Reacción temprana del tejido en la zona de tensión del PDL durante el movimiento

dental ortodóntico
Resumen
Objetivo
El objetivo del estudio fue examinar la reacción temprana del tejido en la zona de
tensión del ligamento periodontal (PDL) durante el movimiento dental ortodóncico.
Diseño
Los primeros molares superiores de las ratas se movieron bucalmente con aparatos
fijos. La PDL en la zona de tensión se examinó histológicamente,
inmunohistoquímicamente y a nivel molecular después de 24 h, 3 días y 7 días.
Resultados
Después de 24 h de carga de fuerza de ortodoncia, el espacio periodontal apareció
considerablemente expandido. Las fibras periodontales se estiraron entre el hueso
y la raíz. Tres días después de la carga, el espacio periodontal expandido se había
estrechado ligeramente, la disposición de la fibra periodontal estaba relajada y los
vasos sanguíneos no parecían alargados. Se formó una capa osteoide considerable
en la superficie del hueso.
Las áreas transversales totales de la PDL en grupos experimentales fueron
significativamente mayores que el grupo control. Las áreas transversales totales de
los vasos sanguíneos no fueron significativamente diferentes entre los grupos.
Significativamente altas expresiones de IL-1β y PTX3 se observaron
característicamente no solo en las células endoteliales y en las células alrededor
del vaso sanguíneo, sino también en los fibroblastos en todo el PDL de la zona de
tensión 24 horas después de la carga de fuerza ortodóncica. Tres y 7 días después
de la carga, mostraron tendencias a volver a los niveles de control.
Conclusiones
Los resultados actuales sugieren que la reacción temprana en la zona de tensión
de la PDL durante el movimiento dental consta de dos fases: primero, inflamación
y, segundo, recuperación rápida y renovación de la PDL con formación de hueso.
Palabras clave
Interleucina-1 betaPentraxina 3Factor de crecimiento de fibroblastos
básicoInflamaciónMicrodisección de captura láser
1. Introducción
En ortodoncia, se han realizado numerosos estudios sobre reacción tisular del
ligamento periodontal (PDL) durante el movimiento dental. La mayoría de ellos
examinó la reacción del tejido en el zona de presión de PDL morfológicamente
(Goldman y Gianelly, 1972; Noda, Nakamura, Kogure y Nomura, 2009; Rygh, 1972;
Reitan, 1960) e histoquímicamente (Baba, Kuroda, Arai, Nakamura, y Sato, 2011),
así como a nivel molecular (Krishnan y Davidovitch, 2006). En consecuencia, la
reacción del tejido ha sido identificada como proceso de inflamación con
degeneración de la PDL comprimida y notable resorción ósea osteoclástica
(Nakamura, Tanaka, y Kuwahara, 1996; Nakamura et al., 2008).
Hay pocos estudios sobre la reacción del tejido en la zona de tensión del PDL, en
comparación con aquellos en la zona de presión. Estos estudios mostraron que las
fibras periodontales se estiraron y los osteoblastos se activaron formando hueso
nuevo a lo largo de la superficie del hueso (Reitan, 1947; Rygh, 1976; Tsurubuchi,
1992). Saito, Saito, Ngan, Shanfeld, Davidovitch (1991) demostró la localización de
IL-1b en zona de tensión de PDL durante el movimiento dental y sugirió que IL- 1b
podría estar estrechamente asociado con la respuesta de las células PDL a fuerzas
de tensión. Sin embargo, no está claro si la inflamación fue inducida en la zona de
tensión del PDL durante el movimiento del diente.
IL-1b es una de las citoquinas inflamatorias típicas estrechamente relacionado con
el inicio de la inflamación aguda (Dinarello, 1996; Oppenheim, Kovacs, Matsushima
y Durum, 1986). Pentraxina 3 (PTX3), que se expresa principalmente por las células
endoteliales de la sangre vasos, es un nuevo biomarcador de enfermedad vascular
inflamatoria (Breviario et al., 1992; Cie slik & Hrycek, 2015; Fazzini et al., 2001;
Souza, 2002; Suzuki et al., 2008; Lee y otros, 1994). La expresión de IL-1b y PTX3
aumentan con la estimulación inflamatoria. bFGF es uno de los factores de
crecimiento que juegan un papel importante en el
diferenciación de los osteoblastos (Marie, 2003; Fei, Xiao, Doetschman, Coffin, &
Hurley, 2011), proliferación de fibroblastos (Takayama et al., 1997) y el desarrollo
de elementos vasculares (Folkman & Klagsbrun, 1987; Moscatelli et al., 1988), que
son esenciales para la reorganización del sistema de fibras del PDL y la
remodelación de hueso alveolar en la zona de tensión del ligamento periodontal.
Presumimos que la reacción tisular temprana del PDL en la zona de tensión
involucró un proceso patológico. En este estudio, nosotros examinamos la reacción
temprana del PDL en la zona de tensión morfológicamente,
inmunohistoquímicamente y a nivel molecular nivel.

