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CURVA DE CRECIMIENTO

BACTERIANO
CURVA DEL CRECIMIENTO

• Se define como crecimiento el aumento de la


cantidad de constituyentes y estructuras
celulares, cuando hay crecimiento en ausencia de
división celular hay aumento en el tamaño y peso
de la célula. Mientras que cuando el crecimiento
es seguido de división de células hay un aumento
en el número de células.
• El crecimiento de una población es el aumento
del número de células como consecuencia de un
crecimiento individual y posterior división.

• Esto ocurre de una manera exponencial.

• El crecimiento exponencial es una consecuencia


del hecho de que cada célula se divide dando dos
células.
LA VELOCIDAD DEL CRECIMIENTO
EXPONENCIAL
• La velocidad del crecimiento
exponencial se expresa como el
tiempo de generación “G”, y este se
define como el tiempo que tarda una
población en duplicarse

• Los tiempos de generación varían


ampliamente entre los distintos
microorganismos.
CURVA DE CRECIMIENTO
BACTERIANO
LATENCIA

• Cuando una población • En esta fase se


bacteriana es inoculada producen las enzimas
en un medio fresco el necesarias para que
crecimiento no suele ellos puedan crecer en
comenzar de inmediato, un nuevo medio
sino después de un ambiente.
tiempo llamado latencia.
• En esta fase no hay
• La fase de latencia incremento de células,
representa un periodo pero hay gran actividad
de transición para los metabólica, aumento en
microorganismos cuando el tamaño individual de
son transferidos a una las células, en el
nueva condición. contenido proteico, ADN
y peso seco de las
células.
EXPONENCIAL O LOGARÍTMICA
  
• Es el periodo de la curva del crecimiento en el
cual el microorganismo crece exponencialmente,
es decir que cada vez que pasa un cierto tiempo
de generación la población se duplica.

• Bajo condiciones apropiadas la velocidad de


crecimiento es máxima. Las condiciones
ambientales afectan la velocidad de crecimiento
exponencial.
FASE ESTACIONARIA

• En cultivos en recipientes cerrados una población


no puede crecer indefinidamente de forma
exponencial.
• Las limitaciones de crecimiento ocurren ya sea
por agotamiento de algún nutriente esencial, por
acumulación de productos tóxicos, porque se
alcance un número de células elevado para el
espacio disponible o por combinación de las
causas anteriores.
FASE DE MUERTE
     
• Si la incubación continùa después de que una
población microbiana alcanza la fase
estacionaria, las células pueden continuar vivas y
seguir metabolizando, pero va a comenzar una
disminución progresiva en el número de células
viables, y cuando esto ocurre se dice que la
población ha entrado en fase de muerte.

FISIÓN BINARIA
• El crecimiento bacteriano es la división de una
bacteria en dos células hijas en un proceso llamado
fisión binaria.

• Previniendo que no se produzca ningún caso de


mutación las células hijas resultantes serán
genéticamente idénticas a la célula original.
• De este modo tiene lugar la "duplicación local" de la
población bacteriana.

• Las dos células hijas creadas tras la división no


sobreviven necesariamente.
• Sin embargo, si el número de supervivientes supera
la unidad, en promedio, la población bacteriana
experimenta un crecimiento exponencial.
LA MEDICIÓN DE UNA CURVA
DEL CRECIMIENTO
• La medición de una curva del crecimiento
exponencial de las bacterias en un cultivo ha sido
tradicionalmente una parte de la formación de
todos los microbiólogos.

• Los procesos fundamentales empleados para ello


son la numeración bacteriana (conteo bacteriano)
por métodos directos e individuales (microscopía,
citometría de flujo ), por métodos directos y
masivos (biomasa), por métodos indirectos e
individuales (conteo de colonias),

• o por métodos indirectos y en bloque (número más


probable, turbidez, absorción de nutrientes).
• Los modelos permiten conciliar la teoría con las
mediciones.
CULTIVO CONTINUO
• El quimiostato es un aparato que se utiliza para
obtener un cultivo continuo en medio renovado,
permite mantener poblaciones de células en
crecimiento exponencial por largos periodos de
tiempo.
MEDIDAS DIRECTAS DEL
CRECIMIENTO BACTERIANO.
1. Recuento de células totales.
- Microscopia -
2. Recuento de celulas viables.
- Recuento de colonias -
MEDIDAS INDIRECTAS DEL
CRECIMIENTO BACTERIANO
• Turbidez. Es un método muy rápido y útil de
medir el crecimiento bacteriano.
- fotómetro -
- espectrofotómetro -
CRECIMIENTO MICROBIANO
• El concepto asociado al Crecimiento Microbiano,
corresponde al aumento poblacional de una
especie microbiana en un medio de cultivo
provisto de todas las necesidades del
microorganismo (Cantidad de Nutrientes,
Temperatura, Grado de Humedad, Gases y pH).
METABOLISMO Y NUTRICION
BACTERIANA
METABOLISMO BACTERIANO
• Conjunto de reacciones bioquímicas
catabólicas y anabólicas, que transforman
las sustancias nutritivas para obtener
energía.
• Anabolismo: reacciones de síntesis.
• Catabolismo: degradación de compuestos
orgánicos.
• Reacciones Endorganicas.
• Reacciones Exorganicas.
ENERGÍA
• La transformación de la energía,
generación de ATP, puede ser mediante
3 vías principales:
1. La respiración, que tiene lugar en
presencia de O2 y da como resultado
CO2 y H2O, es un proceso de oxidación.
2. La fermentación: en condiciones sin
oxigeno.
3. La fotosíntesis: que obtiene la energía
por absorción de luz visible a través de
la clorofila.
NUTRICIÓN MICROBIANA
• Las células están compuestas
de:
1. Macromoléculas: polisacáridos,
lípidos, ácidos nucleicos y
proteínas (Las proteínas son las mas
abundantes).
2. Agua.
El agua es el solvente ideal para los organismos
vivos debido a su polaridad y a su cohesión
NUTRICIÓN
• Los microorganismos requieren para su
desarrollo y actividad celular compuestos
químicos: nutrientes.
• Dependiendo de las cantidades que se
requieran se habla de macronutrientes y
micronutrientes.
• Existen diferencias en cuanto a los
requerimientos nutricionales de cada
microorganismo.
NUTRIENTES
• MACRO • MICRO
● Carbono. ● Cromo
● Nitrogeno. ● Cobalto
● Fosforo. ● Cobre
● Azufre ● Manganeso
● Potasio ● Molibdeno
● Magnesio ● Niquel
● Sodio ● Selenio
● Calcio ● Tungsteno
● Hierro ● Vanadio y Zinc.
FACTORES DE CRECIMIENTO
• Se requieren en muy pocas cantidades y solo por
algunas células:
● Vitaminas,
● Aminoácidos,
● purinas y
● pirimidinas.
La mayoría de los microorganismos son capaces
de sintetizarlos.
AGUA
• Es el principal componente del protoplasma
bacteriano; el medio donde suceden las reacciones
químicas y sus productos.
• La disponibilidad se mide por un parámetro
denominado: actividad de agua (aw) o potencial
de agua. Valores normales entre 0.90- 0.99.
MEDIOS DE CULTIVO

• Satisfacen las necesidades nutritivas de los


microorganismos y pueden ser químicamente definidos
o complejos.

• Para el cultivo correcto de una bacteria es necesario


conocer sus exigencias nutritivas.
TIPOS NUTRICIONALES

Tipo Fuente de Fuente de carbono Ejemplos


energía
Fotoautotrofas Luz CO2 Algas y
cianobacterias
Fotoheterotrofas Luz Compuestos Algas y bacterias
orgánicos fotosintéticas
Quimioautotrofas o Química Compuesto Pocas bacterias
Litotrofas inorgánicos: H2,
NH3, NO2, H2S,
CO2
Quimioheterotrofas o Química Compuesto La mayoría de
Heterotrofas orgánicos: glucosa bacterias
ENZIMAS
• Catalizadores biológicos de naturaleza
proteica.
• Su accionar es esencial en el metabolismo
bacteriano.
• Actúan de manera especifica a través de
un sitio activo, produciendo un efecto
catalítico sobre las moléculas del sustrato,
convirtiéndola en un producto especifico.
• Funcionan en forma secuencial: sistema
multienzimatico.
FERMENTACIONES
• Una fermentación es una reacción de oxidación
– reducción interna equilibrada en la que algunos
átomos de la fuente de energía (donador de
electrones) se reducen, mientras otros se oxidan y
la energía se produce por fosforilación a nivel de
sustrato.
• Una ruta bioquimica muy usada para la
fermentacion de la glucosa es la glucolisis,tambien
denominada via de Embden-Meyerhof .
• La glicolisis se puede dividir en en 3 etapas
principales:
• Pèrdida de energia
• Ganancia de energía vìa aeròbica gana 36
molèculas de ATP y Anaeròbica 2 molèculas de ATP
• Regulacion
• La glicòlisis se desarrolla en 10 pasos
OXIGENO
Los microorganismos son muy variables en
cuanto a la necesidad del oxigeno.
Se dividen dependiendo del efecto del oxigeno:

1.Aerobiosestrictos: los que requieren oxigeno


como aceptor terminal de electrones, no
proliferan en ausencia de O2. ej. Mycobacterium
bovis.

