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Proyecto de investigación | INGENIERIA DE BIOPROCESOS

EXTRACCIÓN DE POLIHIDROXIALCANOATOS (PHA) A PARTIR DE LA


CIANOBACTERIA Nostoc Sphaericum PARA LA ELABORACIÓN DE PLÁSTICOS
BIODEGRADABLES

RESUMEN

Este proyecto tiene por finalidad obtener plástico a partir de la cianobacterias y en este caso se
escogió el Nostoc sphaericum que es conocido comercialmente como murmunta, del cual se
extraerá el phA mediante un proceso microbiológico dentro de un biorreactor y así poder obtener
plásticos biodegradables.
Se escogió como materia prima principal el PHA ya que Los Polihidroxialcanoatos (PHA) son
plásticos biocompatibles y biodegradables sintetizados por una amplia variedad de
microorganismos, que comparten características muy similares con los plásticos de origen
petroquímico.

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INDICE

INTRODUCCION............................................................................................................................... 1
CAPÍTULO I...................................................................................................................................... 2
1. MARCO OPERATIVO.............................................................................................................2
1.1. ANTECEDENTES............................................................................................................ 2
1.2. JUSTIFICACION.............................................................................................................. 2
1.3. OBJETIVOS..................................................................................................................... 2
1.4. ALCANCES Y LIMITACIONES.........................................................................................2
1.5. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA..............................................................................3
CAPITULO II..................................................................................................................................... 4
2. MARCO OPERATIVO.............................................................................................................4
2.1. CIANOBACTERIAS.........................................................................................................4
2.2. POLIHIDROXIALCANOATOS (PHA)...............................................................................4
2.3. PLASTICOS BIODEGRADABLES...................................................................................5
CAPÍTULO III.................................................................................................................................... 5
3. METODOLOGÍA...................................................................................................................... 5
3.1. ACONDICIONAMIENTO DE NOSTOC PARA SU CULTIVO............................................5
3.2. EXTRACCIÓN DE PHA...................................................................................................5
3.3. PRODUCCIÓN DE FILMS...............................................................................................5
CAPÍTULO IV.................................................................................................................................... 6
4. ANÁLISIS DE RESULTADOS Y CONCLUSIONES.................................................................6
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS..................................................................................................6
ANEXOS............................................................................................................................................ 6

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INTRODUCCION

En los últimos años, la producción de plásticos a nivel mundial ha alcanzado cifras


significativas. Los plásticos han ampliado propiedades tales como la suavidad, la
resistencia, la resistencia y la resistencia a la degradación. Sin embargo, sus numerosas
aplicaciones y usos han provocado dependencia a este tipo de recurso y por tal razón la
generación de un efecto ambiental negativo por su tardía degradación.

En cuanto a los 140 millones de toneladas de plástico se utilizan cada año alrededor del
mundo, que requiere el procesamiento de aproximadamente 150 millones de toneladas
de fósiles de combustible y da lugar a enormes cantidades de residuos que pueden tomar
miles de años para descomponerse.

Los métodos utilizados para la eliminación de materiales plásticos son desafiantes ya que
las tasas de degradación son tremendamente bajas. Por lo tanto, investigaciones
dedicadas a la producción de los mismos y a la remediación ambiental buscan
alternativas para disminuir el índice de contaminación en el mundo a través de la
elaboración de plásticos a partir de fuentes biodegradables.

Una alternativa para ello es la extracción a partir de los polihidroxialcanoatos presentes


en microalgas y cianobacterias. Los polihidroxialcanoatos (PHA) son bioplásticos que
podrían reemplazar a los plásticos derivados del petróleo debido a que sus propiedades
son similares a las de polipropileno y se pueden procesar en un modo similar, incluyendo
la extrusión y la inyección de moldes, con total biodegradabilidad.

Microalgas son un tipo de microorganismo que se puede utilizar para obtener PHA a un
costo inferior. Esto es posible debido a que las microalgas tienen un mínimo de los
requisitos nutricionales y son fotoautótrofos; estas sencillas procariotas acumulan PHA
por fotosíntesis oxigenada. Además de reducir los costes de producción, es necesario
mejorar la capacidad de las medidas de polimerización para aumentar su capacidad y
competitividad de las PHA. Por lo tanto, es fundamental conocer las propiedades de los
obtenidos biopolimentados, verificando sus posibles aplicaciones industriales.

