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MANUAL DE
HEMATOLOGÍA I
UNIVERSIDAD UNIDAD ACADÉMICA
AUTÓNOMA MULTIDISCIPLINARIA
DE SAN LUIS POTOSÍ ZONA HUASTECA

LICENCIATURA
EN
QUÍMICA CLÍNICA

V SEMESTRE

Profesor:
_____________________________________________________________

Nombre del alumno:


_________________________________

Elaborado por: Dra. Liseth Rubí Aldaba Muruato

Dr. José Roberto Macías Pérez


UNIDAD ACADÉMICA Manual de Prácticas
MULTIDISCIPLINARIA
ZONA HUASTECA Laboratorio de Hematología I
Q

ÍNDICE

I. OBJETIVO GENERAL ......................................................................................................................... 2

II. LINEAMIENTOS DEL LABORATORIO ......................................................................................... 2

III. LINEAMIENTOS DE TRABAJO EN LAS PRÁCTICAS DE HEMATOLOGÍA I ...................... 4

IV. CRITERIOS DE EVALUACIÓN ...................................................................................................... 5

V. CARACTERÍSTICAS DEL REPORTE .............................................................................................. 6

VI. RUBRICA DE EVALUACIÓN .......................................................................................................... 8

VII. PRÁCTICAS ...................................................................................................................................... 9

PRÁCTICA 1. BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA. .............................. 9


PRÁCTICA 2. RECUENTO DE GLÓBULOS ROJOS. ........................................................................... 17
PRÁCTICA 3. DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA. .................................................................. 23
PRÁCTICA 4. DETERMINACIÓN DE HEMATOCRITO.................................................................... 28
PRÁCTICA 5. EXTENDIDO DE SANGRE PERIFÉRICA..................................................................... 34
PRÁCTICA 6. CUANTIFICACIÓN DE GLÓBULOS BLANCOS. ...................................................... 40
PRÁCTICA 7. DIFERENCIACIÓN DE LA SERIE BLANCA. .............................................................. 49
PRÁCTICA 8. ALTERACIONES ERITROCITARIAS. .......................................................................... 54
PRÁCTICA 9. CLASIFICACIÓN DE LAS ANEMIAS. ......................................................................... 60

VIII. REFERENCIAS .............................................................................................................................. 65

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I. OBJETIVO GENERAL
Aplicar en el campo clínico los conocimientos teóricos de la clase de Hematología I,
explorando técnicas de laboratorio que permiten diagnosticar las enfermedades de la
sangre.

II. LINEAMIENTOS DEL LABORATORIO


En el laboratorio es obligatorio:
1. Usar, adecuadamente, el Equipo de Protección Personal (EPP) para realizar las
prácticas de Hematología I; esto incluye: bata blanca de algodón de manga larga,
una o dos tallas más grande de la utilizada normalmente en la ropa; zapato
cerrado, de piso, con suela antiderrapante (zapato ocupacional con tacón de 2 a 5
cm). En los casos que así amerite, se indicará y deberán utilizarse lentes de
seguridad, cubrebocas y guantes o el equipo de protección personal que minimice
la exposición a riesgos.
2. Lavarse, adecuadamente, las manos antes y después del trabajo en el laboratorio.
3. Presentarse con las uñas recortadas y libres de pintura, cabello corto o recogido.
Está prohibido el uso de accesorios personales que puedan comprender riesgos de
accidentes mecánicos, químicos o por fuego, como son anillos, pulseras, collares y
sombreros. Nunca deben llevarse lentes de contacto sin gafas protectoras, pues
éstos retienen las sustancias corrosivas en el ojo impidiendo su lavado y
extendiendo el daño.
4. Deben conocerse el sitio específico de los ELEMENTOS DE SEGURIDAD
(lavaojos, ducha, extintor, salidas de emergencia, etc.) en el laboratorio, así como
todas las indicaciones sobre seguridad expuestas en el laboratorio.
5. Mantener limpia el área de trabajo y material que se utilice.
6. Si utiliza equipos, materiales o sustancias de uso delicado, es responsabilidad del
usuario leer manuales, HDS (Hojas de Seguridad) o consultar sobre su
funcionamiento.

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7. Respetar las bitácoras, los cronogramas de actividades y los registros de uso de los
aparatos. En caso de no existir dicha bitácora, informárselo al docente a cargo.
8. Notificar cualquier desperfecto del equipo e informar al responsable del
laboratorio cuando los reactivos están por terminarse.
9. Todo el material deberá ser lavado con jabón enzimático, posteriormente deberá
enjuagarse con abundante agua destilada.
10. Etiquete las muestras, reactivos y soluciones adecuadamente, indicando la
siguiente información:
a. Muestras: Nombre del responsable, Fecha, Origen y detalle del contenido
de la muestra.
b. Soluciones: Nombre del responsable, Fecha, Nombre de la solución,
indicando los componentes y la concentración.
c. Reactivos: Fecha en que se recibió y fecha de apertura.
11. En caso de que pierda la etiqueta original, rotular el reactivo. Cuidar los reactivos
y trabajar con alícuotas independientes.
12. Muchos de los reactivos que se emplean son sensibles a la luz o temperatura y
peligrosos para la salud humana (mutagénicos o carcinogénicos), por lo que se
debe estudiar las fichas de seguridad donde se señalan las propiedades químicas,
físicas y toxicológicas de los mismos, así como su manejo y los riesgos para la
salud.
13. Mantener en buen estado los reactivos, soluciones y los espacios de trabajo
asignados.
14. Es responsabilidad de cada uno de los usuarios el disponer adecuadamente de los
desechos, en los contenedores específicos para ello, en base a la NORMA Oficial
Mexicana NOM-087-ECOLSSA1-2002, Protección ambiental - Salud ambiental -
Residuos peligrosos biológico-infecciosos (RPBI) - Clasificación y especificaciones
de manejo, ver tabla 1. La basura general no deberá contener RPBI [1]. Además de

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la NMX-R-019-SCFI-2011 Donde se específica el almacenamiento de productos
químicos, desecho y transporte.

Está prohibido:
1. Sacar del laboratorio, muestras, equipo y materiales (únicamente podrán salir con
autorización del responsable del laboratorio).
2. El acceso a personas no autorizadas.
3. Comer, fumar e ingerir bebidas dentro del laboratorio.
4. Utilizar artículos personales, (celulares, computadoras, etc.) cuando se estén
utilizando guantes.
5. Pipetear cualquier sustancia usando la boca.
El trabajo operativo en el laboratorio implica costos, tanto en tiempo como en
recursos, por lo que en caso de duda contactar a la persona responsable del laboratorio.
La responsabilidad por las consecuencias de no cumplir los lineamientos arriba
mencionados dentro del laboratorio es enteramente del estudiante.

III. LINEAMIENTOS DE TRABAJO EN LAS PRÁCTICAS DE HEMATOLOGÍA I


1. Habrá una tolerancia máxima de 10 minutos para el ingreso, después de
la cual no se permite la entrada al laboratorio y por lo tanto no podrá
presentar reporte de práctica.
2. La asistencia a las prácticas es obligatoria; abandonar el laboratorio sin
autorización se considera inasistencia.
3. El cuidado de instalaciones y material es responsabilidad de todos;
deberá reponerse si se daña.
4. El uso de equipos electrónicos como celulares, tablets, laptops, etc, está
restringido a menos que el instructor indique lo contrario para fines
didácticos.

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5. El trabajo práctico se realizará en equipos según los asigne el maestro
cuyos integrantes rotarán en cada evaluación parcial.
6. Este manual está diseñado para que durante la práctica se pueda ir
tomando nota de los procedimientos y de los resultados obtenidos, por
lo tanto, es requisito que cada alumno se presente a las sesiones prácticas
con su manual impreso y engargolado.
7. Los reportes se anexarán al final de cada práctica contenida en el manual.
El reporte seguirá las especificaciones que se detallan en la sección V, y
se evaluará como se especifica en la sección VI.

IV. CRITERIOS DE EVALUACIÓN


El laboratorio de Hematología I forma parte del curso teórico. La parte teórica
constituirá un 60% de la calificación total, completándose ésta con un 40%
correspondiente al laboratorio. Es necesario aprobar las dos partes, con mínimo de 6
(seis), para que éstas puedan ser integradas. La calificación mínima aprobatoria es de
6 (seis), con base diez, adicionando las calificaciones obtenidas en ambas partes.

El laboratorio será evaluando con diferentes parámetros:


1. Asistencia al laboratorio, comportamiento, disciplina y participación durante el
desarrollo experimental tendrá un valor del 5%.

2. Los reportes tendrán un valor final del 95% y deberán entregarse en la siguiente
sesión. No se aceptarán los reportes de una práctica a la cual no se haya asistido,
ni fuera de la fecha indicada.

3. No se aceptarán reportes en que los resultados, discusiones y conclusiones sean


bajados textualmente de software o de internet. En caso de que dos o más reportes
sean iguales o muy similares se anularán y su calificación es cero. La presentación

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de los reportes deberá ser en hoja blanca, pueden ser recicladas y engrapadas. El
reporte que no sea entregado será tomado con un valor de cero para ser
promediado con los demás reportes.