2. Materiales y métodos

2.1. Diseño experimental

El protocolo experimental fue realizado en animales, fue aprobado por el Comité
Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad Tsurumi y llevado a
cabo de conformidad con las Directrices para Experimentación animal de la
Universidad Tsurumi. Cuarenta y nueve ratas Wistar machos (peso corporal desde
300-320 g, 10 semanas de edad), mantenidos en un campo libre de patógenos
específico medio ambiente, se dividieron en cuatro grupos. Las ratas fueron
alojadas en grupos en jaulas de vivarium estándar y mantenidas en luz durante 12
h: 12 h ciclo oscuro; tenían acceso ad libitum alimento y agua a la rata estándar
Tres grupos eran grupos experimentales y el otro sirvió como grupo de control no
tratado (n = 13). La parte superior primero molares (M1) en los tres grupos se
movieron bucalmente con aparatos durante 24 h (n = 13), 3 días (n = 13) y 7 días
(n = 10). las ratas fueron anestesiadas con una inyección intraperitoneal de 1 ml /
kg pentobarbital sódico y el aparato de ortodoncia con 0.012 helicoidales de acero
inoxidable se fijó en los incisivos superiores con resina adhesiva dental (Fig. 1a, b).
La magnitud de la fuerza inicial la de ortodoncia fue de aproximadamente 0.1 N.
Para aplicar la ortodoncia fuerza, el resorte fue cuidadosamente unido a una
muesca preparada por fresa con punta de diamante en la superficie lingual de la
primera corona molar.

2.2. Preparación para histología e inmunohistoquímica

Al final de los períodos experimentales, tres ratas cada una en el Grupos de control
y de 24 horas, 3 días para estudio histológico, y cinco ratas cada una en los grupos
de control y de 24 horas, 3 días, 7 días para estudio histomorfométrico e
inmunohistoquímico fueron perfundidos con 0,1 M de paraformaldehído tamponado
con fosfato (pH 7,4) fijador (30 minutos para el estudio histológico, 10 minutos para
estudio histomorfométrico e inmunohistoquímico) a través de su aorta ascendente
bajo anestesia profunda con pentobarbital. Después de la fijación de perfusión, los
aparatos de ortodoncia se retiraron y los maxilares fueron disecados y recortados
en bloques más pequeños que contienen primeros molares. Todos los bloques
fueron descalcificados en EDTA al 10% (p / v) durante 3 semanas, y luego se lava
durante la noche con 0.1 M PBS a 4 C. Luego se deshidrataron en etanol graduado
serie, e incrustado en parafina. Los bloques fueron seccionados transversalmente
para obtener secciones seriales de 6 mm. Las secciones para el estudio histológico
fueron teñidas con hematoxilina-eosina y azan para observar las fibras de PDL. Las
secciones para el estudio histomorfométrico se tiñeron con toluidina azul. El PDL en
el área cervical de la raíz mesial de la parte superior primero molares se observó
principalmente en este estudio (Fig. 1c)

