Guia Solucion de Problemas HPLC - SP PDF

HPLC
GUÍA PARA LA SOLUCIÓN DE

PROBLEMAS
www.phenomenex.com
COMUNÍQUESE CON PHENOMENEX PARA:
n Columnas HPLC/UHPLC (capilares a preparativas)

n Columnas de SEC: acuosas (GFC) y no acuosas (GPC)
n Análisis de aminoácidos
n Columnas de SFC
n Columnas de HPLC específicas para el análisis de:
n Fármacos básicos, ácidos y anfotéricos
n Separaciones con pH alto/bajo (pH 1-12)

n Proteínas y péptidos por fase reversa
n Biopolímeros: proteínas y ácidos nucleicos por GFC/SEC
n Polímeros sintéticos
n Alimentos y bebidas
n Muestras medioambientales
n Fármacos en fluidos biológicos
n Rellenos a granel para HPLC
n Accesorios para HPLC, tales como:
n Filtros para muestras y disolventes
n Precolumnas SecurityGuard™ Standard

n Filtros de jeringa
n Jeringas y viales
n Horno de columnas
n Válvulas de inyección para HPLC
n Tubos y fittings
n Columnas de GC
n Accesorios para GC
n Productos para la Preparación de Muestras
(SPE, SLE, precipitación de proteínas, filtros)
n Soporte para validación y desarrollo de aplicaciones
n Servicio técnico adicional
2 Phenomenex l WEB: www.phenomenex.com

ÍNDICE
I. Introducción...................................................................................... 4
II. Presión anómala............................................................................... 5
III. Fugas................................................................................................ 7
IV. Problemas con el cromatograma..................................................... 9
V. Problemas con el inyector.............................................................. 17
VI. Problemas detectados por olfato, vista u oído............................... 18
VII. Principales zonas de problemas y mantenimiento preventivo....... 20
Proteja su columna de HPLC....................................................................... 22
Filtración sencilla previa a la cromatografía................................................. 23
© 2017 Phenomenex, Inc. Todos los derechos reservados.

No se puede copiar ninguna parte de este folleto sin el consentimiento previo por
escrito de Phenomenex, Inc. USA.
Aunque se ha hecho todo lo posible para garantizar la exactitud de la información
contenida en esta guía, Phenomenex no asume ninguna responsabilidad por su uso.
Aceptamos correcciones o adiciones para incorporarlas en próximas ediciones.
3
I. INTRODUCCIÓN
LOCALIZACIÓN Y CORRECCIÓN DEL PROBLEMA
Para solucionar posibles problemas en su sistema de HPLC, el mejor método es
un enfoque sistemático. Esta guía se organiza en cinco categorías principales de
síntomas para ayudarle a identificar el origen del problema que está teniendo:
• anomalías de presión
• fugas
• problemas con el cromatograma
• problemas con el inyector
• otros problemas detectados por olfato, vista u oído
Una vez corregido el problema, registre el incidente en el libro de registros del
sistema para futuras referencias.
PREVENCIÓN
Muchos problemas de LC se pueden prevenir con un mantenimiento rutinario
preventivo. Por ejemplo, cambiar periódicamente las juntas de la bomba
eliminará los fallos de estanqueidad y sus problemas asociados. En la sección
VII se enumeran las zonas de fugas más habituales para cada módulo de LC y
los procedimientos de mantenimiento preventivo que reducirán su frecuencia.
Estas sugerencias deben modificarse para adaptarlas a su modelo específico de
LC y, después, incorporarse a la rutina habitual del laboratorio.
DÓNDE OBTENER MÁS AYUDA

• Phenomenex cuenta con asesores técnicos experimentados que pueden
ayudarle con casi cualquier problema. Se puede comunicar por teléfono,
fax o correo electrónico.
• Debe consultar los manuales del usuario y de servicio del instrumento.
Contienen diagramas detallados, procedimientos para solucionar
problemas de modelos específicos y los números de referencia que
necesita para pedir los recambios.
• Quizás otras personas del laboratorio ya hayan tenido que resolver el
mismo problema que está teniendo; pueden ser un recurso útil.
• El fabricante del instrumento puede ayudarle. La mayoría de los fabricantes
de productos de LC ofrecen soporte técnico gratuito a sus clientes.
• Phenomenex ofrece seminarios sobre HPLC.
• Existen varias fuentes de referencia donde encontrará orientación para
solucionar problemas:
J.W. Dolan and L.R. Snyder, Troubleshooting LC Systems, Humana Press,
NJ (1989).
L.R. Snyder and J.J. Kirkland, Introduction to Modern Liquid
Chromatography,
2nd ed., Wiley, NY (1979).
D.J. Runser, Maintaining and Troubleshooting HPLC Systems - A User’s
Guide, Wiley, NY (1981).
J.W. Dolan, “LC Troubleshooting”, LC/GC Magazine. Esta es una columna
mensual.
4
II. PRESIÓN ANÓMALA
Un cambio en la presión de trabajo es señal de un posible problema. Entre las
siguientes categorías, elija la que más se aproxime a los síntomas que observa y
siga las sugerencias para corregir el problema.
A. Sin lectura de presión, sin flujo

