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Práctica 3: Demostración del efecto sinergista y antagonista en un sistema

simulado y su importancia con la evaluación farmacológica


Hugo Josué Rivera Perea, Erik David Santiago Molina, Akari Denisse Servín
Valadez, Areli Cabrera Sánchez, Susana García Kunz
Asignatura: Farmacología Aplicada
Fecha de entrega: 25.Feb.2019
Docente: Anuar Salazar Gómez

RESUMEN
Una simulación se refiere a una imitación de un proceso real. El software Organ
Bath Simulation sirve para realizar simulaciones de experimentos basados en
órganos aislados, en los cuales se puede observar mediante la formación de un
gráfico las contracciones de dichos órganos en respuesta a distintos agonistas y
antagonistas. Durante esta práctica se realizó la simulación, en íleon de cobayo,
obteniendo las curvas concentración-respuesta en agonistas como histamina y
morfina. Posteriormente, se observó la disminución del efecto de la morfina como
agonista, al agregar naloxona como antagonista. Por otra parte, en el estudio de la
histamina, se realizó por cuadruplicado obteniendo una saturación de los
receptores a cierta concentración dónde el %de efecto máximo se tomó como el
100%, y se logró comprender la importancia de los estudios en órganos aislados
en baño, para evaluar los efectos de los fármacos sobre estos.

Palabras clave: simulación, agonista, antagonista, órgano aislado

INTRODUCCIÓN
El programa Organ Bath Simulation aislados. Los órganos aislados
consiste en simular experimentos de pueden permanecer vivos por varias
baño de órganos aislados y realizar horas en suspensión en un baño que
un registro gráfico de la respuesta, contenga una solución fisiológica de
por medio de contracciones, a sales. Durante esta simulación, la
diferentes concentraciones de solución fisiológica que se utilizó fue
agonistas y/o antagonistas. la solución Krebs.2
Muchas pruebas farmacológicas se
realizan en animales para estudiar
algún tipo de respuesta de una
sustancia determinada, existen otras
pruebas que se pueden realizar sobre
órganos o tejidos extraídos, a estos
se les conoce como órganos
terminaciones nerviosas que se
pueden estimular eléctricamente.

Agonista
Un agonista es aquel medicamento o
sustancia que se une a un receptor
en elinterio9r o la superficie de una
célula y produce la misma acción que
Fig. 1 Organ Bath Simulator la sustancia que normalmente se une
con el receptor. (NIH, (S.D.). Agonista.)

Histamina

Es una amina idazolica involucrada


en las respuestas locales del sistema
inmunitario. También actúa como
neurotransmisor en el sistema
nervioso central (SNC).
Compuesto que actúa en el
organismo como hormona y
neurotransmisor, entre sus funciones
se encuentran: la regulación de ácido
Fig. 2 Organ Bath Simulation 2 gástrico en el estómago y la motilidad
en el estómago.3
Ejerce su acción al combinarse con
Solución Krebs receptores específicos localizados en
Es un buffer que mantiene la presión las células. Hay 4 tipos: H1, H2, H3 y
osmótica del tejido tal y como si H4.
estuviera en el cuerpo de la rata;
además nos proporciona una
cantidad importante de glucosa al
medio para poder determinar la
efectividad de la insulina; El HEPES
es bueno manteniendo la estructura y Fig. 3 Estructura de la Histamina
funcionalidad de las enzimas a bajas
La mayor parte de la histamina en el tejido
temperaturas.
corporal se encuentra en os gránulos de las
Por otra parte, para llevar a cabo su células llamadas mastocitos o en los
preparación se utiliza lo siguiente: basófilos.
NaCl, KCl, MgSO4, KH2PO4, La histamina se libera como neurotransmisor.
NaHCO3, carbógeno, glucosa, CaCl2 Las neuronas que liberan histamina se
encuentran en el hipotálamo, desde ahí las
y agua destilada. (Torres, J (2013).)
neuronas histaminérgicas se proyectan a
través del cerebro hacia la corteza,
El tejido que se utilizo fue íleon de modulando el sueño.
cobayo, el musculo liso intestinal es
capaz de contraerse en respuesta Morfina
directa a la acción de diferentes La morfina es un potente agonista de
agonistas. Además, presenta los receptores opiáceos µ, y en
menor grado los kappa, en el SNC, que están presentes en las células.
todos estos acopldos a los receptores (Antihistamínicos, (2019).)
para la proteína G, actuando como
moduladores, tanto positivos como
negativos de la transmisión sináptica
que tiene lugar a través de las
proteínas.
Naloxona
Este analgésico es obtenido a partir
de la planta del opio, conocida Es un antagonista de los receptores
comúnmente como adormidera.4 opioides muy utilizado para el
Algunos de los usos que se llevan a tratamiento de intoxicaciones
cabo con este analgésico son los provocadas por opiáceos. Es un
siguientes: derivado de la oximorfona. No posee
 Dolor postoperatorio. ninguna actividad agonista. Inhibe de
manera competitiva narcóticos en los
 Dolor crónico intenso receptores mu, delta y kappa
resistente a otros analgésicos. revirtiendo efectos colaterales de los
 Dolor oncológico. morfínicos como depresión
respiratoria, hipotensión arterial
 Dolor transitorio de intensidad sistémica, analgesia, entre otros.
severa.
 Dolor asociado a infarto de
miocardio.