2.Microaerofilos:
utilizan O2 a niveles muy bajos.
Un 12%. No proliferen en la superficie de un
medio sólido. Ej. Haemophillus suis
OXIGENO
3. Anaerobios estrictos: las que no emplean
oxigeno para su metabolismo, sino qe obtienen
su energía de reacciones fermentativas. Ej.
Clostridium tetani
4. Anaerobios aerotolerantes: pueden crecer en
presencia o ausencia de oxigeno, pero la
energía la obtienen por fermentación. Ej.
Bacterias acidolacticas.
OXIGENO
5. Anaerobios facultativos:
son bacterias que proliferan mediante procesos
oxidativos, utilizando oxigeno como aceptor
terminal de electrones, o en anaerobiosis,
empleando reacciones de fermentación para
obtener energía.
Ej. Streptococcus, E. coli
TEMPERATURA
• La temperatura es un factor ambiental
importante en el control de crecimiento
microbiano.
• Los M.O pueden agruparse según los
márgenes de temperatura que
requieren.
• Se distinguen 4 grupos:
1. Psicrofilos 2. Mesófilos

3. Termofilos 4. Hipertermofilos.
CLASES DE M.O. SEGÚN LA
TEMPERATURA

Tipo Rango de Temperatura M.O


Temperatura Optima

Psicrofilo 0 - 20 15 Algas

Mesofilo 20 - 40 38 E. coli

Termofilo 40 - 70 60 Bacillus
stearothermophill
us
Hipertermofil 90 - 115 106 Thermus
acuaticus
os
PH
• La acidez o alcalinidad de un medio tiene una
gran importancia sobre el crecimiento
microbiano. La mayoría de MO. Crecen a un pH
entre 6 y 8.
• El pH intracelular debe permanecer próximo a la
neutralidad.
GENETICA BACTERIANA
ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DEL
GENOMA BACTERIANO
• El material genético de las bacterias se encuentra
en el citoplasma, se le denomina como nucleoide,
cuerpo nuclear, región nuclear.

• Esta compuesto de alrededor de 80% de DNA,


10% de RNA y 10% de proteínas (RNA
polimerasa).
• En 1963 se logro aislar y extender el cromosoma
de E. coli, determinado que tiene una longitud de
1 mm. Es una tira circular doble y que se
encuentra super enrollado.
• El termino genoma se refiere al conjunto
completo de elementos genéticos (genes) dentro
de la célula.
• Los procesos genéticos requieren tres tipos de
polímeros:
• Acido Desoxirribonucleico (DNA).
• Acido Ribonucleico (RNA)
• Proteínas.
• DNA:
El cromosoma bacteriano único contiene dos tiras
complementarias de DNA que están enrolladas
alrededor una de la otra en patrón helicoidal, con los
extremos unidos para formar una molécula circular.
• Las moléculas de DNA son de doble cadena con
bases complementarias. Esta característica le
permite a una de las cadenas proporcionar la
información para el copiado de la información en
la otra cadena.
• Cada par de bases esta compuesto por una purina
y una pirimidina.
• Las purinas de una cadena forman puentes de
hidrogeno con las pirimidinas.
• El par A-T con 2 uniones puente de H.
• El par G-C con tres uniones.
• Cada una de las cuatro bases esta unida a una
fosfo-2’-dexosirribosa para formar un nucleótido.
• La longitud de una melecula de DNA se expresa
en miles de pares de bases o en kilobases (kb).
• El cromosoma de una bacteria, E. coli, es una
molécula circular única que contiene alrededor de
4,500,000 pares de bases o 4500 kb. Con una
longitud aproximada de 1 mm.
RNA:

Existen 3 diferencias entre la química del DNA y la


del RNA:
1. Las macromoléculas del RNA contienen el azúcar
ribosa en lugar de desoxirribosa.
2. El RNA tiene la base uracilo en lugar de timina.
3. El RNA no es una molécula de tira doble
• Las bacterias contienen 3 tipos de RNA:

1. RNAm: (mensajero), su función es copiar el


código genético del gen (DNA cromosómico)
y llevar este mensaje al sitio de síntesis de
proteínas (Ribosomas).

2. RNAt (transferencia), traducción del


mensaje de RNA en una secuencia
especifica de aminoácidos.

3. RNA (ribosomal) síntesis de proteínas.


ENZIMAS

1. Toposisomerasa II: promueve el


superenrollarmiento (DNA girasa)
2. Toposisomerasa I: controla el desenrrollamiento.
3. RNA polimerasa: hace que las dos tiras de DNA
t
se desenrollen de modo que se pueda transcribir
la información.
4. DNA ligasa: une los fragmentos
sintetizados.

5. Primasa: inicia la síntesis de un fragmento


roto.
RECOMBINACION GENETICA
• Es el proceso por el que los elementos genéticos
contenidos en dos genomas separados se juntan
en una unidad.

• Trae como consecuencia un cambio.

• Se transfieren genes completos, grupos de genes o


cromosomas completos.
FORMAS DE RECOMBINACIÓN
• Transformación: el DNA libre se incorpora a
una célula.
• Transducción: La transferencia del DNA
donador esta mediada por un virus.
• Conjugación: la transferencia de DNA implica
contacto célula – célula y la presencia de un
plasmido y de una estructura llamada pili.
TRANSFORMACION
• Este descubrimiento fue uno de los hechos mas
relevantes, pues condujo a experimentos que
probaron que el DNA es el material genético. Fred
Grifth (1920).
• Trabajos con Streptococcus pneumoniae.
• No todas las bacterias tienen esta capacidad, sino
células competentes que son capaces de tomar
una molécula de DNA y lo integran a su
cromosoma.

• Intervienen: proteínas especiales que intervienen


en el transporte e incorporación del DNA.
TRANSFORMACION: ETAPAS
1. Unión del DNA: proteína asociada a la
membrana: autolisina y nucleasas.
2. Incorporacion del DNA:
Primero se fija reversiblemente, luego se vuelve
irreversible.
3. Integracion del DNA: proteína de unión, en el
cromosoma proteína RecA
• Cuando una célula es capaz de tomar una
molécula o un fragmento de DNA y
transformarse se denomina célula competente.
• Solo algunas cepas poseen esta característica,
parece ser una propiedad hereditaria.
EXPERIMENTO DE
GRIFFITH

Neumococo vivo Ratón muerto


capsulado. (S) Se aíslan cepas lisas

Neumococo muerto
Ratón vivo.
por calor

Neumococo vivo
rugoso (R) no Ratón vivo.
capsulado
Neumococo (R) vivo
Ratón muerto: se aíslan
+
cepas S
Neumococo muerto
TRANSDUCCION
El DNA se transfiere de una célula a otra por medio
de un virus: bacteriófago.
TRANSDUCCION
TRANSDUCCIÓN
• Cuando un fago infecta a una bacteria, capta
fragmentos del genoma de la célula hospedadora.
• Al infectar a otra bacteria el fago transductor
puede transferir sus propios genes y también los
de la célula hospedadora de la cual procede.
TRANSDUCCIÓN
Puede ocurrir de 2 formas:
1. Transducción generalizada:
Cualquier porción del genoma bacteriano
pasa a formar parte del genoma de la
partícula vírica.
TRANSDUCCIÓN
2. Transduccion especializada:
El DNA de una región especifica del cromosoma
del hospedador se integra directamente en el
genoma del virus.

No todos los fagos pueden transducir, ni todas


las bacterias son transducibles.
TRANSDUCCIÓN
• El mecanismo de transducción fue descubierto
por Zinder y Lederberg (1952).
• Estudiando la recombinación genética entre
diferentes cepas de Salmonella typhimurium.
CONJUGACION
• Implica el contacto célula – célula.
• El material genético transferido puede ser un
plásmido, o una porción del cromosoma.
• Una célula donadora trasmite la información
genética a otra célula, la receptora.
• La célula donadora posee el pili o pelo sexual.
CONJUGACION
• La capacidad de la células para actuar como
donantes se debe a la presencia de factor f o
factor de fertilidad.
• Las células que carecen de factor f, son
receptoras.
PLASMIDOS
• Son elementos genéticos que se replican
independientemente del cromosoma.
• Se encuentran dentro de la célula.
• Existen varios tipos de plasmidos.
• En E coli, se han aislado mas de 300
TIPOS DE PLASMIDOS
• P. conjugativos: codifican pili sexuales y
proteínas necesarias para la transferencia de
DNA.
• P. R (resistencia a los antibióticos, mercurio).
• P. Producción de bacteriocinas y antibióticos.
TIPOS DE PLASMIDOS
• Plasmidos de funciones fisiológicas:
Utilización de urea,
Fermentación de carbohidratos.
Producción de pigmentos.
• Plasmidos de virulencia: producción de toxinas,
enzimas, tumores.
• E coli, posee un plasmido conjugativo llamado
Factor F:
- Capacidad para sintetizar pili.
- Movilización del DNA para su transferencia.
- Alteración de receptores de la superficie de la
célula.
MUTACION
• Es un cambio hereditario en la secuencia de
bases del acido nucleico que constituye el genoma
de un organismo.
• Fenotipo: las características observables de un
organismo.
• Genotipo: constitución génica precisa de un
organismo. (conjunto de genes)
MUTACIONES
• Cepa silvestre: cepa aislada de la naturaleza.

