Radicales Libres PDF

y Antioxidantes
¿Qué es un Radical Libre ?

Se consideran RL aquellas moléculas que en
su estructura atómica presentan un electrón
desapareado o impar en el orbital externo,
dándole una configuración espacial que
genera una alta inestabilidad.
Son moléculas resultantes del rompimiento
homolítico de un enlace químico.
• Ruptura Homolítica:
Radicales de Carbono
• Ruptura Heterolítica:
Carbanión Carbacatión
Prof. Alfonso R. Bravo Henríquez. 2014.

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¿Qué es un Radical Libre ?
Es una entidad química que contrario a
la normal tendencia espontánea de los
electrones localizados en los átomos y
moléculas a la formación de parejas, uno
de estos se encuentra desapareado.
¡ No confundir un Radical con un Ión !

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Las especies reactivas de Oxígeno (ERO):
El término ERO describe los productos del oxígeno
que no es utilizado para la síntesis de ATP.
Átomo de Oxígeno (O)
• Radicales libres del oxígeno (RLO) Orbital interno
(2 e-)
Anión superóxido (O2.-)
Radical hidroxilo (OH.)
Radical peroxilo (RO2.)
Radical alcoxilo (RO.) Orbital externo
Protones
(+)
(6 e-)
• Intermediarios reactivos del oxígeno (IRO)
Peróxido de hidrógeno (H2O2)
Ácido hipocloroso (HOCl)
Oxígeno singlete (1O2)
Ozono (O3)

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El oxígeno molecular (O2) es un birradical, ya que tiene
2 e- no apareados en su orbital externo, ambos con el
mismo giro paralelo, impidiendo que capte 2 e-
simultáneamente en las reacciones que interviene. El
oxígeno solo puede intervenir en reacciones univalente
y aceptar los e- de uno en uno.
O2 + 4H+ + 4e- → 2H2O

e- = electrón
H+ = hidrogeniones
e- e- + 2H+ e- + H+ e- + H + O2.- = radical anión superóxido
H2O2 = peróxido de hidrógeno
OH. = radical hidroxilo
O2 → O2.- → H2O2 → OH. + H2O → H2O H2O = agua

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Estados energéticos del oxígeno molecular

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Células Xantina oxidasa, Hemo

inflamatorias transporte de e- proteínas
activadas interrumpido

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 Reacción de Fenton

Si sumamos  y  tenemos:
Reacción de Haber-Weiss

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Fuentes biológicas de ERO:
La sangre cumple la función de

transportar el OXÍGENO desde los
pulmones hasta los tejidos, y es aquí
donde este actúa como sustrato en
diversas reacciones bioquímicas
intracelulares, resultando en una gran
producción de H2O2 y superóxido,
entre otras ERO.
• Fuentes Endógenas
• Fuentes Exógenas

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Fuentes Endógenas Fuentes Exógenas
Cadena respiratoria Alimentos

Radical
libre Radical
Contaminación
libre atmosférica
Enzimas oxidativas Radicales libres
(xantina oxidasa)
Humo del cigarrillo
Radical
Células fagocíticas Medicamentos
(sistema inmune) libre (paracetamol)

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• La Mitocondria
Cadena respiratoria

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• En Células Hepáticas
(Retículo Endoplasmático)
Reacción del Citocromo P450

+

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Ej.: Oxidación del Paracetamol
Droga
Enlace
covalente
Conjugación
Oxidación (Glucuronidación, etc.)
(Citocromo P450)
Conjugación
+ Paracetamol
Metabolito Aductos estables
Especies Especies
polares no polares
Paracetamol
Eliminación renal Eliminación biliar

(orina) (intestino)

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• Reacción de la Xantino oxidasa
ATP
I
Ca2+ citosólico
ADP XDH
S
Q ACTIVACION DE PROTEASAS
INTRACELULARES Otras enzimas que
AMP DEPENDIENTES DE CALCIO
U producen RL:
Aldehído oxidasa
E Adenosina Calpaina Triptófano dioxigenasa
Indolamina dioxigenasa
M Ciclooxigenasa
Lipooxigenasa
I Inosina
A
XO XO
Hipoxantina Xantina + H 2O + O 2 Acido úrico + 2O2.- + 2H+

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• Los Leucocitos PMN y Macrófagos
En los procesos inflamatorios están

muy activas las siguientes enzimas:
NADPH oxidasa y Mieloperoxidasa (MPO) Ácido Oxígeno

hipocloroso singlete
Anión Peróxido de Radical

superóxido hidrógeno hidroxilo

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Enfermedades relacionadas con los RL:
Daño inflamatorio
Formación de cataratas
inmune Radical libre
Radical libre
Procesos de
envejecimiento
Radicales libres
Cáncer
Reperfusión después
de isquemia
Radical
Reacciones Aterosclerosis
inducidas por drogas libre
(hígado, riñón)

