RESUMEN
(Aider et al., 2009; Fernandes et al., 2009).
La producción de ácido láctico L(+) por vía
biotecnológica con Lactobacillus casei a partir del
aprovechamiento del lacotosuero (residuo de la
industria láctea) y bajo un modo de operación batch
se evaluó y se llevó a cabo un ajuste de la cinética
de crecimiento de biomasa con la ecuación de …..
, la cinética de consumo de sustrato a la propuesta
de… y la cinética de producción de producto a la
ecuación de…. Posterior a esto mediante un
estudio del comportamiento obtenido de la cinética
de fermentación y a través de los parámetros
hallados se encontró que el rendimiento de sustrato
en producto (x g/g), la productividad de ácido láctico
(p g/L.h), y la concentración final del metabolito (z
g/L) fue superior a otras reportados por diferentes
investigadores (Schugerl et al., 1993; Petrov et al.,
2007 y Vaccari et al., 1993). Sumado a esto, se
realizó una simulación de la fermentación en modo
batch usando los modelos que se ajustaron al
proceso.
MARCO TEÓRICO
Analizando la producción, por vía biotecnológica,
del ácido láctico se observó que una manera
óptima, cuyo enfoque es la reutilización de un
residuo contaminante, es por medio de Lactosuero
como sustrato y cepas de Lactobacillus Casei como
microorganismo. El proceso comienza con la
introducción del lactosuero desproteinizado al
reactor, este se suplementa con extracto de
levadura como fuente de nitrógeno para un mejor
crecimiento de las bacterias. Debido al elevado
contenido en materia orgánica, reducida alcalinidad
y tendencia a acidificar rápidamente, se ha
identificado al lactosuero como sustrato de difícil
tratamiento en digestores anaerobios,
especialmente en reactores que operan con
cargas orgánicas de alimentación altas (Malaspina
F, Cellamare CM, Stante L, Tilche A. 1996). Por
ello, se plantea la necesidad de adicionar una dosis
inicial de alcalinidad o una dosificación a lo largo
del proceso (Yang K, Yu Y, Hwang S., 2003), para
ello usaremos CaOH.
Luego de la fermentación se separa y lava la
biomasa obtenida y el lactato de calcio por
centrifugación diferencial. El lactato de calcio es
convertido en ácido láctico por la adición de ácido
sulfúrico. Seguidamente, este es separado del
poco soluble sulfato de calcio por centrifugación.
Finalmente, el ácido láctico es concentrado por
evaporación hasta alrededor del 50% (v/v)
(Chanfrau et al., 2017)
FUENTE DE CARBONO
La industria láctea es uno de los sectores más
importantes de la economía de países
industrializados y en desarrollo. Aproximadamente
90% del total de la leche utilizada en la industria
quesera es eliminada como lactosuero el cual
retiene cerca de 55% del total de ingredientes de la
leche como la lactosa, proteínas solubles, lípidos y
sales minerales. Algunas posibilidades de la
utilización de este residuo han sido propuestas,
pero las estadísticas indican que una importante
porción de este residuo es descartada como
efluente el cual crea un serio problema ambiental
Las proteínas de este subproducto de la industria
quesera desempeñan un importante papel Nutritivo
como una rica y balanceada fuente de aminoácidos
esenciales~26% (Ha y Zemel, 2003; Ibrahim et al.,
2005) Por ello el lactosuero o suero de queso es un
excelente medio de cultivo y por ello es utilizado
como sustrato.
CARACTERIZACIÓN FISICOQUIMICA DEL
LACTOSUERO
Para el balance de la ecuación pseudo-
estequiométrica es importante definir la formula
empírica del lactosuero, por ello en la tabla 1. Se
puede observar diferentes caracterizaciones de
este, comparando así estos datos con la fórmula
empírica del reportada en la literatura obtuvimos la