El presente trabajo tiene como objetivo proporcionar una revisión sobre la producción de
PHA de diferentes microalgas, basada en las propiedades y composición de
biopolimentados, verificando el potencial utilizado de estos bioplásticos en sustitución de
los plásticos basados en plásticos, y a su vez la producción de los PHA en la
cianobacteria Nostoc Sphaericum que se encuentra en Perú.

CAPÍTULO I

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1. MARCO OPERATIVO

1.1. ANTECEDENTES

Se tiene que en febrero de 2019 fue presentado en la revista “International Journal of


Biological Macromolecules”. El artículo fue elaborado en el instituto de ciencias de la
salud en la Universidad Federal de la Racona de Bahía con el nombre, “Microalgae as
souce of polyhydroxyalkanoates”. Por Samantha Serra Costa, Andrea Lobo Miranda,
Michele Greque de Morais, Jorge Alberto Viera Costa y Janice Izabel Druzian
El artículo es un estudio tubo como objetico proporcionar una revisión sobre la
producción de PHA de diferentes microalgas, centrándose en las propiedades y la
composición de biopolímeros, verificando el potencial de usar estos bioplásticos en lugar
de plásticos a base de petróleo. Los estudios de estimulación de la síntesis de PHA por
microalgas todavía se consideran incipientes. Aun así, está claro que las microalgas
tienen el potencial de producir biopolímeros con un menor costo y pueden desempeñar
un papel vital en el medio ambiente, los estudios que realizaron fue una descripción del
proceso desde las condiciones de crecimiento de las microalgas, métodos de extracción
de PHB hasta los potenciales a alcanzar con estas microalgas.
También como antecedentes se consideró los estudios realizados por diferentes
autores.
Silva y Sforza: El contenido de carbohidratos de la biomasa cambió de 20% a 43%
limitación de nitrógeno.
Sharma y Mallick: la cantidad de polihidroxialcanoato aumento hasta un 35% limitación
de fosforo y nitrógeno. Optimización de la producción de poli-b-hidroxiburitaro
Ripkka, J. Dresuelles, J.B. Waterbury, M. Herdman, R.Y. Stainer: Asignaciones
genéricas, historiales de cepas y propiedades de cultivos puros de cianobacterias,
Rippka et al. Propone una solución nutritiva (EDTA, CaCl2.2H2O y otros compuestos
como fuente para los macros y micro nutrientes)

1.2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Todas las cosas en este mundo tienen su tiempo contado, les lleva más o menos tiempo
degradarse de una u otra forma. La producción de plásticos derivados de la industria del
petróleo se ha convertido en uno de los problemas más grandes de contaminación
ambiental en el mundo. Para poder remediar este problema se ha optado por tomar
rutas alternativas para su producción, una manera es la biodegradación, que es el
empleo de fuentes para la producción del mismo que sea fácilmente degradado por
organismos vivos, principalmente bacterias. La cianobacteria Nostoc sphaericum es una
fuente rica en PHA bajo las condiciones de crecimiento y desarrollo optimas, a su vez es
un recurso fácil de extraer en Perú, por esta razón se busca evaluar la eficiencia de esta
cianobacteria en la producción de polihidroxialcanoatos para su posterior utilización
como un polímero sustituto en la elaboración de plásticos.

1.3. OBJETIVOS

1.3.1. Objetivo general

- Obtención de PHA a partir de Nostoc sphaericum y su posterior conversión en


plástico.

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1.3.2. Objetivos específicos

- Realizar la alimentación de CO2 mediante fermentación de glucosa con


levadura, controlando la cantidad necesaria para el proceso.
- Evaluar distintas condiciones de producción de PHA por ejemplo: Temperatura,
pH, fuentes de Carbono y tiempo expuesto a la luz.
- Identificar y caracterizar el PHA obtenido.
- Conversión de PHB en plástico de uso cotidiano films o películas.

1.4. JUSTIFICACION

La presente investigación busca establecer una nueva alternativa para la producción de


polímeros biodegradables utilizando medios microbiológicos y con lo cual se evitaría el
uso de biopolímeros derivados de petróleo ya que su producción conduce
inevitablemente al deterioro del medio ambiente afectando directamente a todo nuestro
ecosistema.
Hay muchas investigaciones y producciones de plásticos biodegradables sin embargo
en esta investigación se tiene una nueva alternativa con la producción a partir del
Nostoc sphaericum qué es una cianobacteria del cual podemos obtener PHA que es un
poliéster con el cual se pueden obtener plástico con un tiempo corto de degradación el
cual sería una propuesta para el reemplazo de los plásticos comerciales y así contribuir
al mejoramiento del cuidado del medio ambiente.