POSIBLE CAUSA SOLUCIÓN
1. Equipo apagado 1. Encenderlo
2. Fusible fundido 2. Cambiar el fusible
3. Fallo del controlador o de su 3. a. Comprobar que la configuración
configuración sea correcta
b. Reparar o cambiar el controlador
4. Pistón roto 4. Cambiar el pistón
5. Aire en el cabezal de la bomba 5. Desgasificar los disolventes; purgar
la bomba, cebar la bomba
6. Fase móvil insuficiente 6. a. Rellenar el depósito
b. Cambiar la frita de entrada si
está obstruida
7. Válvulas check en mal estado 7. Cambiar las válvulas check
8. Fuga grande 8. Apretar o cambiar los fittings
B. Sin lectura de presión, flujo normal

1. Medidor en mal estado 1. Cambiar el medidor
2. Transductor de presión en mal estado 2. Cambiar el transductor
C. Alta presión constante

1. Flujo demasiado alto 1. Ajustar la configuración
2. Frita de la columna obstruida 2. a. Limpiar la columna en sentido inverso
(si está permitido)
b. Cambiar la frita* (no recomendable)
c. Cambiar la columna
3. Fase móvil inadecuada; 3. a. Utilizar la fase móvil correcta
solución buffer precipitada b. Lavar la columna
4. Columna inadecuada 4. Utilizar la columna adecuada
5. Inyector bloqueado 5. Eliminar la obstrucción o cambiar
el inyector
6. Temperatura de la columna 6. Incrementar la temperatura
demasiado baja
7. Funcionamiento incorrecto del 7. Reparar o cambiar el controlador
controlador
8. Precolumna obstruida 8. Retirar o cambiar la precolumna
9. Filtro en línea obstruido 9. Retirar o cambiar el filtro en línea
* Compruebe primero la garantía del fabricante de la columna.

La retirada de los fittings de conexión podría invalidar la garantía.
5
II. PRESIÓN ANÓMALA (cont.)
D. Baja presión constante

1. Flujo demasiado bajo 1. Ajustar el flujo
2. Fuga en el sistema 2. Buscar y corregir
3. Columna inadecuada 3. Utilizar la columna adecuada
4. Temperatura de la columna 4. Reducir la temperatura
demasiado alta
5. Funcionamiento incorrecto del 5. Reparar o cambiar el controlador
controlador
E. Aumento desmesurado de la presión

1. Consultar la sección C 1. Consultar la sección C
F. Caída de presión a cero

1. Consultar las secciones A y B 1. Consultar las secciones A y B
G. Caída de la presión, pero no a cero

1. Consultar la sección D 1. Consultar la sección D
H. Cambios de presión
1. Aire en la bomba 1. a. Desgasificar el disolvente
b. Purgar la bomba
2. Válvulas check en mal estado 2. Cambiar las válvulas check
3. Juntas de la bomba en mal estado 3. Cambiar las juntas de la bomba
4. Desgasificación insuficiente 1 a. Desgasificar el disolvente
b. Cambiar los métodos de
desgasificación
5. Fuga en el sistema 5. Buscar y corregir
6. Utilizar un método con gradiente 6. Los cambios de presión son normales y
se deben a los cambios de viscosidad
6
III. FUGAS
Las fugas normalmente se solucionan apretando o cambiando el fitting. Sin
embargo, tenga en cuenta que apretar en exceso los fittings de compresión
metálicos puede producir fugas, y que las piezas de plástico que se aprietan
manualmente pueden desgastarse. Si una fuga en un fitting no cesa al apretarlo
un poco, retire el fitting y observe si presenta daños (por ejemplo, férrula
deformada o partículas en la superficie de sellado); los fittings dañados deben
cambiarse.
A. Fittings que fugan