• Se pueden obtener mutantes de una cepa


silvestre o de una derivada de esta.

• Pueden ocurrir cambios perjudiciales, neutros o


beneficiosos.
MUTACIONES
• M. Espontáneas.
Ocurren en la naturaleza, sin ser provocadas.
Ej: efectos de la radiación natural, que alteran la
estructura de las bases de DNA.
Errores en el apareamiento de bases.
• Tipos de mutantes: No capsulado, inmóvil,
fermentación de azucares.
MUTACION
• Mutaciones inducidas por mutágenos, sustancias
que inducen a mutaciones.
• Mutágenos químicos: reaccionan directamente
con el DNA, ocasionando cambios químicos, en
las bases.
• Acido nitroso, bromuro de etidio etc.
• Mutágenos físicos: rayos UV, rayos X.
• FLORA
BACTERIANA
NORMAL
FLORA MICROBIANA:
NOMENCLATURA Y DEFINICIONES
ACTUALES
• Microbiota humana: colección de
microorganismos que residen en el cuerpo
humano.
• Microbioma: todos los genes y productos de los
genes de la microbiota.
• Metagenoma: total de ADN genómico de los
microorganismos de una comunidad.
• Metaproteoma: total de proteínas de los
microorganismos de una comunidad.
• Metaboloma: total de metabolitos de los
microorganismos de una comunidad.
NORMAL
IMPORTANCIA DE SU
ESTUDIO

1. Detectar alteraciones cualitativas


(disbacteriosis) o cuantitativas de la
flora.
2. Conocer qué microorganismo puede
estar causando una infección en una
zona determinada.
3. Conocer origen y significación clínica
de un microorganismo aislado en
muestra clínica.
4. Posiblemente relacionado con la salud y
con enfermedades no infecciosas (flora
intestinal). En estudio.
FLORA MICROBIANA
TIPOS DE FLORA

• Flora residente
• Flora transitoria
• Estado de portador
FACTORES QUE AFECTAN AL
MANTENIMIENTO DE LA FLORA
1. Nutrientes
2. pH
3. Temperatura
4. Humedad
5. Potencial redox
6. Resistencia a sustancias naturales
7. Presencia de receptores celulares
8. Interferencia bacteriana
EFECTOS BENEFICIOSOS DE LA
FLORA MICROBIANA
1. Activación del sistema inmune

2. Interferencia bacteriana
1. Bifidobacterias y lactancia materna

2. Lactobacilos y flora vaginal

3. Tto antimicrobiano y C. difficile

3. Producción de nutrientes esenciales


EN LA INFECCIÓN: PATÓGENOS
OPORTUNISTAS
EJEMPLOS

• E. coli puede producir ITU por vía ascendente.


• Perforación colónica y peritonitis.
• Endocarditis por estreptococos viridans.
• Inmunodepresión e infección.
FLORA MICROBIANA DE LA PIEL
• Varía en función del nº de glándulas
sebáceas y sudoriparas.
• Oscila de 102/cm2 en palmas a 106/cm2 en
cuero cabelludo.
• Regulación:
● Secreciones de glándulas sebáceas
● Sudor
● Descamación celular
FLORA MICROBIANA DE LA PIEL

• Estafilococos coagulasa negativo


● S. epidermidis
• Propionibacterias
• Corinebacterias
• Clostridium spp
FLORA MICROBIANA
NASOFARINGE Y
OROFARINGE
• Fosas nasales:
● Flora de piel + S. aureus (20-30%).
• Nasofaringe:
● Flora de boca + N. meningitidis, S. pneumoniae,
H. influenzae y B. catarrhalis.
• Orofaringe:
● -Flora nasofaringe + estreptococos viridans y
neiserias
FLORA MICROBIANA
CAVIDAD ORAL
• Cocos Grampositivos: estreptococos alfa
hemolíticos y no hemolíticos (S. viridans)
• Cocos Gramnegativos: Veillonella spp
• Bacilos Grampositivos: Actynomices spp y
Lactobacillus spp
• Bacilos Gramnegativos:
● Anaerobios: Porphyromonas spp y Fusobacterium
spp
● Capnofílicos: Eikenella spp y Capnocytophaga spp
• Espiroquetas
• Micoplasma
• Protozoos: amebas
FLORA MICROBIANA
APARATO DIGESTIVO

• Esófago: alimentos y saliva.


• Estómago:
● Papel del pH y enzimas gástricos
● Lactobacilos y Helicobacter spp
• Intestino delgado:
● De 103/gr en duodeno a 108/gr en ileon terminal
(parecida a colon).
FLORA MICROBIANA
APARATO DIGESTIVO

• Colon:
● De 108-11/gr a 1012/gr
● 25% del peso seco de las heces
● Varía en función de la dieta
● 96-99% anaerobios estrictos:
• Bacteroides spp (fragilis), Fusobacterium spp,
Bifidobacterium spp y Clostridium spp.
● 1-4% facultativos:
• Enterococos, enterobacterias (E. coli ) y levaduras
FLORA MICROBIANA
APARATO GENITOURINARIO
• Genitourinario masculino y urinario femenino:
estéril excepto uretra distal
• Genital femenino:
● Antes de la pubertad: Mixta piel y colon.
● Periodo fértil:
• Lactobacilos
• BGN anaerobios
• CGP
• Levaduras
Sobreviven a pH
ácido
NUTRICIÓN Y CULTIVO DE
MICROORGANIMOS
MEDIOS DE CULTIVO
• MEDIOS SINTÉTICOS O DEFINIDOS: SE
CONOCE LA COMPOSICIÓN QUÍMICA Y
CANTIDADES DE COMPONENTES
• MEDIOS COMPLEJOS: CONTIENEN ALGUNOS
COMPONENTES DE COMPOSICIÓN QUÍMICA
NO TOTAL-MENTE DEFINIDA
MEDIOS DE CULTIVO
MEDIOS COMPLEJOS
• SIMPLES: BAJOS REQUERIMIENTOS
• ENRIQUECIDOS: ADICIÓN DE SANGRE, SUERO,
etc.
• SELECTIVOS: FAVORECEN EL CRECIMIENTO
DE ALGUNOS TIPOS DE ORGANISMOS
• DIFERENCIALES: DESTACAN
CARACTE-RÍSTICAS PROPIAS DE UN
ORGANISMO
CULTIVOS PUROS

• OBTENCIÓN DE COLONIAS AISLADAS

• PLACAS DE PETRI

• MEDIOS SÓLIDOS: AGAR AL 1,5%


• UN ORGANISMO DA ORIGEN A UNA COLONIA
SIEMBRA DE
MICROORGANISMOS

• EN PLACA POR ESTRÍA


• EN PLACA EN SUPERFICIE O POR EXTENSIÓN
• EN PROFUNDIDAD O POR VERTIDO
PLACA DE PETRI
SIEMBRA POR ESTRÍA
ESTUFA DE CULTIVO
JARRA DE ANAEROBIOS
CULTIVO CONTÍNUO

• POBLACIÓN MICROBIANA CRECIENDO EN UN


RECIPIENTE DE VOLUMEN CONSTANTE AL QUE
SE AÑADE MEDIO FRESCO Y SE QUITA MEDIO
USADO
• QUIMIOSTATO Y TURBIDOSTATO
MEDICIÓN DEL CRECIMIENTO

• RECUENTO DE CÉLULAS TOTALES: CÁMARAS


DE RECUENTO, RECUENTO ELECTRÓNICO
• RECUENTO DE CÉLULAS VIABLES: EN MEDIO
SÓLIDO (PROFUNDIDAD O SUPERFICIE)
MEDICIÓN DE MASA CELULAR
• DETERMINACIÓN DEL PESO SECO O
HÚMEDO DE LA CÉLULAS EN VOLUMEN
FIJO DEL CULTIVO
• CENTRIFUGACIÓN O FILTRACIÓN POR
MEMBRANA
MEDICIÓN INDIRECTA
• TURBIDEZ: MEDICIÓN DE ABSORBANCIA O
DENSIDAD ÓPTICA (DO)
• DO: PROPORCIONAL A LA CONCENTRACIÓN DE
PARTÍCULAS
• OTRAS: PRODUCCIÓN DE ÁCIDO O GAS EN
ORGANISMOS FERMENTADORES
PROCESOS DE
ESTERILIZACION
ESTERILIZACION
Eliminación de toda forma de vida
DESINFECCION
Reducción del número de microorganismos a un nivel
que no de lugar a una contaminación del alimento,
mediante agentes químicos, métodos físicos o ambos,
higiénicamente satisfactorios generalmente no mata las
esporas
ASEPSIA
Ausencia de microorganismos potencialmente
patógenos
CONTROL MICROBIOLOGICO