siguiente formula empírica 𝑪𝟐𝟕𝑯𝟒𝟒𝑶𝟐𝟎𝑵𝟐 (Johanna
& Verjel, 2014).
BIOMASA
El género Lactobacillus es altamente apreciado por
la capacidad que tienen las bacterias lácticas de
fermentar diversas fuentes de carbono simples y
producir ácido láctico. Muchas de las bacterias del
género Lactobacillus pueden sobrevivir las
condiciones de acidez y alcalinidad, así como a las
enzimas del tracto digestivo en diversos animales,
incluyendo al hombre (Boyle, Robins-Browne y
Tang; 2006).
El Lactobacillus Casei se escogió como
microorganismo, debido a que una de sus
principales características es que es una bacteria
acido láctica y estas producen ácido láctico como el
único o principal producto de la fermentación de
carbohidratos (Carr y col,. 2002;Vázques y col.,
2009).
REQUERIMIENTO DE OXIGENO
Estos microorganismos (BAL) son principalmente
aerotolerantes; pero su crecimiento óptimo se
alcanza bajo condiciones microaerófilas o
anaeróbicas y se conoce que un incremento de la
concentración de CO2 (5% -10%) puede estimular
el crecimiento, sobre todo en el caso del
crecimiento superficial sobre medios sólidos
(velasquez-tellez, giraldo-giraldo, padilla-sanabria,
& giraldo-castaño, 2015).
TEMPERATURA DE CRECIMIENTO
La mayoría de los lactobacilos son mesófilos
(operan en temperaturas entre 30°C- 40°C),
aunque su rango de crecimiento oscila entre 2 y
53°C, su temperatura óptima de crecimiento está
establecida en el rango de 20°C- 40°C (Garcia et
al., 2010).
REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES
Los requerimientos nutricionales son
característicos de cada especie, en general, para
los lactobacilos es deseable que el nitrógeno sea
orgánico en forma de aminoácidos o péptidos
dentro de los cuales el ácido glutámico, isoleucina
y valina son considerados factores de crecimiento
y deben estar presentes en el alimento o medio de
cultivo (Crueger y Crueger, 1989; Karoviéová y
Kohajdová, 2003). La leche y el suero de leche
bovina son considerados como fuentes de
nutrientes para el crecimiento de bacterias del
género Lactobacillus, ya que contienen fuente de
nitrógeno en forma orgánica, complejos vitamínicos
como el complejo B, pH adecuado, y una forma
coloidal que hace disponible todo tipo de nutrientes.
(Escobar, Rojas, Giraldo y Padilla-Sanabria., 2010)
DATOS EXPERIMENTALES
La obtención de parámetros cinéticos se basó en
los siguientes datos de formación de biomasa,
consumo de sustrato y generación de producto
para una concentración inicial de sustrato de 35.5
g/dm3
expuestas en la figura 1, las muestras fueron
expuestas a técnicas analíticas de medición de
biomasa, producto y sustrato, teniendo en cuenta
que dichas muestras se tomaron a ciertos tiempos
iniciando desde el tiempo cero correspondiente a la
fase de inoculación hasta que se da por finalizada
la fermentación.
Medición de concentración biomasa
La medición de la concentración total de biomasa
L. casei se determinó mediante el método de
densidad óptica a 610 nm que fueron convertidos
en peso seco celular (x) por medio de una curva de
calibración. Para ello se tomó de manera estéril 10
cm3 de la muestra en cada tiempo de muestreo y
posteriormente se centrifugó a 1610 × g durante 15
minutos en una centrífuga Hettich EBA 12R.
Medición de concentración de lactosuero y
ácido láctico
La cinética de consumo de lactosuero y ácido
láctico se determinaron mediante el método de
cromatografía líquida de alta resolución, HPLC. El
equipo usado fue una columna HPX-87H operado
a una temperatura de 45°C con un horno de
columna MetaTherm y como eluyente se utilizó 5
mmol/dm3 de H2SO4 a un caudal de 0,6 cm 3/min.
CALCULO DE PARAMETROS CINÉTICOS