Fig. 5 Estructura de la Naloxona

OBJETIVOS
General
Fig. 4 Estructura de la Morfina Demostrar el efecto sinergista y
antagonista en un baño para órgano
aislado mediante un sistema
Antagonista simulado.
El antagonista es una sustancia que Específicos
no provoca una respuesta biológica - Demostrar el efecto de la
por si misma al en lazarse a un concentración de histamina en un
receptor, sino que bloquea o atenúa sistema simulado.
las respuestas que dispara otra - Demostrar el efecto de la
sustancia (agonista) al enlazarse a concentración de morfina en
presencia y ausencia de
ese mismo receptor. La mayoría de
antagonista (naloxona) en un
los medicamentos ejercen efecto,
sistema simulado.
tanto beneficiosos como adversos, al
interactuar con receptores específicos
- Elaborar graficas concentración-
respuesta de histamina y morfina
en presencia y ausencia de
antagonista.

METODOLOGIA

Ejeutar el Seleccionar en Oprimir botón Adicionar Seleccionar


software Organ Tissue type el record para histamina como concentración y
Bath tejido Guinea comenzar la agonista a volumen a
Simulation Pig Illeum lectura utilizar utilizar

Utilizar
Oprimir Flush
concentración Aumentar Al terminar la
Reservoir to
Oprimir Add 1x10-8 y concentración curva, oprimir
Bath para lavar
Organ Bath volumen 0.1 sucesivamente stop y guardar
con solución
ml, 0.2 ml y 0.5 hasta 1x10-1 registro
Krebs
ml

Usar barra de Realizar 4


desplazamiento repeticiones del Calcular %Emax y Elaborar gráficas
horizontal y experimento y concentración concentración-
medir fuerza de obtener final respuesta
contracción promedio

Ejercicio

Seleccionar en Oprimir botón Adicionar Seleccionar


Ejeutar el
Tissue type el record para morfina como concentración y
software Organ
tejido Guinea comenzar la agonista a volumen a
Bath Simulation
Pig Illeum lectura utilizar utilizar

Oprimir Flush Utilizar


Aumentar Al terminar la
Reservoir to concentración
Oprimir Add concentración curva, oprimir
Bath para lavar 1x10-8 y
Organ Bath sucesivamente stop y guardar
con solución volumen 0.1 ml,
hasta 1x10-1 registro
Krebs 0.2 ml y 0.5 ml

Realizar 4 Repetir
Usar barra de
repeticiones experimento Concentración
desplazamiento Calcular %Emax
del ahora en 1x10-2 y un
horizontal y y concentración
experimento y presencia de volúmen de 1
medir fuerza de final
obtener naloxona como ml
contracción
promedio antagonista
Elaborar gráficas
Usar barra de concentración-
Realizar 4
desplazamiento Calcular %Emax y respuesta y
repeticiones del
horizontal y medir concentración comparar en
experimento y
fuerza de final presencia y
obtener promedio
contracción ausencia de
antagonista

