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INSTRUCTIVO
DETERMINACIÓN DE BORO TOTAL EN TEJIDO VEGETAL Cód.

GRUPO INTERNO DE TRABAJO LABORATORIO NACIONAL DE

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SUELOS

TABLA DE CONTENIDO

No. de pág.

1. OBJETIVO Y ALCANCE 1

2. GLOSARIO 1

3. NORMAS DE PROCEDIMIENTO, LINEAMIENTOS O POLÍTICAS DE OPERACIÓN 2

3.1. GENERALES 2

3.2. ESPECÍFICAS DEL MÉTODO 3

3.3. PUNTOS DE CONTROL 3

4. CARACTERISTICAS 4

5. INSUMOS 5

6. PROCEDIMIENTO – OPERACIÓN 6

6.1. ETAPA DE EXTRACCIÓN 6

6.2. ETAPA DE CUANTIFICACIÓN 7

6.3. CÁLCULOS 10

7. IDENTIFICACIÓN DE CAMBIOS 10
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1. OBJETIVO Y ALCANCE

Definir los pasos a seguir en la determinación del boro total en tejido vegetal digestión ácida vía
microondas y cuantificación mediante espectrofotometría en el rango visible, así como los reactivos,
equipos y materiales que se deben utilizar y los controles de calidad involucrados en las diferentes
etapas de la determinación analítica.

El presente instructivo aplica para los servidores públicos del Grupo Interno de Trabajo (GIT)
Laboratorio Nacional de Suelos, de la Subdirección de Agrología del Instituto Geográfico Agustín

2. GLOSARIO

Blanco de proceso Muestra que no contiene el analito a cuantificar; se obtiene al adicionar los
mismos reactivos, someter a los mismos procedimientos de extracción y
cuantificación de la muestra a investigar. Su finalidad es la de cuantificar las
posibles contaminaciones que pueden ser generadas por los procesos a los
que se somete la muestra.
Blanco de reactivo Solución de calibración preparada con la misma matriz de la muestra, que no
contiene el analito a cuantificar. Se utiliza en la construcción de la curva de
calibración al momento de fijar el punto cero de la curva.
Espectrofotómetro Instrumento analítico utilizado para cuantificar la concentración de una
sustancia, de acuerdo con la intensidad del color desarrollado por la misma al
reaccionar con otras. La intensidad del color medida a una longitud de onda
determinada, está directamente relacionada con la concentración del analito
presente en la solución

Floema Tejido conductor encargado del transporte de nutrientes orgánicos e

inorgánicos – especialmente azúcares---- producidos por la parte aérea
fotosintética y autótrofa, hacia las partes basales subterráneas n no
fotosintéticas.
Muestra control Muestra para Control Analítico del Laboratorio de Suelos (CALS), desarrollada
(CALS) en el LNS mediante el análisis de sus propiedades, cuyos valores son
conocidos previamente por los analistas y el responsable del área de trabajo.
Permiten controlar la precisión de la determinación analítica y se utilizan para
rechazar o aceptar tandas de análisis.
Muestra Duplicado Muestra que forma parte de una tanda de análisis y que se coloca dos veces,
dentro de la frecuencia de análisis, para verificar la reproducibilidad interna de
los resultados de una determinación analítica.
Solución control Solución preparada con idénticas condiciones a la solución de calibración, con
concentración y absorbancia conocidas; debido a que su concentración es de
rango intermedio, se utiliza para verificar la precisión y exactitud de la curva de
calibración.
Solución de Se prepara a partir de una solución patrón estándar; se utiliza para construir la
calibración curva de calibración o curva patrón.
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Suelo Sistema natural desarrollado a partir de una mezcla de minerales y restos

orgánicos bajo la influencia del clima y del medio biológico; se diferencia en
horizontes y suministra, en parte, los nutrimentos y el sostén que necesitan las
plantas, al contener cantidades apropiadas de aire y agua.

Xilema Es un tejido vegetal lignificado de conducción que transporta líquidos de una

parte a otra de las plantas vasculares, Transporta agua, sales minerales y
otros nutrientes desde la raíz hasta las hojas de las plantas.

