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Universidad Nacional Autónoma

de México.

Facultad de Estudios Superiores


Zaragoza.

Laboratorio de bioquímica celular y de tejidos 1

Cinética enzimática de la invertasa.

Integrantes:
Badillo Espinoza René Aldhair.
Medina Aguilera Marlon Noel.
Melo Forjas Ariadna Daniela.
Morales Sánchez Paola.

Asesor.
Adriana Hernández.

Grupo:
2451.
Equipo 7.

Fecha de entrega
13 de mayo de 2019

Objetivos:
● Analizar algunos factores que modifican la velocidad de la reacción que es
catalizada por la invertasa.
● Demostrar la relación lineal entre la velocidad de reacción y la concentración
de la enzima presente.
● Determinar cómo influye el pH del medio sobre la velocidad de una reacción
enzimática y su efecto sobre el carácter iónico de la enzima y del sustrato.
● Demostrar que la temperatura afecta las reacciones enzimáticas.
● Observar el efecto de la concentración del sustrato sobre la velocidad de la
reacción enzimática y determinar km,Vmax, por los métodos conocidos.

Introducción:

Las enzimas catalizan reacciones químicas en los seres vivos sin consumirse en la
reacción, acelerando las que espontáneamente podrían producirse.
Cada enzima cataliza un solo tipo de reacción y casi siempre actúa sobre un único
sustrato o sobre un grupo muy reducido de ellos.
las propiedades de las enzimas de origen proteico derivan del hecho de ser proteínas
y de actuar como catalizadores. Los factores que influyen de manera más directa
sobre la actividad de una enzima son:
● pH
● Temperatura
● Cofactores
● Concentración de sustrato

pH:
Las enzimas poseen grupos químicos ionizables. Según el pH del medio, estos
grupos pueden tener carga eléctrica positiva, negativa o neutra. Habrá un pH en el
cual la conformación será la más adecuada para la actividad catalítica (pH óptimo).

Temperatura:
los aumentos de temperatura aceleran las reacciones químicas: por cada 10°C de
incremento, la velocidad de la reacción se duplica. Al ser proteínas , a partir de ciertas
temperaturas empiezan a desnaturalizarse por el calor. la temperatura a la cual la
actividad catalítica es máxima se llama temperatura óptima.

Cofactores:
Una enzima requiere a veces para su función la presencia de sustancias no proteicas
que colaboran en el catálisis: los cofactores. Pueden ser iones inorgánicos. Cuando
es una molécula orgánica se llama coenzima.

Resultados:

Temperatura
Inactivación con 3,5-DNS mas 0.12 mL de enzima
Temp Vµmol/min

0 -0.0348

25 0.00837

37 0.0851

50 0.1939

75 0.5512

92 0.0474

Inactivación con 3,5-DNS


Temp Vµmol/min

0 0.6364

25 0.2135

37 2.494

50 3.418

75 1.1779
92 0.4815

Efecto de concentración de enzima

[Azucar reductor] VelocidadP] Micro [Enzima]


MicroMol Mol/ 5 min

0 0 0

0.275 0.055 1

1.025 0.205 1.5

1.54 0.308 2

1.8 0.360 2.5


Efecto concentración sustrato

Muestra velocidad MicroMol

Blanco 0 0

1 0.4675 7

2 0.7411 17.5

3 1.2365 42

4 1.2226 59.5

5 1.4221 87.5

6 1.5514 175

7 0.9727 350

8 0.7355 437.5
Velocidad= [ ] / Tiempo

Curva estándar.

Muestra Absorbancia

Blanco 0.133

1 -0.0054

2 -0.026

3 0.116

4 0.282

5 0.340

6 0.543
Efecto de pH.

Muestra Absorbancia

Blanco -0.030

1 -0.019

2 -0.025

3 0.062

4 0.028

5 0.194

6 0.120
Análisis

Efecto [ ] sustrato: Al realizar la gráfica de efecto sustrato, se observa que en


los últimos puntos de concentración en micromoles, disminuye la velocidad,
esto por una disminución en la absorbancia medida con el espectrofotómetro.
La línea de tendencia tuvo que haber seguido aumentando o quedar un poco
constante en los últimos puntos, pero en este caso no se dio ese
comportamiento. Por lo cual se puede decir que fue un fallo en el método y la
absorbancia. El efecto del sustrato que en este caso fue sacarosa debió de
aumentar los productos (glucosa + fructosa) y con ello la coloración más
intensa del DNS para así poder tomar una absorbancia mayor. No sé midió con
precisión y por lo tanto, no son confiables los datos 7 y 8.

Efecto temperatura: Presenta un comportamiento positivo hasta que alcanza


la temperatura óptima, de +/- 50°C, en donde hay un declive de la actividad
enzimática debido a la desnaturalización térmica del enzima. En ambas
gráficas se puede observar este declive, y en la segunda se observa en el
segundo punto (25°C) un decaimiento, esto sera por que la temperatura no era
la adecuada, por que en el proceso no se le agregó la enzima, o no estuvo el
suficiente tiempo en incubacion.

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