V. CARACTERÍSTICAS DEL REPORTE


El reporte constará de dos partes (Tabla I), la primera consiste en elaborar un
reporte con formato de reseña de investigación, cumpliendo con las especificaciones
descritas en la tabla; y la parte II consiste en el diseño personal de un informe de
resultados de laboratorio clínico, el cual se anexará al final de la Parte I. El reporte será
evaluado como se describe en el apartado VI, rúbrica de evaluación (Tabla II),
cumpliendo las especificaciones de la tabla I y que estará anexada al final de cada
práctica.
Tabla I. Características del reporte.
Parte I
Título de la Unidad.
Nombre completo del alumno o de los alumnos.
Portada
Institución, centro, departamento, con dirección postal.
Fecha.
El resumen debe ser una descripción breve (máximo 200
palabras), que proporcione información clara del tema de la
Resumen práctica que permita plantear el objetivo del trabajo, las
técnicas usadas, los resultados obtenidos, y la conclusión a la
que se llegó.
Palabras claves 3 palabras claves
Obtenida por parte del alumno, indicando en forma breve
antecedentes teóricos y prácticos, así como indicar la
Introducción
importancia o propósito de los estudios realizados en la
práctica de laboratorio.
Realizar una redacción de tipo científico de la metodología
empleada, debe contener la suficiente información para que
cualquier lector sea capaz de repetir los experimentos, pero si
Materiales y
son técnicas descritas en detalle en otras publicaciones
métodos
científicas no necesita detallar la técnica y solamente se
reporta la fuente bibliográfica. Si se realiza algún análisis
estadístico es necesario describirlo.

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Descripción clara de los resultados, y enseguida ir
acompañados de la tablas, gráficas, imágenes, esquemas, etc.,
Resultados Las tablas deberán llevar encabezados y las figuras, gráficas e
imágenes deben llevar pies de figuras, estos deben ir
enumerados y acompañados por una breve descripción.
Análisis profundo de los resultados obtenidos y hacer la
comparación con los reportados en la literatura. Incluir
Discusión de
referencias bibliográficas que discutan los resultados
resultados
obtenidos, así como las respuestas del apartado de
Cuestionario que viene incluida en cada práctica.
Conclusión Extracción de los puntos concluyentes de la discusión.
Reporta las referencias utilizando el formato "APA". Debe
incluir diferentes referencias bibliográficas que sean de
fuentes confiables como Pubmed libros formalmente
publicados y artículos de revistas arbitrada, no se aceptará
Referencias
referencia como: los siguientes sitios: Wikipedia, Rincón del
Vago, Monografías, Buenas tareas, Buenos ensayos,
Slideshare, Scribd o Blogs sin referencias por menciona
algunos ejemplos.
Parte II
Nombre del laboratorio
Información personal del paciente, incluida la información
clínica que el laboratorio haya recibido del solicitante
Información del solicitante
Datos en el Lista de análisis realizados
informe del Fecha de la recolección de la muestra primaria
laboratorio de Tipo de muestra primaria
análisis clínico: Comentarios sobre la calidad de la muestra (ya sea suficiente
para los análisis realizados o insuficiente, que pudiera influir
en la fiabilidad de los resultados)
Resultados de los análisis
Intervalos de referencia biológicos/valores de decisión,
incluyendo los intervalos de “alerta/crítico” para todos los
análisis realizados, con comentarios interpretativos sobre los
resultados, si proceden
Interpretación de los resultados, si procede
Una casilla que se pueda marcar cuando se requiera
notificación inmediata
Información del miembro del personal del laboratorio que
revise los resultados y autorice la emisión del informe
Fecha y hora de la emisión del informe

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VI. RUBRICA DE EVALUACIÓN

TABLA II. RÚBRICA DE REVISIÓN DEL REPORTE


Parte I
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Resumen Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 3 1 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Introducción Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
15 10 5 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Materiales y Presentación y ortografía deficiente en
Presentación y Presentación y
métodos adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 3 1 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Resultados Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
15 10 5 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Discusión de Presentación y ortografía deficiente en
Presentación y Presentación y
resultados adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
25 20 10 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Conclusión Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 10 5 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Bibliografía Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 3 1 0
Parte II
Informe de Carece de algún
Cumple lo requerido Deficiente No entregado
resultados de aspecto requerido
laboratorio 20 10 5 0
Asistió
Asistencia y Regular Deficiente pero no
Buen desempeño 5 3 1 0
participación desempeño desempeño particip
ó

CALIFICACIÓN

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VII. PRÁCTICAS

PRÁCTICA 1. BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA.

1.1. Objetivo
El alumno como parte del personal de un laboratorio clínico, será capaz de
comprender y utilizar las técnicas, equipamientos y medidas preventivas que
permitan reducir o eliminar los riesgos a la exposición de agentes potencialmente
infecciosos o considerados de riesgo biológico.

1.2. Desarrollo

1.2.1. Introducción a la Bioseguridad en el Laboratorio de Hematología.

La bioseguridad en el laboratorio clínico se define entonces, como un conjunto de


medidas encaminadas a proteger a los trabajadores y los pacientes de la exposición a
riesgos biológicos, así como también la protección del ambiente. Compromete también
a todas aquellas otras personas que se encuentran en la institución [2].

1.2.1.1. Manejo de muestras sanguíneas.


La OMS en el manual de Bioseguridad en el laboratorio, describe que en
el manejo de muestras sanguíneas se deben considerar los siguientes
apartados:
1. Sólo se realizará este trabajo por personal de laboratorio debidamente
capacitado.
2. Usar guantes y equipo protector de ojos y mucosas.
3. Sólo una buena técnica permite evitar o reducir al mínimo las
salpicaduras. La sangre y el suero se deben pipetear con cuidado en
lugar de verterlos. El pipeteo con la boca estará prohibido.
4. Una vez usadas, las pipetas se sumergirán por completo en un
desinfectante apropiado y permanecerán en él durante un tiempo
suficiente, hasta que se eliminen o se laven y esterilicen para volverlas
a utilizar.
5. Los tubos de ensayo que se desea eliminar y que contienen coágulos
de sangre u otros materiales se colocarán, nuevamente con sus tapas,
en recipientes impermeables apropiados que se tratarán y esterilizarán
en la autoclave o se incinerarán.
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6. Habrá que disponer de desinfectantes apropiados para limpiar las
salpicaduras y los derrames de material.
7. Las precauciones normalizadas (que incluyen las «precauciones
universales» [3] están concebidas para reducir el riesgo de transmisión
de microorganismos de fuentes de infección tanto reconocidas como
no reconocidas [4].

1.2.1.2. Recogida, etiquetado y transporte de muestras.


1. Se seguirán siempre las precauciones normalizadas ([4]); se usarán
guantes en todos los procedimientos.
2. La toma de sangre de personas y animales estará a cargo de personal
capacitado.
3. En las flebotomías, los sistemas convencionales de aguja y jeringuilla
se sustituirán por dispositivos de seguridad al vacío de un solo uso
que permitan recoger la sangre directamente en tubos de transporte o
de cultivo con tapón y que inutilicen la aguja después del uso.
4. Los tubos se colocarán en recipientes apropiados para el transporte al
laboratorio [5] y dentro del laboratorio. Los formularios de petición de
examen se colocarán en bolsas o sobres impermeables separados.
5. El personal de recepción no debe abrir estas bolsas.

1.2.1.3. Vidrio y objetos punzantes y cortantes


1. Siempre que sea posible, se sustituirá el material de vidrio por material
de plástico. Sólo se utilizará vidrio duro especial para laboratorio
(vidrio de borosilicato: marcas comerciales Kimax, Pyrex, etc.); se
desechará todo artículo que esté astillado o agrietado.
2. No se utilizarán agujas hipodérmicas para pipetear.

1.2.1.4. Extensiones para el examen microscópico


La fijación y tinción de muestras de sangre, esputo y heces para el
microscopio no destruye necesariamente todos los organismos o los virus
de las extensiones. Éstas deben manipularse con pinzas, almacenarse
cuidadosamente y descontaminarse o tratarse en autoclave antes de
eliminarlas.

1.2.1.5. Equipo automático (desintegradores ultrasónicos, mezcladores


verticales)

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1. El equipo debe ser cerrado para evitar la dispersión de gotitas y
aerosoles.
2. Los efluentes se recogerán en recipientes cerrados y se tratarán en la
autoclave o se eliminarán.
3. El equipo se desinfectará al final de cada sesión de trabajo, siguiendo
las instrucciones del fabricante.

1.2.1.6. Descontaminación
El tratamiento en autoclave de vapor constituye el método de elección
para todos los procesos de descontaminación. El material destinado a la
descontaminación y eliminación debe introducirse en recipientes (por
ejemplo, en bolsas de plástico resistentes al tratamiento en autoclave) que
tengan un código de color para indicar si el contenido ha de pasar a la
autoclave o a la incineración. Deben observarse las normas nacionales de
seguridad de las sustancias químicas.

1.2.1.6.1. Procedimientos de manipulación y eliminación de material y


desechos contaminados
Deberá adoptarse un sistema de identificación y separación del
material infeccioso y sus recipientes. Se seguirán las normas
nacionales e internacionales y se tendrán en cuenta las
siguientes categorías:
I. Desechos no contaminados (no infecciosos) que puedan
reutilizarse o reciclarse o eliminarse como si fueran «basura» en
general.
II. Objetos cortantes y punzantes contaminados (infecciosos):
agujas hipodérmicas, bisturís, cuchillas, vidrio roto; se
recogerán siempre en recipientes a prueba de perforación
dotados de tapaderas y serán tratados como material
infeccioso. Las agujas hipodérmicas no se deben volver a tapar,
cortar ni retirar de las jeringuillas desechables después de
utilizarlas. El conjunto completo debe colocarse en un
recipiente de eliminación específico. Las jeringuillas
desechables, utilizadas con o sin aguja, se introducirán en
recipientes de eliminación apropiados y se incinerarán,
esterilizándolas previamente en autoclave si fuera necesario.
Los recipientes de eliminación de objetos cortantes y punzantes

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serán resistentes a la perforación y no se llenarán por completo.
Cuando estén llenos en sus tres cuartas partes se colocarán en
un recipiente de «desechos infecciosos» y se incinerarán,
esterilizándolos primero en autoclave si la práctica del
laboratorio lo exige. Los recipientes de eliminación de objetos
cortantes y punzantes no se desecharán en vertederos.
III. Material contaminado destinado al tratamiento en autoclave
que después pueda lavarse y volverse a utilizar o reciclarse.
IV. Material contaminado destinado al tratamiento en autoclave y
a la eliminación.
V. Material contaminado destinado a la incineración directa.