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Daños producidos por los RL:
El radical HIDROXILO (OH•) por
ejemplo es muy inestable y
reactivo, con una enorme
capacidad para combinarse
inespecíficamente en la mayoría de
los casos, así como con la
diversidad de moléculas de la
estructura celular: lípidos,
carbohidratos, proteínas, ácidos
nucleicos y sus derivados.
OH
•
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Daños producidos por los RL:
Fuentes endógenas
Producción de RL Fuentes ambientales
• Mitocondrias • Humo del cigarrillo
• Estallido respiratorio • Contaminantes
• Reacciones enzimáticas • Luz UV
• Reacciones de autooxidación
O2.-, H2O2
• Radiaciones ionizantes
Metales de • Xenobióticos
transición
Fe2+, Cu+
OH.
Peroxidación lipídica Modificación de las bases del ADN Daño a proteínas
Daño tisular

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Peroxidación de lípidos:
Vitamina C
4 Regeneración
de la vitamina E
1 Iniciación
3 Terminación
2 Propagación

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Peroxidación de lípidos: 1)Iniciación
2)Propagación
3)Terminación
OH
. Radical peróxilo
1) H
Dieno conjugado
RL del PUFA
Ácido graso 2) FA
!
PU
poliinsaturado 3) O
tr
o
(PUFA)
!
Malondialdehído Endoperóxido Hidroperóxido FA
PU
RL
o
tr
O

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Daño a membranas
celulares
Shock osmótico
Muerte celular

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LDL nativa
LDL oxidada
LDL modificada
Aterogénesis

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Metabolismo de Lipoproteínas

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Esquema de la ATEROGÉNESIS

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Monocitos circulantes
Monocitos
residentes
Macrófagos

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Engrosamiento
Monocito de la placa
Lumen
LDL
nativa
Moléculas
de adhesión
Endotelio (VCAM-1)
Daño
MCP-1
Activación
Macrófago celular
Pared vascular
Formación de
células
Captación por espumosas
Lipoproteínas modificadas
receptores scavenger
Células musculares lisas

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ATEROGÉNESIS

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Oxidación de Azúcares (Glicoxidación):
Radical
del anión
Glucosa Enediol
de enediol
-
Fe3+ Fe2+
.
H2O2 HO• + OH-

(Radical libre)

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Oxidación de Azúcares (Glicoxidación):
Glioxal y metilglioxal son

agentes propagadores H

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Glicosilación: Se pueden glicosilar:
• Hemoglobina
• Enzimas antioxidantes
Consecuencias:
Pérdida de función
o inactivación

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Daño oxidación al ADN:

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Bases Nitrogenadas Azúcares

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Formación del ÓXIDO NÍTRICO:
NADPH ½NADPH
+ ·
N=O
O2 O2
L-arginina L-hidroxi-arginina L-citrulina
La reacción es catalizada por las enzimas ÓXIDO NÍTRICO SINTASAS (NOSs), únicas que requieren
simultáneamente de 5 cofactores/grupos prostéticos: FAD, FMN, hemo, (BH4) y Ca2+- (CaM).
Tipo Localización Subcelular

Enzima Gen No. de residuos Regulación
nNOS NOS1 Constitutiva 1429-1433 Principalmente soluble (cerebro); principalmente particulada Ca2+/CaM
(músculo esquelético)
iNOS NOS2 Inducible 1144-1153 Principalmente soluble Citoquina-inducible; Ca2+-independente
eNOS NOS3 Constitutiva 1203-1205 Principalmente particulada Ca2+/CaM

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Formación del ÓXIDO NÍTRICO:
NR = Nitrato Reductasa
Reacción importante en la industria de

alimentos (productos cárnicos) por la
formación de nitrosomioglobina.

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Funciones del ÓXIDO NÍTRICO:
Funciones asociadas con:
• Relajación del músculo liso
• Neurotransmisión
• Inhibición plaquetaria
• Anti-inflamación (IL10)
El NO es un potente vasodilatador
Proteína quinasa G (PKG) Parece tener una función

Fosfodiesterasas de nucleótidos
cíclicos (PDE2, PDE3)
especialmente relevante en el
Canales iónicos cerebro, en el sistema vascular y
en el sistema inmune.

