Universidad de Concepción

Facultad de Farmacia
Departamento de Análisis Instrumental

Determinación de Oxígeno
disuelto en agua

INTEGRANTES: Stefany Farías-Salcedo (Biología Marina)

Javiera Rojas (Biología)
DOCENTE: Juan Araya Quintana
COLABORADORES DOCENTES: Alejandro Vallejos
Pedro Alarcón
Héctor Contreras

23 de abril, 2019
RESUMEN

Para la determinación de oxígeno disuelto en agua se utiliza casi exclusivamente por el método
químico propuesto por Winkler en 1888, con una serie de modificaciones menores, esto en
laboratorio, mientras que para registros in situ se utilizan electrodos sensibles a oxígeno. El método
de Winkler es una titulación yodométrica, que utiliza los principios de la reacción de óxido-reducción
de los elementos presentes en el agua, agregando cloruro de manganeso como intermediario de
transferencia de electrones (Grasshof et al., 1999).

En este laboratorio, se utilizó una muestra de agua extraída de la Laguna de los Patos al interior de
la Universidad de Concepción para una determinación de oxígeno disuelto a través del método de
Winkler, esto para aplicar una técnica analítica útil en el quehacer profesional del biólogo marino,
consiguiendo una concentración de 319,725 ± 15,225 µmol/L.

METODOLOGÍA

El método Winkler es una titulación yodométrica. Se agrega una solución de manganeso divalente,
seguida de un álcali fuerte, a la muestra. El hidróxido manganoso precipitado se dispersa
uniformemente en toda la muestra de agua de mar que llena completamente una botella de vidrio
tapada. Cualquier oxígeno disuelto oxida rápidamente una cantidad equivalente de manganeso
divalente a hidróxidos básicos de estados de valencia más altos. Cuando la solución se acidifica en
presencia de yoduro, el manganeso oxidado vuelve nuevamente al estado divalente y se libera
yodo, equivalente al contenido original de oxígeno disuelto del agua. Este yodo se titula con una
solución de tiosulfato estandarizada. Por consiguiente, fue necesario varias soluciones para
proceder a este método, siendo algunas preparadas con anticipación por personal del laboratorio.
Soluciones a utilizar:
- Reactivo “A”: Solución de MnSO4 3 M
- Reactivo-B: Solución de NaI 4 M en NaOH 8 M.
- H2SO4 5,2 M.
- NaS2O3 ~0,02 M (Solución debe ser estandarizada). Se prepara en presencia de Na2B4O7 0,66 mM
como preservante.
- Solución 3% p/v de almidón en glicerina 50% v/v como indicador.
- Solución de patrón primario KIO4 0,0100 N.

Estandarización de la solución titulante de tiosulfato de sodio

La estandarización está basada en la reacción de co-proporcionalidad de yoduro con yodato,
formando así yodo. El yodo se une con los excesos de yoduro y el complejo es titulado con tiosulfato.

Primero que todo (previo al método Winkler), se realizó una estandarización de la solución titulante
de tiosulfato de sodio. Para ello en un matraz Erlenmeyer de 100ml se depositó una alícuota de KIO4
0,0100N, 1ml de H2SO4, 1ml de reactivo “B” y de 3-5 gotas de Almidón como indicador (tendrá una
tonalidad oscura). Se mantiene siempre en agitación el matraz a través del uso de una barra de
agitación magnética blanca. En paralelo se procedió a depositar tiosulfato en una bureta de 25 ml
procurando la ausencia de burbujas en esta para una valoración más exacta.
Una vez posicionado el matraz perpendicular a la bureta, comienza la titulación, la cual se detiene
cuando se observa una transición del contenido del matraz, de tonalidad oscura a incolora. Después
de ello se valoriza el volumen gastado de tiosulfato sabiendo que un mol de yodato es equivalente
a 6 moles de tiosulfato.

Se realizó la estandarización por triplicado. Cabe señalar que se debe asegurar en el proceso de
titulación, arrastrar con la piseta cualquier gota que se haya salpicado en la pared interior del
matraz.