3. NORMAS DE PROCEDIMIENTO, LINEAMIENTOS O POLÍTICAS DE OPERACIÓN

3.1.GENERALES
° Todos los funcionarios y contratistas que intervienen en el proceso deben cumplir con las
precauciones y medidas de seguridad descritas en el instructivo vigente I40600-01 “Medidas de
seguridad en la ejecución de análisis”.
° Revisar que el material se encuentre perfectamente limpio y seco. (conforme el instructivo vigente
I40600-07 “Limpieza de áreas de trabajo y material de laboratorio”).
° Todo formato debe diligenciarse en esfero o tinta indeleble.
° Pesar y manipular el suelo utilizando guantes de nitrilo y respiradores para material particulado.
° Verificar mediante los registros que los controles de calidad se cumplan dentro del proceso.
° Corregir cada una de las muestras de suelos por porcentaje de humedad (pW) teniendo en cuenta
los datos consignados en el registro vigente F40601-48 Captura de datos – Humedad.
° Realizar la etapa de pesaje de la muestra en el cuarto de balanzas y la extracción se realiza en la
mesa designada para evitar la contaminación de las muestras
° Dejar la balanza limpia y en las condiciones que la encontró.
° La bolsa que contiene la muestra no debe ser extraída de la caja marcada, para evitar que la
muestra pierda su identidad.
° Todo el análisis es efectuado bajo condiciones ambientales de temperatura y humedad relativa
monitoreadas y con el tipo requerido de agua para la correcta ejecución del método.
° Los periodos de retención de los registros serán los que se determinen en las tablas de retención
documental-TRD vigentes.
° Los elementos de control interno se deben utilizar de acuerdo con las siguientes especificaciones
de secuencia, según el número de muestras a analizar en las tandas:
- Tandas 50 muestras: B1 MC (CALS) M 1-20* B2 MC (CALS) M21-40* B3 MC (CALS) D 1-20 M41-50*
B4 MC (CALS)
- Tandas 40 muestras: B1 MC (CALS) M1-20* B2 MC (CALS) M21-40* B3 MC (CALS) D1-20
- Tandas menores de 40 y mayores de 5 muestras: mantener la relación de los elementos de
control interno al inicio, en el intermedio y al final, según el número de muestras de la tanda.
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- Tandas iguales o menores de 5 muestras: elementos de control interno al comienzo y al final

de la tanda
Donde:
B1 = Blanco de proceso 1
B2 = Blanco de proceso 2
B3 = Blanco de proceso 3
B4 = Blanco de proceso 4
MC (CALS) = Muestras de suelo para control interno
M = Muestras problema a analizar
D = Duplicado de una de las muestras según el rango que muestra el subíndice.
° La selección de la muestra duplicado la realizará el personal del área de preparación (para
garantizar una selección objetiva) y la incluirá en la tanda con el número de laboratorio y la letra D,
ubicándola al final de la secuencia.
° Las indicaciones dadas en el presente instructivo pueden sufrir ajustes con el fin de permitir
disponer la información en el Módulo de Laboratorio del Sistema de Información de la Gestión
Agrológica- SIGA.
° Asegurar que los equipos a utilizar se encuentren en condiciones normales de operación y
cumplan con la verificación e identificación.

3.2.ESPECÍFICAS DEL MÉTODO

° En el momento de tomar los dos mililitro del extracto, si se emplea micropipeta, purgar la punta.
° Revisar que las celdas no tengan rayones o manchas que afecten la lectura en el
espectrofotómetro y limpiar la superficie exterior de cada celda con papel de arroz para eliminar
rastros de partículas y huellas digitales.
° Para las muestras en las que sea necesario realizar dilución, efectuar su cuantificación
instrumental al final de la tanda.
° Verificar la calibración de la micropipeta y la vigencia de la curva de calibración.
° Verificar la lectura del blanco de reactivos a intervalos regulares con el fin de controlar la escala de
lectura del espectrofotómetro.
° Verificar mediante los registros que los controles de calidad se cumplen dentro del procedimiento.
° Utilizar el valor del blanco de proceso para corregir los resultados de las muestras de la tanda.
° Realizar periódicamente las copias de respaldo de la información relacionado con el proceso
conforme a los lineamientos dados por la oficina de Informática y telecomunicaciones.
° Los análisis se deben efectuar bajo condiciones de aireación, iluminación, servicios de agua
potable y desionizada, adecuados para la correcta ejecución del ensayo.

3.3.PUNTOS DE CONTROL

De conformidad con el Instructivo vigente I40600-04 “Aseguramiento de calidad de los procedimientos

analíticos”.
° Pesaje:
- Las balanzas deben estar calibradas y verificadas para realizar las respectivas mediciones.
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° Extracción
Los elementos de control (Blancos y duplicados) deben utilizarse de acuerdo a la secuencia y
numero de muestras según especificaciones.
Verificar el cumplimiento de parámetros de control del agua para análisis.
° Cuantificación
El material volumétrico utilizado debe estar calibrado y verificado.
La curva patrón debe estar vigente y el coeficiente de correlación de la curva patrón debe ser
igual o mayor a 0,9970.
Las soluciones control de y mg/L de boro deben estar vigentes y dentro del rango de
aceptación de las respectivas cartas control vigentes; si no lo están prepararlas de acuerdo
con el Instructivo vigente I40600-06 Preparación y control de reactivos y soluciones para
determinaciones analíticas.

