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Artículo 1: Variación de Concentración inicial (Co) de glicerol (Gly) para estudiar su
efecto sobre la producción del Ácido Clavulánico (AC).
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Efecto de la concentración inicial
de glicerol
12
4
2
0
0 10 20 30 40
Glicerol (g/L)
Figura 1. Efecto de la concentración inicial de Glicerol en el medio de cultivo sobre la
producción de Ácido clavulánico a partir de S. clavuligerus en cultivo por lote agitado a
T: 28°C y 200 rpm. X: Peso seco celular
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Consumo de Glicerol Producción de AC
Cultivo 1 Cultivo 1
16 400
Cultivo 2 Cultivo 2
Concentración de AC
14 350
Glicerol (g/L)
Cultivo 3 Cultivo 3
12 300
Cultivo 4 Cultivo 4
10 250
Alimentación con Alimentación
8
(mg/L)
200 con glicerol
6 glicerol (on)
150 (on)
4 100
2 50
0 0
0 20 40 60 80 100 120 140 0 20 40 60 80 100 120 140
Tiempo (h) Tiempo (h)
Peso Seco celular
Cultivo 1: Control sin 12
alimentación
Peso seco celular (g/L)
10
8
Desde las 60 h se
adicionaron 2 mL/12h de 6
Cultivo 1 La producción de AC
solución de glicerol 4 Cultivo 2 en el cultivo 4 fue 2,3
(125g/L) hasta: 2
Cultivo 3 veces > Cultivo 1
•Cultivo 2 (84 h) Cultivo 4
0
•Cultivo 3 (108 h)
0 20 40 60 80 100 120 140
•Cultivo 4 (132 h). Tiempo (h) 6
Consumo de Glicerol Producción de AC
25 Alimentación Lote 300
con glicerol
Concentración de AC (mg/L)
20 (on) Lote alimentado 250
Glicerol (g/L)
200
15
Alimentación
150
con glicerol
10 (off)
100
Lote
5 50
Lote alimentado
0 0
0 20 40 60 80 100 120 140 0 20 40 60 80 100 120 140
Tiempo (h) Peso Seco celular Tiempo (h)
20
Lote
Peso seco celular (g/L)
Lote alimentado
15 •En lote: La prod. AC
•La X en lote es 230 mg/L (73 h).
alimentado comenzo a 10 •En lote alimentado:
disminuir a las 48 h. La prod. AC: 280 mg/L
•La prod. AC 5 a 130 h
0
0 20 40 60
Tiempo (h)
80 100 120 140
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Artículo 2: Optimización del medio por el método de diseño experimental de matriz
ortogonal de Taguchi L16.
Con medio óptimizado trabajar en lote y lote alimentado con Gly, Arginina (Arg) y
Treonina (Tre).
8
Arreglo de matriz ortogonal usando el software MINITAB 13.3
No. Glicero Sacarosa Prolina Ácido Glutamico K2HPO4 AC
Muestra l (A) (B) (C) (D) (E) (mg/mL)
1 1(0,375) 1(0,500) 1(0,560) 1(0,420) 1(0,05) 0,114
2 1 2(1,000) 2(1,120) 2(0,840) 2(0,1) 0,373
3 1 3(2,000) 3(2,240) 3(1,680) 3(0,2) 0,317
4 1 4(3,000) 4(3,360) 4(2,520) 4(0,3) 0,354
5 2(0,750) 1 2 3 4 0,328
6 2 2 1 4 3 0,530
7 2 3 4 1 2 0,306
8 2 4 3 2 1 0,290
9 3(1,500) 1 3 4 2 0,328
10 3 2 4 3 1 0,269
11 3 3 1 2 4 0,274
12 3 4 2 1 3 0,218
13 4(2,250) 1 4 2 3 0,218
14 4 2 3 1 4 0,226
15 4 3 2 4 1 0,463
16 4 4 1 3 2 0,475
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Basandose: Co de Gly entre 10-20 g/L (Chen y col, 2002) y que Gly limita la
velocidad de síntesis de la producción de AC (Chen y col, 2003).
S/R=-10 log10(S2) donde S:Desv. Estandar
Ácido clavulánico (mg/mL)
(mg/
Tiempo (h)
11
Efecto de la fuente de fosfato sobre Efecto de adición de Animoácidos en
la producción de AC el medio sobre la producción de AC
13
CAC máx. da una razon molar Gly-
Ornitina 40:1 que corresponde a 85
mM y 2,1 mM
14
15
Artículo 4: Escalabilidad (reducción) y medida de OUR (tasa de consumo de
oxigeno)→KLa (coeficiente volumétrico de transferencia gas-liquido) por
comparabilidad matraz de volumen pequeño vs. bioreactor.
16
Criterio de escalabilidad (reducción): Valores de KLa
17
Efecto de ácido clavulánico sobre cultivo de S.c.
18
Efecto del ácido clavulánico descompuesto sobre cultivo de S.c.
19
•Estrategias para optimización del medio de cultivo en pro de mejorar la
producción de AC
•Hay artículos muy bien escritos que se pueden ser interpretados a partir solo de
sus gráficas.
•El artículo 2 habla de la limitación que ejerce la L-valina pero al observar la gráfica
reportada se puede pensar que la L-leucina causa un efecto similar y no fue
estudiado.
21
• La treonina parece ser un eslabón importante en la biosíntesis de ácido
clavulánico en S. clavuligerus.
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Kuo-Cheng Chen, Yun-Huin Lin, Cheng-Min Tsai1, Chen-Hao Hsieh, Jer-Yiing Houng.
“Optimization of glycerol feeding for clavulanic acid production by Streptomyces
clavuligerus with glycerol feeding”. In: Biotechnology Letters. Vol. 24 (2002) p.455–458.
Parag S. Saudagar, Rekha S. Singhal. “Optimization of nutritional requirements and
feeding strategies for clavulanic acid production by Streptomyces clavuligerus”. In:
Bioresource Technology, Vol. 98 (2007) p.2010–2017
Letícia C.G. Domingues, Juliana C. Teodoro, Carlos O. Hokka, Alberto C. Badino, Maria
Lucia G.C. Araujo. “Optimisation of the glycerol-to-ornithine molar ratio in the feed
medium for the continuous production of clavulanic acid by Streptomyces clavuligerus”.
In: Biochemical Engineering Journal, 15 de mayo (2009). DOI:10.1016/j.bej.2009.05.006
Simone Brethauer, Martin Held, Sven Panke. “High Concentrations of Clavulanic Acid
But Not of Its Degradation Products Decrease Glycerol Consumption and Oxygen
Uptake Rates in Cultures of Streptomyces clavuligerus”. In: Biotechnology and
Bioengineering, Vol. 100, No. 3, June 15, 2008
Kuo-Cheng Chen, Yun-Huin Lin, J-Y Wu, S-C.J. Hwang. “Enhancement of clavulanic
acid production in Streptomyces clavuligerus with ornithine feeding”. In: Enzyme Microb.
Technol. Vol. 32 (2003) p.152–156.
Gutiérrez Pulido, Humberto. “Análisis y diseño de experimentos”. Mexico: McGraw-
Hill, 2003.
Shumpe A, Quicker G, Deckwer WD. “Gas solubilities inmicrobial culture media.
Reaction engineering”. Berlin: Springer Verlag. (1982) p. 1-37
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