1.2.1.6.2. Descontaminación de superficies.


Para la descontaminación de superficies se recomiendan
hipocloritos y desinfectantes de alto nivel. Las soluciones de
hipoclorito recién preparadas contendrán cloro disponible a
razón de 1 g/L para uso general, y de 5 g/L para limpiar
derrames de sangre.

1.2.1.7. Rotura de recipientes y derrames de sustancias infecciosas


Los recipientes rotos contaminados con sustancias infecciosas y las
sustancias infecciosas derramadas se cubrirán con paños o papel
absorbente. A continuación, se verterá sobre éstos un desinfectante que
se dejará actuar durante tiempo suficiente, y después podrá retirarse el
paño o el papel absorbente junto con el material roto; los fragmentos de
vidrio deberán ser manipulados con pinzas. Después se fregará la zona
contaminada con un desinfectante. Si se utilizan recogedores de polvo
para retirar el material roto, después habrá que tratarlos en la autoclave
o sumergirlos en un desinfectante eficaz. Los paños, el papel absorbente
y las bayetas utilizados para la limpieza se colocarán en un recipiente
para residuos contaminados. Habrá que utilizar guantes en todas estas
operaciones. Si se contaminan los formularios del laboratorio u otros
papeles manuscritos o impresos, se copiará la información en otro
formulario y se tirará el original en un recipiente para residuos
contaminados.

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1.2.1.8. Rotura de tubos con material potencialmente infeccioso en
centrifugadoras carentes de cestillos de seguridad.
Informar al encargado de bioseguridad en el laboratorio. En todas las
operaciones habrá que utilizar guantes fuertes (por ejemplo, de goma
gruesa), cubiertos en caso necesario con guantes desechables
apropiados. Para recoger los trozos de vidrio se utilizarán pinzas o
algodón manipulado con pinzas. Todos los tubos rotos, fragmentos de
vidrio, cestillos, soportes y el rotor se sumergirán en un desinfectante
no corrosivo de eficacia conocida contra los microorganismos de que se
trate. Los tubos intactos, con sus correspondientes tapones, pueden
introducirse en desinfectante en un recipiente aparte para recuperarlos.
La cubeta de la centrifugadora se limpiará con una bayeta empapada
en el mismo desinfectante a la dilución apropiada; se repetirá la
operación y después se lavará con agua y se secará. Todo el material de
limpieza utilizado se tratará como si fuera material de desecho
infectado.

1.2.1.9. Rotura de tubos dentro de los cestillos de cierre hermético (cestillos


de seguridad)
Todos los cestillos de centrifugadora de cierre hermético se cargarán y
descargarán en una CSB. Si se sospecha que se ha producido una rotura
dentro del cestillo de seguridad, la tapa de seguridad se soltará
cuidadosamente y se tratará el cestillo en la autoclave. También se
podrá desinfectar con agentes químicos.

1.2.1.10. Pinchazos
Pinchazos o lastimaduras; contacto directo con mucosas Los pinchazos,
heridas punzantes, lastimaduras y piel (se incluye acá mucosas)
contaminada por salpicadura de materiales infectados deberán ser
lavados con abundante agua y jabón. Se deberá favorecer el sangrado
de la herida.

1.2.1.11. Eliminación y manejo de desechos


La eliminación de los desechos médicos y de laboratorio está sometida
a varias reglamentaciones regionales, nacionales e internacionales.
Deben consultarse las últimas versiones de los documentos pertinentes
antes de diseñar y poner en práctica un programa de manipulación,

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transporte y eliminación final de desechos biológicos peligrosos. En
general, las cenizas procedentes de los incineradores pueden tratarse
igual que las basuras domésticas corrientes y ser evacuadas por los
servicios locales. Los desechos de la autoclave pueden ser eliminados
en vertederos autorizados o por incineración fuera del laboratorio [6-8].
Mientras que los RPBI, deben manejarse de la siguiente manera dentro
del laboratorio (Tabla III):

TABLA III. MANEJO DE RPBI [1].


TIPO DE ESTADO ENVASADO COLOR
RESIDUOS FISICO
Sangre Líquidos Recipientes Rojo
herméticos
Cultivos y cepas de Sólidos Bolsas de polietileno Rojo
agentes infecciosos
Patológicos Sólidos Bolsas de polietileno Amarillo
Líquidos Recipientes Amarillo
herméticos
Residuos no anatómicos Sólidos Bolsas de polietileno Rojo
Líquidos Recipientes Rojo
herméticos
Objetos punzocortantes Sólidos Recipientes rígidos Rojo
polipropileno

Las bolsas deberán ser de polietileno de color rojo traslúcido de calibre


mínimo 200 y de color amarillo traslúcido de calibre mínimo 300,
impermeables y con un contenido de metales pesados de no más de una
parte por millón y libres de cloro, además deberán estar marcadas con
el símbolo universal de riesgo biológico y la leyenda Residuos
Peligrosos Biológico-Infecciosos. Las bolsas se llenarán al 80 por ciento
(80%) de su capacidad, cerrándose antes de ser transportadas al sitio de
almacenamiento temporal y no podrán ser abiertas o vaciadas.

La Secretaria de Salud proporciona una guía sencilla para el personal de salud


de primer y segundo nivel de atención involucrado con
el manejo de RPBI, de acuerdo con los cambios que incorpora

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la norma NOM-087-ECOL-SSA1-2002 sobre manejo
de estos residuos, la cual sustituye a la NOM-087-
ECOL-1995 [9].

1.3. Resultados

Describir sus observaciones.

1.4. Cuestionario
I. ¿En qué nivel de bioseguridad y riesgo se clasifica el laboratorio de
hematología?

II. La Organización Mundial de la Salud, define los materiales y operaciones que


se consideran peligrosos en el laboratorio clínico, descríbelos.

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RÚBRICA DE REVISIÓN DEL REPORTE


PRÁCTICA 1. BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA
Parte I
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Resumen Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 3 1 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Introducción Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
15 10 5 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Materiales y Presentación y ortografía deficiente en
Presentación y Presentación y
métodos adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 3 1 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Resultados Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
15 10 5 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Discusión de Presentación y ortografía deficiente en
Presentación y Presentación y
resultados adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
25 20 10 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Conclusión Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 10 5 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Bibliografía Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 3 1 0
Parte II
Informe de Carece de algún
Cumple lo requerido Deficiente No entregado
resultados de aspecto requerido
laboratorio 20 10 5 0
Asistió
Asistencia y Regular Deficiente pero no
Buen desempeño 5 3 1 0
participación desempeño desempeño particip
ó

CALIFICACIÓN

16
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PRÁCTICA 2. RECUENTO DE GLÓBULOS ROJOS.

2.1. Objetivo
El alumno será capaz de utilizar la técnica de Recuento de Eritrocitos para determinar
el número de glóbulos rojos presentes en una persona, como herramienta para evaluar
la cantidad de oxígeno que es transportado por los eritrocitos a los tejidos corporales,
así como realizar un diagnostico presuntivo que sirva de ayuda al médico tratante para
localizar la causa probable en alguna enfermedad de tipo hematológico.

2.2. Material biológico


 Sangre venosa procedente de una punción venosa y tratada con anticoagulante
EDTA

2.3. Material por equipo de trabajo


 Equipo para venopuncion (Tubo lila)
 1 Cámara de recuento de Neubauer
 Cubreobjetos
 1 Pipetas especiales de Thoma para glóbulos rojos con manguera y boquilla.
 1 Microscopio
 Tubo de vidrio 12 x 75
 Papel parafilm
 1 gasa

2.4. Reactivos y soluciones


 Solución diluyente para la sangre Hayem: 2.5 g de sulfato sódico, 0.5 g de cloruro
sódico, 0.25 g de cloruro mercúrico, 100 mL de agua destilada, filtrar).

Nota: Los diluyentes más utilizados en el recuento de glóbulos rojos son el Líquido de Hayem,
las Soluciones de Gower, de Dacie o bien simplemente solución salina de cloruro de sodio al
0.9%

2.5. Desarrollo

Proceder de la siguiente manera [10]:


1. Obtener sangre total siguiendo el protocolo ya conocido.
2. Con la boquilla y la Pipeta de Thoma para glóbulos rojos aspirar sangre hasta
la marca 0.5 (evitar formación de burbujas).

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A) Tubo capilar corto


B) Boquilla
Perla
mezcladora
Marca 101

Punta Bulbo

Marca 0.5
Tubo capilar largo

Figura 1. Pipeta de Thoma para glóbulos rojos (A); Pipita de Thoma para glóbulos
rojos con manguera de látex de 11 cm de largo y con boquilla (B). Presenta cerca del
extremo superior (tubo capilar corto) una marca de 101, inmediatamente continúa una
dilatación (bulbo) que contiene una perla roja mezcladora, luego sigue el tallo (tubo
capilar largo), el cual puede estar dividido en 10 partes y/o con 2 marcas: 0,5 a la mitad
del bubo capilar largo y 1 acabando el tubo capilar largo.

3. Limpiar cuidadosamente con una gasa el exterior de la pipeta con un algodón


y sin hacer bajar el nivel de sangre.
4. Aspirar diluyente Hayem hasta la marca 101 de la pipeta.
5. Desmontar con cuidado la manguera y poner parafilm en cada extremo de la
pipeta, enseguida homogeneizar el contenido de la pipeta en un rotador
automático o rotar manualmente en sentido horizontal durante 3 minutos.
6. Desechar en un tubo de vidrio las 3 primeras gotas de la pipeta de Thoma.
7. Colocar el cubreobjetos sobre la cámara de Neubauer [11]y llenarla, tratando
que fluya libremente por difusión el líquido Esto se realiza ubicándola punta
en uno de los bordes no adheridos del cubre y dejando que el líquido penetre
por capilaridad, en el espacio existente entre ambas estructuras, evitando llenar
en exceso o que se formen burbujas.