1.5. ALCANCES Y LIMITACIONES (Tony)

La mayoría de los PHAs pueden ser procesados en equipos de extrusión e inyección


convencionales, sin que se precisen modificaciones significativas para un buen
procesado. Es posible también el procesar estos polímeros en sistemas de moldes y
plásticos de recubrimiento para ser usados, por ejemplo, como materiales de
farmacéutica, biomedicina, de alimentos, embalaje, entre otras.

Una de las grandes limitaciones de producción a escala industrial son los costos (Andler
y Díaz, 2013) así como también puede ser nutricional como la limitación de fósforo,
nitrógeno, oxígeno o en un pH no óptimo y un exceso de la fuente de carbono.

CAPITULO II
2. MARCO OPERATIVO

2.1. CIANOBACTERIAS
2.1.1. Conceptos generales

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Las Cianobacterias son eubacterias, pertenecientes a la división Cyanobacteria.


Cianobacterias = cianofíceas = algas verde-azules. Realizan fotosíntesis oxigénica.
Son responsables del cambio de una
atmósfera reductora a oxigénica.
Los fósiles más antiguos son de algas
cianofíceas (-3.500 m.a.), que vivían
formando unas estructuras
laminares llamadas estromatolitos que se
originaron por la compactación y
consolidación de microorganismos entre
partes sedimentarias.
Figura 1. Estructura de un estrematolito.

Los principales géneros son Spirulina, Lyngbia, Oscillatoria, Anabaena,


Aphanizomenum, Nostoc, Microcystis.

El género en estudio es el Nostoc la cual es una estructura filamentosa heterosista.


Los filamentos doblados, enroscados, esféricos o arrollados son largos y se presentan
ligados por mucílago. Su textura puede ser lisa o verrugosa. Las envolturas
mucilaginosas son firmes y anchas, amarillas, marrones, o de color negro.
Los heterocistes son solitarios, esféricos o en forma de barril. Las acinetos son
elipsoidales y solo levemente más grandes que las células vegetativas. Las acinetos de
Nostoc están situadas generalmente a medio camino entre los heterocistos. Esto lo
diferencia del género Anabaena, donde las acinetos normalmente se encuentran
adyacentes a los heterocistos.

Figura 2. Nostoc o murmunta, cianobacteria que crece en las lagunas andinas del Perú
a más de 3000 metros sobre el nivel del mar. Estas algas fijan el nitrógeno durante su
crecimiento.

2.1.2. Características de las cianobacterias

Estructura:

 Poseen pigmentos como: clorofila(a) (verde), ficocianina (azul), ficoeritrina (rojo).


 Pared celular similar a la de las bacterias Gram -.
 Alguna cianobacterias pueden fijar el N2 atm. debido a la presencia
de heterocistos (llenos de N2) en la colonia.

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 Citoplasma dividido en 2 zonas: centroplasma, donde está el ADN,


cromoplasma, donde están los pigmentos, gránulos de volutina
y carboxisomas que contienen enzimas que fijan el CO2.
 Aisladas o en colonias filamentosas (tricomas), cuyas células se unen a manera
de rosario, rodeadas por una vaina gelatinosa.

Figura 3. Estructura interna de las cianobacterias

Figura 4. Estructura de los tricomas.

Hábitat y reproducción:

 Se reproducen por bipartición


 Viven en gran variedad de hábitat (suelo, rocas húmedas, mar, agua dulce)
formando el verdín. Pueden soportan T de 90º (en aguas termales).
 Al asociarse simbióticamente con los hongos, forman los líquenes.
 Son fotosintéticas aerobias.
Respecto al Nostoc:

 Suelen vivir en climas extremos, con temperaturas bajo cero, prosperando en


alturas sobre 3000 m sobre el nivel del mar, habiéndose encontrado hasta 5000
m en atmósferas pobres en oxígeno.
Morfología:

 Son más grandes que la mayoría de otras bacterias.