Resultados

Fig. 6 Experimento 1 Histamina

Fig. 7 Experimento 2 Histamina


Fig. 8 Experimento 3 Histamina

Fig. 9 Experimento 4 Histamina

Tabla 1. Experimento 1
Concentración
(M) Volumen (mL) Promedio EFECTO% Concentración
0.1mL 0.45275 9.90E-11
1.00E-08 0.2mL 0.598 1.96E-10
0.5mL 1.4495 4.76E-10
0.1mL 2.9655 9.90E-10
1.00E-07 0.2mL 5.2585 1.96E-09
0.5mL 11.99925 4.76E-09
0.1mL 24.65075 9.90E-09
1.00E-06 0.2mL 39.2215 1.96E-08
0.5mL 58.7715 4.76E-08
0.1mL 77.26375 9.90E-08
1.00E-05 0.2mL 90.41175 1.96E-07
0.5mL 97.62425 4.76E-07
0.1mL 100 9.90E-07
1.00E-04 0.2mL
0.5mL

Tabla 2: Ln de la concentración
experimento 1
LN de la concentración
-23.03590127
-22.35290646
-21.46560326
-20.73331617
-20.05032136
-19.16301817
-18.43073108
-17.74773627
-16.86043308
-16.12814599
-15.44515118
-14.55784798
-13.82556089

Tabla 3: Desviación y error estándar


experimento 1
Desviación ERROR
0.042217956 0.011709154
0.048411466 0.013426925
0.028997859 0.008042559
0.169966046 0.047140099
0.280956918 0.077923429
0.712168987 0.197520139
1.007882764 0.279536384
1.207252356 0.334831559
1.499603587 0.415915202
1.040537388 0.288593147
1.165041058 0.323124252
1.0211345 0.283211754
0.807371662 0.22392461
120
100
80
60
40
20
0
-30 -20 -10 0

Series1

Gráfica 1 Histamina, concentración contra %Efecto

Fig. 10 Barras de error (muy pequeñas)

Tabla 4. Resultados de prueba con Morfina Experimento 2


Concentración Volumen Concentración final
Respuesta (gr) % EMax Ln
Morfina (M) (ml) (M)
-
0.1 ml 11.82 100 9.99E-11
23.0269
-
1x10-8 0.2 ml 11.82 100 1.96E-10
22.3529
-
0.5 ml 11.81 99.91 4.76E-10
21.4656
1x10-7 0.1 ml 11.81 99.91 9.90E-10 -
20.7333
-
0.2 ml 11.78 99.66 1.96E-10
22.3529
0.5 ml 11.67 98.73 4.76E-09 -19.163
-
0.1 ml 11.6 98.13 9.90E-09
18.4307
-
1x10-6 0.2 ml 11.38 96.27 1.96E-08
17.7477
-
0.5 ml 10.95 92.63 4.76E-08
16.8604
-
0.1 ml 9.95 84.17 9.90E-08
16.1281
-
1x10-5 0.2 ml 8.61 72.84 1.96E-07
15.4452
-
0.5 ml 6.29 53.21 4.76E-07
14.5578
-
0.1 ml 5.38 45.51 9.90E-07
13.8256
-
1x10-4 0.2 ml 4.34 36.71 1.96E-06
13.1426
-
0.5 ml 3.99 33.75 4.76E-06
12.2553
-
0.1 ml 3.63 30.71 9.99E-06
1x10-3 11.5139
0.2 ml 2.88 24.36 1.96E-05 -10.84

Tabla 5. Desviación y error


estándar
Desviación ERROR

0.01154701 0.00280056
0.01154701 0.00280056
0.01154701 0.00280056
0.01154701 0.00280056
0.01732051 0.00420084
0.01732051 0.00420084
0 0
0.01732051 0.00420084
0.0057735 0.00140028
0 0
0.01154701 0.00280056
0.0057735 0.00140028
0 0
0.01154701 0.00280056
0.01154701 0.00280056
5.439E-16 1.3191E-16
0.05567764 0.01350381

120

100

80

60
Series1

40

20

0
-25 -20 -15 -10 -5 0

Gráfica 2 Morfina, concentración contra %efecto

Tabla 6. Resultados anatgonista y agonista


Concentración Concentración Respuesta Concentración
Volumen (ml) % EMax
Naxolona (M) Morfina (M) (gr) final (M)