2.3. Histomorfometría
Un área de 600 x 800um2 incluyendo el máximo estirado región en el PDL cerca del
centro en el lado lingual fue seleccionado para la medición (Fig. 1d); dos secciones
en cada grupo, dando 10 medidas en total Todas las áreas transversales de la PDL
y los vasos sanguíneos se midieron con Photoshop CS6 Extended (Adobe Systems
Incorporated, San José, CA, EE. UU.) (Fig. 1e)

2.4. Inmunohistoquímica
Las secciones para inmunohistoquímica se tiñeron con toluidina azul para la
orientación. Las otras secciones se incubaron para 30 minutos en 3% de H2O2 para
apagar la actividad de peroxidasa endógena y luego bloqueado con suero de caballo
durante 20 minutos en la habitación temperatura. IL-1b, PTX3 y bFGF se detectaron
mediante el uso de anticuerpos primarios policlonales de conejo (dilución 1: 100;
Bioworld Technology, Inc., St. Louis Park, MN, EE. UU .; Enzo Life Sciences, Inc.,
Farmingdale, Nueva York, EE. UU .; y Santa Cruz Biotechnology, Inc., Dallas,
Texas, EE. UU.). Las secciones se incubaron con el primario anticuerpos durante
90 min a 50 C, y luego con micro polímero vinculado anticuerpos secundarios
(ImmPRESS REAGENT Anti-Rabbit Ig) (Vector Laboratories, Burlingame, CA, EE.
UU.). La tinción era visualizado usando 2-diaminobenzidine (DAB) como
sustratocromógeno y azul de toluidina contratinteado.

2.5. Microdisección de captura láser (LCM)

Al final del período experimental, el maxilar de cinco ratas cada uno en los grupos
de 24 horas, 3 días, 7 días y control fueron diseccionado y sumergido rápidamente
en isopentano enfriado con líquido nitrógeno bajo anestesia de Nembutal. Los
tejidos congelados eran recortado con un disco de diamante dental en bloques más
pequeños conteniendo el primer molar Los tejidos congelados fueron incrustados
en O.C.T. compuesto (Sakura Finetek Inc., Torrance, CA, EE.UU.) y regresó a
nitrógeno líquido hasta la O.C.T. compuesto estaba completamente congelado Los
bloques congelados de las veinte ratas luego se montaron en trozos preenfriados
a? 25? C en un criostato (Leica Microsystems, Wetzlar, Alemania) con O.C.T.
compuesto y seccionado transversalmente con un cuchillo de acero de tungsteno
súper duro (Meiwa Shoji Ltd., Tokio, Japón). Secciones en serie de 7 mm de
espesor fueron recogidos individualmente con cinta adhesiva de gran alcance
(Kawamoto método) en el criostato. Las secciones congeladas se arreglaron con
100% etanol durante 1 minuto El PDL en la zona de tensión se microdiseccionó de
las secciones que usan P.A.L.M. Sistema Micro Beam (P.A.L.M. Microlaser
Technologies AG, Bernried, Alemania) equipado con un láser de nitrógeno (337 nm)
para cortar, extirpar y recolectar tejidos mediante tecnología de catapulta a presión
láser (Nakamura et al., 2007) (Fig. 1f, g). Después de LCM, las muestras disecadas
fueron expulsadas desde el plano del objeto sin contacto mecánico y catapultado
directamente en un tapón de microfuga usando un solo disparo de láser para
posterior extracción de ARN. Se tomaron muestras de aproximadamente 10
secciones Las muestras de control (sin movimiento dental) también fueron
recogidos de la misma manera.