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 El citoplasma suele presentar estructuras reconocibles como los carboxisomas


(corpúsculos que contienen la enzima ribulosa-1,5-bisfosfato
carboxilasa RuBisCO, que realiza la fijación el CO2), gránulos de glucógeno,
gránulos de cianoficina, gránulos de polifosfato, vesículas gasíferas y tilacoides,
donde reside el aparato molecular de la fotosíntesis. Contienen ribosomas 70S
que se encuentran dispersos en el citoplasma.
 La envoltura, como en las bacterias Gram negativas, tiene una membrana
plasmática y una membrana externa, con una pared de peptidoglucano entre
ambas.
 Suelen tener color verde- azulado que les confieren las ficocianinas.
Respecto al Nostoc:
 Tienen aspecto de uvas, traslúcidas, gelatinosas y esféricas, con un diámetro
que varía de 10 a 25 mm. También se presenta como colonias laminares de
geometría irregular.

2.1.3. Propiedades de las cianobacterias

Nutriente valioso
Añade proteínas, calcio, hierro y vitamina A a las comidas que se consumen en los
Andes. La tradición Inca consideraba que el calcio protegía los dientes y los demás
huesos del cuerpo.

Capacidad de Regenerar
El Nostoc tiene propiedades medicinales, por ejemplo; frena la formación del colesterol,
también ayudaría a regenerar los huesos (esto indicado a que en ciertas zonas de la
serranía, la cantidad de osteoporosis es reducida).

Anticancerígeno
Tiene efectos resistentes a los tumores cancerígenos y es capaz de proteger la piel ante
los rayos UV.

Fuente de energía
Se ha podido obtener combustible del Nostoc, en la producción de bioetanol
(combustible de tipo fósil, también llamados “biocombustibles”)

Fuente de elaboración de plásticos biodegradables


Es posible obtener plásticos biodegradables por la producción intracelular de
polihidroxialcanoatos.

2.1.4. Ciclo de crecimiento

Las cianobacterias son organismos antiguos que se caracterizan por conjugar el


proceso de la fotosíntesis oxigénica con una estructura celular típicamente bacteriana.
Al ser responsables de la primera acumulación de oxígeno en la atmósfera, las
cianobacterias han tenido una enorme relevancia en la evolución de nuestro planeta y
de la vida en él. En la actualidad presentan una amplia distribución ecológica,
encontrándose en ambientes muy variados, tanto terrestres como marítimos, e incluso
en los más extremos, siendo la fotoautotrofía, fijando CO2 a través del ciclo de Calvin,
su principal forma de vida, y contribuyendo de manera importante a la productividad
primaria global de la Tierra. En relación con esto, es también relevante el hecho de que
muchas cianobacterias sean capaces de fijar el nitrógeno atmosférico, siendo, a su vez,
capaces de hacerlo en condiciones de aerobiosis (de hecho, ciertas cianobacterias

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representan los mayores fijadores en amplias zonas oceánicas contribuyendo de forma


importante a la cantidad total de nitrógeno fijado en vida libre). La existencia conjunta de
la fotosíntesis y de la fijación de nitrógeno ha requerido el diseño de estrategias que
hagan posible el funcionamiento de ambos procesos antagónicos desde el punto de
vista de sus requerimientos ambientales. (A. Herrero y E. Flores, 2008)

La curva del crecimiento microbiano representa la evolución del número de número de


células viables presente en un cultivo microbiano líquido a lo largo del tiempo de
estudio. Se estudia el número de células viables por mililitro de un cultivo de volumen
limitado y con una cantidad de nutrientes limitada, como por ejemplo un medio de cultivo
líquido en un matraz que ha sido inoculado con una cantidad inicial de microorganismos
o inóculo.
En la curva de crecimiento se diferencias cuatro fases, la fase de retraso (a veces
llamada fase de latencia), la fase de crecimiento exponencial o logarítmico, la fase
estacionaria y la fase de muerte celular.
De las cuatro fases de la curva de crecimiento, habitualmente la fase de crecimiento
exponencial o logarítmica es la que presenta mayor interés por ser la fase en la que el
incremento del número de microorganismos es máximo. Durante esta fase el tiempo de
generación (g) de los microorganismos (el tiempo que la población de microorganismo
necesita para duplicar su número) se mantiene constante.

Dentro de los factores que favorecen su desarrollo tenemos:


- Temperatura (20-25)°C
- pH (6-9)
- Estancamiento del agua
- Intensidad de luz alta
- Nutrientes (fosforo 0.01mg/Lt)
- Nitrógeno inorgánico soluble: nitritos (0.1 mg/L), nitratos (0.1 mg/L)

Si se desea determinar el desarrollo de ciertos componentes dentro de la cianobacteria,


se puede realizar por métodos indirectos empleando reactivos que tengan afinidad por
el componente en análisis.