0.1 ml 12.99 100 9.99E-11


-8
1x10 0.2 ml 12.99 100 1.96E-10
0.5 ml 12.86 98.99 4.76E-10
0.1 ml 12.86 98.99 9.90E-10
-7
1x10 0.2 ml 12.86 98.99 1.96E-10
0.5 ml 12.82 98.69 4.76E-09
0.1 ml 12.81 98.61 9.90E-09
11x10-2 -6
1x10 0.2 ml 12.81 98.61 1.96E-08
0.5 ml 12.78 98.38 4.76E-08
0.1 ml 12.76 98.22 9.90E-08
-5
1x10 0.2 ml 12.39 95.38 1.96E-07
0.5 ml 11.86 91.3 4.76E-07
0.1 ml 10.79 83.06 9.90E-07
-4
1x10 0.2 ml 9.03 69.51 1.96E-06
0.5 ml 7.35 56.58 4.76E-06
0.1 ml 5.42 41.72 9.99E-06
1x10-3
0.2 ml 4.88 37.56 1.96E-05

Tabla 7. Desviación y
Error estándar

Desviación ERROR
0.02309401 0.005601
0.02309401 0.005601
0.0057735 0.0014
0.01 0.002425
0.01154701 0.002801
0.01 0.002425
0.01 0.002425
0.0057735 0.0014
0.0057735 0.0014
0.01154701 0.002801
0.01154701 0.002801
0.0057735 0.0014
0.0057735 0.0014
0.0057735 0.0014
0.0057735 0.0014
0.01732051 0.004201
0.01154701 0.002801

120

100

80

60
Series1
40

20

0
-25 -20 -15 -10 -5 0
Gráfica 3 Morfina y Naxolona, concentración contra % efecto
120

100

80

60 Series2
Series1
40

20

0
-25 -20 -15 -10 -5 0
Gráfica 4 Comparación de efecto con agonista y antagonista

Serie 2 Morfina (agonista solo)


Serie 1 Morfina y Naxolona

Análisis de Resultados morfina, esta al ser un agonista de


receptores opiáceos, tiene como
Como se puede observar en la gráfica 1 función el relajamiento, por lo que en
(curva sigmoidea) hay un crecimiento presencia de un antagonista como la
en el % de efecto proporcional al Naxolona, siendo antagonista
aumento de la concentración, con una competitivo de los opiáceos, al unirse
barra de error muy pequeña (la cuál no en los receptores opioides, lo que
se alcanza a apreciar, revisar valores en disminuye la actividad de la morfina la
apartado de resultados), como se cual solo puede tener efecto a
puede observar, no se llegó a la concentraciones muy elevadas.
concentración indicada dentro de la
práctica ya que este al ser un agonista, Se puede observar en la gráfica 4, que
imita la actividad del neurotransmisor, la morfina por sí sola, comienza a
uniéndose a los receptores hasta llegar mostrar sus efectos a menor
a un punto de saturación de estos, en concentración, presentando una mayor
los cuáles ya no se alcanza un mayor respuesta y un menor % de efecto final.
efecto, dando valores “máximos” como Mientras que al agregar la naxolona
se puede ver en las tablas 1-4 en la hoja como antagonista, la morfina empezó a
de anexo. mostrar sus efectos a mayor
concentración generando una menor
En cuanto al antagonista naxolona respuesta, por lo que la potencia
(competitivo) y el agonista morfina, cambia en presencia de un antagonista
como puede observarse la actividad en
el nervio, va disminuyendo conforme Conclusión
se aumenta la concentración de la
 Los estudios de órgano aislado son sobre el órgano hasta que los
muy útiles para observar los receptores se saturan, por lo que se
efectos de los fármacos, pero llega a un punto que ya no presenta
presenta una dificultad al un aumento en la respuesta con
mantener el órgano o tejido de una mayor concentración de
forma viable. agonista
 Se observó el efecto de la histamina  La naxolona inhibe
como agonista y el efecto de la considerablemente la acción de la
naxolona como antagonista sobre morfina, al unirse a los receptores
la morfina en una simulación de un opiáceos, mismos receptores que
baño de órgano aislado tienen afinidad con la morfina
 Al aumentar la concentración de un
agonista, aumenta la respuesta