Los modelos cinéticos se han utilizado para

Figura 1. Datos experimentales. +, Concentración de biomasa;
•, formación de producto; o, utilización de sustrato. (Altıok et
al., 2006).
predecir el comportamiento de distintos parámetros
operativos en el crecimiento microbiano, utilización
de sustrato y formación de producto. En la literatura
abunda la utilización de distintos modelos para
resolver problemas relacionados a la obtención de
expresiones que relacionen la célula con el medio
ambiente. Con el propósito de obtener dichas
expresiones distintos autores han presentado
modificaciones a modelos existentes para
presentar mayores grados de ajuste.

Haciendo una lectura detallada de la figura 1 se En el caso en el cual se enfoca este trabajo, se
registraron los datos experimentales expuestos en implementaron los modelos que caracterizaban
la tabla 1. procesos con inhibición y productos directamente
asociados al metabolismo central energético de los
Tabla 1.Datos experimentales (Altıok et al., 2006). cuales derivaron las siguientes expresiones.
TIEMPO LACTOSUERO ÁCIDO LÁCTICO BIOMASA
(h) (g/dm^3) (g/dm^3) (g/dm^3) CRECIMIENTO DE BIOMASA (Alcón, M ET AL),
0 35,5 2,917 1,143 (ALITOK, D et al)
1 34,167 5,208 1,429
𝒅𝒙
2 34,375 5,625 2 𝝁∗𝒙 = ;
3 29,792 6,25 2,286 𝒅𝒕
𝒔
4 25,417 7,5 2,929 𝝁 = 𝝁𝒎𝒂𝒙 ∗ ( ) ∗ (𝟏 − 𝑲𝒑𝒙) ∗ 𝑿
5 21,458 9,583 3,643 𝑲𝒔𝒙 + 𝒔
6 20,208 13,75 4,571
𝒅𝒙 𝑿 𝒇 𝑷
7 16,979 17,5 5,357 Y 𝒅𝒕 = 𝝁 ∗ (𝟏 − 𝑿𝒎) ∗ (𝟏 − 𝑷𝒎)𝒉
8 12,5 21,667 6,286
9 6,25 25 6,786
10 0,625 29,583 6,929 Debido a costos computacionales elevados
11 0 31,667 7,071 asociados a la tercera ecuación, se decidió
implementar las primeras dos ecuaciones para
MÉTODOS ANALÍTICOS hallar los parámetros cinéticos de este sistema.

Con el fin de realizar las curvas de crecimiento,

generación de producto y consumo de sustrato
Donde xcalc pcalc scalc
µ=velocidad de crecimiento
µmax= velocidad máxima de crecimiento 0.51882585 2.917 35.5
ksx= coeficiente de inhibición por sustrato 1.64260114 3.90041603 34.4873925
kpx= coeficiente de inhibición por producto
1.65376125 5.871688 32.4462208
GENERACIÓN DE PRODUCTO (Alitok, D et al) 1.90506654 6.95533051 31.1855774
3.03021381 9.45703599 28.1894741
𝑑𝑝 𝑑𝑥
=𝛼∗ +𝛽∗𝑥 4.11441108 12.5528773 24.0758228
𝑑𝑡 𝑑𝑡
La cual representa una generación de producto 4.87193387 16.9445322 17.818696
directamente asociada al metabolismo central 5.8364319 21.8289779 9.63644995
energético y α y β son constantes empíricas que 6.45784735 30.0499611 -6.09235252
varían con las condiciones. 4.50067527 46.0846669 -43.2898521
CONSUMO DE SUSTRATO (Alitok, D et al)
𝑑𝑠 𝜇∗𝑥
=− − 𝑚𝑠 ∗ 𝑥
𝑑𝑡 𝑌𝑥𝑠
La cual representa un consumo de sustrato
únicamente direccionado a actividades de
crecimiento y mantenimiento.

RESULTADOS
dx/dt exp ds/dt exp dp/dt exp U exp U monod dx/dt calc dp/dt calc ds/dt calc dif dx/dt dif dp/dt dif ds/dt
0.1435 -2.1035 3.228 0.12554681 0.27658606 0.31613787 1.06273461 -1.05914948 -0.17263787 2.16526539 -1.04435052
0.4285 -0.5625 1.354 0.29986004 0.26086674 0.37277857 1.28180565 -1.31985449 0.05572143 0.07219435 0.75735449
0.4285 -2.1875 0.521 0.21425 0.25910633 0.51821265 1.78664726 -1.84656593 -0.08971265 -1.26564726 -0.34093407
0.4645 -4.479 0.9375 0.20319335 0.2438235 0.55738053 1.9692798 -2.10391527 -0.09288053 -1.0317798 -2.37508473
0.6785 -4.167 1.6665 0.23164903 0.22391159 0.65583706 2.4015666 -2.68449818 0.02266294 -0.7350666 -1.48250182
0.821 -2.6045 3.125 0.22536371 0.19954253 0.72693344 2.80185657 -3.32184658 0.09406656 0.32314343 0.71734658
0.857 -2.2395 3.9585 0.18748633 0.17590551 0.80406408 3.29026684 -4.14728744 0.05293592 0.66823316 1.90778744
0.8575 -3.854 3.9585 0.16007094 0.14692196 0.78706093 3.53224462 -4.83060979 0.07043907 0.42625538 0.97660979
0.7145 -5.3645 3.75 0.11366529 0.11064058 0.69548671 3.6691841 -5.62452428 0.01901329 0.0808159 0.26002428
0.2855 -7.1355 2.916 0.04207191 0.06343493 0.4304694 3.29299307 -6.01038822 -0.1449694 -0.37699307 -1.12511178