Es la inhibición, muerte o eliminación de los


microorganismos
OBJETIVO:
1. Para evitar la transmisión de la enfermedad y la
infección
2. Para erradicar microorganismos de un hospedador
que esta infectado
3. Para prevenir el deterioro y alteración de los
alimentos
4. Para que las diferentes superficies que entren en
contacto con alimentos y el hombre se encuentren
libres o a un nivel mínimo de contaminación
MÉTODOS DE
ESTERILIZACIÓN
METODOS FISICOS METODOS
✓ Calor Húmedo QUIMICOS
✓ Calor seco ✓ Alcoholes
✓ Filtración ✓ Fenoles
✓ Radiación ✓ Sales de Metales
Pesados
✓ Agentes oxidantes
(halógenos y H 2 O2 )
✓ Detergentes
✓ Colorantes
CALOR HUMEDO
▪ Manera más practica y confiable para esterilizar
▪ La Presión a vapor proporciona Tº superiores a las que
se obtienen por ebullición
▪ El aparato usado para este fin se llama Autoclave (olla
de Presión)
AUTOCLA
VE • Equipada con un dispositivo que
permite que la cámara se llene a
saturación de vapor y se
mantenga la Presión y Tº
constante durante un tiempo
deseado
• 121ºC / 15 Lbs / 15 min.
• Es importante eliminar el aire
completamente porque de lo
contrario no se alcanza la Tº
deseada.
• USOS: Medios de cultivo,
soluciones, material quirúrgico,
ropa, guantes…..material de
desecho.
• MECANISMO DE ACCION
COAGULACION DE
PROTEINAS
TEMPERATURAS SUPERIORES A LA DE
EBULLICIÓN
Presión de vapor Temperatura
(Lbs) ( ºC )
0 100º
5 109º
10 115º
15 121º

20 126º
¿DE QUE DEPENDE EL TIEMPO DE
ESTERILIZACIÓN?

❖ Naturaleza del material a esterilizar


❖ Tipo de recipiente
❖ Volumen del material
CALOR SECO

➢ Se recomienda cuando no se quiere


que el vapor a Presión tenga
contacto directo con el material a
esterilizar
➢ El Horno eléctrico o de gas es el
aparto usado comúnmente
➢ Generalmente el material que se
esteriliza por calor seco es: material
de vidrio (cajas petri, pipetas,
frascos, aceites, polvos…)
➢ 180ºC/ 30 min. o 170ºC /1 hora
➢ Mecanismo de acción:
Fragmentación de MC y
desnaturalización de proteínas
INCINERACIÓN
• Fuego directo . Método eficaz
de esterilización pero de
aplicación limitada
USOS:
• Material de desecho
infectado
• Destrucción de esqueletos y
animales de laboratorio
• Material biológico

• Asas bacteriológicas
RADIACIÓN
Def. Emisión y propagación de energía a través del
espacio o un material
Radiación UV
• Es la que se usa comúnmente como esterilizante
• Abarca una longitud de onda desde 150 a 3900 Å
• La λ efectiva con poder bactericida es de 2650 Å

• Se usan lamparas de UV de 2600 a 2700 Å para reducir la


población microbiana.
USOS: Quirófanos, cuartos de llenado aséptico en la industria
farmacéutica, previene formación de películas en la superficie
de alimentos (vinagre, encurtidos) En la desinfección de agua
cristalina y solo con una profundidad de 15 – 20 cm
Mecanismo de acción: Actúa destruyendo ácidos nucleicos
RADIACIONES IONIZANTES
▪ β ∂ X Flujo de electrones emitidos por sustancias
radioactivas
▪ Son costosas

▪ Dificiles de utilizar por la propagación de radiaciones

▪ Poder cancerígeno o mutagénico

USOS: Materia prima, Dx.


FILTRACIÓN

Existen 4 tipos de filtros


1. Celulosa (membrana de celulosa)

2. Asbesto

3. Fibra de vidrio

4. Flujo laminar
FILTRO CELULOSA

Uso: Sustancias sensibles al calor


(TERMOLÁBILES) como vacunas, vitaminas,
enzimas, sueros de animales…
FILTRO DE ASBESTO
Uso: Se usan para sustancias químicas a granel
p/e pinturas
FIBRA DE VIDRIO Y FLUJO LAMINAR
Usos: En industrias farmacéuticas y/ o laboratorios como
aire tratado filtrado circulante.
METODOS QUIMICOS

SUSTANCIAS QUE INHIBENDO MATAN GERMENES

“Todos los desinfectantes y/o


germicidas van acompañados de un
proceso de limpieza”
DESINFECTANTE Y/O
ANTISÉPTICO DEPENDE DE:

• Concentración
• Tiempo de exposición
• Cantidad de materia orgánica
• Temperatura de la solución
ALCOHOL (R-CH 2 – OH)

• Sustancia química que puede tener poder


bacteriostático o bactericida dependiendo de su
concentración.
• Poder bactericida al 70%
• A mayor Peso molecular son mas tóxicos
CH3 OH……. metílico
CH3 CH2 OH…… etílico
CH3 CH2 CH2 OH……… propílico
CH3 CH2 CH2 CH2 OH…… butílico
• Son disolventes de lípidos, se consideran
agentes deshidratantes
• En piel reducen flora microbiana
FENOLES

• Se utilizan en objetos inanimados


• Poder bactericida concentración entre 1 -5% en
solución acuosa
USOS: Sanitarios y cuartos de vestir
Algunos compuestos fenolicos son fungicidas ejemplo:
• ác. Fénico efectivo 2-5% (instrumentos, utensilios)
• Difenil-fenol, se usa para impregnar envolturas de frutos
cítricos evitando crecimiento de hongos
• Pentacloro fenol .-poder fugicida en la conservación de la
madera
SALES DE METALES PESADOS

• Usos: objetos inanimados y cuerpo humano


Ejemplo
*Sales de Mercurio (Hg) Merthiolate (antiséptico)
*Sales de plata (Ag) Tratamiento de agua
*Sales de cobre (Cu) Sulfato cúprico antiséptico
Desventajas : a mayor concentración tóxicos para
tejido, tienen efecto olgodinamico en pequeñas
cantidades ejercen efecto letal vs. bacterias
AGENTES OXIDANTES
• Se encuentran los Halógenos Cloro, Yodo, Fluor
también el peroxido de hidrogeno (H2O2)

CLORO Desinfectante más usado (liquido, solido, gas)


*Hipoclorito de sodio
*Hipoclorito de calcio
* Ac. hipocloroso

• Utilizados ampliamente en la industria y en el


hogar

• Existen diferentes concentraciones dependiendo


de su uso
Hipoclorito de Na 1% higiene personal

Hipoclorito de Na 4 - 6.5% blanqueador o desinfectante


clásico

Hipoclorito de Ca 5 – 70% Desinfectante en equipo de


lecheria
Mecanismo de acción destruyen u oxidan materia
orgánica
YODO
AGENTE GERMICIDA MÁS ANTIGUO
• Elemento poco soluble en agua pero soluble en alcohol
• En agua es soluble pero combinado con otras sales
como Yoduro de potasio o Yoduro de Sodio
• El yodo siempre se mezcla con un detergente en medio
ácido
• Existen diferentes concentraciones de acuerdo a su
uso.
• Se degrada con materia organica
DETERGENTES
• Agentes tenso activos, rompen Tensión
superficial…grasas
Ejemplos:
Jabón .- Desinfectante/ germicida , en aguas duras
pierde su efecto
Surfactantes.- Champúes, polvos (lavandería,
limpiadores)
Extrán .- Tiene tenso activos no dejan residuos
COLORANTES
• Agentes antimicrobianos, son derivados del
trifenil metano y algunos derivados de la
acridina
Ejemplos:
Cristal violeta
Verde de Metilo vs Gram(+)
Verde brillante
• Tratamiento de quemaduras y heridas

• Aplicaciones oftálmicas

• Irrigaciones de vejiga
•CLASIFICACIÓN
Y TAXONOMÍA
BACTERIANA
Nucleoide Citoplasma
Membrana
Cápsula celular

Pared
Flagelo Pili celular
La línea verde indica origen  bacteriano de los cloroplastos
La línea roja indica origen  bacteriano de las mitocondrias
DOMINIOS: Caracteres que los
definen

BACTERIA ARCHEA EUKARYA


Células  procariotas eucariotas
Núcleo con NO SI
Membranas enlazados por enlaces eter, enlazados por
lipídicas éster,  ramificado éster,
no ramificados no ramificados

organelas NO SI
 
ribosomas 70S 80S
dysenteriae Tiphy, pneumoniae
coli
cholerasius
La taxonomía es la ciencia de la clasificación, agrupa y separa los
organismos vivos de acuerdo a sus características fenotípicas o genéticas.
Para propósitos de clasificación, los organismos usualmente son reconocidos
en órdenes superiores, familias, géneros, especies y subespecies.