Figura 2. Cámara de Neubauer.

18
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8. Reposar durante 3 minutos dentro de una cámara húmeda con el fin de que los
eritrocitos sedimenten.
9. Localizar la cuadricula de la cámara de Neubauer con el objetivo seco débil
(10X) y verificar que la distribución de los hematíes sea homogénea; enseguida
enfocar con seco fuerte (40X),
10. Realizar el recuento en los cuadros más pequeños de la cámara, contando los
hematíes localizados en los 4 cuadros de los extremos y en el del centro,
haciendo un total de 5 cuadros, seguir el orden que aparece en la Figura 3A.

A) B) C)

1 2

1 mm 5

4 3

Figura 3. Cuadrados de la cámara de Neubauer. Cuadrantes marcados en rojo son los


usados para cuantificar los glóbulos rojos (A); orden que se debe seguir a la hora de
observar los cuadrados pequeños “zig-zag” (B); Visualización de los hematíes
contenidos en un cuadrado pequeño (C). Para evitar contar repetidamente los mismos
hematíes, sólo se cuentan los que están contenidos dentro del cuadrado y los que están
en contacto con sus líneas de demarcación superior y derecho.

2.6. Resultados

I. Anotar el número de eritrocitos contados.


CUADRANTE GLOBULOS ROJOS CONTADOS
1
2
3
4
5
TOTAL

19
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II. Describir y dibujar como se ven los glóbulos rojos a 10X y 40X.

10X OBSERVACIONES

40X OBSERVACIONES

III. Cálculos

20
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RBC = H x 5 x 10 x D

RCB=Recuento de glóbulos rojos (Red Blood Cell Count) sobre mm3 de sangre
H = recuento de hematíes
D = factor de dilución (100 ó 200)

Análisis de fórmula: Como se cuentan los hematíes presentes en 5 cuadrados medianos del cuadrado
grande central, y éste tiene 25 cuadrados medianos, hay que multiplicar por 5 la cifra obtenida en el
recuento, esto es para calcular el número de hematíes que hay en un cuadrado grande. Como la longitud
de cada uno de los lados del cuadrado grande central es de 1 mm, y la longitud del espacio comprendido
entre éste y el cubre es de 0,1 mm, hay que multiplicar por 10 el resultado anterior, para determinar así
el número de hematíes existentes y así obtener el valor en 1 mm3. Como la sangre, previamente al
recuento propiamente dicho, se diluye hay que multiplicar el resultado anterior por 100, si se ha partido
de la sangre entera contenida hasta el enrase de 1, o por 200, si se ha partido de la sangre entera
contenida hasta el enrase de 0,5 (para calcular las diluciones realizadas, no se tiene en cuenta el líquido
contenido en el tubo capilar largo de la pipeta diluidora, pues se considera que éste no se mezcla con el
resto a nivel del bulbo).

2.7. Cuestionario

8. ¿Cuál es el fundamento de la solución diluyente usada?


9. ¿En qué unidades se debe reportar el RBC?
10. ¿Cuáles son los posibles errores en esta técnica?
11. ¿Cuáles son los valores normales en hombres, mujeres y niños?
12. Un valor anormalmente alto de hematíes que significado clínico tiene.
13. En un paciente con anemia sus niveles eritrositarios son________________.
14. Si no se cuenta con una cámara de Neubauer ¿Que otro tipo de cámara se puede
usar y cómo?
15. Mediante una rigurosa investigación bibliográfica elabora el formato de un
reporte de laboratorio que incluya tus resultados.

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RÚBRICA DE REVISIÓN DEL REPORTE
PRÁCTICA 2. RECUENTO DE GLÓBULOS ROJOS
Parte I
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Resumen Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 3 1 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Introducción Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
15 10 5 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Materiales y Presentación y ortografía deficiente en
Presentación y Presentación y
métodos adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 3 1 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Resultados Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
15 10 5 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Discusión de Presentación y ortografía deficiente en
Presentación y Presentación y
resultados adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
25 20 10 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Conclusión Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 10 5 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Bibliografía Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 3 1 0
Parte II
Informe de Carece de algún
Cumple lo requerido Deficiente No entregado
resultados de aspecto requerido
laboratorio 20 10 5 0
Asistió
Asistencia y Regular Deficiente pero no
Buen desempeño 5 3 1 0
participación desempeño desempeño particip
ó

CALIFICACIÓN

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PRÁCTICA 3. DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA.

3.1. Objetivo
El alumno al término de la práctica será capaz de determinar lo gramos de
Hemoglobina (Hb) en sangre, como una herramienta para diagnosticar alguna
patólogía relacionada al valor anormal de este parámetro.

3.2. Material biológico


 Sangre venosa procedente de una punción venosa y tratada con anticoagulante
EDTA

3.3. Material por equipo de trabajo


 Equipo para venopuncion (Tubo lila)
 1 gradilla
 2 tubos de ensaye de 13 X 100 mm
 1 Pipeta de Sahli o micropipetas
 1 Espectrofotómetro
 1 Celda analítica
 1pipetas de 5 mL
 1 Gasa
 1 Plumón sharpie para marcar los tubos de ensaye
 Papel parafilm

3.4. Reactivos y soluciones


 Reactivo diluyente de Drabkin: (Drabkin, modificado por Van Kampen y Zijlstra
(VKZ) [12]
 K3 Fe (CN)6 (RA)_______________________ 200 mg
 KCN (RA) ____________________________ 50 mg
 KH2 PO4 (RA) _________________________ 140 mg
 Sterox SE (Harleco)____________________ 0.5 ml
 H2O destilada (hasta)___________________ 1000 ml
 pH 7.2
 Patrón de Hemoglobina 15 g/dL

3.5. Desarrollo

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Proceder de la siguiente manera [13]:

1. Utilizar el equipo de flebotomía necesario para obtener sangre venosa con


EDTA.
2. Rotular con el plumón sharpie 3 tubos de ensayo, uno como Blanco (B), otro
como Patrón (P) y el otro como Muestra (M).
3. Proceder a dispensar las soluciones como se describe en la Tabla IV:

TABLA IV. PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACIÓN DE


HEMOGLOBINA.
B P M
Reactivo de Drabkin (mL) 5 5 5
Patrón Hemoglobina (µL) ----- 20 -----
*Sangre (µL) ----- ----- 20
* Antes de pipetear, ver apartado de procesamiento de la sangre.

*Procesamiento importante para la muestra de sangre [12]:

I. Para proceder a medir exactamente 20 µL (0.02 ml) de la sangre utilizar la


pipeta de Sahli (Figura 4). La sangre debe estar homogénea al momento
de tomar la muestra de 20 µL, si no cuenta con una pipeta Sahli, puede
hacer uso de una micropipeta automática de 20 µL. Con ayuda de una
gasa, limpiar la sangre que queda en las paredes externas de la punta de
la pipeta.

Figura 4. Pipeta Sahli. es


deseable que la pipeta no
se introduzca más allá de
2 mm en la muestra de
sangre.

24
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II. Enseguida, introducir la pipeta hasta el fondo del tubo M el cual contiene
la solución de Drabkin y depositar la sangre, procurando lavar las paredes
internas de la pipeta; esto se logra mediante aspiraciones y expulsiones
consecutivas de reactivo dentro del tubo, tratando de evitar la formación
de burbujas y evitando que sobrepase el aforo en esos repetidos lavados,
pues de otra forma se añadiría un factor de contaminación de la muestra
respecto del volumen nominal.
III. Tapar el tubo de ensaye con papel parafilm y mezclar por inversión varias
veces por inversión (por lo menos 20 veces).
IV. Dejar reposar por 5 minutos a temperatura ambiente (15 – 25°C), para que
se produzca la hemólisis total de las células rojas y se complete la reacción.
Se debe observar de color rojo-transparente.

4. En el espectrofotómetro se realizará la lectura de la siguiente manera:

I. Seleccionar la longitud de onda a 540 nm.


II. Colocar en una cubeta de lectura el reactivo del tubo B (no contiene
muestra) y ajustar el aparato a 0 (cero) de absorbancia.
III. En otras cubetas colocar los reactivos de P y M y leer las absorbancias
que nos indique el espectrofotómetro.
IV. Anotar la lectura en la sección 1.6. Resultados.
Nota: El espectrofotómetro debe ser encendido por lo menos 30 minutos antes
de realizar las lecturas: si el espectrofotómetro no resta la absorbancia del
blanco, es necesario que usted la reste en sus cálculos.

3.6. Resultados

I. Registrar los resultados.


TUBO ABSORBANCIA
*B
P
M
*Nota: Anotar este resultado solamente si el espectrofotómetro no resta la
absorbancia del B, por lo que es necesario que usted la reste en sus cálculos.

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II. Cálculos

Calcular la concentración de hemoglobina, utilizando la curva de calibración o


multiplicando por una constante que resulta de la calibración del método.

Se divide la absorbancia del problema entre la absorbancia del estándar, el resultado


se multiplica por la concentración del estándar.

Absorbancia M - Absorbancia B
[Hb] = Absorbancia P - Absorbancia B
x 15 (Concentración Patrón) = g/dL de Hb en la muestra

Nota: Esta fórmula está diseñada considerando que B se resta hasta el momento de hacer los
cálculos.

3.7. Cuestionario

1. Describe el fundamento de este método.


2. ¿Cuáles son los valores normales en hombres, mujeres y niños?
3. ¿Cuáles son los posibles problemas que se pueden presentar?
4. ¿Qué significado clínico tiene la presencia de valores anormales de Hb?
5. ¿Por qué las personas que residen en zonas de mayor altitud tiene valores
normalmente altos de Hb?
6. Mediante una rigurosa investigación bibliográfica elabora el formato de un
reporte de laboratorio que incluya tus resultados.