2.1.5. Producción de cianobacterias en Arequipa

La Murmunta (Nostoc sphaericum), es una alga andina peruana aún no ha sido


industrializada siendo un recurso renovable, depositaria de numerosos lagos,
manantiales y diversos ambientes acuáticos, su larga data de consumo indica una
seguridad alimentaria como complemento nutricional económico. (Alvarado et al. 2017)

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La mayoría de las algas marinas han sido estudiadas y explotadas en la industria de


alimentos, sin embargo las de agua dulce, su explotación e información científica son
escasas, sobre todo en el comportamiento reológico de su hidrocoloide como es el caso
del Nostoc sphaericum. Esta alga es un recurso natural renovable que se desarrolla en
diferentes medios acuíferos como en los departamentos de Ancash, Amazonas,
Cajamarca, Cuzco, Huancayo, Junín, La Libertad, Oroya, Puno, Cerro de Pasco, y parte
de la selva de Huánuco. (Roldán et al. 2015)

2.2. POLIHIDROXIALCANOATOS (PHA)


2.2.1. Conceptos generales
Los biopolímeros o polihidroxialcanoatos (PHA) son considerados fuertes candidatos
para el reemplazo de los polímeros de origen petroquímico, ya que siendo sintetizados
por microorganismos a partir de sustratos de bajo o nulo valor económico y en general
de recursos renovables, tienen características físicas similares a las de los plásticos
derivados del petróleo, como el polipropileno y polietileno (González et al., 2013; Lee,
1996; Sudesh et al., 2000; Serrano, 2010), pero tienen la posibilidad de ser degradados
a dióxido de carbono y agua en condiciones aerobias o a metano y dióxido de carbono
en condiciones anaerobias (Du et al., 2001).

Estos, son polímeros de ácidos hidroxialcanoicos que algunos microorganismos


acumulan intracelularmente como material de reserva, para usarlo posteriormente como
fuente de carbono y energía. La polimerización de los ácidos hidroxialcanoicos, por
acción de enzimas intracelulares, tiene lugar mediante condensación del grupo
carboxilo de un monómero (ácido hidroxialcanoicos), con el grupo hidroxilo del
siguiente, formándose un enlace éster; de ahí que se han llamados biopoliésteres
(Khanna y Srivastava 2005) (Figura 1).

Los PHA son acumulados como polímeros líquidos, móviles y amorfos en forma de
gránulos que se alojan en el citoplasma de los microorganismos, rodeados de una
monocapa de fosfolípidos que contiene enzimas polimerasas y despolimerasas (Ábalos
et al., 2003; Gómez, 2013). Estas bacterias sintetizan los PHA como compuestos de
almacenamiento de fuentes de carbono y energía (Lenz y Marchessault, 2005; Ojumu,
et al., 2004) y probablemente cumplen con otras funciones en la célula bacteriana. De
esta manera, constituyen un grupo de materiales biodegradables de gran potencial
biotecnológico (Arcos, 2007).

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Figura 1. Esquema del gránulo de PHA acumulado intracelularmente

2.2.2. Características de los polihidroxialcanoatos

ESTRUCTURA
 La estructura básica de los PHA contiene unidades repetitivas de poliésteres
alifáticos desde 600 a 35000.

Figura. Estructura del poliéster alifático.

 De acuerdo a la repetición de sus poliésteres podemos clasificarlos si:


- N=1 representa la clase de poli(3-hidroxialcanoatos)
- N=2 representa la case de poli(4-hidroxialcanoatos)
 De acuerdo al numero de átomos de carbono en una unidad monomérica de la
cadena:
- Cadena corta: 3 a 5 átomos de carbono
- Cadena media: 6 a15 átomos de carbono
- Cadena larga: más de 15 átomos de carbono
 De acuerdo al grupo R cuando R es:
- CH3: poli(3-hidroxibutirato) (PHB)
- CH2CH3: Poli(3-hidroxivalerato) (PHV)
- CH2CH2CH3: Poli(3-hidroxihexanoato) (PHHx)

PROPIEDADES TERMICAS Y MECANICAS


 Su temperatura de fusión es a 175°C y su resistencia a la tracción desde 30 a 35
Mpa.