Es una ciencia ARTIFICIAL, influida por los avances en las técnicas.

SE DIVIDE
1. CLASIFICACION
2. NOMENCLATURA
3. IDENTIFICACION
“Es la ordenación de los microorganismos en grupos o taxones en función
de semejanzas mutuas o de parentesco evolutivos”

El objetivo es el de ser ESTABLE, OBJETIVA Y PREDICTIVA


“Es la asignación de nombres específico a los grupos taxonómicos de acuerdo a
criterios y normas preestablecidas y adminitidas internacionalmente”
“Es la parte práctica de la taxonomía, dado que permite encuadrar un
determinado organismo en un grupo taxonómico previamente establecido”
Las distintas categorías taxonómicas se definen por las propiedades y
características que poseen las bacterias que las integran.

Los datos reciben el nombre de caracteres taxonómicos. E incluyen


caracteres fenotípicos, genéticos y quimiotaxonómicos.
FENOTÍPICOS

▶ 1) MORFOLÓGICOS
▶ 2) BIOQUÍMICAS/FISIOLÓGICAS
▶ 3) SEROLÓGICAS
▶ 4) FAGOTIPIA
▶ 5) PRUEBAS DE INHIBICIÓN
GENÉTICOS

▶ 1 ) ADN / ARN: contenido de G+C,


hibridación ADN-ADN, secuenciación del
ARNr
QUIMIOTAXONÓMICOS

▶ 1) MEMBRANA CITOPLASMÁTICA: ácidos grasos, tipos de


lípidos polares, presencia de ácidos micólicos
▶ 2) PARED CELULAR: tipos de peptidoglucano, presencia
de ácidos teicoicos
▶ 3) PROTEÍNAS: comparación perfil proteínas, secuencia
de aminoácidos
T
A
ENFOQUE
X CLÁSICO

O
N
TAXONOMÍA
O NUMÉRICA

M
Í ENFOQUE
GENÉTICO O
A MOLECULAR
Usa las características bioquímicas, morfológicas y culturales, así como las
susceptibilidad a los antibióticos y compuestos inorgánicos, para determinar el
grado de similitud entre organismos.

Se calcula luego un coeficiente o porcentaje de similitud.

Se construye un dendrograma o matriz de similitudes entre los organismos.


Ejemplo de codificación de datos

Estados
Característicos Cepa A Cepa B Cepa C Cepa D
1 + + - 0
2 + + + +
3 + + + -
4 - + 0 0
5 + + + +
6 + + - +
7 + + - 0
8 0 - + +
9 + + + +
10 + + + -
11 + 0 - 0
12 + + + -
Coeficiente %S dispuesto de manera arbitraria

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
1 100 50 48 56 84 49 39 51 52 51 53 48
2 50 100 50 85 51 53 43 51 93 49 48 94
3 48 50 100 52 50 34 32 86 52 93 89 50
4 56 85 52 100 57 54 39 58 93 54 52 89
5 84 51 50 57 100 51 41 52 53 52 56 59
6 49 53 34 54 51 100 89 80 55 82 87 53
7 39 43 41 39 41 89 100 29 43 29 39 44
8 51 51 85 58 52 80 29 100 80 88 78 51
9 52 93 52 93 53 55 43 80 100 51 50 89
10 51 49 93 54 52 82 82 29 88 100 81 49
11 53 48 89 52 56 87 39 78 50 81 100 48
12 48 94 50 89 59 53 44 51 89 49 48 100
2
12 94
4 85 89 %S agrupados
9 93 89 93
3 50 50 52 52
10 49 49 54 51 93
11 48 48 52 50 89 81
8 51 51 58 80 86 88 78
6 53 53 54 55 34 82 87 80
7 43 44 39 43 32 29 39 29 89
1 50 48 56 52 48 51 53 51 49 39
5 51 59 57 53 50 52 56 56 51 41 84
2 12 4 9 3 10 11 8 6 7 1
El significado ideal de la identificación y clasificación debe ser comparar la
secuencia de genes en una cepa dada, con la secuencia de genes para
cada especie conocida.

El método que se usa es la hibridización.

Este método puede ser usado para medir el número de secuencias


de DNA que dos organismos cualesquiera tienen en común y para
estimar el porcentaje de divergencia dentro de las secuencias de DNA
que están relacionadas pero no son idénticas.
VENTA
JA
CLASI S DE LA
FICAC
GENET ION
ICA

• BRINDA UN CONCEPTO MÁS UNIFICADO DE


ESPECIE
• ES MÁS OBJETIVA Y ESTABLE
• SE PUEDEN ORGANIZAR ESQUEMAS DE
IDENTIFICACIÓN FIDEDIGNOS
• INDICA CÓMO EVOLUCIONARON LOS
MICROORGANISMOS Y CÓMO PUEDEN
AGRUPARSE
ESPECIE

Grupo taxonómico básico


Menos definido que para organismos superiores
Rasgos morfológicos no tan importantes
Puede ser considerada como una colección de cepas que
muestran muchos rasgos en común y difieren considerablemente
de otras cepas
Una CEPA de una especie es considerada como CEPA TIPO
(comparar)
SUBESPECIE

Basada en variaciones fenotípicas y genotípicas menores,


pero constantes. Es la categoría más baja aceptada
oficialmente
CATEGORÍAS
INFRASUBESPECIE

Nombre preferido Sinónimo Cepas que tienen

biovar biotipo prop bioquímicas o fisiológicas


especiales

serovar serotipo prop antigénicas distintivas

patovar patotipo prop patogénicas para ciertos


animales

fagovar fagotipo lisis por ciertos fagos

morfovar morfotipo rasgos morfológicos


especiales
TIPOS DE CLASIFICACIÓN

▶ 1) FENOTÍPICAS O FENÉTICAS
▶ 2) FILOGENÉTICAS O FILÉTICAS
La filogenética es un término que se refiere a
todo aquello propio o vinculado a la
Filogenia. En tanto, la filogenia,... Con el
origen, procedencia,
nacimiento…determinación de la historia
evolutiva de los organismos.
Se comparan macromoléculas que se comportan como
“cronómetros evolutivos”.
Sus características son:
1. distribución universal
2. realizar la misma función en todos los seres vivos
3. sus secuencias deben permitir la identificación de
regiones de homología y heterogeneidad
4. la tasa de cambio de la secuencia de la macromolécula
debe estar en correlación con la distancia evolutiva
EL USADO ES EL ARNr, Y DENTRO DE ELLOS EL 16S
A. TINCIÓN: Gram, AAR, Cápsula

B. MÉTODOS BIOQUÍMICOS: actividad enzimática, medios selectivos

C. MÉTODOS SEROLÓGICOS: aglutinación en porta, ELISA, IFI

D. TIPIFICACIÓN POR BACTERIÓFAGOS: altamente específicos (placa)

E. SECUECIACIÓN DE AMINOÁCIDOS

F. PERFIL DE ÁCIDOS GRASOS

G. COMPOSICIÓN DE BASES DEL DNA: % de G+C

H. HIBRIDIZACIÓN DEL DNA


CULTIVO PURO

MORFOLOGÍA DE COLONIA Y GRAM

CARACTERÍSTICAS DE PROPIEDADES PROPIEDADES


BIOQUÍMICAS
CRECIMIENTO ANTIGÉNICAS

CARACTERÍSTICAS GENÉTICAS O MOLECULARES

PORCENTAJE DE G+C HIBRIDACION ESTABILIDAD TÉRMICA


Diagnóstico Investigaciones
Clínico No microbiológicas

Tomar correctamente
Rotular y embalar adecuadamente
Almacenar y transportar correctamente

No teñidos o teñidos
con Gram u otra
tinción

Característica de colonia, morfología,


hemólisis, pigmento, etc.