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Funciones del ÓXIDO NÍTRICO:
El NO puede actuar también a través de la nitrosilación de ciertas proteínas,
de la interacción con metales de transición u otros radicales libres, de la
modificación directa del DNA, etc.
·
N=O

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Metabolismo Oxidativo de la HOMOCISTEÍNA:
2 + O2 H2O2
+ O2.-
Homocisteína Homocisteína-homocisteína disulfuro

(Homocistina)
Elevados niveles de Homocisteína

en sangre se han asociado con:
GSH ↑
• Aterosclerosis Catalasa ↑
Otros antioxidantes ↑
• Trombosis venosa
• Defectos del tubo neural
• Infartos de placenta Replicación del
ADN
• Abortos inexplicados
• Daño celular endotelial
Muerte
• Daño oxidativo celular
• Promoción de trombogénesis
• Regulación alterada de la vasoconstricción
• Estimulación de la proliferación celular del músculo liso

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Antioxidantes
Son sustancias que cuando están
presentes retardan o inhiben la
oxidación de sustratos susceptibles
al ataque de las EROs.
La acción del ANTIOXIDANTE es de

sacrificio de su propia integridad
molecular para evitar alteraciones
de moléculas (lípidos, proteínas,
ADN, etc.) funcionalmente vitales o
más importantes.

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Clasificación de los ANTIOXIDANTES
Origen Acción
1. Exógenos
Vitamina E - Neutraliza el oxígeno singlete

- Captura radicales libres hidroxilo
- Captura O2.-
- Neutraliza peróxidos
Vitamina C - Neutraliza el oxígeno singlete

- Captura radicales libres de hidroxilo
- Captura O2.-
- Regenera la forma oxidada de la vitamina E
Betacarotenos Neutraliza el oxígeno singlete

Flavonoides, Licopenos
2. Endógenos
Enzimáticos Cofactor
Superóxido dismutasa (SOD) Cobre, zinc, manganeso
Catalasa (CAT) Hierro
Glutatión peroxidasa (GPx) Selenio
No enzimáticos
Glutatión Barreras fisiológicas que enfrenta el oxígeno a su
paso desde el Coenzima Q hasta las células

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Sistemas de defensa antioxidante:
Existen 5 niveles de defensa antioxidante.
PRIMER NIVEL:
Consiste en evitar la reducción

univalente del O2 mediante sistemas
enzimáticos capaces de efectuar la
reducción tetravalente consecutiva
sin liberar los intermediarios
parcialmente reducidos. Esto se logra
con la Citocromo Oxidasa.

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SEGUNDO NIVEL:
Enzimas especializadas en captar el radical anión superóxido (O 2.-).
Superóxido Dismutasa (SOD)
SOD
2 O2.- + 2 H+ H 2 O2 + O 2
Puede ser dimérica o tetramérica. Se conocen tres formas

de SOD según el metal que utilizan como cofactor: CuZn-
SOD, Mn-SOD y Fe-SOD.

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TERCER NIVEL:
Enzimas que neutralizan el peróxido de hidrógeno. Entre ellas está

la Catalasa, que se encuentra en los peroxisomas y que catalizan la
reacción de dismutación siguiente:
Catalasa (CAT)
CAT
2 H2O2 2 H 2O + O2
Es tetramérica y contiene un núcleo de hierro como
grupo hemo unido a cada cadena polipeptídica.

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TERCER NIVEL:
Enzimas que neutralizan el peróxido de hidrógeno. Entre ellas está

la Glutatión Peroxidasa que catalizan la siguiente reacción:
Glutatión Peroxidasa (GPX)
GPX
H2O2 + 2 GSH GSSG + 2 H2O
Es tetramérica, cada unidad contiene un residuo de

selenocisteína. Se conocen 5 isoenzimas: GPX citosólica ó
mitocondrial (GPX1), GPX2 citosólica (o GPX-G1) y la GPX3
extracelular (o GPX-P), la GPX4 (PHGPX o fosfolípido
hidroperóxido GPX), GPX5, que es independiente de selenio.

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TERCER NIVEL:
La Glutatión Peroxidasa (GPX) también

puede neutralizar hidroperóxidos lipídicos.
GPX
ROOH + 2 GSH ROH + GSSG + H2O
GR
Hidroperóxido Alcoxilo del
lipídico ácido graso
La molécula de glutatión oxidada (GSSG) es

regenerada a la forma reducida (GSH) en otra
reacción catalizada por la enzima Glutatión
Reductasa (GR).

