

Phytophthora infestans en agar Avena, siendo potencialmente con mejores condiciones

Formatted: Right

80
para enfrentar en campo a este fitopatógeno, debido a que crece a 4° C y utiliza diversas

fuentes carbohidratos y distintos rangos de pH. Formatted: Font: Not Italic

32. El 50,0% de actinomicetos es celulolítico (16),Los actinomicetos aislados mostraron

tener alta capacidad hidrolítica sobre polisacáridos como el almidón y celulosa,

evidenciando su importancia al degradar la materia orgánica en el ambiente, así como la

asimilación de azúcares.

la prueba fue realizada en Agar Mandels y Reese revelada con rojo de congo, notándose

un halo claro en la zona de inhibición. El 100.0% de actinomicetos es amilolítico (32), la

prueba fue realizada en Agar almidón revelada con lugol 1:1, notándose un halo claro en

la zona de inhibición.

43. Los actinomicetos aislados por su buen desarrollo en ensayos de laboratorio en

diferentes rangos de pH y temperatura, estarían mejor adaptados a condiciones de

suelos con pH neutro, alcalino y condiciones de psicrofilia (4°C) hasta los 28°C, pero no a

45°C.El 97% de actinomicetos utiliza como fuente de carbono Glucosa, sacarosa y

manitol, el pH 7 es ideal para su crecimiento, aumentando eficientemente a pH 8.5, y

disminuyendo en acidez pH 5.5.

54. De acuerdo a los resultados de los ensayos de antagonismo en placa, la mayor parte

la mayor parte de los actinomicetos (71,9%) aislados de la rizósfera de la papa

presentaron actividad antifúngica antagonista frente a Phytophthora infestans.

5. Los solventes utilizados para la producción de los extractos no son compatibles con el

metabolito que posee actividad antifúngica. Formatted: Font: Not Italic

65. Tanto para aislamiento de actinomicetos como para las pruebas de antagonismo

frente Phytophthora infestans el medio Agar Avena fue más eficiente. Los actinomicetos

Formatted: Right

81
crecen desarrollaron considerablemente en menor tiempo en comparación con otros

medios (Centeno, Agar Almidón Caseína, Asparragina o Czapeck).

7. Por la ausencia de actividad inhibitoria de los extractos orgánicos el etil acetato,

diclorometano y butanol, no serían los adecuados para la extracción del metabolito.

75. La cepa CAB10_J2 con 80.05% de inhibición es la más antagonista frente a

Phytophthora infestans de los 32 actinomicetos aislados en agar avena y centeno, siendo

potencialmente con mejores condiciones para enfrentar in vitro a Phytophthora infestans,

debido a que crece a 4° C y utiliza diversas fuentes de Ph.

X. 10. RECOMENDACIONES Formatted: No underline, Font color: Text 1


Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,
Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
1. Continuar la investigación con actinomicetos aislados de la rizósfera de Solanum at: 0.75", Tab stops: Not at 5.44"
Formatted: Font: Not Bold
tuberosum de Cabana frente a fitopatógenos del cultivo que se presenten con mayor
Formatted: Left, Line spacing: Multiple 1.15 li, Tab stops:
Not at 5.44"
frecuencia en la zona.

2. Complementar el estudio de los actinomicetos productores de sustancias

antifúngicasbioactivos con la evaluación de la curva de crecimiento microbiano para

encontrar el tiempo de desarrollo donde se produce la mayor cantidad de estos

compuestos, además de extraer metabolitos con otros solventes para obtener halos de

inhibición confiables y cuantificables..

4. Separar e identificarn de los metabolitos secundarios presentes en los extractos

orgánicos obtenidos de actinomicetos con buena actividad anti-Phytophthoraantifúngica Formatted: Font: Italic, No underline, Font color: Auto

frente a hongos fitopatógenos de la papa.

Formatted: Right

82
5. Utilizar marcadores moleculares para la determinación de especies de actinomicetos.

6. Ensayar la preparación de principios biactivos de actinomicetos con buena actividad

anti-Phytophthora antifúngica para inocular en plantas de Solanum tuberosum a nivel de

invernadero, con el fin de evaluar si el efecto es favorable in vivo. Y corroborar los

resultados de las pruebas in vitro.

7. Aumentar la investigación tanto en metabolismos primarios y secundarios de los

actinomicetos frente a diversos hongos fitopatógenos.

