Está en la página 1de 8

Cultivo de Microorganismos

1. INTRODUCCIÓN

Un cultivo de microorganismos consiste en proporcionarles las condiciones físicas, químicas


y nutritivas adecuadas para que puedan multiplicarse de forma controlada. En general,
podemos distinguir cultivos líquidos y sólidos en función de las características del medio y
cultivos discontinuos y continuos en función de la disponibilidad de nutrientes en el medio.

2. OBJETIVOS
 Comparar los principales métodos de cultivo utilizados para los diferentes tipos de
microorganismos.
 Conocer los principales métodos de cultivo utilizados para los diferentes tipos de
microorganismos.

3. MARCO TEORICO

Diferentes métodos de siembra

- Sembrar: Es el acto de colocar el material bacteriológico en el medio de cultivo para


promover su crecimiento y desarrollo, y subsiguiente multiplicación.
El resultado de una siembra se llama: Cultivo
· Las siembras pueden ser:
- Primarias: cuando el material es inoculado en los medios por primera vez
- Secundarias: cuando el material a inocular procede de una siembra primaria

Métodos Generales:

1) Siembra por dilución: Se toma el tubo de ensayo con medio líquido, como el caldo simple.
Se toma el material a diluir y se siembra en el tubo con el uso del asa cargada con el material
bacteriológico, se agita, con movimientos moderados.
Medio de cultivo: Liquido
Instrumento: Asa
Finalidad: poner la bacteria en suspensión

En este proceso de siembra de microorganismo vamos a utilizar dos métodos :

1) Siembra por estría por agotamiento: Con éste procedimiento se puede conseguir una
buena separación de las colonias y aislarlas fácilmente. Para ello se funde el medio de cultivo,
se vuelca en caja de Petri y se deja solidificar. Con el asa previamente esterilizada se toma
material de un cultivo heterogéneo y se descarga sobre la superficie del medio formando estrías.
Esto puede realizarse de varias formas:
a- Al comienzo se coloca el inoculo, luego se continúa con las estrías. Cuando se quiere obtener
colonias muy separadas se puede utilizar dos o tres placas de Petri, para lo cual se repite la
operación sin tomar con el asa nuevo material.
b- Se puede dividir la placa de Petri en cuatro cuadrantes; una vez depositado el material en el
primero, siguiendo el sentido de las agujas del reloj, se hace una estría luego en el segundo,
tercero y cuarto cuadrante sin cargar nuevamente el asa; en el último cuadrante aparecerán las
colonias aisladas
c- El inóculo se extiende sobre una pequeña zona de la placa, próxima al borde, se esteriliza el
asa y se traza otra estría a partir del depósito y así sucesivamente.
Medio de cultivo: solido en placa de Petri
Instrumento. Asa
Finalidad. Obtener colonias aisladas

2) Aislamiento por el método de diseminación

 Tomar el inóculo de la muestra, con la pipeta Pasteur, Flamear previamente la boca del
tubo antes y después de extraída la muestra.
 Depositar una gota del inóculo sobre la superficie del medio. Cerrar la placa a la llama
del mechero y devolver el sobrante de la muestra al tubo de cultivo.
 Calentar al mechero la espátula de Drigalsky y esterilizar. Destapar con la mano
izquierda lo necesario para introducir la espátula.
 Diseminar la gota del cultivo con la espátula, por la superficie del medio. Desechar la
espátula.
 Rotular los datos sobre el dorso de la placa Petri, escribiendo: Nombre del grupo, tipo
de siembra y fecha.
 Incubar a 37° C durante 24 a 48 horas, colocando las placas en la estufa en posición
invertida.
Crecimiento microbiano en medio líquido

Si la bacteria crece en un medio líquido, en la mayoría de los casos las células que se
producen en cada división continúan su vida independientemente formándose una suspensión
de células libres.
En un cultivo discontinuo de bacterias en medio líquido, se pueden diferenciar cuatro
fases en la evolución de los parámetros que miden el crecimiento microbiano:

1.- Fase lag o de adaptación durante que los microorganismos adaptan su metabolismo a las
nuevas condiciones ambientales (abundancia de nutrientes y condiciones de cultivo) para
iniciar la fase de crecimiento exponencial.
2.- Fase exponencial o logarítmica: en ella la velocidad de crecimiento es máxima y
el tiempo de generación es mínimo. Durante esta fase las bacterias consumen a velocidad
máxima los nutrientes del medio. La evolución del número de células durante esta fase se
explica con los modelos matemáticos que describiremos a continuación.

3.- Fase estacionaria: en ella no se incrementa el número de bacterias (ni la masa u


otros parámetros del cultivo). Las células en fase estacionaria desarrollan un metabolismo
diferente al de la fase exponencial y durante ella se produce una acumulación y liberación de
metabolitos secundarios que pueden tener importancia industrial.

Los microorganismos entran en fase estacionaria porque se agota algún nutriente


esencial del medio o porque los productos de desecho que han liberado durante la fase
exponencial hacen que el medio sea inhóspito para el crecimiento microbiano.
La fase estacionaria tiene gran importancia porque probablemente represente con
mayor fidelidad el estado metabólico real de los microorganismos en los ambientes naturales.
4.- Fase de muerte: se produce una reducción del número de bacterias viables del
cultivo.
Crecimiento microbiano en medio sólido
Las fases, parámetros y cinética de crecimiento discutidas para el caso de los cultivos
líquidos se presentan también en cultivos sólidos. La cinética de crecimiento, en este
caso, se puede estudiar siguiendo la evolución del número de células viables por unidad de
superficie o por unidad de masa.
Cuando una célula aislada e inmóvil comienza a crecer sobre un substrato sólido, el
resultado del crecimiento al cabo del tiempo es una colonia. Por consiguiente, se denomina
unidad formadora de colonia (UFC) a una célula bacteriana viva y aislada que si se encuentra
en condiciones de substrato y ambientales adecuadas da lugar a la producción de una colonia
en un breve lapso de tiempo. Si el número inicial de bacterias por unidad de superficie es
muy alto, la confluencia de las colonias da lugar a lo que se llama un césped cuando se
realizan los cultivos en placas de laboratorio.
En el caso de microorganismos móviles (deslizantes) o en el de los hongos filamentosos que
tienen un crecimiento trófico no se producen colonias aisladas sino formaciones más difusas
o miceliares.

4. MATERIALES
 medio de cultivo ya preparado
 asa de siembra
 mechero
 tubo de ensayo 1ml de agua destilada y 9ml de chica de jora 1/10

5. PROCEDIMIENTO
Cuando se utilice exclusivamente el asa de platino o nicrón.

 Coger el asa por el cabo, en forma similar, a cuando tomamos el lápiz para escribir.

 Introduzca el asa de alambre de platino o nicrón directamente en la zona de color azul


de la llama del mechero, hasta que se ponga al rojo vivo. Seguidamente, proceda a
introducir lentamente el resto del alambre para lograr el mismo efecto.

 Retire el instrumento de la llama y espere de 4 a 5 segundos con el objetivo de que el


asa se enfríe.

 Con el asa estéril y fría tome el volumen o fragmento de la muestra que será sembrado
y trasládelo de inmediato para el medio del cultivo seleccionado.

 Si la siembra se fuera a producir en un medio solidificado en forma de cuña en tubo


de ensayo, proceda del siguiente modo:

 Con la mano opuesta a la que sujeta el asa, tome el tubo por l porción inferior.