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TERCER NIVEL:

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INTEGRACIÓN DEL SEGUNDO/TERCER NIVEL:

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IMPORTANCIA DEL GLUTATIÓN:

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IMPORTANCIA DEL GLUTATIÓN:
GSH en diabetes

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PAPEL DE LOS MINERALES EN LAS ENZIMAS ANTIOXIDANTES:
Los minerales actúan como cofactores enzimáticos, participando

activamente en reacciones de oxido-reducción.
En la Superóxido dismutasa: En la Catalasa:
Mn3+ + O2•- → Mn2+ + O2 H2O2 + Fe(III)-E → H2O + O=Fe(IV)-E
Mn2+ + O2•- + 2H+ → Mn3+ + H2O2 H2O2 + O=Fe(IV)-E → H2O + Fe(III)-E + O2

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CUARTO NIVEL:
El radical libre puede ser

neutralizado por la vitamina E o
alfa-tocoferol, un antioxidante Alfa-Tocoferol
(vitamina E)
efectivo que por su hidrofobicidad
se encuentra en las membranas
biológicas donde su protección es
particularmente importante.
Radical libre Tocoferoxilo

Alfa-Tocoferol (vitamina E oxidada)
(vitamina E)

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CUARTO NIVEL:
La vitamina C o ácido
ascórbico es un agente
reductor o donador de Ácido Dehidroascorbato
electrones y puede Ascórbico
(Vitamina C)
(Vitamina C oxidada)
reacciona rápidamente
con el radical libre.
Dehidroascorbato reductasa
2
Ácido ascórbico (Glutatión oxidado) (Glutatión reducido)
(Vitamina C)

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CUARTO NIVEL:
La vitamina C también permite la regeneración de la vitamina E.
(Glutatión reducido)
Vitamina C 2 GSH
Alfa-Tocoferol (oxidada)
(vitamina E)
Vitamina C
(reducida) GSSG
(Glutatión oxidado)
Radical libre Tocoferoxilo

(vitamina E oxidada)

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CUARTO NIVEL:
Radical peroxilo

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QUINTO NIVEL:
Una vez producido el daño molecular,

existe un quinto nivel de defensa que Fosfolipasa A2
consiste en la REPARACIÓN. Los RL
pueden inducir mutagénesis, pero
existen mecanismos enzimáticos de
reparación del DNA que permiten
restablecer la información genética. PUFA
También los PUFAs peroxidados peroxidado
pueden ser eliminados para reparar
los fosfolípidos lesionados.

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Los antioxidantes en los alimentos:
Los antioxidantes más importantes son:
La Vitamina C
Los Beta-carotenos
Los flavonoides
La Vitamina E
El selenio
El cobre
El cinc
El manganeso

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ESTRÉS OXIDATIVO
El desbalance entre la producción

de EROS y la defensa antioxidante
provoca un daño orgánico conocido
como ESTRÉS OXIDATIVO, que
lleva a una variedad de cambios
fisiológicos y bioquímicos los
cuales ocasionan el deterioro y
muerte celular.
Antioxidantes Prooxidantes

y Antioxidantes
ESTRÉS OXIDATIVO BIOMOLÉCULAS MÉTODOS
El estrés oxidativo se puede Lípidos Quimioluminiscencia

medir mediante Métodos MDA (malondialdehído)
Directos e Indirectos. Dienos conjugados
Peróxidos
Pentano, etano
Proteínas Compuestos carbonilos

Grupos sulfhidrilos
Fragmentación de proteínas
Actividad de enzimas
Grupo aminos libres
ADN Bases modificadas (8-OxoG)

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¿Qué es un Radical Libre ?

Prof. Alfonso R. Bravo Henríquez. 2014.

¡ No confundir un Radical con un Ión !

Prof. Alfonso R. Bravo Henríquez. 2014.

Prof. Alfonso R. Bravo Henríquez. 2014.

O2 + 4H+ + 4e- → 2H2O

Prof. Alfonso R. Bravo Henríquez. 2014.

Prof. Alfonso R. Bravo Henríquez. 2014.

Células Xantina oxidasa, Hemo

Prof. Alfonso R. Bravo Henríquez. 2014.

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La sangre cumple la función de

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Prof. Alfonso R. Bravo Henríquez. 2014.

Fuentes Endógenas Fuentes Exógenas

Cadena respiratoria Alimentos

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Reacción del Citocromo P450

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Metabolito Aductos estables

Eliminación renal Eliminación biliar

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En los procesos inflamatorios están

NADPH oxidasa y Mieloperoxidasa (MPO) Ácido Oxígeno

Anión Peróxido de Radical

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Peroxidación lipídica Modificación de las bases del ADN Daño a proteínas

Prof. Alfonso R. Bravo Henríquez. 2014.

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Células musculares lisas

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H2O2 HO• + OH-

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Glioxal y metilglioxal son

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Bases Nitrogenadas Azúcares

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L-arginina L-hidroxi-arginina L-citrulina