2.6. Aislamiento de ARN y RT-qPCR

Después de que la PDL se diseccionó de cada muestra, el ARN era extraído
utilizando el RNeasy Micro Kit (Qiagen, Hilden, Alemania), de acuerdo con las
instrucciones del fabricante. Un paso en tiempo real El análisis de PCR se realizó
con One Step SYBR PrimeScript RTPCR Kit II (TaKaRa Bio Inc., Japón) en un termo
Cycler Dice Real Time System (TaKaRa Bio Inc.) usando los cebadores descritos
en Tabla 1. Las condiciones de PCR fueron de 95 ° C durante 30 s, 45 ciclos de
desnaturalización a 95 ° C durante 5 s y recocido y extensión a 60 ° C durante 30 s,
seguido de disociación y una desnaturalización estándar curva. La curva estándar
para cada gen se trazó mostrando Ct versus el valor logarítmico de las
concentraciones diluidas de ARN. Los la cantidad de ARNm de cada gen en cada
muestra se cuantificó mediante extrapolando de la curva estándar para cada gen,
como se describe en un estudio previo (Arai, Ohnuki, Umeki, y Saeki, 2005). Todas
los experimentos se repitieron por triplicado usando ARN extraído de cinco muestras
independientes

2.7. análisis estadístico

Todos los datos se presentaron como media y desviación estándar. Los ANOVA y
la prueba HSD de Tukey se usaron para evaluar estadísticas significado (SPSS1
11.0J; IBM, Chicago, IL, EE. UU.). P <0.05 fue
considerado estadísticamente significativo.

3. Resultados

3.1. Observación histológica

Secciones fijadas por perfusión del PDL del primer área molar en el
grupo de control mostró que el PDL se interpuso entre el
raíz y hueso alveolar. Osteoblastos y cementoblastos fueron vistos
en las superficies del hueso y el cemento, respectivamente. los
los fibroblastos se dispersaron en la PDL (Fig. 2a). Fibras periodontales
mostró una disposición de malla y cada fibra PDL mostró una
configuración ondulada en el PDL, especialmente en el tercio medio de
PDL (Fig. 2b)
En contraste con las observaciones en el grupo de control, estructural
se habían producido cambios en la PDL 24 h después de la fuerza ortodóncica
cargando (Fig. 2c). En la zona de tensión (PDL cervical lingual), la
espacio periodontal se había ampliado considerablemente y el celular
los elementos parecían alargarse entre las fibras periodontales.
Los vasos sanguíneos también se vieron alargados entre el periodontal
fibras. La disposición típica ondulada de las fibras periodontales era
perdido y las fibras periodontales estaban extremadamente estiradas entre
el hueso y la raíz (Fig. 2d).
Tres días después de la carga de la fuerza de ortodoncia, la expansión
el espacio periodontal se estrecha ligeramente y la fibra periodontal
la disposición parecía estar relajada entre el hueso y la raíz,
en comparación con las observaciones 24 h después de la fuerza ortodóncica
cargando. No hubo signos de elongación en la aparición de sangre
recipientes (Fig. 2e, f).

3.2. Histomorfometría
En imágenes seleccionadas de PDL, los vasos sanguíneos se revelaron como
círculos blancos dispersos en el PDL para todos los períodos experimentales
(Fig. 3a-d).
Áreas transversales totales de la PDL a las 24 h, 3 días y 7 días
fueron significativamente más grandes que la del grupo control (Figuras 4a y
5a). El área se incrementó rápidamente a las 24 h después de la fuerza de
ortodoncia
carga y luego disminuyó gradualmente a los 3 días y 7 días. Total
áreas transversales de los vasos sanguíneos mostraron una ligera disminución
después de la carga de la fuerza de ortodoncia, pero la disminución no fue
significativamente diferente entre los grupos (Figuras 4b y 5b). los
relación del área de los vasos sanguíneos al área de la PDL fue significativamente
disminuyó 24 horas y 3 días después de la carga de la fuerza de ortodoncia, como
comparado con el del control. La proporción se incrementó ligeramente
más tarde (figuras 4c y 5c).