1. Fitting flojo 1. Apretar
2. Fitting rayado 2. Cambiar
3. Fitting excesivamente apretado* 3. a. Aflojar y volver a apretar
b. Cambiar
4. Fitting sucio 4. a. Desmontar y limpiar
b. Cambiar
5. Los recambios no coinciden 5. Utilizar todos los recambios del mismo
fabricante
B. Fugas en la bomba
1. Válvulas check sueltas 1. a. Apretar la válvula check
(no apretar demasiado)
b. Cambiar la válvula check
2. Fittings flojos 2. Apretar los fittings
(no excesivamente)
3. Juntas del mezclador en mal estado 3. a. Cambiar la junta del mezclador
b. Cambiar el mezclador
4. Juntas de la bomba en mal estado 4. Reparar o cambiar
5. Fallo del transductor de presión 5. Reparar o cambiar
6. Fallo del amortiguador de pulsaciones 6. Cambiar el amortiguador de pulsaciones
7. Fallo de la válvula dosificadora 7. a. Comprobar los diagramas; cambiar
en caso de fugas
b. Comprobar si hay daños en los
fittings; cambiar
8. Válvula de purga 8. a. Apretar la valvula
b. Cambiar la válvula de purga
* Use fittings de conexión que se aprieten manualmente para evitar problemas de sellado y la necesidad de utilizar llaves
7
III. FUGAS (cont.)
C. Fugas en el inyector
1. Juntas del rotor en mal estado 1. Volver a montar o cambiar el inyector
2. Loop obstruido 2. Cambiar el loop
3. Junta del puerto de inyección floja 3. Ajustar
4. Diámetro de la aguja de inyección 4. Utilizar la jeringa correcta
inadecuado
5. Sifón del conducto de residuos 5. Mantener el conducto de residuos por
encima de la superficie de los residuos
6. Obstrucción del conducto de residuos 6. Cambiar el conducto de residuos
D. Fugas en la columna
1. Fitting de conexión flojo 1. Apretar el fitting de conexión
2. Relleno de la columna en la férrula 2. Desmontar, limpiar la férrula y volver a
montar
3. Grosor de frita inadecuado 3. Utilizar la frita adecuada (consulte el
cuadro de debajo)
E. Fugas en el detector
1. Junta de la celda en mal estado 1. a. Evitar un exceso de presión
b. Cambiar la junta
2. Ventanas de la celda resquebrajadas o 2. Cambiar las ventanas
rayadas
3. Fugas en los fittings 3. Apretar o reemplazar
4. Conducto de residuos obstruido 4. Cambiar el conducto de residuos
5. Celda de flujo obstruida 5. Volver a montar o reemplazar
Guía de selección del tamaño de poro de la frita

CUANDO EL TAMAÑO DE PARTÍCULA EL TAMAÑO DE PORO
DEL RELLENO ES: DE LA FRITA DEBE SER:
2 - 4 µm 0.5 µm
5 - 20 µm 2 µm
8
IV. PROBLEMAS CON EL CROMATOGRAMA
Muchos problemas en el sistema de LC se manifiestan como cambios en
el cromatograma. Algunos de estos cambios se pueden solucionar realizando
cambios en el equipo; sin embargo, otros requieren modificar el método
analítico. Para una “buena cromatografía”, es fundamental seleccionar el tipo
de columna y la fase móvil apropiados.
A. Picos con cola (tailing)

1. Frita de entrada de la columna obstruida 1. a. Limpiar la columna en sentido inverso
(si está permitido)
b. Cambiar la frita de entrada*
c. Cambiar la columna
2. Columna con void o espacios vacios 2. Llenar espacios vacíos*
3. Otro pico coeluido 3. a. Utilizar una columna más larga
b. Cambiar la fase móvil y/o la
selectividad de la columna
4. pH de fase móvil incorrecto 4. Ajustar el pH. En compuestos básicos,
un pH menor suele proporcionar picos
más simétricos
5. Reacción de la muestra con sitios 5. a. Agregar un par iónico o un
activos modificador volátil básico
b. Cambiar la columna
Normal Problema
PICOS CON COLA (TAILING)
B. Picos con hombro

1. Baja temperatura 1. Aumentar la temperatura de la columna
2. Disolvente de muestra incorrecto 2. Utilizar fase móvil para el disolvente de
inyección
3. Sobrecarga de muestra 3. Reducir la concentración de la muestra
4. Columna incorrecta 4. Consultar A.1. y A.2.
C. Picos partidos
1. Contaminación en la entrada de la 1. Retirar la precolumna y reintentar
precolumna o de la columna analítica el análisis. Cambiar la precolumna
si es necesario

La retirada de los fittings de conexión podría invalidar la garantía.
continúa en la siguiente página
9
IV. PROBLEMS WITH THE CHROMATOGRAM (cont.)
C. Picos partidos (cont.)

Si la columna analítica está obstruida,
limpiar en sentido inverso. Si el problema
continúa, es posible que la columna
Normal Problema
se haya ensuciado con contaminantes
altamente retenidos. Utilizar el
procedimiento de limpieza apropiado. Si
el problema continúa, probablemente la
entrada esté bloqueada. Cambiar la frita
o la columna
PICOS PARTIDOS
2. Disolvente de la muestra incompatible 2. Cambiar el disolvente. Siempre que sea

con la fase móvil posible, disolver las muestras en fase
móvil
D. Distorsión de los últimos picos

1. Sobrecarga de muestra 1. Disminuir la cantidad de muestra
E. Distorsión de los primeros picos

1. Disolvente de inyección incorrecto 1. a. Reducir el volumen de inyección
b. Utilizar un disolvente de inyección
más débil
F. Los primeros picos con más colas (tailing) que los últimos
1. Efectos ajenos a la columna 1. a. Cambiar los tubos del sistema (tubos
más cortos y estrechos)
b. Utilizar una celda del detector de
menor volumen
G. Las colas aumentan a medida que aumenta el valor de k’