Por difusión en
discos
Serología Tecnologías
o MIC de DNA
PACIENTE SINTOMÁTICO

Síntomas y signos característicos

Diagnóstico clínico presuntivo TOMA


DE MUESTRA
Sangre– Suero Esputo Orina
Hisopos Heces Muestra para Biopsias
anaerobiosis
Técnicas a seleccionar según Dx presuntivo

------------------------------------------------------------------------------------

Microscopía Cultivo P. Serológicas Hibridación


Aglutinación, DNA
FC,ELISA, IFI
Cuantificación
Medios selectivos y
P. bioquímicas no selectivos

---------------------------------------------------------------------------------------------------
Diagnóstico Definitivo--------------Antibiograma-----------------Tratamiento
TIPOS NUTRICIONALES

Tipo Fuente de Fuente de carbono Ejemplos


energía
Fotoautotrofas Luz CO2 Algas y
cianobacterias
Fotoheterotrofas Luz Compuestos Algas y bacterias
orgánicos fotosintéticas
Quimioautotrofas o Química Compuesto Pocas bacterias
Litotrofas inorgánicos: H2,
NH3, NO2, H2S,
CO2
Quimioheterotrofas o Química Compuesto La mayoría de
Heterotrofas orgánicos: glucosa bacterias
▶ GENERO - ESPECIE

NOMENCLATURA
IDENTIFICACION
BACTERIANA

● Aislar y distinguir microorganismos


● Verificar la autenticidad o propiedades de un
cultivo en una situación clínica
● Aislar e identificar el agente causal de una
enfermedad.
▶ Identificación preliminar de colonias
desarrolladas en medios
▶ Observación de morfología
▶ Pruebas bioquímicas o enzimáticas
▶ - Prueba de la catalasa
▶ - Prueba coagulasa
▶ - Prueba oxidasa
▶ - Prueba de Indol: Triptofanasa

IDENTIFICACION
▶ - Solubilidad en bilis: Enzima autocatalítica
▶ - Prueba de Ureasa: Hidroliza la urea en
amoniaco
▶ - Prueba de la termonucleasa:
Desoxirribonucleasa.
▶ Oxidación y fermentación
▶ Hidrólisis
▶ Degradación de aminoácidos
▶ Nitratos
▶ TSI (triple azúcar hieron)
▶ LIA (lisina hierro agar)

PRUEBAS BIOQUIMICAS
I. Eubacterias gram negativas que tienen paredes celulares
1. Espiroquetas
Treponema, Borrelia, Leptospira
2. Bacterias gram negativas aerobias/ microaerófilas,
´motiles/vibroides
Campylobacter, Helicobacter, Spirillum
3. Bacterias curvas no motiles
Ninguna

CLASIFICACION
4. Bacilos y cocos gram negativos
aerobios/microaerófilos
Alcaligenes, Bordetella, Brucella, Francisella,
Legionella, Moraxella, Neisseria,
Pseudomonas, Bacteroides.
5. Bacilos gram negativos
Enterobacterias
6. Bacilos gram negativos anaerobios, rectos, curvos, helicoideos
Bacteroides, Fusobacterium, Prevotella
7. Rickettsias y Clamidias
Rickettsia, Coxiella, Chlamydia
8. Bacterias fototróficas anoxigénicas
9. Bacterias fototróficas oxigénicas
10. Bacterias Quimiolitotróficas aerobias
11. Bacterias con gemación o apéndice
12. Bacterias con envolturas
13. Bacterias no fotosintéticas
14. Bacterias con órgano fructífero
II. Bacterias Gram positivas que tienen
paredes celulares
15. Cocos gram positivos
Enterococcus, Peptoestreptococcus,
Staphylococcus, Streptococcus
16. Bacilos y cocos gram positivos
formadores de endosporos
Bacillus, Clostridium
17. Bacilos no esporulados regulares
Erysepelothrix, Listeria
18. Bacilos no esporulantes irregulares
Actinomyces, Corynebacterium, Mobiluncus
19. Micobacterias
Mycobacterium
20. Actinomicetos
III. Eubacterias sin pared celular
21. Micoplasmas
Mycoplasma, Ureaplasma
IV. Arqueobacterias
22. Metanógenas 23. Reductoras de sulfato
24. Extremadamente halófilas
25. Metabolizadoras azufre
CLASIFICACION BACTERIANA
BACTERIAS

AEROBIAS ANAEROBIAS

GRAM POSITIVOS GRAM NEGATIVOS

COCOS BACILOS COCOS BACILOS

COCOBACILOS
AEROBIAS

GRAM POSITIVAS

COCOS

+ CATALASA -
Staphylococcus Streptococcus

S. aureus S. epidermidis S. saprophyticus HEMOLISIS


α β δ
S. viridans S. pyogenes S. bovis
S. pneumoniae S. agalactiae
Enterococos
AEROBIAS

GRAM POSITIVAS

BACILOS

+ ESPORAS -
BACILLUS
Erysipelotrhrix
B. anthracis B. cereus Listeria Corynebacterium
B. subtillis
L. monocytogenesC. diphtheriae, urealyticum
L. bulgarica C. xerosis, amycolatum
L. grayi C. equi, striatum, auris
C. ulcerans, durum, jeikeium
L. murrayi
AEROBIAS

GRAM NEGATIVOS

COCOS

NEISSERIAS MORAXELLAS

N. gonorrhoeae N. meningitidis M. catarrhalis M. lacunata


N. lactamica N.sicca N. mucosa
N. cinerea N. subflava N. flavescens
AEROBIAS

GRAM NEGATIVOS

BACILOS

OXIDASA + OXIDASA -
+

Campylobacter Pseudomonas, Eikenella E.coli, Shigella


C. jejuni Acinetobacter Klebsiella
H. pylori Stenotrophomonas Enterobacter
Vibrios Alcaligenes Serratia
Aeromonas Flavobacterium Proteus
Plesiomonas Achromobacter Salmonella
AEROBIAS

GRAM NEGATIVOS

COCOBACILOS

Haemophilus Bordetella Brucellas


H. aprhrophilus
H. influenzae B. pertussis B. suis
H. ducreyi B. parapertussis B. abortus
H. haemolyticus B. bronchiseptica B. melitensis
H. parainfluenzae B. canis
H. parahemolyticus Francisella
H. segnis Pasteurella
BACTERIAS

ESPIRALES MICOPLASMAS B.A.A.R

Micobacterias
TREPONEMA M. orale M. tuberculosis
BORRELIA M. salivarium M. leprae
LEPTOSPIRA M. genitalium M. bovis
SPIRILLUM M. hominis M. avium
M. kansasii

UREAPLASMA
BACTERIAS

RICKETSIAS COXIELLA CLAMIDIAS


EHRLICHIA

R. rickettsii C. trachomatis
R. conorii C. pneumoniae
R. akari C. psittacci
R. typhi
ANAEROBIAS

GRAM POSITIVAS

COCOS

Peptoestreptococcus
Peptococcus
Sarcina
Copracoccus
Ruminococcus
ANAEROBIAS

GRAM POSITIVAS

BACILOS

+ ESPORAS -
Clostridium
Propionibacterium
Mobiluncus
C. perfringens C. botulinum
Bifidobacterium
C. difficile C. tetani
Eubacterium
C. septicum C. ramonosum
Lactobacillus
C. novyi C. bifermentans
Rothia
Actinomices
ANAEROBIAS

GRAM NEGATIVOS

COCOS

Acidaminococcus
Megasphaera
Veillonella
ANAEROBIAS

GRAM NEGATIVOS

BACILOS

Bacteroides fragilis
Prevotella melaninogenica
Porphyromonas
Fusobacterium
Leptotrichia
Wolinella
UNIVERSIDAD NACIONAL DE
LOJA
ÁREA DE LA SALUD HUMANA
CARRERA DE MEDICINA

CURSO DE ACTUALIZACIÓN CIENTÍFICA DE


LA CARRERA DE MEDICINA

CONTROVERSIAS EN LA RESISTENCIA A LOS


ANTIBIÓTICOS: LA GRAN PANDEMIA

188
OBJETIVO

▶ Provocar un cambio en nuestra

189
forma de ver el problema de la
resistencia bacteriana y pensar que un
sueño de que todos actuemos de
forma diferente, si es posible
TEMAS:

1. EL PROBLEMA: (RESISTENCIA
BACTERIANA)

2. MICROBIOTA O MICROBIOMA
HUMANO

3. QUÉ HACER ANTE ESTE


PROBLEMA?

190
1. Resistencia a Antibióticos

191
192
MOLECULA NATURAL, SINTETICA O SEMISINTETICA, CAPAZ DE
INDUCIR LA MUERTE O DETENER EL CRECIMIENTO DE UNA
POBLACION BACTERIANA.
ANTIBIÓTICO
CLASIFICACION DE LOS ANTIBIOTICOS

Según sitio blanco


Inhibición de la
pared Replicación del DNA (DNA girasa)
ß-lactámicos Quinolonas
Sintéticos (Imipenem,
Ertapenem, meropenem,etc
cefalosporinas
Glicopéptidos
Fosfomicina
Bacitracina Síntesis proteica
50S:
Metabolismo del
ácido Fólico Eritromicina
Trimetoprim Clindamicina
Sulfonamidas
Síntesis proteica
30S:
Aminoglucósidos
Tetraciclina
193
Resistencia bacteriana…

Depende de...
el agente antimicrobiano.
la bacteria
el sitio donde se localiza la infección

194
Se puede cuantificar como un valor de concentración inhibitoria mínima
(CIM).
El valor de CIM puede aumentar entre 3 y 100 veces

“Cuando la resistencia se adquiere por “Cuando la resistencia se aquiere por


mutación la CIM aumenta de 3 a 5 transferencia horizontal de genes la
veces.” CIM aumenta por lo general entre 50 y
100 veces”
Orígenes de la Resistencia Adquirida…

“Un antibiótico es un metabolito producido por una bacteria o un hongo que a baja
concentración puede inhibir el crecimiento de bacterias...”

“La mayoría de los antibióticos utilizados derivan de compuestos producidos por

195
bacterias y hongos del suelo...”

“La flora microbiana del suelo desarrolló mecanismos para defenderse de la actividad
de los antibióticos, es decir son mecanismos naturales, anteriores al uso clínico de los
antibióticos...”