3.3. Observación inmunohistoquímica

Análisis inmunohistoquímico de secciones teñidas con azul de toluidina reveló los
cambios de superficie de la superficie del hueso, así como la cambios en PDL.
Aunque no hubo cambios detectables en el superficie ósea 24 h después de la carga
de ortodoncia (Fig. 6b), un cambio fue evidente en la superficie del hueso tres días
después de la carga. UN capa considerable de nuevo osteoide con tinción
metacromática se había producido a lo largo de la superficie del hueso calcificado
(Fig. 6c). los los osteoblastos se alinearon a lo largo de la capa osteoide. Después
de siete días, el espacio periodontal se hizo más estrecho y una capa de osteoide
Todavía se observó en la superficie del hueso calcificado y los osteoblastos eran
presente a lo largo del osteoide (Fig. 6d). El análisis inmunohistoquímico demostró
diferentes aspectos en la reacción tisular de la PDL, en comparación con la
convencional recomendaciones. No hubo una ubicación característica del IL-1b en
el secciones de control de PDL (Fig. 6f). Sin embargo, 24 h después de la ortodoncia
carga de fuerza, se observó IL-1b a lo largo de PDL (Fig. 6g). Era ubicado en la
mayoría de los fibroblastos y células endoteliales en el PDL expandido (Fig. 6g-H).
Apenas se observó en el PDL 3 días después de la carga (Fig. 6h), y luego se
mantuvo casi sin cambios (Fig. 6i). PTX3 se detectó en las células endoteliales y
también en las células alrededor de los vasos sanguíneos. También se detectó en
algunos de los osteocitos en las secciones de control (figura 6k). La ubicación de
PTX3 en el PDL 24 h después de la carga de la fuerza de ortodoncia fue bastante
diferente de eso en el control. Fue fuertemente detectado no solo en el células
endoteliales y las células alrededor de los vasos sanguíneos, sino también en el
fibroblastos a lo largo de PDL (Fig. 6l, l-H). Tres días después de la carga, la
ubicación en las células endoteliales fue similar a la de 24 h después carga (Fig.
6m, m-H). Pero su intensidad en los fibroblastos parecía ser más débil a los 3 días
que a las 24 h. PTX3 desapareció de la mayoría de los fibroblastos Siete días
después de la carga de la fuerza de ortodoncia, PTX3 se localizó en las células
endoteliales y las células alrededor de los vasos sanguíneos, que era similar a la de
la sección de control (Fig. 6n). bFGF se localizó en las células alrededor de los
vasos sanguíneos en el sección de control, pero su reacción parecía débil (Fig. 6p).
Después 24 h de carga de fuerza de ortodoncia, bFGF se localizó en las células a
lo largo de la PDL, así como las células alrededor de los vasos sanguíneos (Fig. 6q,
q-H). Pero 3 y 7 días después de la carga de la fuerza de ortodoncia, fue detectado
en las células alrededor de los vasos sanguíneos (Fig. 6r, s). 3.4. Análisis RT-qPCR
RT-qPCR apoyó evidentemente las observaciones inmunohistoquímicas a nivel
genético Demostró una regulación positiva significativamente más alta de IL-1b 24
h después de la carga de fuerza ortodóncica en la PDL (Figuras 7a y 8a). Luego
disminuyó drásticamente para controlar el nivel, 3 y 7 días después de la carga de
la fuerza de ortodoncia. La PTX3 también mostró una regulación positiva similar a
IL-1b (Figuras 7b y 8b). Pero la regulación positiva significativa se observó
adicionalmente 3 días después carga, aunque su regulación positiva fue
significativamente menor que a las 24 h. La expresión de PTX3 luego disminuyó al
nivel de control, 7 días después de la carga de la fuerza de ortodoncia. RT-qPCR
mostró que bFGF estaba significativamente regulado al alza 24 h después de la
carga de la fuerza de ortodoncia (figuras 7c y 8c). Su expresión disminuyó al nivel
de control, 3 y 7 días después de la carga.

