Está en la página 1de 31

ENZIMAS: Catalizadores biológicos que hacen posible el funcionamiento de la

célula en condiciones ambientales moderadas.


Las enzimas son proteínas y están clasificadas dependiendo del tipo de
reacción que catalizan en oxireductasas, transferasas, hidrolasas, etc.
FACTORES DECISIVOS EN LA SELECCIÓN DEL
MICROORGANISMO

• Capaz de dar una alta producción de enzima al menor tiempo posible


1 de fermentación.

• Que sean extracelulares.


2

• Las cepas no deben producir sustancias toxicas.


3

• Debe generar la menor cantidad de subproductos interferentes.


4
CONDICIONES OPTIMAS PARA LA CEPA
SELECCIONADA

Debe ser determinada experimentalmente. En la cual la


temperatura, la composición de la solución de nutrientes y la
suplementación de sustrato optimas para los cultivos pueden ser
determinados.

Tienen como desventaja que no se puede controlar los valores de


pH y la concentración de oxigeno disuelto.
Para la selección del biorreactor se deben tener en cuenta los
siguientes requerimientos:

FUNCIONALES ECONOMICOS

Debe existir una alta transferencia de masa


Fácil de operar bajo condiciones asépticas.
liquido-gas.

Es necesaria la formación de interfaces Flexibilidad razonable con respecto a los


liquido-gas. requerimientos de varios procesos.

Debe haber una adecuada relación de las


Bajo poder especifico de consumo.
fases dispersadas (gaseosa, liquida, solida)
MATERIALES
Y
MÉTODOS
BIOREACTORES: SE REALIZARON SEIS EXPERIMENTOS
PARA LOS QUE SE DISEÑARON 3 TIPOS DE
BIORREACTORES
BIORREACTORES: el biorreactor es sin
duda uno de los equipos fundamentales de
la microbiología industrial. Es el recipiente
donde se realiza el cultivo, y su diseño debe
ser tal que asegure un ambiente uniforme y
adecuado para los microorganismos.
El biorreactor de tanque agitado es de uso muy definido.
La agitación se realiza mecánicamente mediante un eje
provisto de turbinas ocasionada por un motor.

Biorreactor de Columna de Burbujeo.Este tipo de


bioreactor carece de un sistema de transmisión mecánica
para mezclar el caldo de cultivo, es básicamente un
contenedor cilíndrico con un eyector de gas en el fondo.
Este gas es expulsado en forma de burbujas ya sea
hacia una fase liquida o hacia una suspensión solida
liquida.
Esterilización de los
biorreactores

Microorganismo y
condiciones de cultivo

Composición del medio


de expresión enzimática
ESTERILIZACIÓN DE LOS BIORREACTORES

Antes del bioproceso, los bioreactores


se trataron con una solución de
hipoclorito de sodio al 0.25 % por 48
horas; luego se trataron con una
solución de fenol al 3% por 15 minutos,
posteriormente con una de etanol al 70
% por 15 minutos y finalmente fueron
enjuagados con 500 ml de agua estéril.
Los aditamentos para la entrada de aire
y el control de espuma se esterilizaron
de manera similar
Microorganismo y condiciones de cultivo:
se utilizó la cepa Phanerochaetechrysosporium
BKM-F-1767 (ATCC24725) replicada en medio
YMPG, el cual contiene por cada 100 mililitros;
extracto de levadura 1g, extracto de malta 1g,
peptona bacteriológico 0.2g, glucosa 1g,
asparagina 0.1g 0.2g 0.1g; tiamina clorhidrato
1mg y agar 2g. Se esterilizó y se colocó en
cajas de Petri estériles; la cepa se replicó sobre
este medio e incubo a 37 °C por 5 días y se
mantuvo a 4°C.
Composición del medio de
expresión enzimática

se preparó el fluido de expresión enzimático


que contenía por cada 100 mililitro:

• Glucosa 1g g; tartrato de amonio 0.02g; 0.2g 0.05g;


0.01g; Tween 800.05g; tiamina HCl 0.1.mg; alcohol
veratrilico 2,5 Mm y solución de elementos traza 7ml

Ácido nitrilo acético 1,5g; 3g; NaCl 1g;


0.1g; 0.1g; 0.1g; 0.01g; 0.01g; 0.01g;
0,01g; 0.1g
PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN DE ESPORAS
 : Al biorreactor estéril se le adicionaron 1000 ml de
fluido de expresión esterilizado por filtración a través de
filtros de 0.45 mm, y una suspensión de esporas de la
cepa recién replicada en tween 80 al 0.1% hasta una
concentración final entre 15x104 y 20x104 esporas/ml .

