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Síntesis y maduración del ARN

Transcripción en procariotas

• La principal enzima para la transcripcion es la ARN polimerasa. Cataliza la síntesis de la


cadena de ARN en direccion 5’ - 3’
• No requiere cebador
• Esta compuesta por multiples cadenas polipeptidicas
• La secuencia de ADN a la que se une la ARN polimerasa para la transcripcion de un gen se
denomina promotor
• Secuencia de los promotores -10 y -35
• Sintesis continua hasta que la polimerasa encuentra una señal de terminacion: secuencia GC
y la proteina Rho
• ARNm de bacterias son traducidos mientras son transcriptos

ARN polimerasas en eucariotas y factores de transcripción generales

• Contienen varias ARN polimerasas que transcriben diversas clases de genes


• Interaccionan con un conjunto de proteínas específicas para iniciar la transcripción
• Transcripción sobre la cromatina en lugar de sobre ADN libre
• Regulacion de la estructura de la cromatina es muy importante en la transcripción

ARN polimerasas eucarióticas

• Contienen 3 tipos
• Tipo I: ARNr 5,8S, 18S, 28S
• Tipo II: ARNm, ARNmi, ARNsn
• Tipo III: ARNt, ARNr 5S, ARNsc
• ARN mitocondriales
• ARN Cloroplásticos

Factores de transcripción generales e iniciación de la transcripción por la ARN polimerasa II

• Funcionamiento diferente de la procariota


• Solo es capaz de iniciar la transcripción si se añaden proteínas adicionales a la reacción
( factores de transcripción)
• Los factores de transcripción generales están implicados en la transcripción en todos los
promotores de la polimerasa II y es parte de la maquinaria transcripcional básica
• Los factores específicos son responsables por regular la expresión génica
• Caja TATA es una característica general de los promotores
• Otras son: Inr (elemento iniciador) y elementos promotores corriente abajo como DPE, DCE
y MTE
• Formación del complejo de transcripción: 1) unión del TFIID (TBP y TAF) al promotor 2)
Reclutamiento de TFIIB que se une a TBP 3) TFIIB-TBP une la polimerasa a TFIIF 4)
Reclutamiento de TFIIE y TFIIH
• Dos de las subunidades de TFIIH son helicasas para el deserollamiento del ADN
• La fosforilación del resíduo 5 de serina en CTD por TFIIH induce la liberación de la
polimerasa y da lugar al comienzo de la transcripción
• El complejo mediador asocia los factores generales y basales
Transcripción de las Polimerasas I y III
Regulación de la Transcripción en eucariotas

• El empaquetamiento del ADN eucariótico en cromatina limita su disponibilidad como molde


de transcripción. Proteínas regulan la transcripción en células eucariotas mediante
modificaciones de la estructura cromatínica.

Estructura y Función de los activadores de la transcripción

• Se unen a secuencias reguladoras del ADN y estimulan la transcripción


• Una region de la proteina se una especificamente al adn, la otra interactua con otras
proteinas incluyendo el mediador
• Dominios en dedos de cinc: receptores de hormonas esteroideas (testosterona y estrogenos)
• Helice vuelta helice: proteinas con homeodominios. Importanes en el desarrollo embrionario
• Cremallera de leucina y helice- bucle- helice: importante funcio en la regulacion de la
expresion genica inducible con especificidad tisular

Regulacion de la elongacion

• La ARN polimerasa comienza la transcripción de muchos genes, pero poco despues se


detiene corriente abajo de los promotores. Proseguiran al recibir señales adecuadas.
• Reclutamiento de P-TEFb es el paso regulador principal en el control de la elongacion
• El Myc-c es uno de los factores de transcripción importantes en el cancer humano