4. CARACTERISTICAS

El presente instructivo está basado en el manual de métodos analíticos del Laboratorio Nacional de
Suelos año 2006.

° Principio del método.

El contenido de boro total en tejido vegetal, se determina después de la digestión de la muestra vía
microondas. Se lee el boro en el extracto por colorimetría usando el método de azometina _H y usar
un buffer de acetato de amonio para llevar el pH del extracto entre 4.9 y 5.1. A este pH la azometina_H
y el boro en solución forman un complejo estable, el cual es un color amarillo.
En medio acuoso, los iones borato y la Azometina-H reaccionan reversiblemente formando un
compuesto quelato de color amarillo. La reacción depende del pH del medio y es máxima a pH 5,20.
Para ajustar el pH se utiliza una solución enmascaradora tampón compuesta de ácido acético, acetato
de amonio y EDTA-Na2.
La determinación espectrofotométrica de Boro es a través de la formación de un complejo coloreado
con Azometina-H.
° Importancia
El boro es absorbido por las plantas principalmente bajo la forma de ácido bórico H 3 BO3 no disociado,
fundamentalmente mediante los mecanismos de flujo de masas. Aunque parece que en alguna
extensión se absorbe de forma activa como anión borato B(OH) 4, el proceso de absorción es
inicialmente pasivo (por difusión en el espacio libre), seguido después de una absorción activa en el
espacio interno.
El boro es relativamente poco móvil en el interior de las plantas y los contenidos son superiores en las
basales respecto a las partes más altas de las plantas, especialmente si el boro está en exceso. El
ritmo de transpiración ejerce una influencia decisiva sobre el trasporte de este elemento hasta las
partes altas de la planta, en caso de deficiencia, los contenidos en los tejidos más jóvenes decrecen
rápidamente. Se admite que, más que un elemento móvil o inmóvil en el interior de la planta, el boro
es transportado vía xilema, pero se retransporta con dificultad vía floema.
La acumulación del boro en la hoja depende del contenido del suelo en boro asimilable, del flujo de
savia en el xilema y del ritmo de transpiración.
° Interferencias
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° Referencias
Gaines, T.P. y Mitchell, G.A. 1979: Boron determination in plant tissue by the azomethine H
method. Comm, in Soil Sci , and Plant Anal , 10 1099-1108.
ICA, Manual de asistencia Técnica No 47., 1989 El análisis de suelos, plantas y aguas para
riego pp 96-98.
Métodos analíticos del Laboratorio de Suelos, 2006 pp 258-261.

5. INSUMOS
Equipos
° Espectrofotómetro rango visible.
° Cabina de extracción.
° Micropipeta de 1 y de 5 mL.
Materiales
° Suelo seco al aire y tamizado por 2 mm y /o tejido vegetal seco a 70°C y tamizado por 1 mm.
° Balón de 50 mL.
° Tubos plásticos de 10 ml.
° Gradilla.
° Celdas de vidrio para espectrofotómetro.
° Papel de arroz.
° Bandeja.

Reactivos

De conformidad con el Instructivo vigente I40600-04 “Aseguramiento de calidad de los procedimientos

analíticos”.
° Acetato de amonio R.A.
° Ácido acético R.A.
° Sal disódica de etilenediaminetetra acético (EDTA) R.A.
° Ácido Tioglicólico R.A.
° Cloruro de bario al 10%.
° Solución buffer.
° Azometina- H.
° Solución estándar de boro de 50 mg/L
° Solución patrón de boro de: 0.0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.6, 0.8 y 1.0 mg/L de boro, con vigencia de 6
meses o cuando se requiera por un procedimiento de control de calidad.
° Soluciones control de la curvas de calibración de 0,2 y 0,6 mg/L de boro.

6. PROCEDIMIENTO – OPERACIÓN

6.1.ETAPA DE DIGESTIÓN
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Analista
1. Proceda de acuerdo al instructivo XXXXX DETERMINACIÓN DE LA DIGESTIÓN ÁCIDA EN
MATRICES DE SUELO Y TEJIDO VEGETAL VÍA MICROONDA.

6.2.ETAPA DE CUANTIFICACIÓN
Analista
2. Enciende el espectrofotómetro y ajusta las condiciones instrumentales de análisis, verifica que las
curvas de bajas y altas se encuentren vigentes, en caso de que la curva de calibración se haya
vencido la realiza nuevamente.