4. Discusión
El objetivo de este estudio fue examinar la reacción patológica en la zona de tensión
de PDL durante el movimiento dental. Por lo tanto, la expresión de IL-1b, una
citocina inflamatoria típica, se utilizó para examinar la reacción tisular de la PDL
(Dinarello, 1996; Oppenheim et al., 1986). PTX3 también se evaluó para detectar
reacción inflamatoria de los vasos sanguíneos en el PDL (Breviario et al.,1992;
Fazzini y otros, 2001; Cie? Slik & Hrycek, 2015; Souza, 2002;Suzuki et al., 2008).
Se detectó bFGF para confirmar la recuperación de el PDL de la reacción patológica
(Fei et al., 2011; Folkman & Klagsbrun, 1987; Marie, 2003; Moscatelli y otros, 1988;
Takayama et al., 1997). En este estudio, examinamos la PDL después de 24 h, 3
días y 7 días PDL en la zona de presión estaba extremadamente comprimido con
degeneración de la PDL 24 h después del movimiento dental (Nakamura et al.,
2003; Rygh, 1972). Por lo tanto, PDL en zona de tensión es sometido a una fuerte
fuerza de tracción 24 h después de la fuerza de ortodoncia carga, que causa una
reacción patológica en el PDL. Por 3 y 7 días, confirmamos la transición de la
reacción patológica a fase de recuperación Los hallazgos de la observación
histológica fueron similares a los de estudios convencionales (Azuma, 1970;
Tsurubuchi, 1992). Los las fibras periodontales se estiraron entre el hueso alveolar
y cemento y osteoblastos activos estaban presentes a lo largo del hueso superficie.
Osteoide se formó en la superficie del hueso 3 y 7 días después carga de fuerza de
ortodoncia. La histomorfometría también mostró una expansión significativa del
espacio PDL en los grupos experimentales. La zona de los vasos sanguíneos en el
PDL no mostró ningún cambio significativo.Los cambios significativos de la relación
(vasos sanguíneos / PDL) se debieron a la expansión del espacio PDL. Estos
indican que la circulación sanguínea es mantenido en la zona de tensión del PDL
24 h después de la ortodoncia carga forzada (Tabla 2).en la celda en todo el PDL y
RT-qPCR demostrado expresión significativamente alta de IL-1b, un agente
inflamatorio típico citoquina en la zona de tensión de PDL 24 h después de la fuerza
ortodóncica carga, aunque los hallazgos morfológicos fueron similares a los de los
hallazgos convencionales. Estos resultados evidentemente indicaron que reacción
inflamatoria había ocurrido en la zona de tensión de la PDL 24 h después de la
carga de la fuerza de ortodoncia. Este hallazgo es diferente de el concepto
convencional. Esto fue mejorado por la expresión de PTX3, un biomarcador para
enfermedad vascular inflamatoria (Cie? slik & Hrycek, 2015; Fazzini et al., 2001;
Suzuki et al., 2008), en las células y células endoteliales alrededor de los vasos
sanguíneos. Las expresiones de PTX3 en gen y proteína niveles también indicaron
que la lesión de los vasos sanguíneos entre los fibras periodontales estiradas se
habían producido en la zona de tensión de PDL durante 24 h de la carga de fuerza
de ortodoncia inicial, que es una de las características de este estudio La expresión
