Pruebas bioquímicas primarias: Tinción

de GRAM, prueba de catalasa, prueba

de oxidasa, prueba de O/F y motilidad.
Las pruebas bioquímicas primarias son usadas para determinar el género
de la mayoria de las bacterias. Actualizado: 2015

1. Tinción de GRAM.
2. Prueba de catalasa.
3. Prueba de oxidasa.
4. Prueba de oxidación/fermentación conocida como OF.
5. Motilidad.
NOTA: P A R A I D E N T I F I C A R E L G É N E R O D E L A S E N T E R O B A C T E R I A S SE
USAN OTRAS PRUEBAS B IOQUIMICAS LLAMADAS IMVIC QUE SE
COMPONE DE CUATRO PRUEBAS: INDOL, ROJO DE METILO, VOGES-
PROSKAUER Y CITRATO.

Reactivos usados en la tinción de Gram.

 Agua estéril para realizar el frotis.
 Cristal violeta también conocido como violeta de genciana.
 Safranina.
 Una mezcla de alcohol-acetona 1:1.
 Agua corriente para enjuagar.
Técnica de la tinción de Gram.
De preferencia la tinción debe ser realizada sobre un recipiente para que
los desechos sean desechados adecuadamente.

Frotis bacteriano.
1. Con la ayuda de un mechero, flamear un asa bacteriológica hasta el rojo
vivo y esperar a que enfríe un poco.
2. Tomar con el asa una gota de agua estéril y agregarla en un portaobjetos.
3. Flamear nuevamente el asa y esperar a que enfríe.
4. Tomar con el asa un poco de muestra bacteriana a partir de una colonia
aislada.
5. Después agregar la muestra en la gota de agua que esta en el portaobjetos
y homogeneizar suavemente con movimientos circulares.
6. Esperar que seque al aire libre o poner durante uno o dos segundos con la
llama de un mechero para fijar la muestra, teniendo en cuenta que el calor
 no debe ser directo (sólo se pasa por la llama), puesto que el calor excesivo
puede cambiar la morfología celular de las bacterias a observar.
Tinción.
1. Agregar cristal violeta, solo el suficiente para que se cubra el extendido
bacteriano.
dejar actuar durante 60 segundos.
2. Agregar el lugol, solo el suficiente, dejar actuar durante 60 segundos.
3. Enjuagar con agua corriente.
4. Agregar una o dos gotas de alcohol-acetona e inmediatamente enjuagar
con agua corriente.
5. Agrgar Safranina, solo la suficiente, Dejar actuar durante 60 segundos.
6. Enjuagar con agua corriente.
7. Dejar secar a temperatura ambiente.
8. Observar en un microscopio óptico con un objetivo 100X usando aceite
de inmersión.

Resumen de los pasos de la

tinción de Gram. Bacilos Gram positivos

Bacilos Gram negativos