1. Interacciones secundarias, 1. a. Agregar trietilamina
en fase reversa (muestras básicas)
b. Agregar acetato (muestras ácidas)
c. Agregar sal o solución buffer
(muestras iónicas)
d. Probar con una columna diferente
2. Interacciones secundarias, 2. a. Agregar trietilamina
en fase normal (compuestos básicos)
b. Agregar ácido acético
(compuestos ácidos)

10
IV. PROBLEMAS CON EL CROMATOGRAMA (cont.)
G. Las colas aumentan a medida que aumenta el valor de k’ (cont.)

2. Interacciones secundarias, 2. c. Agregar agua (compuestos
en fase normal polifuncionales). Solo para métodos
de fase normal que utilizan
disolventes miscibles con agua.
d. Probar un método de LC diferente
3. Interacciones secundarias, par iónico 3. Agregar trietilamina (muestras básicas)
H. Colas (tailing) en picos ácidos o básicos

1. Buffer inadecuado 1. a. Utilizar una solución buffer con una
concentración de 50‑100 mM.
b. Utilizar una solución buffer con
pKa igual al pH de la fase móvil
I. Picos adicionales
1. Otros componentes de la muestra 1. Normal
2. Picos del análisis anterior que se 2. a. Aumentar el tiempo de análisis o la
retienen mucho pendiente del gradiente
b. Aumentar el flujo
3. Picos fantasma 3. a. Comprobar la pureza de la fase móvil
b. Utilizar fase móvil como disolvente
de inyección
c. Reducir el volumen de inyección
4. Contaminación 4. Filtrar la muestra
J. Cambios en el tiempo de retención

1. Control de la temperatura incorrecto 1. Termostatizar la columna

2. Cambios en la fase móvil 2. Prevenir los cambios (evaporación o
reacción, entre otros)
3. Equilibrado de la columna incorrecto 3. Dejar más tiempo para el equilibrado de
la columna entre análisis
K. Cambios bruscos en el tiempo de retención

1. Cambios en el flujo 1. Restablecer el flujo

2. Burbujas de aire en la bomba 2. Purgar la bomba
3. Fase móvil inadecuada 3. a. Cambiar por la fase móvil adecuada
b. Establecer la mezcla de fase móvil
adecuada en el controlador
11
L. Deriva de la línea base

1. Fluctuación de la temperatura de la 1. Controlar la temperatura de la
columna (Incluso pequeños cambios columna y de la fase móvil; utilizar
producen subidas y caídas cíclicas de la un intercambiador de calor antes del
línea base. En su mayoría, suelen afectar detector
a los detectores de índice de refracción
y de conductividad, o a los detectores Normal Problema
de UV en alta sensibilidad o en modo
fotométrico directo).
DERIVA DE LA LÍNEA BASE
2. Fase móvil no homogénea. (La deriva 2. Utilizar disolventes de calidad HPLC

suele deberse a una mayor absorbancia y sales y aditivos de gran pureza.
y no a un patrón cíclico debido a la Desgasificar la fase móvil antes de
fluctuación de la temperatura). utilizarla; utilizar Helio
3. Acumulación de contaminación o aire en 3. Purgar la celda con metanol u otro
la celda del detector disolvente fuerte. Si fuera necesario,
limpiar la celda con 1N HNO3
(nunca con HCI).
4. Tubo de salida bloqueado después del 4. Desconectar o reemplazar el tubo.
detector. (La alta presión resquebraja la Consultar el manual del detector para
ventana de la celda y produce líneas de reemplazar la ventana
base con ruido).
5. Problema de mezcla de la fase móvil o 5. Corregir la composición o el flujo. Para
cambios en el flujo evitarlo, monitorizar periódicamente la
composición y el flujo
6. Equilibrado insuficiente de la columna, 6. Lavar con un disolvente de fuerza media,
especialmente cuando cambia la fase pasar de 10 a 20 volúmenes de columna
móvil de una fase móvil nueva antes del
análisis
7. Fase móvil contaminada, deteriorada 7. Comprobar la composición de la fase
o preparada con materiales de baja móvil. Utilizar reactivos de gran pureza y
calidad disolventes de calidad HPLC
8. Los materiales muy retenidos en 8. Utilizar precolumna. Si fuera necesario,
la muestra (valor de k’ alto) pueden lavar la columna con un disolvente fuerte
eluirse como picos muy anchos y entre las inyecciones o periódicamente
parecer que son una línea base que se durante el análisis
eleva. (Los análisis en gradiente
pueden agravar el problema).
9. La fase móvil se ha reciclado pero el 9. Resetear la línea base. Utilizar una fase
detector no se ha ajustado móvil nueva cuando se sobrepase
el rango dinámico del detector
10. El detector (UV) no se ha seleccionado 10. Cambiar la longitud de onda al máximo
en el máximo de absorbancia sino en la de absorbancia UV
pendiente de la curva
continúa en la siguiente
12
M. Ruido en la línea base (normal)