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RÚBRICA DE REVISIÓN DEL REPORTE


PRÁCTICA 3. DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBIA
Parte I
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Resumen Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 3 1 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Introducción Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
15 10 5 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Materiales y Presentación y ortografía deficiente en
Presentación y Presentación y
métodos adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 3 1 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Resultados Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
15 10 5 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Discusión de Presentación y ortografía deficiente en
Presentación y Presentación y
resultados adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
25 20 10 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Conclusión Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 10 5 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Bibliografía Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 3 1 0
Parte II
Informe de Carece de algún
Cumple lo requerido Deficiente No entregado
resultados de aspecto requerido
laboratorio 20 10 5 0
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PRÁCTICA 4. DETERMINACIÓN DE HEMATOCRITO.

4.1. Objetivo
El alumno al término de esta práctica comprenderá que el valor del hematocrito sirve
para confirma el diagnostico de diferentes enfermedades y patologías, como es el caso
de las anemias y la policitemia.

4.2. Material biológico


 Sangre venosa procedente de una punción venosa y tratada con anticoagulante
EDTA o sangre capilar obtenida por punción con lanceta.

4.3. Material por equipo de trabajo

4.3.1. Método de Wintrobe (Macrohematocrito)


 Tubo de Wintrobe graduado de 0-100 mm (0-10 cm)
 Pipetas Pasteur
 Equipo para venopuncion (Tubo lila)
 Centrifuga o soporte Wintrobe
 Gradilla

4.3.2. Microhematocrito
 Lanceta (en caso de obtener sangre capilar)
 Tubos capilares azules o rojos
 Plastilina
 Encendedor o cerillos
 Microcentrifuga

4.4. Reactivos y soluciones


 Alcohol al 70%
 Sangre venosa

4.5. Desarrollo

4.5.1. Método de Wintrobe (Macrohematocrito) [14]

Procedimiento:

1. Obtener sangre venosa con EDTA.

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2. Utilizando una pipeta Pasteur llenar el Tubo de Wintrobe (Figura 5)hasta la
marca superior de 10 cm o 100 mm que dependerá del tubo que se use. Trate de
evitar la formación de burbujas.

A) B)

Figura 5. Material para realizar el Método de Wintrobe. Tubo Wintrobe


marcado de 0 a 10 cm. (A); Soporte Wintrobe (B).

3. Tapar el tubo con un tapón de goma (opcional).


4. Centrifugar a 3000 rpm durante 30 minutos o colocar en posición vertical.
5. Leer directamente la graduación en milímetro (mm) a partir del borde superior
del plasma hasta la columna de glóbulos rojos, y anotar los resultados de 1, 2 y
24 horas.
6. Registrar sus resultados en la sección 4.6.

4.5.2. Microhematocrio.

Procedimiento:

1. Utilice tubos capilares de 7 cm de largo por 1.1 mm de grosor (Figura 6), llenar las
¾ partes del capilar, con sangre venosa bien homogeneizada (capilar azul) o sangre
obtenida del talón (capilar rojo).

29
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Figura 6. Tubos capilares. Vía venosa (capilares azules); vía capilar o


dérmico (capilares rojos).

2. Cerrar la punta del tubo capilar sellando a la llama del mechero o con serillo (evite
quemar el paquete globular) o con plastilina.
3. Utilizar la microcentrífuga, 5 minutos a 10,000 rpm (Figura 7) o bien colocar en
posición vertical durante una hora.

Figura 7. Microcentrígua para tubos capilares.


4. Colocar en posición vertical el capilar y medir con una regla en mm, tanto la
longitud total de la muestra de sangre, como la fracción globular sedimentada
(Figura 8).

30
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Figura 8. Forma gráfica de cómo medir el tubo capilar con regla.

5. Registrar sus resultados en la sección 4.6.

4.6. Resultados
I. Registrar los resultados
Realizar un dibujo de lo observado y registrar los resultados obtenidos.

Tubo capilar Resultados

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II. Cálculos.
Obtener el valor en mm/hora y en porcentaje.

% Hto = B x 100
A

Cálculos
A: Longitud Total de la sangre
Plasma

B: Longitud Fracción celular

Leucocitos

Resultados:

_______________________mm/hora

_______________________% Hto

4.7. Cuestionario
I. ¿Cómo se debe reportar en un informe de laboratorio?
II. ¿Cuáles son los valores normales del hematocrito?
III. ¿En qué causas patológicas el hematocrito esta elevado?
IV. ¿En qué causas patológicas el hematocrito esta disminuido?
V. ¿Existen otros métodos para evaluar la velocidad de sedimentación
globular además de los descritos en esta práctica?
VI. Menciona 5 causas de error que se pueden presentar en esta técnica.
VII. Mediante una rigurosa investigación bibliográfica elabora el formato de
un reporte de laboratorio que incluya tus resultados.

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RÚBRICA DE REVISIÓN DEL REPORTE


PRÁCTICA 4. DETERMINACIÓN DE HEMATOCRITO
Parte I
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Resumen Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 3 1 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Introducción Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
15 10 5 0
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aspecto requerido, aspecto requerido,
Materiales y Presentación y ortografía deficiente en
Presentación y Presentación y
métodos adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 3 1 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Resultados Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
15 10 5 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Discusión de Presentación y ortografía deficiente en
Presentación y Presentación y
resultados adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
25 20 10 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Conclusión Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 10 5 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Bibliografía Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 3 1 0
Parte II
Informe de Carece de algún
Cumple lo requerido Deficiente No entregado
resultados de aspecto requerido
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PRÁCTICA 5. EXTENDIDO DE SANGRE PERIFÉRICA.

5.1. Objetivo
Al concluir la práctica, el alumno será capaz de utilizar esta sencilla técnica para
observar las características morfológicas de las células sanguíneas, lo que permitirá
ayudar a la confirmación de alguna patología de la sangre.

5.2. Material biológico


 Sangre venosa procedente de una punción venosa y tratada con
anticoagulante EDTA o sangre capilar obtenida por punción con lanceta.

5.3. Material por equipo de trabajo


 6 Portaobjetos limpio, secos y sin grasa.
 Micropipieta de 20 µL con puntas.

5.4. Reactivos y soluciones


 Alcohol al 70%

5.5. Desarrollo
5.5.1. Extendido

Proceder de la siguiente manera (Figura 9) [15]:

1. El tubo con sangre agitar suavemente para homogeneizar.


2. Depositar una gota de sangre (aproximadamente 20 µL) sobre el portaobjeto
1 (posición horizontal), preferentemente en uno de los extremos.
3. Tomar el portaobjeto 2 (portaobjeto extensor) y posicionarlo sobre el
portaobjeto 1 en un ángulo adecuado (generalmente es de 30 – 45°).
4. Deslizar el portaobjeto 2 hacia la gota.
5. Dejar que la gota de sangre tome contacto con todo el borde del portaobjeto.
6. Deslizar el portaobjeto 2 con la gota, a una velocidad y ángulo constante en
dirección contraria, tratando de deslizarse por todo el portaobjeto 1. Se debe
formar una película fina de sangre bien distribuida sin agujeros ni surcos.
7. Mover el portaobjetos con la mano hacia uno y otro lado durante varios
segundos para secar rápidamente el extendido y posteriormente rotular.

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Figura 9. Extensión de sangre en portaobjeto. Colocar una gota de sangre en el


extremo del portaobjeto y posicionar el segundo portaobjeto sobre primero en un
ángulo de 30 a 45° (A); deslizar el portaobjetos 2 hacia la gota de sangre para que se
encuentre en la posición del inciso (B); finalmente deslizar suavemente en sentido
contrario para que quede la extensión de sangre como se observa en (C).

Presenta tres zonas claramente diferenciadas una buena extensión sanguínea:

I. Cabeza: Es la zona inicial de la extensión. Si atendemos a las características


que debe presentar un extendido sanguíneo ideal, la cabeza será la zona con
mayor grosor. De hecho, los hematíes pueden estar formando más de una
capa.
II. Cuerpo: Es la zona intermedia de la extensión sanguínea y la más adecuada
para el estudio de las células. Existe una adecuada proporción de leucocitos
en esta zona.
III. Cola: Es la zona final del extendido. En ella los hematíes se disponen en
forma de mosaico, deformados, y homogéneamente coloreados. Los
leucocitos dispuestos en esta zona suelen ser los más grandes (monocitos y
granulocitos).

5.5.2. Tinción de Wright [16-18]


Se procederá a la tinción con un método de tinción diferencial que permite la
observación de las células sanguíneas.

35
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1. La extensión fina, secada al aire y sin fijar, se cubre totalmente con un


volumen conocido de colorante Wright (1 mL aproxidamadamente) que se
deja actuar durante 5 a 8 minutos. El colorante no debe derramarse por lo
bordes, pero adicionar más si se comienza a evaporar.
2. Posteriormese, se añade gota a gota a, igual volumen de agua tamponada
(pH 6,8) o amortiguador de Wright, soplando ligeramente con la pipeta para
conseguir una mezcla homogénea. Esperar la formación de brillo metálico.
3. Después de 10 a 15 minutos se vierte el colorante, y se lava con agua
tamponada (pH 6,8) o con el chorro de agua, hasta que la extensión tenga
un aspecto rosado a simple vista.
4. Limpiar el dorso del portaobjetos con una gasa humedecida en alcohol para
eliminar cualquier resto de colorante.
5. Dejar que seque al aire.
6. Observar al microscopio al colocar una gota de aceite de inmersión y leer
con el objetivo de 100x. Se debe tomar en cuenta:
 Eritrocitos: Color rosa o rosa - anaranjado.
 Plaquetas: Color violeta pálido o púrpura.
 Neutrófilos: Núcleo violeta oscuro. Citoplasma rosado con
granulaciones rojo violeta.
 Eosinófilos: Núcleo violeta. Citoplasma azul con gránulos rojos o rojo
anaranjado.
 Basófilos: Núcleo azul oscuro o púrpura. Gránulos púrpura casi
negros.
 Linfocitos: Núcleo púrpura. Citoplasma azul celeste.
 Monocitos: Núcleo laxo violeta. Citoplasma azul celeste.