Determinación del oxígeno disuelto en una muestra de agua

Para la determinación de oxígeno disuelto, se comenzó añadiendo en un matraz Erlenmeyer 100ml

de la muestra de agua a la que se le determino el oxígeno disuelto. Se añadió 1 ml de Reactivo-A y
luego 1 ml del Reactivo-B y se mantuvo siempre en agitación el matraz (uso de una barra de
agitación magnética blanca). Se dejó precipitar el contenido (durante 10min), el cual se apreció de
una tonalidad marrón. Cuando el precipitado decanto, se agregó 1 ml de H2SO4 y se agito con barra
magnética hasta la disolución del precipitado. Finalmente se agregó 5 gotas del indicador (almidón),
y se inició la titulación con la solución estandarizada de NaS2O3. Esta titulación se detuvo al observar
una transición de tonalidad oscura a incolora en el matraz que contenía la muestra problema.

Nuevamente se realizó la titulación por triplicado y se calculó la concentración de oxígeno disuelto

sabiendo que 1 mol de oxígeno (O2) es equivalente a 4 moles de tiosulfato S2O32-.

RESULTADOS

I. Estandarización del titulante

El titulante Tiosulfato de sodio (Na2S2O3) se estandarizó mediante tres replicas con un patrón
primario de KIO4 0,0100 N, resultando en 5, 5 y 4,8 mL del titulante sobre 10 mL del patrón primario.
Las concentraciones calculadas según estos volúmenes fueron 0,0200 N, 0,0200 N y 0,0208 N
respectivamente, con un promedio de 0,0203 N ± 0,0005.

II. Determinación de Oxígeno disuelto

La titulación con Na2S2O4 se realizó por triplicado, obteniendo una concentración de Oxígeno
disuelto promedio de 319,725 ± 15,225 µmol/L.
DISCUSIÓN

El método Winkler es una titulación yodométrica. Como el oxígeno disuelto en el agua de mar no
oxida directamente el ion yoduro a yodo, se realiza una oxidación de varias etapas utilizando
manganeso como medio de "transferencia". Se agregan cloruro de manganeso y una solución
alcalina de yoduro de potasio a un volumen medido de agua. El manganeso se precipita como
hidróxido

Mn2+ + 20H-  Mn(OH)

y se oxida a hidróxido de manganeso (III) en una reacción heterogénea

2Mn(OH)> + ½ 02 + H20  2Mn(0H)3

El gran exceso de hidróxido de maganeso (II) obliga a la formación de manganeso (III) en lugar de
manganeso (IV). Debido a la inestabilidad del manganeso (II) en un medio alcalino, la fijación del
oxígeno es rápida y cuantitativa. La acidificación de la muestra a un pH entre 1 y 2.5 disuelve los
precipitados de hidróxido, y los iones yoduro añadidos con los reactivos de fijación son oxidados a
yodo por los iones de manganeso (III) que se reducen a iones de manganeso (II).

2Mn(OH)3+ 21- +6H+  2Mn2+ + I2 + 6H20

El pH no debe exceder de 2.5, ya que a un pH más alto, la oxidación del yodo por el manganeso (III)
puede ser incompleta. Por otro lado, también se debe evitar un exceso de ácido, ya que el tiosulfato
usado para valorar el yodo es un anión débil y se combina con los iones de hidrógeno para formar
el ácido tiosulfúrico inestable, que a su vez se desproporciona en azufre y ácido sulfuroso. o dióxido
de azufre (Grasshog , 1962). El yodo y los iones yoduros en exceso se combinan para dar un complejo
de tres átomos de yodo con una carga negativa, que tiene una presión de vapor de yodo mucho más
baja que el yodo molecular.