1. Aire en la fase móvil, celda de detector o 1. Desgasificar la fase móvil. Purgar el
bomba sistema para eliminar el aire de la celda
del detector o de la bomba
2. Fuga 2. Consultar la sección III. Comprobar
si hay fittings flojos en el sistema.
Normal Comprobar si hay fugas, acumulación
Problema de sal o ruidos inusuales en la bomba.
Cambiar las juntas de la bomba si fuera
RUIDO EN LA LÍNEA BASE necesario
3. Deficiente mezcla de la fase móvil 3. Mezclar la fase móvil a mano o utilizar un
disolvente menos viscoso
4. Efecto de la temperatura (columna a alta 4. Reducir el diferencial o incorporar un
temperatura, detector sin calentar) intercambiador de calor
5. Otro equipo electrónico en la misma 5. Aislar el módulo de LC, el detector
línea o el ordenador para determinar si el
problema es externo. Corregir según sea
necesario
6. Pulsos de la bomba 6. Incorporar un amortiguador de pulsos en
el sistema
N. Ruido en la línea base (irregular)

1. Fuga 1. Consultar la sección III. Comprobar si
hay fittings flojos. Comprobar si hay
Normal fugas, acumulación de sal o ruidos
inusuales en la bomba. Cambiar las
juntas si fuera necesario. Comprobar si
Problema hay fugas en la celda de detector
RUIDO EN LA LÍNEA BASE
2. Fase móvil contaminada, deteriorada 2. Comprobar la composición de la fase

o preparada con materiales de baja móvil
calidad
3. Disolventes de la fase móvil inmiscibles 3. Seleccionar y utilizar únicamente
disolventes miscibles
4. Electrónica del detector u ordenador 4. Aislar el detector y el ordenador
electrónicamente. Consultar el manual
de instrucciones para corregir el
problema
5. Aire atrapado en el sistema 5. Purgar el sistema con un disolvente
orgánico compatible
6. Burbujas de aire en el detector 6. Purgar el detector. Instalar un
dispositivo de presión después
del detector

13
N. Ruido en la línea base (irregular) (cont.)

7. Celda de detector contaminada (incluso 7. Lavar la celda con 1N HN03 (nunca con
pequeñas cantidades de contaminantes HCI).
pueden causar ruidos)
8. Lámpara del detector con poca potencia 8. Cambiar la lámpara
9. Fuga de sílica o de relleno de la columna 9. Cambiar la columna
10. Mezclador de fase móvil defectuoso o 10. Reparar o reemplazar el mezclador o
en mal estado mezclar previamente si es isocrático
O. Picos anchos
1. Cambio en la composición de la fase 1. Preparar una nueva fase móvil
móvil
2. Flujo de la fase móvil demasiado bajo 2. Ajustar el flujo
3. Fugas (especialmente entre la columna y 3. Consultar la sección III. Comprobar si
el detector) hay fittings flojos. Comprobar si hay
fugas, acumulación de sal o ruidos
inusuales en la bomba. Cambiar las
juntas si fuera necesario
4. Parámetros del detector incorrectos 4. Ajustar los parámetros
5. Efectos ajenos a la columna: 5. a. Inyectar un volumen menor (por
a. Columna sobrecargada ejemplo, 10 µL en vez de 100 µL) o
b. Tiempo de respuesta del detector o muestras diluidas 1:10 y 1:100
volumen de celda demasiado altos b. Reducir el tiempo de respuesta o
c. Tubería entre la columna y el detector utilizar una celda más pequeña
demasiado larga o d.i. demasiado c. Utilizar el tubo más corto posible con
grande un d.i. de 0.005-0.007 pulg.
d. Tiempo de respuesta del software d. Reducir el tiempo de respuesta
demasiado alto
Normal Problema
PICOS ANCHOS

14
O. Picos anchos (cont.)

6. Concentración de la solución buffer 6. Aumentar la concentración
demasiado baja
7. Precolumna contaminada o gastada 7. Cambiar la precolumna
8. Columna contaminada o gastada. 8. Cambiar la columna por una del mismo
Bajo número de platos tipo
9. Espacio vacío o void en la entrada de la 9. Reemplazar la columna
columna
10. El pico es en realidad dos o más 10. Cambiar el tipo de columna para mejorar
compuestos con poca resolución la separación
11. Temperatura de la columna demasiado 11. Aumentar la temperatura. No superar los
baja 60 °C a menos que el fabricante de la
columna acepte temperaturas más altas
12. Constante de tiempo del detector 12. Utilizar una constante de tiempo menor
demasiado alta
P. Pérdida de resolución
1. Fase móvil contaminada o deteriorada 1. Preparar una nueva fase móvil
(lo que provoca cambios en el tiempo de
retención)
2. Precolumna o columna analítica 2. Retirar la precolumna y reintentar el
obstruida análisis. Cambiar la precolumna si
es necesario. Si la columna analítica
está obstruida, limpiar en sentido
inverso. Si el problema continúa,
es posible que la columna se haya
ensuciado con contaminantes altamente
retenidos. Utilizar el procedimiento
de limpieza apropiado. Si el problema
Normal continúa, probablemente la entrada
esté bloqueada. Cambiar la frita o la
columna*
Problema
PÉRDIDA DE RESOLUCIÓN