2.2.3. Producción de biomasa

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En primer lugar, debemos concretar que tipo de algas se encuentran en el punto de mira
para la producción de PHA. La producción de biomasa se puede dar por 2 métodos
básicos: estanques abiertos y fotobiorreactores cerrados.
Los estanques pueden ser simples y con muy poca o ninguna corriente de agua, la
relación entre la superficie y el volumen tiende a ser baja, es la alternativa más
económica pero no protege de plagas, depredadores y patógenos. Los fotobiorreactores
cerrados se construyen con materiales transparentes, como vidrio o plástico. La relación
entre la superficie y el volumen suele ser algo mayor, hay un mayor control en el paso
de microorganismos patógenos.
La calidad del cultivo se controla eligiendo condiciones que fomenten el crecimiento de
la cepa de interés, pero no el de otros organismos que puedan acabar en el estanque o
fotobiorreactor.
Aunque el componente esencial para la producción de biomasa son los carbohidratos,
proteínas, lípidos podrían emplearse como materia prima de otros productos
energéticos.

2.2.4. Cianobacterias y polihidroxialcanoatos (PHA)


2.2.5. Métodos de extracción de PHA
Como un producto acumulado intracelularmente en el citoplasma de la celula de los
microorganismos, los PHA debens ser extraidos después de la etapa de producción
(Costa et al. 2018). Debemos considerar los distintos métodos utilizados en diferentes
bibliografías como una oportunidad para obtener el PHA con un alto rendimiento, incluso
se pueden combinar métodos.(Kapritchkoff et al. 2006)
El proceso terminará después de recoger el biopolimero por sedimentación o
precipitación.

Método Químico: Se utilizan solventes como cloroformo, acetona, metil isobutil cetona,
cloruro de metileno. (Costa et al. 2018). Se debe considerar el tiempo de contacto con el
solvente y temperatura de calentamiento.
Método Físico: Los métodos más utilizados son molinos homogeneizadores y
ultrasonido.
Se consiguen mejores propiedades térmicas al biopolímero respecto al método químico.
(Middelberg et al. 1995).
Método Biológico: Es un método más complejo que se basa en la aplicación de
enzimas como lizosimas, nucleasas y proteasas. El objetivo es hidrolizar el caldo de
cultivo celular que contienen el PHA. (Kapritchkoff et al. 2006).
Utilizando un método físico y un biológico no se degradan las propiedades del
bioplímero pero se presenta un menor rendimiento del proceso.(Quines et al. 2015).

2.2.6. Economía

2.3. PLASTICOS BIODEGRADABLES


2.3.1. Conceptos generales
Se denominan “bioplásticos” (BPL) a aquellos materiales plásticos certificados como
biodegradables que tienen su origen en materias orgánicas (recursos agrícolas,
forestales y animales), en principio renovables.
Los BPL constituyen un subgrupo dentro de los “plásticos biodegradables” (EDP) que, al
igual que los BPL se degradan por la acción de los microorganismos, pero pueden tener
su origen en fuentes no renovables (recursos fósiles).

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El siguiente esquema muestra los diferentes tipos de BPL existentes, clasificados en


función de su origen.

Los BPL pueden provenir básicamente del PLA y PHA, de origen animal o vegetal; pero
para considerarse un BPL propiamente dicho, deben provenir de materias primas
vegetales renovables, como la soja, patata, algodón, tabaco, etc., siendo la materia
prima más utilizada el almidón. El siguiente gráfico muestra el porcentaje de utilización
de las distintas materias primas posibles.

Grafica. Porcentajes de utilización de materias primas para la producción de BPL.


Actualmente, las capacidades productivas de estos polímeros son muy inferiores a
las de los polímeros derivados del petróleo, por lo que aún es difícil que se den
producciones a gran escala de biopolímeros en fábrica. Sin embargo, en principio no
habría que cambiar las tecnologías de fabricación de envases convencionales para
fabricar envases con polímeros de BPL, ya que se utilizan las mismas líneas de
producción.