Para la obtención de los parámetros cinéticos se

empleó un solver en Excel, el cual minimizando una
función error entre datos experimentales y
calculados arroja el valor de los parámetros. Los
datos experimentales se obtuvieron por medio de
diferenciación finita de los datos expuestos en la
tabla 1 y los datos calculados se obtuvieron
implementando los modelos expresados
anteriormente.

Con el procedimiento anteriormente mencionado

se obtuvieron los siguientes parámetros:

µmax kpx ksx

0.424070668 0.018743159 15.9538637

α β ypx ms
2.085439526 0.35297306 5.20695734 0.8735214
3.7 0.06 0.678 0.03

VALIDACIÓN DE LOS RESULTADOS

Para validar los resultados se generó una tabla con

valores de biomasa, sustrato y producto obtenidos
a partir de los parámetros encontrados
anteriormente, y se observó si el comportamiento
de los obtenidos experimentalmente

ANALISIS DE FACTIBILIDAD

CARÁCTERÍSTICAS Y UBICACIÓN DE LA
PLANTA

Como se puede observar en la gráfica 1 la mayor

producción de leche en Colombia se encuentra en
la zona de Antioquia y Cundinamarca, uno de los
factores que influencia en la localización de la
planta es que sea una zona de alta producción de
leche y una zona central para que funcione como
entro de acopio. Debido a lo dicho anteriormente la
ubicación de la planta seria en Cundinamarca.

PRECIOS Y COSTOS

El ácido láctico tiene un precio comercial que varia

entre 1.38 US$/kg (para 50% de pureza) y 1.54
US$/kg (para 88% de pureza) (Wee et al., 2006).

Se estima que la demanda actual del ácido láctico

en el mundo está entre 130,000 a 150,000
toneladas métricas por año (Wee et al., 2006). Este
compuesto posee un uso potencial como insumo
para aplicaciones de gran volumen, con ventas
proyectadas que exceden los US $ 3 billones
anuales sólo en Estados Unidos (72 millones de
libras), (Wisconsin Biorefining Development
Initiative, 2006).
Actualmente, a nivel mundial, algunos
observadores estiman que la producción de ácido
láctico tiene un incremento de 12-15% anual
(Joglekar et al., 2006) y se tiene proyectado un
aumento de la demanda de ácido láctico de un
45.5% anual para el uso en polímeros
biodegradables (Jarvis, 2001).

Todo el ácido láctico consumido en Colombia es de

origen extranjero, el cual se encuentra distribuido
según se muestra en la tabla 2.

Proyectando las tendencias mostradas hasta el

2010, se esperarían volúmenes de 297.3, 320.6,
343.9 y 367.2 Ton para los años 2007, 2008, 2009
y 2010, respectivamente, considerando
incrementos acordes con el comportamiento de la
tendencia en los últimos años.
BIBLIOGRAFIA

Altıok, D., Tokatlı, F., & Harsa, Ş. (2006).

Kinetic modelling of lactic acid production from
whey byLactobacillus casei (NRRL B-441).
Journal of Chemical Technology &
Biotechnology, 81(7), 1190–1197.
doi:10.1002/jctb.1512

Alcón Martín, Almudela. García-Ochoa Soria,

Félix.
Santos Mazorra, V. E. (2005). Desarrollo de
modelos cinéticos para bioprocesos: aplicación
a la producción de xantano, 471.