Relacion entre la estructura cromatinica y la transcripción

• El ADN de todas las celulas eucariotas se encuentran fuertemente unidas a las histonas
• La unidad estructural basica de la cromatina es el nucleosoma, 147 pares de bases enrolladas
en torno a dos moleculas cada una por las histonas H2A, H2B, H3 y H4. Con una molecula
de H1 unida al ADN
• Los genes transcritos activamente se encuentran en cromatina relativamente descondensada
• Aún permanecen unidos a las histonas y empaquetados en nucleosomas
• El primer tipo de modificacion es la acetilacion de las histonas, correlacionado a las
cromatinas transcripcionalmente activas
• La acetlacion se da em el extremo amino-terminal
• Las histonas tambien se modifican por la metilacion de residuos de lisina y arginina, y la
adicion de peptidos pequenos a los residuos de lisina
• Las modificaciones en las colas de las histonas se regulan entre si.
• La modificacion de las histonas representa un mecanismo de herencia epigenetica – la
transmision de informacion uqe no forma parte de la secuencia del ADN en la division
celular
• Los factores remodeladores de la cromatina son complejos proteicos que aprovechan la
energia generada por hidrolisis de las moleculas de ATP para alterar los contactos del ADN
con las histonas
• Factores de elongacion se asocian al dominio c-terminal fosforilado de la polimerasa II
cuando comienza la elongacion productiva y factores remodeladores de la cromatina que
desplzan temporalmente a los nucleosomas en el transcurso de la transcripcion.

Regulacion de la transcripcion por ARN no codificantes

• Son moleculas pequenas de ARNsi y ARNmi.


• Inhiben a la traduccion o la degradacion del ARNm homologo por medio de la interferencia
del ARN y la regulacion genica
• Los ARNsi y los ARN no codificantes largos pueden regular la expresion genica a nivel de
la transcripcion
• Los ARNsi provocan la condensacion de la cromatina y la formacion de la heterocromatina
• Los ARNsi se asocian con un complejo proteico denominado complejo silenciador de la
transcripcion inducido por ARN (RITS)
• El complejo RITS inducen la condensacion de la cromatina y la metilacion de la lisina-9 en
la histona H3
• El fenomeno de la inactivacion del cromosoma X en las hembras es un ejemplo bien
estudiado de la regulacion genica por el ARN no codificante largo. Esto se debe a u
mecanismo de compensacion de dosis por el que inactiva la mayoria de los genes de uno de
los cromosomas X por su conversion en heterocromatina durante el desarrollo.
Metilacion del ADN

• Los residuos de citosina en el ADN pueden ser modificados por la adicion de grupos metilo
en la posicion del carbono-5

• El ADN es metilado especificamente en las citosinas que preceden a guaninas en la cadena


• La metilacion juega un papel clave en la movimientacion de transposones a lo largo del
genoma y en la suprecion transcripcional de algunos genes
• Los patrones de metilacion se mantienen de forma estable tras la replicacion del ADN. En
consecuencia un gen metilado y reprimido en una celula parental continuara estandolo en las
celulas hijas.
• Un papel regulador importante de la
metilacion es la impresion
genomica cuya expresion dependen
si se heredan de la madre o del
padre
Maduracion y Renovacion del ADN

• Los transcriptos primarios de los ARNm eucarioticos son sometidos a grandes


modificaciones, incluyendo la eliminacion de intrones por corte y empalmado, antes de ser
transportados desde el nucleo al citoplasma para servir de moldes en la sintesis de proteinas.
• El ARN maduro esta listo para ser usado

Maduracion de los ARN ribosomicos y de transferencia

• Similar en procariotas y eucariotas


• El ARNr 5S se transcribe a partir de un gen distinto
• Además del corte, en la maduracion tiene lugar la adicion de grupos metilo a las bases y
residuos de azucares de nucleotidos especificos y la conversion de uridinas en
pseudouridinas
• La maduracion del ARNr tiene lugar en el interior del nucleolo eucariotas
• Los ARNt son sintetizados como grandes moleculas precursoras (pre-ARNt)
• ARNasa P es una ribozina, o sea, el componente
catalitico esta formado por ARN en vez de proteinas
• Todos los ARNt poseen la secuencia CCA en su
extremo 3’
• Esta secuencia es el sitio de union de los
aminoacidos
• Aprox. 10% de los pares de bases son modificadas
durante la maduracion
• Algunos preARNt poseen intrones que son
eliminados por cortes y empalme (splicing)