“Las bacterias pueden transmitir estos “Los genes normales de una bacteria
genes de defensa en forma horizontal pueden mutar, haciendo que los
desde una cepa resistente a un cepa antibióticos no puedan actuar”
sensible”
Mecanismos de Resistencia…
Resumen transferencia horizontal de resistencia...

196
TIPOS DE RESISTENCIA
NATURAL O INTRINSECA: propia del microorganismo. Por
ejemplo: resistencia a la Vancomicina en bacilos gram negativos

ADQUIRIDA: es aquel tipo de resistencia que determinada


especie la ha adquirido. Ej. la penicilina en S.pneumoniae

Esta resistencia puede ser: En un solo paso (Plasmídica)


En forma gradual (Cromosómica))

197
Resistencia…

• Resistencia Natural o intrínseca


i) la bacteria no tiene la molécula/reacción enzimática que es el blanco del
antibiótico.
ii) el antibiótico no puede ingresar al interior de la bacteria.

198
...es especie específica y género específica...

• Resistencia adquirida
i) se debe a la adquisición de genes que codifican para resistencia.
ii) o a la mutación de algunos genes (generalmente genes de las proteínas
blanco).
...es una propiedad específica de cada cepa (no todas las bacterias son
transformables)...
Mecanismos de Resistencia…

1. Modificación química (enzimatica) del antibiótico...

199
2. Modificación de la molécula blanco...

3. Disminución de la disponibilidad intracelular del antibiótico...


3.1. Se impide la entrada
3.2. Aumenta el eflujo (salida)

4. Establecimiento de una ruta metabólica alternativa...


MECANISMOS BIOQUÍMICOS DE RESISTENCIA

• Inactivación
enzimática
• Alteraciones de la
permeabilidad
• Alteraciones de la
molécula diana
• Nuevas vías
metabólicas

200
Mecanismos de Resistencia…
Resumen mecanismos de resistencia...

“Bombas de
expulsión”

“Enzimas que
degradan el
antibiótico”

“Enzimas que
modifican el
antibiótico”
201
Mecanismos de Resistencia…
1. Modificación química del antibiótico...
Inactivación de los β-lactámicos por β-lactamasas

202
Activa
O
R C NH S
CH3
O C N CH3

H COOH
Inactiva
Línea temporal de eventos

203
1932, 1952, 1956,
Descubrimiento Descubrimiento Disponible el
de las de la Se introduce la
Linezolid
Sulfonamidas Erythromycina Vancomicina
1900 2000

HISTORIA DE LOS ANTIBIÓTICOS


1962, 1980’s,
1928,
Descubrimiento 1940’s:Penicilina Surgimiento de Disponibles las
de la Penicillina comienza a las Quinolonas Fluoroquinolonas
comercializarse, síntesis
de cefalosporinas
DROGA AÑO DROGA AÑO

Kanamicina 1957
Tetraciclina 1952
Amikacina 1959
Rolitetraciclina 1958
Tobramicina 1967 Minociclina 1966
Metilmicina 1975 Cloranfenicol 1947
Penicilina 1928
Eritromicina 1952
Cefotaxima 1977
HITOS EN 1962
Lincomicina LOS Imipenem 1976

FÁRMACOS
Clindamicina 1966
Aztreonam 1981
Acido Clavulánico 1976
RESISTENCIA A LOS ANTIMICROBIANOS

USO RESISTENCIA
DROGA DESCUBRIMIENTO
CLÍNICO CLÍNICA
PENICILINA 1928 1943 1954
ESTREPTOMICINA 1944 1947 1956
TETRACICLINA 1946 1952 1956
ERITROMICINA 1952 1955 1956
VANCOMICINA 1956 1972 1997
GENTAMICINA 1963 1967 1968
FLUOROQUINOLONAS 1978 1982 1985
Ronald et al (1966), Kammer (1982), Davies (1997), O’Brien (1997),
Soussy (1998), Weidermann & Heisig (1999).
AMENAZAS
PARA EL
FUTURO

▶ Varias compañías han anunciado el retiro o disminución de la


investigación en antibacterianos (Aventis, Bristol Myers Squibb, Lilly,
Glaxo Smith Kline, Procter & Gamble, Roche y Wyeth)

▶ En el año 2002, de 89 nuevos medicamentos aprobados por la FDA,


no se aprobó fármaco antibacteriano alguno

▶ El otro dato inquietante es que actualmente de 506 nuevas moléculas


en desarrollo por los principales laboratorios internacionales, sólo 6 son
antibacterianos

http://microbiosdetrigoso.blogspot.com
EPÍLOGO

Y ES QUE COMO DICE EL VIEJO


REFRAN:
“ LO QUE NO LOS MATA, LOS
HACE MAS FUERTES”
ENFERMEDADES

INFECCIONES RESPIRATORIAS AGUDAS



ENFERMEDADES DIARREICAS
ENFERMEDAD DE CHAGAS
DENGUE – CHIKUNGUNYA - ZIKA
SIDA
MALARIA
TUBERCULOSIS
INFECCIONES ASOCIADAS A CUIDADOS EN SALUD (IIH)
ENFERMEDADES REEMERGENTES: PESTE - ÉBOLA
PROBLEMAS EMERGENTES: RESISTENCIA ANTIMICROBIANA

CAUSAN MAS DEL 85% DE LA


MORTALIDAD POR INFECCIONES EN
EL MUNDO
CLASIFICACIÓN SEGÚN GRADO DE RESISTENCIA A
LOS ANTIMICROBIANOS

▶ Multirresistente” (MDR): Patógeno resistente a


por lo menos 3 clases de antimicrobianos a los que
habríamos esperado sensibilidad

▶ “Extremadamente resistente” (XDR): Sólo


quedan 1 o 2 opciones de antimicrobianos frente a los
cuales el microorganismo es sensible

▶ “Panrresistente” (PDR): Patógeno resistente a


todos los antimicrobianos comercialmente disponibles
Estados Unidos: Los CDC inician programa para erradicar las
superbacterias
5 de abril de 2015 – Fuente: Reuters
La Organización Mundial de la Salud
declaró a la resistencia antibiótica una
emergencia mundial. Los CDC estiman que
en Estados Unidos causan dos millones de
infecciones graves y 23.000 muertes por
añoo, cifras que, para algunos
especialistas son conservadoras.
Muchas de estas infecciones ocurren en los
hospitales. Los CDC estiman que uno de cada 20

213
pacientes internados adquiere una infección
derivada del tratamiento médico.

El plan presidencial para los CDC promete


reducir 60% las infecciones por
microorganismos resistentes al final de la
década y disminuir las infecciones sanguíneas
por Staphylococcus aureus resistente a la
meticilina (SARM)
PRESENTARON LA ESTRATEGIA NACIONAL DESTINADA AL
CONTROL DE LA RESISTENCIA ANTIMICROBIANA (ARGENTINA)
31 de julio de 2015 – Fuente: Ministerio de Salud (Argentina)

El ministro de Salud de Argentina, Daniel Gustavo Gollán,


presentó el 31 de julio ante autoridades, directores y
coordinadores de la cartera sanitaria la estrategia nacional
destinada al control de la resistencia antimicrobiana, para hacer
frente a “un problema mundial que tenemos y que va a sobrevenir
en un futuro no muy lejano si no hacemos más al respecto”, tal
como él mismo afirmó.
“La resistencia es un proceso natural de adaptación biológica que
se dará a una velocidad cada vez mayor si no corregimos muchas
de las cosas que estamos haciendo mal”, explicó Gollán.
Entre los lineamientos de la estrategia se incluyen acciones desde
la Administración Nacional de Medicamentos, Alimentos y
Tecnología Médica (ANMAT) como la fiscalización en las
farmacias sobre las recetas para que no se vendan antibióticos sin
prescripción médica.
GRAN BRETAÑA: LOS MÉDICOS PRESCRIBEN
ANUALMENTE 10 MILLONES DE ANTIBIÓTICOS
INNECESARIOS
23 de agosto de 2015 – Fuente: National Institute for Health and Care Excellence (Gran Bretaña)

Una de cada cuatro recetas de antibióticos emitidas en


Gran Bretaña es probable que sean innecesarias. Así lo
ha puesto de manifiesto Marcos Baker, director de
práctica clínica del Instituto Nacional para la Salud y
Atención de Excelencia (NICE), quien anunció que al
año la cifra está cerca de los 10 millones en total y que
su prescripción es probable que sea innecesaria porque
los pacientes buscan doctores que solo atienden sus
demandas para medicamentos. Baker alertó de que se
está viviendo una creciente crisis ya que el uso abusivo
de algunos fármacos está permitiendo que las
bacterias desarrollen resistencia, lo que lleva a ser una
amenaza para la asistencia sanitaria.
1010 = 10,000.000.000
10-5 a 10-8 (10-6) = 1/1,000.000
luego entonces habrán 10.000 mutantes
Sí 1% entonces: 100 mutantes
UNA FORMA MÁS
En 1 hora: 800 mutantes
En 10 horas: nuevamente billones !!!
FÁCIL DE VER EL
PROBLEMA…
PERO HAY OTRA FORMA
DE LOGRAR LA RESISTENCIA A LOS
ANTIMICROBIANOS…

PRINCIPAL FACTOR DE RIESGO

Uso Indiscriminado de Antimicrobianos


PRESIÓN SELECTIVA
SELECCIÓN DE CEPAS
RESISTENTES A LOS
ANTIMICROBIANOS

xx
Cepas resistentes
raras xx

xx
xx Exposición a
antimicrobianos
xx
xx

Cepas resistentes
predominantes
¿ CÓMO AFECTA ?