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Tampoco hay diferencias significativas en cuanto a cantidad de material necesaria para


fabricar envases de BPL comparado con los plásticos sintéticos, ni en los análisis de
ciclo de vida salen tampoco diferencias significativas entre ambos polímeros en cuanto
al impacto que generan en la etapa de producción.
La producción futura llegará a sustituir hasta un 12% en peso a los plásticos de origen
sintéticos. En el sector del envase se estima una sustitución de un 23‐ 25% y en algunos
productos concretos, hasta del 50%. Ello implicaría aumentar la superficie agrícola en
Europa dedicada a estos polímeros. Las posibilidades de aumento de esta superficie
pueden ser viable, dada la superficie actual agrícola en Europa y las previsiones de
abandono de cultivos, si se modificara la PAC.
2.3.2. Proceso de fabricación a partir de PHA
El método más empleado es el cultivo por lote alimentado. En el cultivo de bacterias con
producción de PHA asociada al crecimiento, se utiliza un sistema de lote alimentado en
una sola etapa en la que se proporciona un medio enriquecido en nutrientes. En cambio,
para el cultivo de bacterias que requieren la limitación de algún nutriente esencial, el
método más empleado es el cultivo por lote alimentado en dos etapas. La primera etapa
se lleva a cabo en un medio enriquecido en nutrientes para favorecer el crecimiento
celular, y en la segunda etapa se limita la concentración total o parcial de un nutriente
esencial para promover la síntesis de PHA. En esta segunda etapa, el incremento en
biomasa se debe a la acumulación intracelular del polímero (Khanna y Srivastava,
2005). También se han estudiado métodos de cultivos mixtos por lote alimentado en dos
etapas, en los que se usan dos tipos de microorganismos diferentes. Uno de los
microorganismos transforma la fuente de carbono barata en sustratos asimilables para
que el otro microorganismo los utilice para producir PHA (Tanaka y cols., 1993) Después
del proceso de fermentación, para la recuperación de la biomasa, el caldo de cultivo se
centrifuga y la biomasa precipitada se filtra. Para la extracción del polímero del interior
de las células se usan normalmente disolventes clorados, especialmente por reflujo con
cloroformo. Debido a que los disolventes clorados son altamente agresivos para el
medio ambiente y para la salud humana, se han desarrollado otros procesos de
extracción basados en el uso de carbonato de etileno o de propileno, así como
metodologías de digestión química que se basan en la liberación del polímero mediante
la ruptura de las células usando soluciones de hipoclorito de sodio, ácidos o bases. Una
vez añadido el disolvente, la solución resultante se centrifuga y se filtra para eliminar
restos de células. Posteriormente, el PHA se precipita normalmente en metanol o etanol
y se recupera el polímero por evaporación del disolvente (Fiorese y cols., 2009)

2.3.3. Proceso de biodegradación


La propiedad que distingue el PHB de los plasticos derivados del petróleo es su
biodegradabilidad. Bajo condiciones aerobicas se degrada en CO2 y agua, y bajo
condiciones anaeróbicas se degrada en CO2 y metano.
2.4. BIO – REACTORES
2.4.1. Medios de cultivo

El medio de cultivo es una disolución acuosa que transporta los nutrientes inorgánicos
que necesitan las microalgas para su crecimiento. El suministro de medio de cultivo y
las concentraciones de los nutrientes deben estar acoplado con la producción de
biomasa de forma que se suministren en cantidad suficiente para que nunca se
produzca una limitación que tendría como consecuencia una disminución en la
productividad de biomasa o incluso alguna disfución del cultivo como la fotoinhibición.

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Los principales nutrientes necesarios son:

- Agua: además de transporte, es un nutriente que suministra los electrones (H·)


necesarios para la reducción del CO2.
- Carbono: normalmente suministrado aparte como CO2, aunque puede
suministrarse como bicarbonato, considerablemente más caro.
- Oxígeno: suministrado tanto por el H2O como por el CO2. Sin embargo es sólo el
oxígeno del CO2 el que se incorpora en la biomasa.
- Nitrógeno: el cuarto elemento más importante por volumen ya que forma parte de
las proteínas y nucleótidos de la biomasa. Suministrado como NO3- o NH4+.
- Fósforo: suministrado como fosfato, forma parte de importantes intemedios
metabólicos, lípidos, enzimas y multitud de especies bioquímicas.

Adicionalmente existe una gran cantidad de otros nutrientes que pueden ser necesarios
dependiendo de la especie. Según la cantidad en la que se necesiten se suelen
clasificar como macronutrientes o micronutientes, ya que es importante para la
preparación del medio.

- Macronutrientes: sales como cloruro de sodio y magnesio, sulfatos y sales de


calcio. Pueden aparecer en concentraciones de hasta 30 g/L cuando se trata de
especies marinas y hasta de 100 g/L en microalgas halófilas. Estos macronurientes
no se consumen en la generación de biomasa o se incorporan en muy pequeña
medida. Su omjetivo principal es mastenes la presión osmótica y el equilibrio de
electrolitros.
- Micronutrientes: Son elementos que actuan como cofactores de enzimas y
aparecen en muy pequeñas cantidades, a veces de microgramos por litro. Si se
ponen en exceso pueden actuar como un veneno, como es el caso del cobre, que es
un conocido alguicida.