La retirada de los fittings de conexión podría invalidar la garantía. continúa en la siguiente página
15
Q. Todos los picos son demasiado pequeños

1. Atenuación del detector demasiado alta 1. Reducir la atenuación
2. Constante de tiempo del detector 2. Utilizar una constante de tiempo menor
demasiado alta
3. Tamaño de inyección demasiado 3. a. Aumentar la concentración
pequeño de la muestra
b. Aumentar el volumen de inyección,
si el tamaño de la columna lo permite
4. Conexión del software inadecuada 4. Utilizar la conexión correcta
R. Todos los picos son demasiado grandes

1. Atenuación del detector demasiado baja 1. Utilizar una atenuación mayor
2. Tamaño de inyección demasiado grande 2. a. Reducir la concentración de la
muestra
b. Disminuir el volumen de inyección,
utilizar un loop de muestra menor o
un loop de relleno parcial
3. Conexión del software inadecuada 3. Utilizar la conexión correcta
16
V. PROBLEMAS CON EL INYECTOR
Estos problemas suelen detectarse mientras se usa la válvula de inyección.
En la sección III (Fugas) se tratan las fugas en las válvulas de inyección.
A. Inyector manual, difícil de girar

1. Junta del rotor dañada 1. Volver a montar o reemplazar la válvula
2. Rotor demasiado apretado 2. Ajustar la tensión del rotor
B. Inyector manual, difícil de cargar

1. Válvula desalineada 1. Alinear
2. Loop obstruido 2. Cambiar el loop
3. Jeringa sucia 3. Limpiar o reemplazar la jeringa
4. Tubos obstruidos 4. Limpiar o reemplazar los tubos
C. Autoinyector, no gira
1. Sin presión (o alimentación) 1. Suministrar la presión adecuada

(alimentación)
2. Rotor demasiado apretado 2. Ajustar
3. Válvula desalineada 3. Alinear
D. Autoinyector, otros problemas

1. Obstrucción 1. Limpiar o reemplazar la parte obstruida

2. Mecanismo atascado 2. Consultar el manual de servicio
3. Controlador en mal estado 3. Reparar o cambiar el controlador
17
VI. PROBLEMAS DETECTADOS POR OLFATO,
VISTA U OÍDO
Debe poner todos los sentidos para identificar los problemas de LC. Debe
acostumbrarse a dedicar unos minutos al día en poner todos sus sentidos
(¡excepto el gusto!) en el sistema de LC para entender como funciona
normalmente. Esto le ayudará a localizar los problemas rápidamente. Por
ejemplo, normalmente olerá una fuga antes de verla. La mayoría de los
problemas se identifican por la vista; muchos de ellos están incluidos en la
sección anterior.
A. Olor a disolvente
1. Fuga 1. Consultar la sección III
2. Derrame 2. a. Comprobar si el contenedor de
residuos se ha desbordado
b. Localizar y limpiar el derrame
B. Olor a quemado
1. Sobrecalentamiento del módulo 1. a. Comprobar si la ventilación es
adecuada; ajustar
b. Comprobar los parámetros
de la temperatura; ajustar
c. Apagar el módulo; consultar
el manual de servicio
C. Lecturas de medida anómalas

1. Anomalías de presión 1. Consultar la sección II

2. Problema en el horno de la columna 2. a. Comprobar los parámetros; ajustar
b. Consultar el manual de servicio
3. Fallo de la lámpara del detector 3. Cambiar la lámpara
D. Luces de advertencia
1. Límite de presión excedido 1. a. Comprobar si hay una obstrucción