MAYOR SUFRIMIENTO HUMANO


AUMENTO DE LA MORTALIDAD
MAYOR TIEMPO DE HOSPITALIZACIÓN POR
INEFICACIA EN LOS TRATAMIENTOS
DESACREDITACIÓN PROFESIONAL E
INSTITUCIONAL
JUICIOS POR MALA PRAXIS MÉDICA
AUMENTO DEL COSTO DE LA ATENCION DE
SALUD
LA RESISTENCIA MATA…

Las infecciones resistentes a múltiples fármacos causan al


año 25.000 muertes en Europa y 23.000 muertes en Estados
Unidos, según los datos del Centro Europeo para la
Prevención y el Control de las Enfermedades (ECDC)
Aunque el costo total de las resistencias antimicrobianas es
difícil de calcular, en 2014, el ECDC y la Agencia Europea de
Medicamentos (EMA) estimaron que el costo total para la
Unión Europea en términos de costos de atención médica
adicionales y las pérdidas de productividad fue de al menos
1.880 millones de dólares
En Europa, se estima que se producen cada año 3,2 millones
de infecciones hospitalarias, de las cuales 51.901 están
causadas por bacterias RESISTENTES a antibióticos
carbapenémicos
MEDICOS PRESCRIPCIÓN
LABORATORISTAS INAPROPIADA
ODONTÓLOGOS

SELECCIÓN
DE MUTANTES
RESISTENTES

EXPLOSIÓN
DE LA
RESISTENC
IA
PROMOCIÓN COMERCIAL
PRESCRIPCIÓN NO ÉTICA
INAPROPIADA

EXPENDEDORES
PRESCRIPTORES

ANTIBIOGRAMAS
SIN CALIDAD

INFORMACIÓN
INSUFICIENTE

FÁRMACOS NO
CONTROLADOS
MALOS HÁBITOS
DE USO

DESCONOCIMIENTO EN ANTIMICROBIANOS
MECANISMOS LEGISLACIÓN EN ALIMENTOS
DE RESISTENCIA NO APLICADA PARA ANIMALES
________________________________

2. MICROBIOMA HUMANO Y
ENFERMEDAD PLANETARIA:
_______________________________
•Enfermedad planetaria de los
eco microbianos
▶ Masiva producción

225
antropogénica de AMR •Infecciones intratables

▶ Uso y abuso: medicina •Incremento de nuevas


humana, veterinaria y patologías
agricultura
•Riesgo de fracaso de los
avances médicos
▶ Liberación al medio ambiente
PROBLEMA Y
CONSECUENCIAS
SALUD HUMANA

SALUD GLOBAL SALUD DEL AMBIENTE

▶ Enfermedades del ser


humano, de los animales y
de los vegetales Salud de la
microbiósfera
CUERPO HUMANO:
TERRITORIO DENSAMENTE POBLADO
PARTO Y NACIMIENTO :
LACTOBACILLUS JOHNSONNI
NUESTRAS AMIGAS: LAS BACTERIAS
¿PUNTADAS DISPAREJAS?
¿ SOMOS MÁS “BACTERIAS” QUE HUMANOS?
 
▶ Tenemos diez veces más células
▶ Un micoplasma es al cuerpo microbianas que humanas,
humano como éste al planeta.
▶ Diez billones de células
▶ El cuerpo humano es la biósfera eucariotas, , y cien billones de
para nuestras bacterias células procariotas.

▶ La relación altura de un ser ▶ Las bacterias del cuerpo pesa 1,25


humano/ diámetro de la Tierra, kg, el 10 % de nuestro peso en
12.756 km: 7,5 × 106 seco.
 
▶ La relación bacteria más ▶ Heredamos de nuestros padres:
pequeña de vida libre, unos 23.000 genes.
Mycoplasma genitalium ( 0,225
μm de diámetro) /altura de una
persona da también 7,5 × 106 ▶ El microbioma intestinal aportaría
3,3 millones de genes.
 
 
MICROBIOTA / MICROBIOMA

•el árido desierto de la frente,


•los bosques fríos del antebrazo,
•las selvas húmedas de la axila,
•los lagos ácidos del estómago,
•los densos pantanos de los intestinos
repletos de alimentos y carentes de aire,
•las biopelículas de lactobacilos
fermentadores de la vagina.
TRASTORNOS RELACIONADOS CON LA
MICROBIOTA: ALERGIAS
  
▶ Incremento uso de
antibióticos
▶ Susceptibilidad alergia y
asma
▶ Higiene, asepsia, peligrosa

▶ Resistencia al asma,
▶ Desarrollo del microbioma
enfermedad inflamatoria
intestinal.
▶ Relación entre contacto
temprano y microbiota del
▶ Aprende a No reaccionar
recién nacido y de la
exageradamente a ciertos
infancia
alérgenos
 
▶ Abundancia relativa de dos filos ▶ La proporción de
dominantes de bacterias:
Bacteroidetes y Firmicutes. Bacteroidetes disminuye en
los individuos obesos
▶ La proporción aumenta con
▶ Rasgo «transmisible»: la colonización la pérdida de peso por
de ratones gnotobióticos (libresde
microorganismos) dietas hipocalóricas

▶ Resultados indican claramente que



Con microbiota de ratones
la microbiota intestinal es un factor
adicional que contribuye a la obesos aumenta
obesidad.
significativamente la grasa
TRASTORNOS
  RELACIONADOS
▶ La microbiota de obesos aumenta la corporal
CON
LAcapacidad
MICROBIOTA: OBESIDAD
de aprovechamiento
energético de la dieta. ▶ Con microbiota de un ratón
delgado, no aumenta la
grasa corporal
__________________________

3.QUÉ HACER ANTE ESTE PROBLEMA?

237
_______________________
_____
DECLARACIÓN SOBRE RESISTENCIA A LOS ANTIBIÓTICOS,
GINEBRA, 2014
COALICIÓN PARA AFRONTAR LA RESISTENCIA A LOS
ANTIBIÓTICOS
1. LOS ANTIBIÓTICOS CLÍNICAMENTE ÚTILES
SON UN RECURSO FINITO, UN BIEN GLOBAL,

238
PÚBLICO Y ESENCIAL. LOS GOBIERNOS Y LA
INSTITUCIONES INTERNACIONALES NO DEBEN
SUBORDINAR LA PROTECCIÓN DE LOS
CONSUMIDORES Y LA SALUD PÚBLICA AL AFÁN
DE LUCRO
2. TODAS LAS POLÍTICAS Y PRÁCTICAS
REFERIDAS AL USO DE ANTIBIÓTICOS DEBEN
SUSTENTARSE EN EL ENFOQUE ECOLÓGICO DE

239
LAS BACTERIAS Y SU IMPORTANCIA PARA LA
SALUD HUMANA, ANIMAL Y ECOSISTÉMICA
3. SE NECESITA LIDERAZGO PÚBLICO PARA ADOPTAR
NUEVOS MODELOS DE INVESTIGACIÓN Y
DESARROLLO QUE RESPONDAN A LAS NECESIDADES

240
BASADAS EN LA INVESTIGACIÓN ABIERTA Y
TRANSPARENCIA DE LOS DATOS, QUE IMPULSE EL USO
APROPIADO Y EL ACCESO EQUITATIVO A LOS
ANTIBIÓTICOS
4. LA ACCIÓN A NIVEL NACIONAL ES VITAL, LA
COOPERACIÓN INTERNACIONAL ES ESENCIAL Y
LA RESPONSABILIDAD COLECTIVA DE TODOS
LOS ACTORES ES CRUCIAL PARA LOGRAR UNA

241
SOLUCIÓN A LA CRECIENTE CRISIS DE LA SALUD
PRODUCIDA POR LA RESISTENCIA A LOS
ANTIBIÓTICOS
5. UNA ESTRATEGIA EFECTIVA PARA CONTENER
LA RESISTENCIA A LOS ANTIBIÓTICOS REQUIERE
QUE LOS DETERMINANTES SOCIALES Y
ECONÓMICOS DE LAS ENFERMEDADES
INFECCIOSAS SE HAN CONSIDERADOS. EN

242
MUCHAS PARTES DEL MUNDO , ESTOS SE
MANIFIESTAN EN LA POBREZA, EXPLOTACIÓN,
RELACIONES DE PODER INTERNACIONALES Y
LAS DESIGUALDADES LOCALES, ASÍ COMO LA
FALTA DE ACCESO A UNA NUTRICIÓN
ADECUADA, AL AGUA POTABLE Y AL
SANEAMIENTO.
GRACIAS

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