I2 + I-  I3-

En el paso final del análisis, el yodo se titula con tiosulfato. El yodo se reduce a yoduro, y el tiosulfato
a su vez se oxida al ion tetrationato. La concentración de la solución de tiosulfato utilizada para la
titulación debe ser conocida con precisión. El punto final de la valoración se indica comúnmente
mediante un indicador de almidón o mediante la detección fotométrica. El indicador de almidón
forma un compuesto cerrado con yodo. La gran nube de electrones del yodo interactúa con los
dipolos del hidroxo en la hélice del almidón, lo que resulta en un color azul intenso del complejo de
almidón de yodo. Sin embargo, las moléculas de yodo pueden dejar la hélice de almidón fácilmente
y, por lo tanto, pueden reducirse por tiosulfato. El punto final de la titulación está claramente
marcado por el cambio de azul a incoloro. La ecuación estequiométrica para la reacción del yodo
con el tiosulfato es:

I3- + 2S2032- < 3I- + S4062-

Si bien el práctico estuvo enfocado en el seguimiento de las reacciones químicas que subyacen
durante el método de Winkler. El muestreo, con todos sus cuidados, no estuvo considerado. En un
contexto real, el analista debe considerar tomar las precauciones necesarias durante todo el
proceso analítico para cuidar la integridad de la muestra y usar equipamiento adecuado en cada
etapa.
En este método minucioso, para lograr buenos resultados incluso es necesario contar con un
analista entrenado en la determinación del punto final de la valoración ya que el verdadero punto
final estequiométrico es un poco después del punto final de almidón, pero este error es apenas
significativo en el trabajo marino. Ademas este punto final puede mostrar errores cuando se están
estimando bajas concentraciones de oxígeno (Knowles & Lowden, Analyst, 1953).
Para la toma de muestras se debe utilizar una botella Niskin y para la fijación de oxigeno una botella
de vidrio Winkler. Esto para evitar interferecnias ya que el uso de otros materiales influye
directamente en la cantidad de ocigeno disuelto, por ejemplo, el almacenamiento de agua de mar
oxigenada en contacto con botellas de muestras de latón provoca una pérdida apreciable del
elemento debido a la oxidación del metal.
Para un trabajo de máxima precisión, la muestra debe ser sifoneada en la botella Niskin de manera
que se minimice la turbulencia y la agitación de la muestra. Las muestras se deben extraer en las
botellas de vidrio Winkler inmediatamente después de tomarlas. El retardo de muestreo nunca debe
exceder los 15 min. Cuando se llenen las botellas, el análisis debe comenzar en menos de 1 hora, ya
que el oxígeno puede perderse cuando las muestras se calientan a temperatura ambiente o por
respiración microbiológica. Además, las muestras se deben almacenar en la oscuridad o en una luz
tenue para minimizar la fotosíntesis por cualquier fitoplancton que pueda estar presente.
Existen otro tipo de interferencias para la valorización, si hay mucho plancton o grasas en el agua.
También nitritos, iones ferrosos o los sólidos en suspensión.

Respecto a la titulación, esta no debe retrasarse y el tiosulfato debe agregarse con bastante rapidez.
Las soluciones deben permanecer incoloras durante al menos 20 segundos en el punto final. Otra
fuente de error, es la volatilización del yodo la cual depende principalmente de la temperatura y no
es grave a temperaturas inferiores o aproximadas a 25 ° C, siempre que las titulaciones sean rápidas.
También se debe tener en cuenta que las soluciones de yoduro alcalino se pueden oxidar con
oxígeno atmosférico, especialmente en presencia de partículas de polvo, o por contacto con botellas
de reactivos hechas de materiales inadecuados que pueden mejorar la oxidación (Carpenter, 1965).

Según los resultados conseguidos tras el uso del método de winkler sin su correcta manipulación se
hallo una concentración de Oxígeno disuelto promedio de 319,725 ± 15,225 µmol/L en la muestra
problema, lo cual denoto una buena condición de esta y por consiguiente el oxígeno disuelto en
esta es adecuado para la vida de ciertas especies.
CONCLUSIÓN

El oxígeno disuelto es responsable de sustentar la vida de las especies acuáticas, los peces al nadar
filtran por su aparato respiratorio el oxígeno, moluscos e invertebrados acuáticos lo necesitan para
respirar, también a nivel bacteriano es de suma importancia ya que sin su presencia muchos de
estos microorganismos que mantienen el equilibrio de estos ecosistemas morirían. Una disminución
drástica de la cantidad de oxígeno disuelto significa una alteración a estos sistemas de vida.