b. Comprobar la configuración del
límite; ajustar
2. Otras luces de advertencia 2. Consultar el manual de servicio
18
VI. PROBLEMAS DETECTADOS POR OLFATO,
VISTA U OÍDO (cont.)
E. Alarmas de advertencia
1. Fuga o derrame de disolvente 1. Buscar y corregir
2. Otras alarmas de advertencia 2. Consultar el manual de servicio
F. Ruidos y chirridos
1. Rodamientos en mal estado 1. Consultar el manual de servicio
2. Lubricación insuficiente 2. Lubricar según sea necesario
3. Desgaste mecánico 3. Consultar el manual de servicio
19
VII. PRINCIPALES ZONAS DE PROBLEMAS Y
MANTENIMIENTO PREVENTIVO
El siguiente cuadro muestra los problemas más habituales que se producen
en cada módulo de LC. En la columna de la derecha se enumeran los
procedimientos de mantenimiento preventivo que pueden reducir la cantidad de
fallos. El número entre paréntesis es el plazo de mantenimiento recomendado.
Los manuales del usuario y de servicio de su LC pueden contener otras
sugerencias para el mantenimiento preventivo de su modelo específico.
Depósito de disolventes
PROBLEMA MANTENIMIENTO PREVENTIVO
1. Frita de entrada obstruida 1. a. Cambiar los filtros de la botella
(3 a 6 meses)
b. Filtrar la fase móvil
con filtro de 0.5 µm
2. Burbujas de gas 2. Desgasificar la fase móvil
Bomba
1. Burbujas de aire 1. Desgasificar la fase móvil
2. Juntas de la bomba en mal estado 2. Cambiar (3 meses)
3. Fallo de la válvula check 3. Filtrar la fase móvil, utilizar un filtro en
línea en el conducto de entrada. Guardar
un juego de refacción
Inyector
1. Desgaste de la junta del rotor 1. a. No apretar en exceso

b. Filtrar las muestras
Columna
1. Frita de entrada obstruida 1. a. Filtrar la fase móvil

b. Filtrar las muestras
c. Utilizar un filtro en línea o una
precolumna
2. Espacio vacío o void en el cabezal de la 2. a. Evitar fases móviles con un pH > 8
columna (para la mayoría de las columnas
de base sílica)
b. Utilizar precolumna
c. Si trabaja con pH alto, use una
columna adecuada como Gemini®
o Kinetex® EVO
Gemini y Kinetex son marcas comerciales registradas de Phenomenex. Gemini y Kinetex EVO son patentados por
Phenomenex. U.S. Patent No 7,563,367 y 8,658,038 y equivalentes extranjeras.
20
VII. PRINCIPALES ZONAS DE PROBLEMAS Y
MANTENIMIENTO PREVENTIVO (cont.)
Detector
1. Fallo de la lámpara; menor respuesta del 1. Cambiar (6 meses) o tener una lámpara
detector; mayor ruido del detector de reemplazo
2. Burbujas en la celda 2. a. Mantener la celda limpia
b. Utilizar un restrictor después
de la celda
c. Desgasificar la fase móvil
General
1. Daños por corrosión o abrasión 1. Limpiar el buffer del equipo cuando no
esté en uso
21
ADVERTENCIA: LOS CONTAMINANTES PUEDEN CAUSAR
• Alta presión • Pérdida de resolución

• Picos desdoblados • Daños irreversibles
• Picos anchos en la columna
• Ruido en la línea base • Daños en el sistema
• Deriva de la línea base
Proteja su columna de HPLC y sus resultados

Un sistema de precolumnas universal para HPLC diseñado para proteger de forma eficaz
sus valiosas columnas analíticas, así como los resultados, de los efectos perjudiciales de
los contaminantes. Atrape los contaminantes sin alterar su cromatografía.
Encontrará más información en

www.phenomenex.com/securityguard
Protección de Columnas HPLC
Cómo funciona: Vista transversal que muestra

el cartucho; se puede examinar
fácilmente la presencia de Conexión universal para
contaminantes columnas de HPLC que se
aprieta manualmente; no se
necesitan llaves
Desde el
inyector
compuestos de interés
contaminantes Holder
Columna de
HPLC
Conector universal:
Gracias a su diseño patentado,

SecurityGuard Standard puede acoplarse
a las conexiones de prácticamente
cualquier fabricante.
Si el sistema de precolumna por cartuchos SecurityGuard

Standard no funciona tan bien o mejor que su actual sistema
de precolumna de fase y dimensiones similares, envíenos
sus datos comparativos en un plazo de 45 días y conserve el
SecurityGuard Standard de manera GRATUITA.
Diseño patentado
SecurityGuard es marca comercial de Phenomenex.
SecurityGuard está patentado por Phenomenex. U.S. Patent Nº 6, 162, 362.
PRECAUCIÓN: Esta patente solo se aplica al holder de cartucho de protección de tamaño analítico; no se aplica a los
holders SemiPrep, PREP o ULTRA, ni a ningún cartucho.
22
FILTROS DE JERINGA PHENEX™
Para la filtración de muestras y disolventes previa a la cromatografía
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• Resultados más constantes y reproducibles
• Mayor vida útil de las columnas
Phenex ofrece:
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proteínas • Bajo volumen de JERINGA
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a encontrar el filtro de jeringa
química • Calidad certificada adecuado para eliminar las partículas
de su matriz de muestra en 3 pasos
• Nivel de extraíbles • Integridad 100 % sensillos:
mínimo comprobada
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• Excelente flujo • Uso bidireccional
TIPOS DE MEMBRANA
RC NY
(Celulosa regenerada) (Nylon)
PTFE, Teflon® CA
(Politetrafluoroetileno) (Acetato de celulosa)
PES GF
(Polietersulfona) (Fibra de vidrio)
PVDF
(Fluoruro de polivinilideno)
Si los filtros Phenex no funciona

tan bien o mejor que sus
filtros actuales de membrana,
diametro y tamaño de poro
similares, envíenos sus datos
comparativos en un plazo de
45 días y conserve sus filtros
Phenex de manera GRATUITA.
Por encima de la jeringa, los filtros no son estériles. La
carcasa está fabricada con polipropileno (PP) de calidad
médica.
Consejo: Pruebe un paquete de muestra.