REFERENCIAS YXJtYWZhY21lZHxneDo3M2I2
1. NIH, (S.D.). Agonista. OTkxY2Ew ODAyOTY2
25/febrero/2019, recuperado
de: 4. Antihistamínicos, (2019).
https://www.cancer.gov/espano Antagonista. 20/febrero/2019,
l/publicaciones/diccionario/def/ recuperado de:
agonista https://www.antihistaminico.co
m/glosario/antagonista/
2. Dempster, J. (2016).
Strathclyde Pharmacology 5. Torres, J (2013). Manual de
Simulations: Virtual Organ preparación de reactivos.
Bath. Recuperado de: Universidad Autónoma de
https://norecopa.no/norina/strat Yucatán
hclydepharmacology- 6. Vademécum. (2016). Morfina.
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3. Dewhurst, D. et. al. (2010). https://www.vademecum.es/pri
Agonistas y antagonistas en ncipios-activos-morfina-
íleon de cobayo. Recuperado n02aa01
de: 7. Gago, F. (2018) Introducción a la
https://docs.google.com/viewer farmacología experimental.
?a=v&pid= Universidad de Alcalá. 25/02/19.
sites&srcid=ZGVmYXVsdGRvb Recuperado de:
WFpbnxm http://www3.uah.es/farmamol/Pub
lic/PDF_files/IntroFarmaExperim.
pdf
Hoja Anexo de Tablas individuales

Tabla 1. Histamina
Concentración Volumen Respuesta % Emáx Concentración
(M) (mL) (g) (H sola) final (M)
0.1 0.059 0.68 9.9x10-11
1x10 -8 0.2 0.097 0.91 1.96x10-10
0.5 0.146 1.03 4.76x10-10
0.1 0.214 1.51 9.9x10-10
1x10 -7 0.2 0.537 3.81 1.96x10-9
0.5 1.485 10.54 4.76x10-9
0.1 3.019 21.44 9.9x10-9
1x10 -6 0.2 5.061 35.94 1.96x10-8
0.5 7.630 54.19 4.76x10-8
0.1 10.425 74.04 9.9x10-8
1x10-5 0.2 12.995 92.30 1.96x10-7
0.5 13.86 98.44 4.76x10-7
0.1 13.94 99.01 9.9x10-7
1x10 -4 0.2 14.079 100 1.96x10-6
0.5 - - -

Tabla 2. Histamina
Concentración Volumen Respuesta % Emáx Concentración
(M) (mL) (g) (H sola) final (M)
0.1 0.039 0.291 9.9x10-11
1x10 -8 0.2 0.0488 0.364 1.96x10-10
0.5 0.1856 1.386 4.76x10-10
0.1 0.6155 4.596 9.9x10-10
1x10 -7 0.2 1.1041 8.245 1.96x10-9
0.5 2.608 19.477 4.76x10-9
0.1 4.699 35.093 9.9x10-9
1x10-6 0.2 6.858 51.217 1.96x10-8
0.5 9.789 73.106 4.76x10-8
0.1 11.363 84.861 9.9x10-8
1x10 -5 0.2 12.516 93.472 1.96x10-7
0.5 13.26 99.026 4.76x10-7
0.1 13.39 100 9.9x10-7
1x10 -4 0.2 - - -
0.5 - - -
Tabla 3. Histamina
Concentración Volumen Respuesta % Emáx Concentración
(M) (mL) (g) (H sola) final (M)
0.1 0.0195 0.156 9.9x10-11
1x10-8 0.2 0.0293 0.234 1.96x10-10
0.5 0.1954 1.566 4.76x10-10
0.1 0.3224 2.583 9.9x10-10
1x10 -7 0.2 0.5080 4.071 1.96x10-9
0.5 1.074 8.607 4.76x10-9
0.1 2.511 20.125 9.9x10-9
1x10 -6 0.2 4.386 35.152 1.96x10-8
0.5 6.468 51.839 4.76x10-8
0.1 9.2037 73.765 9.9x10-8
1x10-5 0.2 10.552 84.571 1.96x10-7
0.5 11.93 95.615 4.76x10-7
0.1 12.184 97.651 9.9x10-7
1x10-4 0.2 12.477 100 1.96x10-6
0.5 - - -

Tabla 4. Histamina
Concentración Volumen Respuesta % Emáx Concentración
(M) (mL) (g) (H sola) final (M)
0.1 0.1172 0.898 9.9x10-11
1x10 -8 0.2 0.1367 1.048 1.96x10-10
0.5 0.2149 1.647 4.76x10-10
0.1 0.3615 2.771 9.9x10-10
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