UNIVERSIDAD TÉCNICA FEDERICO SANTA MARÍA

DEPARTAMENTO DE QUÍMICA
ANÁLISIS INSTRUMENTAL 2do Semestre 2018

10 de octubre
Experiencia
N°1 2018
Espectroscopía UV- Visible

Profesores Aníbal
Valenzuela
René Cortez
Integrantes Nicole Albornoz
Felipe Vergara
Bloque Miércoles 3-4
 Universidad Técnica Federico Santa María
Departamento de Química
Análisis Instrumental 2018-2. Campus San Joaquín

MEDICIONES OBTENIDAS

Muestra Problema M3

Tabla 1: Calibración de absorbancia para distintas concentraciones de glucosa

Concentración de glucosa [M] Absorbancia
0 0
0,001 0,049
0,002 0,162
0,004 0,302
0,008 0,320

Tabla 2: Absorbancia obtenida para cada réplica de la muestra

Análisis de muestra problema Absorbancia
Muestra (réplica 1) 0,105
Muestra (réplica 2) 0,136

RESULTADOS

a) Obtenga la regresión lineal de la calibración de la glucosa. Grafíquela y exprese el

coeficiente de correlación (r2)

0,4
Abs= 41,05C+ 0,0434
0,35 R² = 0,8075

0,3
Absorbancia [u.a]

0,25
0,2
0,15
0,1
0,05
0
0 0,002 0,004 0,006 0,008 0,01
Concentracion [M]

Gráfico N°1: Curva de calibración de absorbancia en función de la concentración de glucosa.

La curva de calibración obtenida con los datos del laboratorio es:

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donde c corresponde a la concentración molar de la solución, a la multiplicación del coeficiente

de absortividad junto con el paso óptico medido en .El coeficiente de correlación lineal para
estas mediciones fue de , valor que está bastante alejado de , por lo que se puede decir que
el experimento presentó una mala exactitud, debido probablemente a un error en la calibración del
instrumento lo que deriva de un error en los métodos del experimentador, de esto se puede decir que
la ley de Lambert-Beer no se cumple para estas condiciones.

b) Calcular el contenido de glucosa en la muestra fermentada, expresado como

concentración Molar y . Exprese los resultados con el límite de confianza
( confianza)

Para cuantificar la concentración de glucosa en la muestra fermentada se la debe interpolar con la

curva de calibrado estimada previamente de la siguiente manera.

Reemplazando:

Con las absorbancias medidas en la Tabla 2, se estimó la concentración de la muestra problema,

presentadas en la Tabla 3:

Tabla 3: Concentración de glucosa calculada para cada réplica del laboratorio

Análisis de muestra Absorbancia Concentración de
Concentración de Glucosa Glucosa
problema
Muestra (réplica 1)
Muestra (réplica 2)
Promedio

Luego calculando el límite de confianza al 95%, con dos datos se tiene:

√ √

Finalmente la concentración promedio de glucosa en la muestra problema queda expresada como

según los datos recopilados.

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c) Determine el porcentaje de error, desviación estándar, y desviación estándar relativa (CV).

Basado en los datos entregados en el laboratorio, la muestra problema contenía una concentración de
glucosa de . Con ello se logró estimar el porcentaje de error obtenido mediante:

| |

Este valor tan alto de error porcentual confirma un error en sistemática y una mala exactitud, por lo
que se puede concluir que el instrumento no estaba bien calibrado por lo que el valor obtenido para la
concentración experimental está muy lejos del valor Verdadero esperado.
Para mejorar estas mediciones se recomienda tener claros los pasos a seguir por los
experimentadores para así evitar errores porcentuales de este calibre.

La desviación estándar muestral de las estimaciones de concentración se determinó mediante la

función “desvest.m” en excel, debido a la cantidad de mediciones realizadas, cuyo valor fue de
. La desviación estándar relativa se calculó con la siguiente:

( ) ( )

Este resultado es sorpresivo, pues una desviación estándar tan alta, refleja que el instrumento de
medición es impreciso, y considerando que la experiencia está pensada por los profesores para que
el instrumento sea preciso. Se puede concluir que el instrumento de medición tal vez no se encontraba
en condiciones óptimas para trabajar, ya que, una mala precisión y una mala calibración es poco
frecuente y lo más recomendable es registrar todos los datos nuevamente, esperando tener una curva
de calibración más precisa y con ello concentraciones más cercanas al valor verdadero

De todas formas es recomendable que los experimentadores mejoren sus métodos de trabajo porque
no solo obtuvieron malos resultados, si no que se tuvo que trabajar con un dato de muestra problema
menos debido a los errores cometidos en el laboratorio.

d) En base a los espectros de absorción del reactivo DNS (ácido dinitrosalicílico) y del
producto de la reacción DNS-glucosa (ácido 3-amino,5- nitrosalicílico), explique en qué
rango de longitud de onda debe efectuarse la medición de absorbancia para
determinar Glucosa.