La mejor manera de determinar si una
membrana Phenex determinada es adecuada
para su aplicación. Solicite ya el suyo por
teléfono o visite
www.phenomenex.com/sample
Póngase en contacto con su asesor técnico o distribuidor de Phenomenex para solicitar asistencia o consultar la
disponibilidad.Se pueden realizar compras de grandes cantidades con un ahorro importante.
Phenex es marca comercial de Phenomenex.

Teflon es marca registrada de E.I. du Pont de Nemours and Co.
23
Esta publicación se distribuye de forma gratuita. Para conseguir más copias, póngase en contacto con:
Alemania Estados Unidos Noruega

t: +49 (0)6021-58830-0 t: +1 (310) 212-0555 t: +47 810 02 005
f: +49 (0)6021-58830-11 f: +1 (310) 328-7768 f: +45 4810 6265
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Australia Finlandia Nueva Zelanda

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Austria Francia Países Bajos

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Bélgica India Puerto Rico

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t: +32 (0)2 511 8666(holandés) f: +91 (0)40-3012 2411 f: +1 (310) 328-7768
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f: +34 91-413-2290 f: 001-310-328-7768
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www.phenomenex.com
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su país, póngase en contacto con el Departamento Internacional de Phenomenex USA en
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HPLC

GUÍA PARA LA SOLUCIÓN DE

n Columnas HPLC/UHPLC (capilares a preparativas)

n Separaciones con pH alto/bajo (pH 1-12)

n Precolumnas SecurityGuard™ Standard

2 Phenomenex l WEB: www.phenomenex.com

II. Presión anómala............................................................................... 5

IV. Problemas con el cromatograma..................................................... 9

V. Problemas con el inyector.............................................................. 17

VI. Problemas detectados por olfato, vista u oído............................... 18

VII. Principales zonas de problemas y mantenimiento preventivo....... 20

Proteja su columna de HPLC....................................................................... 22

Filtración sencilla previa a la cromatografía................................................. 23

© 2017 Phenomenex, Inc. Todos los derechos reservados.

DÓNDE OBTENER MÁS AYUDA

A. Sin lectura de presión, sin flujo

B. Sin lectura de presión, flujo normal

C. Alta presión constante

* Compruebe primero la garantía del fabricante de la columna.

D. Baja presión constante

E. Aumento desmesurado de la presión

F. Caída de presión a cero

G. Caída de la presión, pero no a cero

A. Fittings que fugan

Guía de selección del tamaño de poro de la frita

A. Picos con cola (tailing)

PICOS CON COLA (TAILING)

B. Picos con hombro

* Compruebe primero la garantía del fabricante de la columna.

C. Picos partidos (cont.)

2. Disolvente de la muestra incompatible 2. Cambiar el disolvente. Siempre que sea

D. Distorsión de los últimos picos

E. Distorsión de los primeros picos

G. Las colas aumentan a medida que aumenta el valor de k’

continúa en la siguiente página

G. Las colas aumentan a medida que aumenta el valor de k’ (cont.)

H. Colas (tailing) en picos ácidos o básicos

J. Cambios en el tiempo de retención

1. Control de la temperatura incorrecto 1. Termostatizar la columna

K. Cambios bruscos en el tiempo de retención

1. Cambios en el flujo 1. Restablecer el flujo

L. Deriva de la línea base

2. Fase móvil no homogénea. (La deriva 2. Utilizar disolventes de calidad HPLC

M. Ruido en la línea base (normal)

N. Ruido en la línea base (irregular)

RUIDO EN LA LÍNEA BASE

2. Fase móvil contaminada, deteriorada 2. Comprobar la composición de la fase

continúa en la siguiente página

N. Ruido en la línea base (irregular) (cont.)

continúa en la siguiente página

O. Picos anchos (cont.)

* Compruebe primero la garantía del fabricante de la columna.

Q. Todos los picos son demasiado pequeños

R. Todos los picos son demasiado grandes

A. Inyector manual, difícil de girar

B. Inyector manual, difícil de cargar

1. Sin presión (o alimentación) 1. Suministrar la presión adecuada

D. Autoinyector, otros problemas

1. Obstrucción 1. Limpiar o reemplazar la parte obstruida

C. Lecturas de medida anómalas

1. Anomalías de presión 1. Consultar la sección II

1. Límite de presión excedido 1. a. Comprobar si hay una obstrucción

1. Desgaste de la junta del rotor 1. a. No apretar en exceso