 Con el dedo meñique de la mano que sostiene el asa, retire del tubo el tapón de
algodón o la tapa de rosca y reténgala (no colocar el tapón o la tapa sobre la mesa de
trabajo)
 Flamee de inmediato la boca del tubo de ensayo, pasándola una o dos veces por la
llama del mechero, con el objetivo de eliminar por incineración, los microorganismos
contaminantes que se encuentran en esa zona, por la parte externa del tubo. Esta
acción calórica, provoca además una convección del movimiento del oxígeno presente
en el interior del tubo hacia afuera, debido a la desigualdad de calor, lo cual favorece
que decrezca el riesgo de contaminación.

 Introduzca el asa con el volumen o fracción de la muestra en el tubo, hasta el fondo de


la cuña. A partir de este momento, la siembra puede realizarse de diferentes maneras,
en dependencia del tipo de microorganismo que pretendemos que se desarrolle en ese

medio de cultivo:

 Deslizando el asa, desde el fondo hacia arriba, por toda la superficie de la cuña,
trazando una línea longitudinal.

 Deslizando el asa por la superficie de la cuña desde el fondo hacia arriba,


imprimiéndole un movimiento de zigzag.

 Motiando toda la superficie de la cuña con hisopo.

 Efectuando cualquiera de las tres variantes explicadas, pero adicionalmente roturando


el medio con el asa, haciendo un pequeño corte longitudinal.

 Al concluir la siembra se flamea la boca y se taponea nuevamente el tubo procediendo


a esterilizar el asa en las llamas del mechero.
Si la siembra se fuera a realizar en la superficie de un medio solidificado en placa de
Petri, proceda de la siguiente manera:

Con la mano opuesta a la que sujeta el asa de platino, tome la placa de Petry, de manera que
la tapa quede hacia arriba. Con ayuda del dedo pulgar abra parcialmente la placa.

 Introduzca el asa con la muestra y proceda a deslizarla suavemente en forma de


zigzag, desde la pared, hasta cubrir aproximadamente un tercio de toda la superficie.

 Cierre la placa y gírela varios cm, en contra de las manecillas del reloj, procediendo a
abrirla nuevamente por igual procedimiento.

 Introduzca nuevamente el asa y haga un segmento similar al anterior, de manera que


las bacterias sembradas en el primer segmento sean removidas para el segundo.

 Repita esta operación una o dos veces más.


 Finalmente cierre la placa y colóquela sobre la mesa de trabajo boca abajo.

 Esterilice el asa de platino a la llama del mechero, en la forma explicada antes de


dejarla en el puesto de trabajo.
 Rotular y guardar para la incubación

6. CONCLUSIONES

Una vez que ya tenemos los medios de cultivo preparados, hay que inocularlos, y para ello se
necesita:
Medio de cultivo.
Condiciones óptimas de incubación como temperatura, pH, presión, condiciones atmosféricas
(concentración de O2).

Estos medios de cultivo son sólidos (cultivos en reposo), o líquidos (para cultivos en
agitación)

Al realizar una siembra de microorganismos, debemos tener en cuenta que técnica se va a


utilizar, debido a que estas varían respecto a las características del microorganismo a tratar.
También debe tenerse en cuenta la forma, espacio y el objetivo al que se quiere llegar, pues
dependiendo de esto la técnica de siembra es diferente. Un microorganismo se puede sembrar
en un medio líquido o en la superficie de un medio sólido de agar. Un cultivo de bacterias o de
hongos es con el fin de aislarlas en el medio para lograr un mejor estudio de ellos.
CUESTIONARIO

 Explique las recomendaciones generales que se debe tener en cuenta para realizar un
adecuado aislamiento de microorganismos.

 ¿Cuáles son las muestras problemas que pueden tomarse y cuáles son las normas
específicas para colectarlas?
 ¿Cuál es la finalidad del aislamiento de microorganismos?
 ¿Qué es un CLON?
 Explique los métodos para el aislamiento y cultivo de bacterias anaerobias.
 ¿Si desea realizar recuento de células bacterianas, qué método de siembra emplearía?
¿Por qué?