Nota: Los resultados indicados son orientativos ya que la intensidad y la tonalidad del
color varían con el pH usado en la tinción. En general la coloración con el reactivo de
Wright da lugar a coloraciones más rojizas al disminuir el pH del agua tamponada
utilizada.

36
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5.6. Resultados
I. Describir y dibujar como se observan las células dependiendo de la zona
del extendido.
Zona de la Cabeza del Extendido OBSERVACIONES

Zona del Cuerpo del Extendido OBSERVACIONES

37
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Zona de la Cola del OBSERVACIONES
Extendido

5.7. Cuestionario
I. Haz un dibujo donde se muestren un extendido bien hecho y por lo menos
4 extendidos mal hechos, y describe los posibles errores de cada uno.
II. ¿Cuáles son las células que se pueden ver en un extendido?
III. ¿Cuáles tinciones citológicas que se pueden usar para teñir un extendido
sanguíneo, describe los fundamentos de cada técnica y menciona cuáles
células se tiñen en cada una de esas técnicas?
IV. Mediante una rigurosa investigación bibliográfica elabora el formato de
un reporte de laboratorio que incluya tus resultados.

38
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RÚBRICA DE REVISIÓN DEL REPORTE


PRÁCTICA 5. EXTENDIDO DE SANGRE PERIFÉRICA
Parte I
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Resumen Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 3 1 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Introducción Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
15 10 5 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Materiales y Presentación y ortografía deficiente en
Presentación y Presentación y
métodos adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 3 1 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Resultados Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
15 10 5 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Discusión de Presentación y ortografía deficiente en
Presentación y Presentación y
resultados adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
25 20 10 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Conclusión Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 10 5 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Bibliografía Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 3 1 0
Parte II
Informe de Carece de algún
Cumple lo requerido Deficiente No entregado
resultados de aspecto requerido
laboratorio 20 10 5 0
Asistió
Asistencia y Regular Deficiente pero no
Buen desempeño 5 3 1 0
participación desempeño desempeño particip
ó

CALIFICACIÓN

39
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PRÁCTICA 6. CUANTIFICACIÓN DE GLÓBULOS BLANCOS.

6.1. Objetivo
El alumno será capaz de utilizar la técnica de Recuento de Glóbulos Blancos, así como
interpretar los resultados.

6.2. Material biológico


 Sangre venosa procedente de una punción venosa y tratada con anticoagulante
EDTA

6.3. Material por equipo de trabajo


 Equipo para venopuncion (Tubo lila)
 1 Cámara de recuento de Neubauer
 1 Cámara de recuento de Nageotte.
 Cubreobjetos
 1 Pipeta especial de Thoma para glóbulos blancos (perla blanca) con manguera y
boquilla.
 1 Microscopio
 Tubo de vidrio 12 x 75
 Papel parafilm
 1 gasa

6.4. Reactivos y soluciones


 Alcohol al 70%
 Solución diluyente para la sangre Turck:
• 2ml de ácido acético glacial
• 1ml de solución acuosa de violeta de genciana al 1%
• 100ml de agua destilada.

6.5. Desarrollo

6.5.1. Preparación de la muestra con pipeta de Thoma.


Proceder de la siguiente manera:
1. Obtener sangre total siguiendo el protocolo ya conocido.
2. Con la boquilla y la Pipeta de Thoma para glóbulos blancos (Figura 10) aspirar
sangre hasta la marca 1 (evitar formación de burbujas).
40
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A) Tubo capilar corto B)


Perla
mezcladora
Marca 11

Marca 1
Bulbo

Boquilla
Punta Tubo capilar largo

Figura 10. Pipeta de Thoma para glóbulos blancos (A); Pipita de Thoma para
glóbulos blancos con manguera de látex de 11 cm de largo y con boquilla (B).
Presenta cerca del extremo superior (tubo capilar corto) una marca de 11,
inmediatamente continúa una dilatación (bulbo) que contiene una perla blanca
mezcladora, luego sigue el tallo (tubo capilar largo), el cual puede estar marcado: 0,5
a la mitad del bubo capilar largo y 1 acabando el tubo capilar largo.

3. Limpiar cuidadosamente con una gasa el exterior de la pipeta con un algodón


y sin hacer bajar el nivel de sangre.
4. Aspirar diluyente Turk hasta la marca 11 de la pipeta.
5. Desmontar con cuidado la manguera y poner parafilm en cada extremo de la
pipeta, enseguida homogeneizar el contenido de la pipeta en un rotador
automático o rotar manualmente en sentido horizontal durante 3 minutos.
6. Desechar en un tubo de vidrio las 3 primeras gotas de la pipeta de Thoma.
7. Utilizar la cámara de Neubauer (subsección 6.5.2) o la cámara de Nageotte
(subsección 6.5.3).

6.5.2. Cámara de Neubauer.

Proceder de la siguiente manera:


1. Colocar el cubreobjetos sobre la cámara de Neubauer [11] (Figura 11) y llenarla,
tratando que fluya libremente por difusión el líquido Esto se realiza ubicándola
punta en uno de los bordes no adheridos del cubre y dejando que el líquido
penetre por capilaridad, en el espacio existente entre ambas estructuras,
evitando llenar en exceso o que se formen burbujas.

41
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Figura 11. Cámara de Neubauer.

2. Reposar durante 10 minutos dentro de una cámara húmeda con el fin de que
los glóbulos blancos sedimenten.
3. Localizar la cuadricula de la cámara de Neubauer con el objetivo seco débil
(10X) y verificar que la distribución de los glóbulos blancos sea homogénea;
enseguida enfocar con seco fuerte (40X).
4. Realizar el recuento de los glóbulos blancos en los cuadros grandes de las
esquinas de la cámara señalados con la letra “L” (Figura 12), y registrar
resultados en la subsección 6.6.1.

A) B) C)
L L

L L
0.25 mm 1 mm
3 mm

Figura 12. Cuadrados de la cámara de Neubauer. La profundidad de la cámara es de


0.1 mm. La cuadrícula de recuento muestra 9 cuadrados grandes, cada uno de 1 mm2.
Cuadrantes marcados en rojo son los usados para cuantificar los glóbulos blancos.
Cada cuadrado grande está dividido en 16 cuadrados con aristas de 0.25 mm (A);
orden que se debe seguir a la hora de observar y contar las células en los 16 cuadrados
“zig-zag” (B); Visualización de los glóbulos blancos contenidos en un cuadrado
pequeño (C). Para evitar contar repetidamente las mismas células, sólo se cuentan los
que están contenidos dentro del cuadrado y los que están en contacto con sus líneas
de demarcación superior y derecho.

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6.5.3. Cámara de Nageotte.

Proceder de la siguiente manera [11, 19]:

1. Colocar el cubreobjetos sobre la cámara de Nageotte (Figura 13) y llenarla,


tratando que fluya libremente por difusión el líquido Esto se realiza ubicándola
punta en uno de los bordes no adheridos del cubre y dejando que el líquido
penetre por capilaridad, en el espacio existente entre ambas estructuras,
evitando llenar en exceso o que se formen burbujas.
2. Reposar durante 15 minutos dentro de una cámara húmeda con el fin de que
los glóbulos blancos sedimenten.
3. Localizar la cuadricula de la cámara de Nageotte con el objetivo seco débil (10X)
y verificar que la distribución de los glóbulos blancos sea homogénea;
enseguida enfocar con seco fuerte (40X).

A) B) C)
5 mm
10 mm

0.25 mm 0.01 mm

10 mm

Figura 13. Cámara de Nageotte. Cámara de Nageotte que describe la profundidad de


la cámara, 0.5 mm (A). La base cuadrada de 100 mm2 está dividida en 40 rectángulos
con una superficie de 2.5 mm2 (B). Zona ampliada que muestra como se deben contar
los leucocitos, barriendo la superficie delineada de un lado a otro (C).

4. Contar los leucocitos barriendo la superficie delineada de un lado a otro, como


se muestra en la Figura 3. Se deben contar todos los leucocitos del área,
ncluyendo leucocitos que tocaran las líneas del borde, los leucocitos fueron
contados en los 40 rectángulos de una de las cámaras [primer conteo], así mismo
se realizó el conteo en la segunda área [recuento por duplicado]. Registrar
resultados en la subsección 6.6.2.

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6.6. Resultados

6.6.1. Registro de resultados de la cámara de Neubauer.

I. Anotar el número de glóbulos blancos contados.

CAMARA DE NEUBAUER
CUADRANTE GLOBULOS BLANCOS CONTADOS
1
2
3
4
TOTAL

II. Describir y dibujar sus observaciones de la cámara de Neubauer a 10X y 40X.

10X OBSERVACIONES

44
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40X OBSERVACIONES

III. Cálculos para el conteo de leucocitos en cámara de Neubauer.

WBC = L/4 x 10 x D

WCB=Recuento de glóbulos blancos sobre mm3 de sangre


L = Recuento de Leucocitos en los cuatro cuadrantes grandes.
D = Factor de dilución (10 o 20)

Análisis de fórmula: Como se cuentan los glóbulos blancos presentes en 4 cuadrados grandes, la suma
total de estos se dividirá entre 4, para calcular el número de células que hay en un cuadrado grande que
mide 1 mm. Como la longitud de cada uno de los lados del cuadrado grande central es de 1 mm, y la
longitud del espacio comprendido entre éste y el cubre es de 0,1 mm, hay que multiplicar por 10 el
resultado anterior, para determinar así el número de hematíes existentes y así obtener el valor en 1 mm3.
Como la sangre, previamente al recuento propiamente dicho, se diluye hay que multiplicar el resultado
anterior por 10, si se ha partido de la sangre entera contenida hasta el enrase de 1, o por 20, si se ha
partido de la sangre entera contenida hasta el enrase de 0,5 (para calcular las diluciones realizadas, no
se tiene en cuenta el líquido contenido en el tubo capilar largo de la pipeta diluidora, pues se considera
que éste no se mezcla con el resto a nivel del bulbo).