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La figura presenta un resumen del bioensayo de producción y degradación de los PHA


producidos por microalgas, que demuestra cómo la producción de PHA por estos
organismos puede ser ambientalmente correcta.
En este ciclo a través de la fotosíntesis, las microalgas utilizan la luz solar, el dióxido de
carbono, el agua y los nutrientes para producir los PHA que se extraen, purifican y
procesan en los artículos plásticos más diversos. Después de su uso, los PHA se
pueden depositar en entornos microbianos activos y la biodegradación de este polímero
formará dióxido de carbono y agua, que serán consumidos por las microalgas.
(Diagrama presentado por Serra Costa et al. 2019)

CAPÍTULO III
3. METODOLOGÍA

3.1. VARIABLES
3.2. ACONDICIONAMIENTO DE NOSTOC PARA SU CULTIVO
3.2.1. Equipos, materiales y reactivos

Equipos Materiales Reactivos

3.2.2. Procedimiento experimental


3.3. EXTRACCIÓN DE PHA
3.3.1. Equipos, materiales y reactivos

Equipos Materiales Reactivos

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3.3.2. Procedimiento experimental

3.4. PRODUCCIÓN DE FILMS


3.4.1. Equipos, materiales y reactivos

Equipos Materiales Reactivos

3.4.2. Procedimiento experimental

CAPÍTULO IV
4. ANÁLISIS DE RESULTADOS Y CONCLUSIONES

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

S.S. Costa, A.L. Miranda, M.G. de Morais, et al., Microalgae as source of


polyhydroxyalkanoates (PHAs) — A review, International Journal of Biological
Macromolecules
N. Mallick, S. Gupta, B. Panda, R. Sem, Process optimization for poly(3- hydroxybutyrate-
co-3-hydroxyvalerate) co-polymer production by Nostoc muscorum, Biochem Eng J. 37
(2007).
S.S. Costa, A.L. Miranda, B.B. Andrade, D.J. Assis, C.O. Souza, M.G. Morais, J.A.V. Costa,
J.I. Druzian, Influence of nitrogen on growth, biomass composition, production, and
properties of polyhydroxyalkanoates (PHAs) by microalgae, Int. J. Biol. Macromol 116
(2018).
G.Q. Chen, A microbial polyhydroxyalkanoates (PHA) based bio- and materials industry,
Chem. Soc. Rev 38 (2009)
S.S. Costa, A.L. Miranda, D.J. Assis, C.O. Souza, M.G. Morais, J.A.V. Costa, J.I. Druzian,
Efficacy of Spirulina sp. polyhydroxyalkanoates extraction methods and influence on polymer
properties and composition, Algal Res. 33 (2018
F.M. Kapritchkoff, A.P. Viotti, R.C.P. Alli, M. Zuccolo, J.G.C. Pradella, A.E. Maiorano, E.A.
Miranda, A. Bonomi, Enzymatic recovery and purification of polyhydroxybutyrate produced
by Ralstonia eutropha, J. Biotechnol. 122 (2006)
A.P.J. Middelberg, Process-scale disruption of microorganisms, Biotechnol Adv. 13 (1995)

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S. Khanna, A.K. Srivastava, Recent Advances in Microbial Polyhydroxyalkanoates, Process


Biochem. 40 (2005)
E. Fukada, Y. Ando, Piezoelectric properties of poly-β-hydroxybutyrate and copolymers of β-
hydroxybutyrate and β-hydroxyvalerate, Int. J. Biol. Macromol 8 (1996)
Alvarado Lopez, Stefany Milagros y Rodriguez Flores, Brigitte Estefania Efecto del consumo
de hierro contenido en la murmunta (Notoc Sphaericum) en la recuperación de ratas con
anemia inducida, Arequipa, 2017
Roldan W. Caracterización y cuantificación del comportamiento reológico del hidrocoloide
proveniente del Nostoc (Nostoc sphaericum v.). [Tesis en línea] [Lima]: Universidad Nacional
Agraria La Molina; 2015 [citado Sep. 2016]
http://www2.eez.csic.es/olivares/ciencia/fijacion/cianobacterias.html

ANEXOS

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