El rango de longitud de onda en el cual debe efectuarse la medición de la absorbancia de la glucosa

corresponde sobre los aproximadamente, ya que, el DNS al ser reducido por la glucosa
obtiene un color café-rojizo, los cuales se ubican en la región de espectro de UV-visible ubicada sobre
el rango anteriormente mencionado. Bajo este rango, la absorbancia corresponde únicamente al
DNS, el cual presenta un color amarillo, lo que se debe a que este absorbe antes de los .
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e) Explique y fundamente por qué debe efectuarse una reacción de la glucosa con el reactivo
DNS para este tipo de análisis.

Al momento de realizar un barrido de longitud de onda en el rango UV-vis a la glucosa, se puede

observar la falta de peaks de absorbancia. Entonces, una de las consecuencias que conlleva mezclar
DNS con la glucosa, es que el primero logra oxidar al segundo, lo cual genera que resultados
colorimétricos que logran la medición del espectro.

f) Considerando los espectros obtenidos de Glucosa y Vainillina, explique (en base a sus
estructuras químicas) las diferencias observadas.

Considerando la estructura molecular de ambas moléculas, se puede apreciar lo siguiente:

Figura n°1: estructura molecular de la vainillina Figura n°2: estructura molecular de la glucosa

Como se puede observar ambas estructuras presentan diferencias. La vainillina tiene estructura
aromática y grupos funcionales como el fenol, aldehído y éter. Por otro lado la glucosa tiene un grupo
aldehído y alcoholes.

Por otra parte, analizando el espectro UV-Vis de cada uno de estos compuestos:

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Figura n°3: espectros UV-visible de los compuestos glucosa y vainillina.

Se puede observar que la glucosa no posee peaks. Sin embargo, al hacerla reaccionar con DNS, esta
presenta un peak el cual la deja puesta en evidencia el grupo funcional que posee. Por otro lado, se
tiene que el espectro de la vainillina posee tres peaks, los cuales deja ver la presencia de los grupos
funcionales en su estructura.

f) Calcule el coeficiente de absortividad molar “Є”, para los compuestos asignados en el

laboratorio, a la(s) longitud de onda(s) indicada, y explique cada término de la Ley de
LambertBeer.

Se tiene que la muestra problema corresponde a la cafeína, la cual tiene un espectro que se presenta
a continuación:

Figura n°4: espectro de la cafeína con concentración 5[mg/L]

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Absorbancia.

Para calcular la absortividad, se tiene que la ley de LambertBeer establece la siguiente ecuación:

Donde:
Corresponde a la absorbancia, que es una unidad adimensional asociada a cuanta luz de una
cierta longitud de onda absorbe una muestra al ser atravesada por esta radiación.
: Coeficiente de absortividad molar, define cuan fuerte una muestra absorbe la luz por unidad de
concentración molar. Sus unidades son
: Concentración molar de la muestra en
: Longitud del paso óptico, es la anchura en de la celda que contiene la muestra.

Para poder realizar el cálculo de la absorbancia, primero se debe tener la concentración con las
unidades apropiadas. Entonces haciendo un cambio de unidades se tiene que:
[ ] [ ] [ ]

Reemplazando en (3) los datos, de concentración, coeficiente de absotividad molar y longitud de paso
óptico, se tiene:

REFERENCIAS

1. “Análisis Instrumental”; Skoog, Holler y Nieman, 5a edición; Capítulos 13 y 14.

2. “Métodos Instrumentales de Análisis”; Willard, Hobart H.; Merritt, Lynne L (Jr); Dean, John A.;
Settle, Frank A. (Jr)

3. Material de cátedra “Introducción – Estadísticas de Resultados Analíticos”; Aníbal Valenzuela,

Aulas USM, [en línea], revisado el 02-04-2018

4. Material de cátedra “Espectroscopía UV-Visible”; Aníbal Valenzuela, Aulas USM, [en línea],
revisado el 02-04-2018