La cantidad de oxígeno disuelto en el agua también nos permite conocer la calidad de la misma,
cuando existe la presencia de contaminantes en el agua, las bacterias presentes en esta tienden a
consumir el oxígeno disuelto, para realizar los procesos metabólicos de degradación de estas
sustancias a otras más simples, por lo tanto, tener noción de este método algo complejo permite
analizar diversas problemáticas de esta índole.

A pesar de que sea un método con muchas etapas y riesgo de muchas interferencias, hay registros
de diversos autores que modifican tales etapas con fin de eliminar dichos errores por lo que de
cierta manera es un método bastante flexible y que otorga una valoración robusta respecto a la
cantidad de oxígeno disuelto en una masa de agua.
BIBLIOGRAFÍA

● Grasshoff, K. K. Kremling & M. Ehrhardt. 1999. Chapter 4: Determination of oxygen.

Methods of Seawater Analysis. Third edition. Wiley-Vch 600 pp.

● Grasshoff, K. (1962), Kieler Meeresforschungen, 18,42.

● Carpenter, J.H. (1965). Limnol. Oceanogr., 10,135.

● Knowles, G., & Lowden, G. F. (1953). Methods for detecting the end-point in the titration of
iodine with thiosulphate. Analyst, 78(924), 159-164.
ANEXO 1: Estandarización de Na2S2O4

Para la estandarización del titulante Na2S2O4 se utilizaron 10 mL de una solución patrón de KIO4
0,0100 N, mientras que se utilizaron 5,0 mL del titulante, la concentración real del titulante se
calcula como:

𝐶1 ∙ 𝑉1 = 𝐶2 ∙ 𝑉2

Con C1 y V1 como la concentración y volumen de la solución patrón de KIO4, y C2 y V2 como la

concentración y volumen del titulante a estandarizar. Con C2 como la incógnita:

10 𝑚𝐿 ∙ 0,0100 𝑁
𝐶1 =
5,0 𝑚𝐿

𝐶1 = 0,0200 𝑁 de Na2S2O4

Se repitió el procedimiento con el segundo y tercer volumen de 5,0 y 4,8; resultando en 0,0200 N y
0,0208 N. Finalmente, se calculó el promedio y desviación estándar de estas concentraciones,
0,0203 N ± 0,0005.

ANEXO 2: Determinación de Oxígeno disuelto

La concentración de oxígeno disuelto se calculó con la concentración molar del titulante,

calculandola para el volumen utilizado:

0,0203 moles 1000 mL

X moles 6,3 mL

0,0203 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 ∙ 6,3 𝑚𝐿

𝑋=
1000 𝑚𝐿

𝑋 = 1,279 𝑥 10−4 moles de Na2S2O4 en 6,3 mL

Este proceso se repitió con el segundo y tercer volumen de 6,6 y 6,0 mL, resultando en 1,340 x 10−4
moles y 1,218 x 10−4 moles respectivamente. Con un promedio y desviación estándar de 1,279 x
10−4 ± 6,090 x 10−6

Ya que 1 mol de O2 es equivalente a 4 moles de Na2S2O4, la cantidad de moles calculada

anteriormente se divide por 4 para obtener los moles de O2.

1,279 𝑥 10−4
𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝑂𝑥í𝑔𝑒𝑛𝑜 =
4

𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝑂𝑥í𝑔𝑒𝑛𝑜 = 3,1972 𝑥10−5

Este valor se multiplica por 10 6 para convertir en micromoles:

 3,1972 𝑥10−5 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝑑𝑒 𝑂𝑥í𝑔𝑒𝑛𝑜 ⋅ 10 6 = 31,9725 µ𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝑑𝑒 𝑂𝑥í𝑔𝑒𝑛𝑜

Esto se divide por el volumen (en libros) de la muestra para obtener la concentración µM:

31,9725 µ𝑚𝑜𝑙
= 319,725 µ𝑚𝑜𝑙/𝐿
0,1 𝐿

Se repite el mismo procedimiento con las demás cantidades de moles obtenidas a partir de los moles
del titulante para conseguir un promedio y desviación estándar de la concentración de oxígeno
disuelto en la muestra: 319,725 ± 15,225 µmol/L.