de PTX3 en esta situación podría evitar el engrosamiento del endotelio células,
mejorar la circulación sanguínea y promover la reconstrucción rápida de la PDL. La
alta expresión de PTX3 en los fibroblastos está involucrada en la remodelación de
la matriz celular en los fibroblastos (Doni, 2015; Maina, 2009). Estos resultados
indican claramente que la reacción temprana en la zona de tensión de la PDL hay
un tipo de inflamación. Inmunohistoquímica y RT-qPCR proporcionaron un
interesante hallazgo con respecto a la reacción de los fibroblastos en la zona de
tensión de PDL 24 h después de la carga de la fuerza de ortodoncia. Los fibroblastos
mostró simultáneamente altas expresiones significativas de inflamación citoquinas,
IL-1b, PTX3, y uno de los factores de crecimiento, bFGF, en niveles de genes y
proteínas. Estas expresiones en los fibroblastos son diferente de aquellos en
fibroblastos en condiciones normales, lo que indica que los fibroblastos responden
rápidamente al medio ambiente cambios en el PDL. Los fibroblastos tienen la
capacidad de pleiotrópicos expresión que no sea la producción de colágeno, que es
esencial para la renovación rápida de la PDL.
Como resultado, la reacción inflamatoria aparentemente disminuyó en la zona de
tensión de PDL 3 días después de la carga de la fuerza de ortodoncia, que era
contrario a eso en la zona de presión de PDL (Nakamura et al., 2008). Las
observaciones 3 días después de la fuerza de ortodoncia carga fueron bastante
diferentes de los observados 24 h después de la cargando. El espacio periodontal
expandido se redujo ligeramente y la disposición de la fibra estirada se relajó en el
PDL. Estas los cambios fueron inducidos por la rápida formación de hueso en la
superficie del hueso en el PDL, porque se había formado una considerable capa de
osteoide en la superficie del hueso 3 días después de la carga de la fuerza de
ortodoncia. Esto puede ser apoyado por la recuperación a un nivel normal de IL-1b.
los transición de la situación patológica a la situación fisiológica en la zona de
tensión del PDL se debe a la respuesta rápida del células endoteliales en la PDL,
que es esencial para células y tejidos supervivencia. Los eventos en la zona de
tensión de PDL están en contraste con los observados en la zona de presión de
PDL, donde la sangre la circulación se interrumpe y las células y los tejidos se ven
obligados a sufren necrosis celular y degeneración tisular (Rygh, 1972; Nakamura
et al., 2003, 2008). Esto sugiere que es importante para diseñar un método de
ortodoncia que permite un diente rápido movimiento sin inflamación Se necesitan
más estudios para examinar los cambios en el tejido de la PDL dentro de las 24 h
posteriores carga de fuerza ortodóntica y para confirmar la hipoxia tisular usando
tinción de pimonidazol. En resumen, los resultados presentes sugieren que la
reacción temprana en la zona de tensión del PDL durante el movimiento dental
consiste de dos fases: primero, inflamación y segundo, recuperación rápida y
renovación del PDL con formación de hueso