XI. 11. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Formatted: No underline, Font color: Text 1


Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,
Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
ADEGBOYE, M., Y BABALOLA, O. (2013). Actinomicetos: una fuente inagotable de at: 0.75", Tab stops: Not at 2.7"
Formatted: Font: Not Bold
metabolitos secundarios bioactivos. Patógenos microbianos y estrategias para
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Formatted: Right

98
Formatted: Left

XII.ANEXOS

Formatted: Right

99
ANEXO 1. TOMA DE MUESTRA

LOCALIDAD DISTRITO
CABANA SUR, LUCANAS,
AYACUCHO-PERÚ

TEMPERATURA DEL SUELO:


7.5°C

VARIEDAD DE PAPAS NATIVAS:


Canchan, Huayro, Cuchipa-akan, Formatted: Font: Italic
Futis, y Jompis y Chaska siendo 9, Formatted: Font: Italic
7, 4, 6, 6 y 0 las colonias aisladas
del suelo de estas variedades de
papa respectivamente.

Formatted: Right

100
Formatted: Left

ANEXO 2. AISLAMIENTO DE ACTINOMICETO

10-2 10-3 10-4


10-1

TIERRA

10 g 9 ml 9 ml 9 ml
90 ml de
Sol. Salina +
fenol 0.85 %

Agitar 25
veces,
incubar por
30 min a
30°c .
0,1 ml 0,1 ml

AGAR AVENA + NISTATINA + ÁACIDO


NALIDIXICO

AGAR ALMIDÓN CASEÍNA +


NISTATINA + ACIDO NALIDIXICO

Formatted: Right

101
ANEXO 3: SELECCIÓN DE ACTINOMICETOS

Repiques en Agar Avena: Mejor


esporulación y crecimiento.

COMPORTAMIENTO CULTURAL:

Colonia de actinos: rugosa,


costrosa, adherida fuertemente al
agar.

GRAM: GRAM +

PRUEBAS DE SELECCIÓN PRIMARIA

MICROCULTIVO: 7 días, hifas delgadas y esporulación

COLORANTE USADO: Azul de lactofenol

Formatted: Right

102
ANEXO 4. CARACTERIZACIÓN FENOTÍPICA DE ENZIMAS HIDROLÍTICAS EN AGAR

ALMIDÓN Y AGAR CARBOXIMETILCELULOSA

VERNIER: para medición


de los radios de
inhibición y los radios de
las colonias

Formatted: Right

103
ANEXO 5. CARACTERIZACIÓN BIOQUÍMICA DE LOS ACTINOMICETOS EN EL USO

DE GLUCOSA, SACAROSA Y MANITOL

Se usó medio mínimo: ISP 9

SIEMBRA POR
PUNTURA

ISP9+ GLUCOSA Formatted: Font: Bold

ISP9 + MANITOL ISP9 + SACAROSA Formatted: Font: Bold


Formatted: Font: Bold

Utiliza alguno de estos carbohidratos si crece en el


medio ISP 9 suplementado con alguno de estos.

Formatted: Right

104
ANEXO 6. CARACTERIZACIÓN FISIOLÓGICA DE LOS ACTINOMICETOS

SIEMBRA POR
PUNTURA

Modificando el pHs:
5.5, 7 y 8.5 (AA a 28
oC). Modificando la T o
: 4, 45 y 28 oC (AAC a
pH 7).

Formatted: Right

105
Formatted: Left

ANEXO 7. PRUEBAS DE ANTAGONISMO EN PLACA DE ACTINOMICETOS FRENTE

A Pphytophthora infestans

TECNICA DEL COCULTIVO:

SE SEMBRÓ AL MISMO TIEMPO


LOS ACTINOMICETOS CON EL
PATÓGENO, Y SE INCUBÓ A 28° C
POR 10 DÍAS

Formatted: Right

106
Formatted: Left

ANEXO 8. OBTENCIÓN DEL EXTRACTO ORGÁNICO ANTIMICROBIANO Y Formatted: Font: Bold, No underline, Font color: Auto

DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTI-PHYTOPHTHORA Formatted: Font: Italic, No underline, Font color: Auto

