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UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSÉ DE CALDAS

FACULTAD DE MEDIO AMBIENTE Y RECURSOS NATURALES


LABORATORIO DE BIOQUÍMICA
Profesora: Luz Mery Buitrago A.

Práctica de laboratorio

EXTRACCIÓN E IDENTIFICACIÓN DE LÍPIDOS

1. INTRODUCCIÓN

Los lípidos son sustancias no polares, prácticamente insolubles en agua, pero solubles en
disolventes grasos no polares como el cloroformo, benceno, etanol, metanol, etc. Este
grupo de biomoléculas han recibido poco interés por parte de los investigadores, quizás
por los problemas en su manejo atribuibles a la insolubilidad en agua; pero desempeñan
una variedad de funciones de gran importancia.

Los lípidos simples como los triglicéridos, funcionan como sustancias de reserva; y las
ceras realizan actividades de protección. Los lípidos compuestos como las lecitinas,
cefalinas, etc., se combinan con proteínas para constituir la estructura de todas las
membranas biológicas. Lípidos como el colesterol son de gran importancia clínica para el
hombre, en cambio otros se desempeñan como hormonas, sales biliares, vitaminas, entre
otros. Otra Importancia de los lípidos, es la de proporcionar aislamiento físico y térmico a
los diferentes órganos del cuerpo.

La yema de huevo, el tejido cerebral y ciertas semillas son fuentes ricas en fosfolípidos y
otros materiales lipídicos.

Los lípidos generalmente se encuentran enlazados a proteínas y polisacáridos de los


tejidos, formando complejos con diferentes grados de estabilidad, por lo que para poder
romper estos complejos se requiere el empleo de condiciones de extracción capaces de
desnaturalizar o separar las proteínas o los carbohidratos asociados con ellos. El etanol,
por ejemplo, desnaturaliza proteínas y separa los complejos de lipoproteínas.

Para realizar la extracción total de los lípidos, es común el empleo de metanol al 95%,
etanol al 95% o de mezclas metanol: cloroformo (3:1) o etanol: éter (2:1). Es conveniente
adaptar las condiciones de extracción tanto al tipo de tejido empleado, así como a la
cantidad y naturaleza del lípido deseado.

La separación de los lípidos basada en sus diferencias de solubilidad, son


desafortunadamente casi siempre, parcialmente satisfactoria, debido a que la solubilidad
de los constituyentes de las mezclas de lípidos son bastantes diferentes a las de los
lípidos puros.

Para la separación de las lecitinas de la solución etérea, se utilizará acetona, ya que las
lecitinas, cefalinas y esfingolípidos son solubles en éter, etanol o cloroformo, pero
insolubles en acetona, y por este motivo precipitan de la solución.
Otros lípidos simples se separarán por saponificación con hidróxido de potasio, formando
JABONES. En la porción etérea resultante se va a separar el COLESTEROL, ya que éste
no es material saponificable. Para su aislamiento se eliminará el éter por evaporación.

La identificación del colesterol se hace generalmente realizando las Pruebas de Salkowski


y la de Lieberman-Burchard, las cuales tienen el siguiente fundamento:

PRUEBA DE SALKOWSKI: Cuando a las soluciones clorofórmicas de colesterol se les


adiciona un volumen igual de ácido sulfúrico concentrado, y se mezclan suavemente, se
desarrolla un color rojo característico en la capa clorofórmica. El color obtenido resulta de
la formación de dobles enlaces adicionales o bien a partir de la condensación de 2
moléculas de colesterol para formar bioesteroides.

PRUEBA DE LIEBERMAN-BURCHARD: El Anhídrido Acético puede condensarse con


los Grupos hidroxilo de la posición 3 del colesterol o esteroides relacionados, produciendo
el éster correspondiente. Si el esterol contiene una insaturación en la posición 5, ocurrirá
una epimerización a la forma 3 y una deshidratación con la formación de un color
característico. La reacción sirve como una prueba específica para los 3-hidroxiesteroides
con una insaturación en la posición 5.

1. SOLUBILIDAD DE LOS LÍPIDOS

Solubilidad. Los grupos principales de los lípidos tienen características de solubilidad


diferentes y esta propiedad se usa en su extracción y purificación a partir de materiales
biológicos.

Emulsión. La mayoría de los lípidos son solubles en etanol a 95% v/v, pero forman una
emulsión de gotas pequeñas cuando se les agrega agua. Esto da a la suspensión una
apariencia lechosa característica y constituye una prueba muy sensible para grasas.