Contribuciones de autor
A. Tsuge, contribuyó a la concepción, el diseño, la adquisición de datos, análisis e
interpretación, redactó y revisó críticamente el manuscrito; K. Noda e Y.,
contribuyeron al diseño y los datos interpretación y revisó críticamente el
manuscrito. Todos los autores dio su aprobación final y aceptó ser responsable de
todos los aspectos de la obra.

Conflicto de intereses
Los autores declaran no tener posibles conflictos de interés con respecto a la autoría
y / o publicación de este artículo.

Recursos de fondos
Ninguna.

Aprobación ética
El protocolo experimental en animales fue aprobado por el Comité Institucional de
Cuidado y Uso de Animales de la Universidad Tsurumi y llevado a cabo de
conformidad con las Directrices para animales
Experimentación de la Universidad Tsurumi (26A019).

Reconocimiento
Quisiéramos agradecer al Profesor N. Hanada (Departamento de Investigación de
Traducción, Escuela de Medicina Dental de la Universidad Tsurumi) por su valioso
apoyo.

Tabla 1
Primera secuencia usada en este estudio.

Primera secuencia 5`3` Tamaño (bp) Referencia

Gen adelante CCCTGCAGCTGGAGAGTGTGG 152 Zhang et al.
atras TGTGCTCTGCTTGAGAGGTGCT (2014)
PTX3 Adelante TCAAAGCCACAGACGTATTAAACAA 103 Okutani et al.
Atrás AAACACTAGGGACTGGGAACTTAGG (2007)
bFGF Adelante GCGACCCACACGTCAAACTACAGC 231 Fuentes,
atras ACTGCCCAGTTCGTTTCAGTGCCA Opperman,
Bellinger, Carlson,
& Hinton (2002)
GAPDH Adelante CAACTCCCTCAAGATTGTCAGCAA 113 Choi, Arai,
atras GGCATGGACTGTGGTCATGA Ishikawa,
Shimoda, &
Nakamura (2011)
 Fig. 1. (a, b)
Elementos de ortodoncia utilizados en este estudio. El artefacto con resortes helicoidales de acero
inoxidable de 0.012 in. fijado en los incisivos superiores con resina adhesiva dental. La parte
superior primeros molares fueron movidos bucalmente. (c) Área de observación. PDL en el área
cervical de la raíz medial en la parte superior primer molar se observó principalmente. (d) Imagen
de medición área con tinción con azul de toluidina. (e) Imagen de procesamiento de computadora
extraída de la PDL y áreas de sección transversal vascular (d). El área de color negro muestra la
sección transversal de PDL y los círculos blancos muestran los vasos sanguíneos. barra: 100 mm. (f,
g) Microdisección por captura láser (LCM) de la PDL en la sección congelada. barra: 200 mm. B:
hueso, R: raíz, M: mesial, L: lingual, Bu: bucal.
 Fig. 2. Histología de la PDL. (a, b) Control,
(c, d) 24 h, (e, f) 3 días. (a, c) (e) Tinte HE
( x 200), (b, d, f) Mancha de Azan (x200).
B: hueso, R: raíz, barra: 100 mcm.

Fig. 3. Imágenes de procesamiento

informático de áreas transversales de la
PDL y sus vasos sanguíneos para
histomorfoftalia. (a) Control, (b) 24 h, (c) 3
días, (d) 7 días. B: hueso, R: raíz, (a-e)
(100), barra: 100 mcm
 Fig. 4. Histomorfometría (a) el área del ligamento
periodontal, (b) el área de los vasos sanguíneos, (c) la
relación de los vasos sanguíneos al área PDL

Fig. 5. Prueba de HSD de Tukey en los cambios de curso de tiempo

del área total de la sección transversal en los grupos experimental y
de control. (a) área del ligamento periodontal, (b) área de los vasos
sanguíneos, (c) relación de los vasos sanguíneos al área PDL. El
significado de * P <0.01.
Fig. 6. Inmunohistoquímica de la PDL. (a-d) Secciones teñidas con azul de toluidina para la
orientación por inmunohistoquímica, (a) Control, (b) 24 h, (c) 3 días, (d) 7 días. (e-i) Análisis
inmunohistoquímico de IL-1b, (e) control negativo, (f) control, (g) 24 h, (h) 3 días, (i) 7 días.
(j-n) Análisis inmunohistoquímico de PTX3, (j) control negativo, (k)
Fig. 7. Análisis RT-qPCR de la PDL en zona de tensión. (a) IL-1b, (b) PTX3 y (c) bFGF. Los datos
representan la media ± valores de desviación estándar de cinco ratas por grupo después
normalización a la expresión de ARNm de gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH).

Fig. 8. Prueba de HSD de Tukey en los cambios de curso de tiempo del análisis RT-qPCR de la PDL
en la zona de tensión. (a) IL-1b, (b) PTX3 y (c) bFGF. Importancia de * P <0.05.
Tabla 2

Histomorfometría. (a) ligamento periodontal (PDL), (b) Las áreas transversales totales de los vasos
sanguíneos, (c) la relación de los vasos sanguíneos a las áreas de PDL.