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6.6.2. Registro de Resultados de la cámara de Nageotte.

I. Anotar el número de glóbulos blancos contados.

CAMARA DE NAGEOTTE
GLOBULOS BLANCOS CONTADOS

TOTAL

II. Describir y dibujar sus observaciones de la cámara de Nageotte a 10X y 40X.

10X OBSERVACIONES

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40X OBSERVACIONES

III. Cálculos para el conteo de leucocitos en cámara de Nageotte.

WBC = L x D/V
WCB=Recuento de glóbulos blancos sobre µL de sangre
L = Recuento de Leucocitos en los cuatro cuadrantes grandes.
D = Factor de dilución (10 o 20)
V= Volumen de conteo (µL)

6.7. Cuestionario
I. ¿Cuál es el fundamento de la solución de Turk usada y cuál otra se pudo
usar?
II. ¿Cuáles son las diferencias entre la cámara de Neubauer y la de Nageotte en
el recuento de Leucocitos?
III. ¿Cuáles son los valores normales en hombres, mujeres y niños?
IV. Valores anormales de glóbulos blancos que significado clínico tiene.
V. Mediante una rigurosa investigación bibliográfica elabora el formato de un
reporte de laboratorio que incluya tus resultados.
VI. ¿Cuál es el método más exacto que existe para cuantificar Leucocitos?

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RÚBRICA DE REVISIÓN DEL REPORTE
PRÁCTICA 6. CUANTIFICACIÓN DE GLÓBULOS BLANCOS
Parte I
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Resumen Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 3 1 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Introducción Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
15 10 5 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Materiales y Presentación y ortografía deficiente en
Presentación y Presentación y
métodos adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 3 1 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Resultados Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
15 10 5 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Discusión de Presentación y ortografía deficiente en
Presentación y Presentación y
resultados adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
25 20 10 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Conclusión Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 10 5 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Bibliografía Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 3 1 0
Parte II
Informe de Carece de algún
Cumple lo requerido Deficiente No entregado
resultados de aspecto requerido
laboratorio 20 10 5 0
Asistió
Asistencia y Regular Deficiente pero no
Buen desempeño 5 3 1 0
participación desempeño desempeño particip
ó

CALIFICACIÓN

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PRÁCTICA 7. DIFERENCIACIÓN DE LA SERIE BLANCA.

7.1. Objetivo
Al concluir la práctica, el alumno será capaz de diferencias la serie blanca.

7.2. Material biológico


 Sangre venosa procedente de una punción venosa y tratada con anticoagulante
EDTA

7.3. Material por equipo de trabajo


 Equipo de venopunción
 2 Portaobjetos de vidrio
 Micropipeta de 20 µL o pipeta pasteur
 Papel secante
 Plumón sharpie
 Contador celular
 Cronometro

7.4. Reactivos y soluciones


 Aceite de inmersión
 Alcohol metanol fijador
 Eosina bufferizada
 Policromo

7.5. Desarrollo
7.5.1. Extensión
1. Homogenizar la muestra sanguínea.
2. Con ayuda de una micropipeta, depositar una pequeña gota de sangre en el
extremo de un portaobjetos totalmente limpio.
3. Con el borde de otro portaobjetos a 30 o 45 grados, tocar la gota, esperar a que
la sangre se distribuya por capilaridad en el extremo del portaobjetos extensor
y deslizarlo suavemente sobre el otro portaobjetos, en sentido longitudinal
hasta que la gota quede bien extendida sobre la superficie delprimer
portaobjetos.
4. Dejar secar la extensión de sangre.

7.5.2. Tinción de Wright [17, 18]

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Se procederá a la tinción con un método de tinción diferencial que permite la
observación de las células sanguíneas.

1. La extensión fina, secada al aire y sin fijar, se cubre totalmente con un


volumen conocido de colorante Wright (1 mL aproximadamente) que
se deja actuar durante 5 a 8 minutos. El colorante no debe derramarse
por los bordes, pero adicionar más si se comienza a evaporar.
2. Posteriormente, se añade gota a gota a, igual volumen de agua
tamponada (pH 6,8) o amortiguador de Wright, soplando
ligeramente con la pipeta para conseguir una mezcla homogénea.
Esperar la formación de brillo metálico.
3. Después de 10 a 15 minutos se vierte el colorante, y se lava con agua
tamponada (pH 6,8) o con el chorro de agua, hasta que la extensión
tenga un aspecto rosado a simple vista.
4. Limpiar el dorso del portaobjetos con una gasa humedecida en
alcohol para eliminar cualquier resto de colorante.
5. Dejar que seque al aire.
6. Observar al microscopio al colocar una gota de aceite de inmersión y
leer con el objetivo de 100x. Se debe tomar en cuenta:
 Eritrocitos: Color rosa o rosa - anaranjado.
 Plaquetas: Color violeta pálido o púrpura.
 Neutrófilos: Núcleo violeta oscuro. Citoplasma rosado con granulaciones rojo
violeta.
 Eosinófilos: Núcleo violeta. Citoplasma azul con gránulos rojos o rojo
anaranjado.
 Basófilos: Núcleo azul oscuro o púrpura. Gránulos púrpura casi negros.
 Linfocitos: Núcleo púrpura. Citoplasma azul celeste.
 Monocitos: Núcleo laxo violeta. Citoplasma azul celeste.
Nota: Los resultados indicados son orientativos ya que la intensidad y la tonalidad del
color varían con el pH usado en la tinción. En general la coloración con el reactivo de
Wright da lugar a coloraciones más rojizas al disminuir el pH del agua tamponada
utilizada.

5. Se hará un recuento de 100 células blancas en total, diferenciando cada una de


ellas según sus características morfológicas.

50
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7.6. Resultados
I. Evaluar la morfología de eritrocitos, leucocitos y plaquetas (Dibujar y reportar
observaciones, importante evaluar anormalidades). Nota: Si es necesario anexar
hojas para dibujar sus impresiones. Poner particular interés en la serie blanca.

ERITROCITOS OBSERVACIONES

LEUCOCITOS OBSERVACIONES

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PLAQUETAS OBSERVACIONES

7.7. Cuestionario
I. ¿Cuáles son los valores de referencia, adultos y niños?
Células
Neutrófilos en Banda
Neutrófilos segmentados
Linfocitos
Monocitos
Eosinófilos
Basófilos

II. Mediante una rigurosa investigación bibliográfica elabora el formato de


un reporte de laboratorio que incluya tus resultados.

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RÚBRICA DE REVISIÓN DEL REPORTE
PRÁCTICA 7. DIFERENCIACIÓN DE SERIE BLANCA
Parte I
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Resumen Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 3 1 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Introducción Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
15 10 5 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Materiales y Presentación y ortografía deficiente en
Presentación y Presentación y
métodos adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 3 1 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Resultados Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
15 10 5 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Discusión de Presentación y ortografía deficiente en
Presentación y Presentación y
resultados adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
25 20 10 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Conclusión Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 10 5 0
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aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Bibliografía Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 3 1 0
Parte II
Informe de Carece de algún
Cumple lo requerido Deficiente No entregado
resultados de aspecto requerido
laboratorio 20 10 5 0
Asistió
Asistencia y Regular Deficiente pero no
Buen desempeño 5 3 1 0
participación desempeño desempeño particip
ó

CALIFICACIÓN

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PRÁCTICA 8. ALTERACIONES ERITROCITARIAS.

8.1. Objetivo
Al concluir la práctica, el alumno será capaz de diferencias las alteraciones
morfológicas de los eritrocitos y evaluar la madurez de estos, permitiéndole
diferenciar los diferentes tipos de anemias.

8.2. Material biológico


• Obtener sangre venosa de pacientes previamente diagnosticados con
anemias.

8.3. Material por equipo de trabajo


• Equipo para venopuncion (Tubo lila)
• Extensiones teñidas de pacientes con anemias.
• 3 Tubos de ensaye 13 x 75 mm
• 2 pipetas Pasteur
• Papel parafilm
• 1 Plumón sharpie
• 1 caja de portaobjetos
• 1 Contador celular
• Aceite de inmersión
• Microscopio
• Cronómetro

8.4. Reactivos y soluciones


• Alcohol 70%
• Azul de cresilo brillante: Mezclar 80 mL de solución salina con 20 mL de
citrato sódico al 3%, añadir 2 g de azul de cresilo brillante, homogeneizar y
filtrar.

8.5. Desarrollo
8.5.1. Morfología de los eritrocitos [20-23]
1. Preparar extensiones sanguíneas y teñir células como previamente se
describió en la práctica 5.
2. Observar al microscopio al colocar una gota de aceite de inmersión y leer
con el objetivo de 100x.

8.5.2. Recuento de reticulocitos [22, 24, 25]

54
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Seguir el siguiente procedimiento [22]:
1. Con ayuda una pipeta pasteur, se depositan tres gotas de sangre
anticoagudada con EDTA (o bien 20 µL con micropipeta automática) en
un tubo de ensaye chico.
2. Enseguida con otra pipeta pasteur, agregar 3 gotas de reactivo azul de
crisolo brillante (o bien 20 µL del reactivo con micropipeta automática).
Nota: Es importante mantener la proporción 1:1 de la muestra de sangre
y el colorante.
3. Mezclar suavemente la mezcla contenida en el tubo y enseguida taparlo
con parafilm.
4. Incubar a 37°Cen baño maría por 10 minutos.
5. Hacer una extensión en el portaobjeto.
6. Revisar la extensión en el microscopio con el objetivo de inmersión
(100X).
7. Se leerán varios campos, contar los reticulocitos en cada 1000 eritrocitos.
Los hematíes se ven teñidos de color verde-amarillento y los
reticulocitos se distinguirán por los filamentos azul intenso en su
interior.
8. Reportar resultados en la sección 8.6.