MATERIALES

PARTE A
1. 40 mL de Aceite de oliva (por grupo de trabajo)
2. 40 mL de aceite de hígado bacalao (por grupo de trabajo)
3. Solventes:
 Acetona (50 mL/ por sección de clase)
 Alcohol (200 mL/ por sección de clase)
 Cloroformo (50 mL/ por sección de clase)
 éter (50 mL/ por sección de clase)
PARTE B

MATERIALES:
 CEREBRO (POR SECCIÓN)
 HUEVO (POR GRUPO DE TRABAJO)

 1 Embudo
 1 Erlenmeyer de 100 mL con tapón de caucho
 1 probeta de 50 mL
 1 gradilla
 8 tubos de ensayo
 1 Beaker de 200 mL
 Pipeta de 1 mL
 Pipeta de 0.5 mL
 Espátula
 Mortero con pistilo
 Agitador
 Mechero
 Mallas de asbesto
 Aro con nuez
 Balanza
 Placa de vidrio de 20 cm x 20 cm o cápsula de porcelana
 Vidrio de reloj
 Papel de filtro
 Bisturí (GRUPO DE TRABAJO)
 gasa (GRUPO DE TRABAJO)
 Yeso (GRUPO DE TRABAJO)

 Plancha de calentamiento

REACTIVOS

 10 mL de Cloroformo
 2 mL de Ácido acético glacial
 2 mL Anhídrido acético
 4 mL de Ácido sulfúrico
 5 mL de Acetona
 0,5 mL Hidróxido de Sodio 40%
 5 mL Alcohol etílico
METODOLOGÍA
PARTE A
1. Examine la solubilidad de los materiales relacionados a continuación, en agua y en los
solventes orgánicos; anote las diferencias entre los grupos principales de lípidos.

1 2 3 4 5
Agua destilada 2mL
acetona 2mL
alcohol 2mL
cloroformo 2mL
éter 2mL
aceite de oliva 2mL 2mL 2mL 2mL 2mL

1 2 3 4 5
Agua destilada 2mL
acetona 2mL
alcohol 2mL
cloroformo 2mL
éter 2mL
Aceite de hígado de 2mL 2mL 2mL 2mL 2mL
bacalao

PARTE B
2. AISLAMIENTO DE FOSFOLÍPIDOS

Vierta en el Erlenmeyer 20 mL de alcohol y caliéntelo en una estufa eléctrica.


Tome media yema de un huevo, deposítela en un beaker y añádale 20 mL de
alcohol caliente. Mezcle con el agitador, deje enfriar y filtre en un tubo de ensayo
seco. Si el filtrado presenta turbidez, debe repetir esta última operación.

Con el filtrado usted realizará las siguientes experiencias:

Adicione 5 mL de acetona en un tubo de ensayo y agregue gota a gota 0.5 mL de


filtrado hasta observar turbidez. La aparición de ésta indica la precipitación de un
tipo de fosfolípidos: las lecitinas. Registre sus resultados.

Tome 3 mL de filtrado en un tubo de ensayo y 1 mL de agua destilada, se formará


una emulsión estable. Registre sus resultados.
3. AISLAMIENTO DE COLESTEROL

Pese 3 g de cerebro y 10 g de yeso. Mézclelos en un mortero y macere hasta obtener una


masa espesa; con ayuda de la espátula deposite la masa en una placa de vidrio
procurando formar una capa bien fina. Sométala a calentamiento hasta secarse
completamente. Para ello debe colocar la placa de vidrio sobre una malla de asbesto a
una altura de 40 cm por encima de la malla del mechero y así evitar su ruptura por acción
del calor. Una vez seca la masa, coloque la placa de vidrio sobre una placa de asbesto
hasta que se enfríe, raspe la pasta, deposítela en un mortero y proceda a triturarla hasta
hacerla polvo, agregue este en un Erlenmeyer, adicione 10 ml de cloroformo, agite
cuidadosamente tapando la boca del Erlenmeyer e igualando presiones regularmente
durante 5 minutos y filtre. Con su filtrado, que es extracto de colesterol en cloroformo se
hará las siguientes pruebas:

REACCIÓN DE SCHIFF

En un tubo de ensayo seco vierta 1 mL del extracto del colesterol y haga deslizar por las
paredes de este con cuidado y lentamente 1 mL de ácido sulfúrico concentrado. En la
interfase debe observase un color rojo que evidencia la presencia de colesterol. Anote su
apreciación de lo observado en la hoja de respuestas.

REACCIÓN DE SALKOVSKY

En un tubo de ensayo seco agregue 1 mL de extracto de colesterol y 1 mL de ácido


sulfúrico concentrado. Mezcle. Deje en reposo hasta que se separe en dos capas. La
capa superior resulta coloreada de rojo y la inferior de rojo amarillento con fluorescencia
verde. Si la capa inferior se separa y se le añade 1 mL de ácido acético glacial, aparecerá
una coloración rosada mientras la fluorescencia se mantiene. Proceda a hacerlo y anote
su apreciación de lo observado.

REACCIÓN DE LIEBERMANN – BURCHARD

Tome 2 mL de su extracto en un tubo de ensayo, añádale 0.5 mL de anhídrido acético y


0.1 mL de ácido sulfúrico. Mezcle cuidadosamente. El líquido resultante adquiere
inicialmente coloración rojo, luego violeta, azul y por último verde.

ANÁLISIS

CONCLUSIONES

BIBLIOGRAFIA

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