3. Comprueba la vigencia de las soluciones control, si se encuentran vencidas las elimina (Ver
Instructivo I40600-08 “Manejo de residuos analíticos”) y las prepara nuevamente.

4. Toma de la muestra control (CALS), de las soluciones control de la curva, del blanco de proceso y
de las muestras 2 ml y los coloca en los tubos de ensayo de 50 ml de capacidad.

5. Adiciona 18 ml de la solución B, agita y deja en reposo 15 minutos.

6. Después de 15 minutos, transvasa las muestras a las celdas de colorimetría, ajusta el 100%
(absorbancia) con agua destilada a 634 nm.

7. Realiza la lectura de la concentración de las soluciones control y verifica que se encuentren dentro
del rango de aceptación, si cumplen continúa con el paso 24; si no cumplen continúa con el paso 1
para las muestras y las soluciones control de acuerdo con el Instructivo vigente I40600-06
“Preparación y control de reactivos y soluciones para determinaciones analíticas”; registra los
valores en el formato vigente F40600-14 Carta control de análisis, diseñado para cada uno de
estos controles.

8. Realiza la lectura de las muestras control (CALS) y los blancos de proceso y registra los valores
en el formato vigente F40601-50 Captura de datos - Cuantificación por espectrofotometría (rango
visible).

9. Resta el valor promedio de los blancos de proceso en las lecturas de las muestras control y lo
registra en la columna lectura corregida del formato vigente F40601-56 Captura de datos –
Cuantificación por espectrofotometría (rango visible).

10. Verifica si la lectura corregida de las muestras control (CALS) está dentro del rango de variación
admitido en el formato vigente F40600-16 Rangos de variación de lectura admitidos para los
procedimientos analíticos. Si lo está, siga con el paso 28; si no siga con el paso 27.

11. Cuando alguno de los valores de lectura de las muestras control no está(n) dentro del rango de
variación establecido, le comunica inmediatamente al coordinador técnico para aplicar medidas
correctivas, que cuando apliquen incluyen la realización de repeticiones a partir del paso 1.

12. A los 2mL del extracto de cada una de las muestras y el duplicado les aplica los pasos 21 a 23
descritos para las muestras control.

13. Apaga el equipo y anota la hora en el formato vigente F40600-07 de Control de operación,
comprobación y mantenimiento rutinario de equipos y dispone de los residuos generados en el
análisis para su eliminación (Ver Instructivo vigente I40600-08 de Manejo de residuos analíticos).
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14. Dispone los residuos producto de la cuantificación (Ver Instructivo I40600-08 “Manejo de residuos
analíticos”) y realiza prelavado del material.

15. Entrega los registros de datos y las cartas control al responsable técnico del área para evaluación
de cumplimiento de criterios de conformidad con lo descrito en el formato vigente F40601-63
Revisión y seguimiento de parámetros de control interno - análisis suelos y posterior verificación
de coherencia y correlación de resultados.

Responsable de Análisis
El coordinador técnico recibe los registros de datos y las cartas control y aplica lo establecido para la
revisión y aprobación de la calidad del dato analítico.

Si los datos analíticos de una o más muestras de la tanda no correlacionan con los resultados de otras
determinaciones analíticas o son dudosas, ordena al analista la repetición a partir del paso 1.
Coordinador de Laboratorio

Revisa y aprueba los resultados y entrega los registros para digitación de acuerdo con las pautas
establecidas en el Manual de procedimiento vigente P40600-07 Análisis de muestras en el laboratorio
nacional de suelos.

6.3 CÁLCULOS

 Realiza los cálculos

Utiliza los datos de humedad del suelo

P mg/Kg = (Lm - Lb) x fd x vf x(100 +pw)

-------------------------------------------
Pesos de muestra en gramos (g)

7.Donde: IDENTIFICACIÓN DE CAMBIOS

P=VERSIÓN CAPITULO
Fósforo total DESCRIPCIÓN FECHA
Lm = 1Lectura muestra
1
Lb= Lectura blanco de proceso
Vf = Volumen final2
pW = factor de corrección
3 por
humedad de la muestra.
(g) = gramos

5 .

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REALIZÓ SUBDIRECCIÓN DE AGROLOGÍA Martha Lucía Carrascal

REVISÓ METODOLÓGICAMENTE OFICINA

ASESORA DE PLANEACIÓN

VERIFICÓ TÉCNICAMENTE, VALIDÓ Y APROBÓ

SUBDIRECCIÓN DE AGROLOGÍA

OFICIALIZÓ OFICINA ASESORA DE PLANEACIÓN