8.6. Resultados
8.6.1. Etapa I.

Dibujar sus observaciones.

55
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8.6.2. Etapa II.

Dibujar y describir los eritrocitos y reticulocitos observados en el microscopio.

OBSERVACIONES

 Los cálculos se harán con una simple regla de tres para obtener el valor
porcentual de los reticulocitos encontrados.

Resultados
CR (% )= R / H x 100 R:__________

CR (%): Cuenta porcentual de Reticulocitos

R: Numeró Reticulocitos contados

H: Total de hematíes contados

 Sin embargo, el recuento de reticulocitos se CR (% )= ________


indicará también en relación a los 1000 eritrocitos
contados, esto es, en ‰.

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Resultados

R:_________

‰:________

 En caso de bajo número de eritrocitos, se considera el número absoluto de


reticulocitos/µL.
Resultados

CR = H x ‰ / 1000

CR: Cuenta de Reticulocitos (células/ µL)

H: Número de eritrocitos/ µL

‰: Número de reticulocitos ‰
CR:__________ células/ µL

 El recuento de eritrocitos también se puede expresar como Cuenta Corregida de


Reticulocitos (CCR): Que se expresa como porcentaje (%) y se obtiene de la siguiente
manera:

CCR = CR (%) xRT


(Hto / 45)
=_____

CR (%): Cuenta porcentual de Reticulocitos


Hto: Hematocrito del paciente
45: Hematocrito normal

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8.7. Cuestionario
I. Dibuja y describe como es morfológicamente un eritrocito (tamaño, forma,
aspecto, etc).
II. Describe los tipos de alteraciones que pueden presentarse en los eritrocitos.
III. Describe y dibuja las alteraciones en el tamaño que pueden presentar los
eritrocitos.
IV. Describe y dibuja las alteraciones en el aspecto que pueden presentar los
eritrocitos.
V. Describe y dibuja las alteraciones en la forma que pueden presentar los
eritrocitos.
VI. Describe y dibuja las alteraciones en el color que pueden presentar los
eritrocitos.
VII. Describe y dibuja como se observan las inclusiones intraeritrocitarias
presentar los eritrocitos.
VIII. Describe y dibuja como se observan las inclusiones parasitarias presentar los
eritrocitos.
IX. Describe y dibuja como se observan las agrupaciones anómalas de los
eritrocitos.
X. ¿Qué son los reticulocitos?
XI. Describe el fundamento de la tinción utilizada para el recuento de reticulocitos.
XII. En que unidades se debe reportar el recuento de reticulocitos.
XIII. Mediante una rigurosa investigación bibliográfica elabora el formato de un
reporte de laboratorio que incluya tus resultados.
XIV. ¿Por qué es importante determinar el CCR?
XV. ¿Cuáles son los valores normales de reticulocitos?

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Q
RÚBRICA DE REVISIÓN DEL REPORTE
PRÁCTICA 8. ALTERACIONES ERITROCITARIAS
Parte I
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Resumen Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 3 1 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Introducción Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
15 10 5 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Materiales y Presentación y ortografía deficiente en
Presentación y Presentación y
métodos adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 3 1 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Resultados Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
15 10 5 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Discusión de Presentación y ortografía deficiente en
Presentación y Presentación y
resultados adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
25 20 10 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Conclusión Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 10 5 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Bibliografía Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 3 1 0
Parte II
Informe de Carece de algún
Cumple lo requerido Deficiente No entregado
resultados de aspecto requerido
laboratorio 20 10 5 0
Asistió
Asistencia y Regular Deficiente pero no
Buen desempeño 5 3 1 0
participación desempeño desempeño particip
ó

CALIFICACIÓN

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PRÁCTICA 9. CLASIFICACIÓN DE LAS ANEMIAS.

9.1. Objetivo
Al concluir la práctica, el alumno será capaz de clasificar las anemias por medio de la
determinación de los índices absolutos, así como podrá hacer uso de metodologías
manuales, así como de equipos autoanalizadores, permitiendo ampliar el panorama
de desempeño en el laboratorio.

9.2. Material biológico


• Obtener sangre venosa de pacientes previamente diagnosticados con
anemias.

9.3. Material por equipo de trabajo


• Equipo para venopuncion (Tubo lila)
• Revisar prácticas 2, 3 y 4.
• Analizador hematológico ADVIA60

9.4. Reactivos y soluciones


• Revisar prácticas 2, 3 y 4.

9.5. Desarrollo
Tomar por lo menos 2 muestras de sangre y realizar los procedimientos de las
Etapas I y II [21].

9.5.1. Etapa I. Técnicas manuales


• Revisar prácticas 2, 3 y 4 para Recuento de Glóbulos rojos, Hematocrito y
Hemoglobina.

9.5.2. Etapa II. Equipo automatizado


 Utilizar el analizador hematológico ADVIA60 (Figura 14).

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Figura 14. Analizador hematológico ADVIO60. Toma 10 µl de muestra


a través de tapa de goma (tubo cerrado) para evitar derrames y
contaminación con la muestra (bioseguridad). Proporciona histogramas
de Glóbulos Rojos, Glóbulos Blancos y Plaquetas y tiene un completo
sistema de alarmas para células anormales y recuentos fuera de los
límites normales

9.6. Resultados

9.6.1. Registro de resultados de la Etapa I.

I. Registra los resultados obtenidos.

Tabla 2. Resultados
RBC (células/µL)
Hto %
Hb g/dL

II. Cálculos
• Reportar Volumen Corpuscular Medio (VCM):

VCM = (Hto % x 10)/RBC(células/µL)

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• Reportar Hemoglobina Corpuscular Media (HCM):

HCM = (Hb g/dL x 10)/RBC

• Reportar Concentración de Hemoglobina Corpuscular Media (CMHC):

CMHC = (Hb g/dL x 100)/Hto%

CÁLCULOS

VCM =____________________

HCM =____________________

CMCH =___________________

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Registro de resultados de la Etapa II.

9.7. Cuestionario
I. En que unidades se debe reportar VCM, HCM y CMHC.
II. ¿Cuáles son los valores de referencia?
III. ¿Qué información aportan estas determinaciones?
IV. Cuando existen anormalidades (aumento o disminución) de VCM,
HCM y CMHC ¿Cuál es el significado clínico?
V. ¿Qué otra determinación puede ayudar en el diagnóstico de anemias?
Descríbela.
VI. Mediante una rigurosa investigación bibliográfica elabora el formato de
un reporte de laboratorio que incluya tus resultados.
VII. Describe lo que es “Anemia”.
VIII. Describe la clasificación de las anemias.

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RÚBRICA DE REVISIÓN DEL REPORTE
PRÁCTICA 9. CLASIFICACIÓN DE LAS ANEMIAS
Parte I
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Resumen Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 3 1 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Introducción Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
15 10 5 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Materiales y Presentación y ortografía deficiente en
Presentación y Presentación y
métodos adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 3 1 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Resultados Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
15 10 5 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Discusión de Presentación y ortografía deficiente en
Presentación y Presentación y
resultados adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
25 20 10 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Conclusión Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 10 5 0
Carece de algún Carece de algún
Cumple lo requerido, No presenta o es
aspecto requerido, aspecto requerido,
Presentación y ortografía deficiente en
Bibliografía Presentación y Presentación y
adecuada muchos aspectos
ortografía adecuada ortografía inadecuada
5 3 1 0
Parte II
Informe de Carece de algún
Cumple lo requerido Deficiente No entregado
resultados de aspecto requerido
laboratorio 20 10 5 0
Asistió
Asistencia y Regular Deficiente pero no
Buen desempeño 5 3 1 0
participación desempeño desempeño particip
ó

CALIFICACIÓN

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Q
VIII. REFERENCIAS

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ambiental - Residuos peligrosos biológico-infecciosos - Clasificación y especificaciones de
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http://www.salud.gob.mx/unidades/cdi/nom/087ecolssa.html.
2. OMS, Manual de Bioseguridad en el Laboratorio. 3ra ed ed. 2005, Ginebra.
3. CDC, Recommendations for prevention of HIV transmission in health-care settings, Centers for
Disease Control. MMWR Suppl, 1987. 36(2): p. 1S-18S.
4. Garner, J.S., Guideline for isolation precautions in hospitals. Vol. 24. 1996: American Journal of
Infection Control. 24–52.
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edition:[Available from:
http://www.unece.org/trans/danger/publi/unrec/rev13/13files_e.html.
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salud. 2003; Available from: www.salud.gob.mx.
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11. BRAND. Cámaras de recuento. 2018; Available from:
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12. Van, K.E., Zijlstra, W.G., Standardization of hemoglobinometry. II. The hemiglobincyanide
method. Clin Chim Acta, 1961. 6: p. 538-44.
13. Srivastava, T., Negandhi, H., Neogi, S.B., Sharma, J., Saxena, R. , Methods for Hemoglobin
Estimation: A Review of “What Works”. J Hematol Transfus, 2014. 2(3): p. 1028.
14. Lemus Varela, M., Villaseñor Sierra, A., Determinación de la velocidad de sedimentación
globular mediante micrométodo comparado con el método Wintrobe. 2009: p. 68-69.
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22. Brugnara, C., Reticulocyte cellular indices: a new approach in the diagnosis of anemias and
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23. Merino, A., Alteraciones Morfológicas de los Eritrocitos. 2014. 20: p. 41- 64.
24. Mirta, A., Índices Reticulocitarios: Fracción inmadura de reticulocitos (FIR), Contenido de
Hemoglobina de Reticulocitos (CHr). Hematología, 2013. 17(1): p. 67-69.
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