Formatted: No underline, Font color: Auto

Formatted: Left

Formatted: Right

107
Formatted: No underline, Font color: Auto

Formatted: No underline, Font color: Auto

1. Al cumplir losHabiéndose cumplido Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt


los 10 deftdías del cultivo: s Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt
Se elige solventes dicloromometano, Separar solvente de Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt
etil acetato y butanol,, luego se echa la fase acuosa Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt
en una añadiendo en una
proporción 1:1 (Caldo-solvente).Se Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt
deja en el shaker a 250 rpm por 24 h Formatted: Font: (Default) Arial
para la respectiva Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt
separación.proporcipt;height:96.15pt; Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt
flip:x;z-index:le;04x;z-index:le;04til
Formatted: No underline, Font color: Auto
acetato y butanol, luego se echa en
una

Formatted: Left, Line spacing: Multiple 1.15 li


Evaporar en rotavapor, Formatted: Font: Not Bold, No underline, Font color: Auto
obteniendo el peso del extracto Formatted: Font: Not Bold

Formatted: Font: (Default) Arial, Bold

Realizar pocillos y
añadir extractos,
ANEXO 98. MEDIOS DE CULTIVO incubar. Formatted: Font: (Default) Arial

1. Agar Almidón Caseína (AAC) – mg/L (Kuster y Williams, 1964)

Almidón 10,0

Caseína 0,30

Nitrato de Potasio 2,00

NaCl 2,00

K2HPO4 2,00

MgSO4.7H2O 0,05
Formatted: Right

108
CaCO3 0,02

FeSO4.7H2O 0,01

Agar 15,0

Agua destilada 1000,0 ml

pH 7,0

*Para el aislamiento, cultivo y mantenimiento de actinomicetos.

2. Agar Avena - mg/L (Kuster, 1959)

Avena 20,0

Agar 18,0

Solución de sales traza 1,0 ml

Agua destilada 1000,0 ml

pH 7,2 pH 7,0

*Para el aislamiento, cultivo y mantenimiento de actinomicetos.

3. Agar Centeno – mg/L (Caten y Jinks, 1968)

Harina de centeno 25,0

Sacarosa 20,0

Agar 15,0

Agua destilada 1000,0 ml

pH 5,5
Formatted: Right

109
*Para el aislamiento, cultivo y mantenimiento de Phytophthora infestans.

4. Agar Almidón – mg/L (Modificado por Achi y Nijoku, 1992)

Extracto de carne 3,0

NaCl 6,0

Almidón 2,0

Agar 18,0

Agua 1000,0 ml pH 7,0

*Para la detección de la producción de amilasas.

5. Agar Carboximetilcelulosa – mg/L (Mandels y Reese, 1965)

Carboximetilcelulosa 10,0

K2HPO4 2,0

KH2PO4 2,0

Agar 18,0

Agua 1000,0 ml

pH 7,0

*Para la detección de la producción de celulasas.

6. Medio Extracto de Levadura Glucosa – mg/L (Modificado por Sultan et al., 2002)

Extracto de levadura 1,0

Peptona de soya 4,0

D-glucosa 5,0

CaCO3 1,0**

Almidón 10,0**
Formatted: Right

110
Agua 1000,0 ml

pH 7,0 *Para la fermentación de actinomicetos. **: Opcionales

7. Medio ISP9: Medio de utilización de carbohidratos - mg/L (Modificado por

Pridham y Gottlieb, 1948)

(NH4)2SO4 2,64

KH2PO4 2,38

K2HPO4 5,65

MgSO4 1,0

Agar 18,0

Solución de carbohidrato 100 ml*

Sales traza de Pridham 1,0 ml

Agua destilada 900,0 ml pH 6,8-7,0

*Agregar 10 g de carbohidrato en 100 ml de agua destilada.

8. Agar Glicerol-Asparragina - mg/L (Pridham y Lyons, 1961) Formatted: No underline, Font color: Auto

L-Asparragina 1,0 Formatted: No underline, Font color: Auto

Glicerol 10,0 Formatted: No underline, Font color: Auto

K2HPO4 1,0 Formatted: No underline, Font color: Auto

Agar 20,0

Solución de sales traza 1,0 ml

Agua destilada 1000,0 ml Formatted: Right

111
pH 7,4

9. Agar Czapeck- mg/L

Nitrato sódico 2,00 g

Cloruro potásico 0,50 g

Sulfato magnésico 0,50 g

Sulfato ferroso 0,01 g

Fosfato dipotásico 1,00 g

Sacarosa 30,00 g

Agar agar 18,00 g

(Fórmula por litro) pH final: 6,8 ± 0,2

Formatted: Right

112