 Actividad enzimática y seguimiento del bioproceso:


Durante los seis ensayos se tomaron muestras dos
veces por día, las cuales fueron filtrados por 0.45 mm.
Se realizaron los siguientes análisis:
Pruebas específicas para cada ensayo:

Para los ensayos 1 y 2 Para los ensayos 3 y 4

• se tomaron 10.0 ml de • Para los ensayos 3 y 4: se


muestra del biorreactor dos tomaron 5.0 ml de muestra
veces al día durante 15 del biorreactor dos veces al
días para el ensayo 1 y 27 día, durante 11 días para el
días para el ensayo 2. Las ensayo 3 y durante 23 días
muestras se filtraron por para el ensayo 4; se les
membrana de 0.45 µm determino la turbidez por
prepesadas y se determinó UV-VI
el peso seco del micelio
secando los filtros
prepesados a 40°C en
estufa de vacío hasta peso
constante.
Para los ensayos 5 y 6 Tiempo de duración

• cada ensayo se determinó de


• Para los ensayos 5 y 6 se acuerdo a los cambios que se
tomaron 5.0ml de muestra dos iban presentando en el
veces al día, durante 13 días biorreactor (apariencia y olor
para el ensayo 5 y durante 35 del fluido de expresión, etc.)
días para el ensayo 6. con los cuales se concluyó la
viabilidad de cada ensayo.
• Alícuotas del ensayo 6 fueron
precipitadas con metanol
grado reactivo, pasada por
filtros especiales para
solventes orgánicos de 0.45
µm previamente pesados. Al
residuo se les realizo un
espectro IRTF en un Spectrum
RXI FT-IR SystemPerkin
Elmer, con el fin de observar
los cambios en la estructura
del PVOH
RESULTADOS
Y
DISCUSIÓN
Para los ensayos 1 y 2

• Hongo creció en forma de pellets.

• Biomasa no homogénea por ello las gráficas


de crecimiento dan puntos muy variables.

• El tamaño del hongo depende en gran parte


de la agitación.

• Los pellets del primero fueron mas


pequeños susceptibles a desintegrarse. (150
Biorreactor rpm)

• Máxima actividad enzimática se observó el


día 16. (18.00 U/I)

• Día 23 para el segundo ensayo (24.96 U/I)

Agitador orbital
Forma pellets Phanerochaete chrysosporium
máx.

máx.
Para los ensayos 3 y 4
• No se utilizó agitación orbital.

• El suministro de aire es suficiente tanto


para la oxigenación como para una
agitación homogénea.

• Crecimiento sin pelletes.

• El polipropileno del biorreactor y


accesorios(ejes, tuercas, tornillos)
interactuaron con el medio.

• Cambios en sus características olor, color,


morfología.

• La máxima actividad enzimática noveno


dia 6.36 U/l y 9.46 U.I
Biorreactor Columna de burbujeo
(polipropileno)
Forma filamentosa Phanerochaete chrysosporium
Para los ensayos 5 y 6
• Reactor mas inerte.

• Aumento del volumen de aire de


300mL/min a 750mL/min.

• Crecimiento aglomerado filamentoso

• La máxima actividad al cuarto día (10.79


U/I) para el ensayo 5 y al día 30 (43.22
U/I) para el ensayo 6.

• Actividad mas estable y aumento gradual.

• En el ensayo 6 por medio de scan se


observo formación de compuestos
fenólicos que resultaron a partir de la
biodegradacion del PVOH.
Biorreactor Columna de burbujeo
(vidrio)
CONCLUSIONES
Y
RECOMENDACIONES
 Los resultados obtenidos
hasta ahora, permiten
concluir que el
escalamiento del
proceso exige un
cuidadoso diseño del
biorreactor.
 Por la factilidad económica
que tiene el biorreactor
utilizado en los ensayos 5
y 6 y por la estabilidad en
la producción de la LiP
observada en el ensayo 6,
se puede concluir que de
los tres sistemas
diseñados, este es el mas
adecuado para continuar
estandarizando las
variables y optimizando el
proceso para mejorar la
obtención de la LiP.
EN LA PRODUCCION DE LiP
es necesario buscar acelerar el
metabolismo del hongo con el fin de
aumentar su tasa de crecimiento para
que su producción enzimática se
inicie en el menor tiempo posible

podría agregársele al medio aserrín


de pino porque en trabajos anteriores
no publicados, se comprobó que la
presencia de éste, estabiliza el
sistema y aumenta la cantidad de
enzima producida
Recomendaciones y
conclusiones
Para mantener estables los niveles de enzima se
podría realizar la fermentación como un proceso
discontinuo hasta que el microorganismo se
encuentre en su metabolismo secundario, para
luego convertirlo en un proceso continuo
agregándole diariamente pequeñas cantidades
de fluido de expresión, garantizándole al hongo
un tiempo de vida mayor.
FIN

También podría gustarte