TEMA: CARBOHIDRATOS

- 11.3 Los carbohidratos pueden unirse a proteínas para formar glicoproteínas

o Grupo azúcar –(Covalente)→Proteína = GLICOPROTEÍNA
o Los carbohidratos están presenten en un porcentaje en peso mucho menor en las glicoproteínas
que en lo proteoglicanos

o Muchas glicoproteínas son componentes de las MEMBRANAS CELULARES

 Dónde ejercen una serie de funciones
 Adhesión celular
 Unión de los espermatozoides al óvulo

o Otras glicoproteínas se forman por

 Carbohidratos –(Se unen)→A proteínas solubles  El núcleo pentasacarídico (sombreado en gris) es común a todos los oligosacáridos
 En particular muchas de las proteínas secretadas por las células están glicosiladas, N-enlazados y sirve y sirve de base para una gran diversidad de ellos, dos de los
incluyendo la mayoría de las proteínas presentes en el componente sérico de la cuales están representados aquí. (A) Un tipo rico en manosas (B) un tipo más
sangre complejo.

 Al átomo de oxígeno de la cadena lateral de la serina o treonina

o Los carbohidratos pueden unirse a las proteínas a través de residuos de asparragina (enlaces N-) (Denominado enlace O-)
o bien serina o treonina (enlaces O-)
 @Glicoproteínas los azúcares pueden enlazarse
 Al átomo de nitrógeno amídico de la cadena lateral de la asparragina
(Denominado enlace N-)
o El residuo de asparragina puede aceptar un oligosacárido solamente
si forma parte de una secuencia Asparragina-X-Serina o Asparragina-
X-Treonina, en las que X puede ser cualquier aminoácido EXCEPTO
PROLINA

o Los sitios potenciales de glicosilación pueden localizarse conociendo

la secuencia de los aminoácidos
 Cuáles de estos sitios potenciales serán realmente
glicosilados depende entre otras cosas de la estructura de
la proteína y del tipo de células en que se expresa
o Todos los oligosacáridos N-enlazados
 Tiene en común un PENTASACÁRIDO NUCLEAR o CENTRAL
formado por
 3 manosas
 2 N-acetilglucosaminas
 A este núcleo se unen más azúcares para formar la enrome
diversidad de estructuras oligosacarídicas que encontramos
en las glicoproteínas
 Un enlace glicosídico (Se representan en rojo) une el carbohidrato a la
cadena lateral de una aparragina (UNIÓN N-) o de una serina o treonina
(UNIÓN O-)
 Hormona glicoprotéica eritropoyetina (EPO)
 Características
o Es una glicoproteína presente en el suero sanguíneo
 Ha mejorado el tratamiento de anemia enormemente
 En particular la inducida por quimioterapia del cáncer
o Es segregada por los riñones y estimula la producción de glóbulos
rojos
o Se compone de 165 aminoácidos
o Está N-glicosilada en 3 residuos de ASPARRAGINA y O-glicosilada en
1 de SERINA

 EPO madura
o Contiene 40% de carbohidrato en peso
o La glicosilación mejora la estabilidad de la proteína en sangre
 La proteína no glicosilada
o Tiene 10% de bioactividad de la forma glicosilada
 Porque es rápidamente extraida de la sangre por el riñón
 La disponibilidad de EPO humana recombinante
o ✓:Ha ayudado eficazmente al tratamiento de las anemias
o X: Algunos atletas fraudulentos las han utilizado para aumentar el
recuento de glóbulos rojos sanguíneos y por tanto la capacidad de
transportar oxígeno
 Laboratorios → Son capaces de distinguir en los atletas EPO
recombinante humana prohibida de la EPO natural
detectando las diferencias en sus patrones de glicosilación
o La glicosilación de las proteínas tienen lugar en el interior del retículo endoplásmico y en
complejo de Golgi
 La glicosilación de las proteínas tiene lugar en el lumen del RETÍCULO ENDOPLÁSMICO
(ER) y en el APARATO DE GOLGI
 La proteína la sintetizan los ribosomas adheridos a la cara citoplasmática de la
membrana del ER y la cadena peptídica se va introduciendo en la luz del ER
 Glicosilación
 N-enlazada → Empieza en el ER y continúa en el Aparato de Golgi
 O-enlazada → Tiene lugar exclusivamnte en el complejo de Golgi
 Un oligosacárido muy grande, destinado a unirse al residuo de asparragina de una
proteína se va ensamblando unido al DOLICOL FOSFATO, una molécula lipídica
especializada localizada en la membrana del ER y que contiene unas 20 unidades de
isopreno (C5)
 El grupo fosfato es el sitio de unión del oligosacárido activado, el cual se transfiere a
continuación en bloque a la asparragina específica de la cadena polipeptídica
creciente.
 Tanto los azúcares activados como la enzima complejo responsable de la
transferencia del oligosacárido a la proteína están localizados en el lado luminal del
ER. Por consiguiente, las proteínas citoplasmáticas no se glicosilan siguiendo esta vía
 Las proteínas del lumen del ER y de la membrana del ER son transportadas al
APARATO DE GOLGI (Apilamiento de sacos membranosos aplanados). Las unidades de
carbohidrato de las glicoproteínas se alteran y elaboran en el complejo Golgi.
 Allí se insertan las unidades de azúcar O-enlazadas y los azúcares N-unidos que llegan
del ER como componentes de las glicoproteínas y se modifican de modos diversos.
 El complejo de Golgi es el principal centro de distribución de la célula
 Las proteínas madura del Golgi se envían a los lisosimas, a los gránulos
secretorios o a la membrana plasmática, según las señales codificadas en sus
secuencias de aminoácidos y sus estructuras tridimensionales
 El aparato de Golgi es el centro de distribución de proteínas hacia los lisosomas, las
vesículas de secreción o la membrana plasmática. La cara CIS del complejo recibe
las vesículas procedentes del ER y la cara TRANS envía las vesículas hacia sus dianas
respectivas. Las vesículas también transfieren las proteínas de un comportamiento
del Golgi a otro
o Los errores en la glicosilación pueden ocasionar situaciones patológicas
 Aunque en muchos casos no se conoce con detalle la función de la unión de los
carbohidratos a las proteínas, los datos indican que la unión de estos carbohidratos es
importante para la maduración, la estabilidad y el envío de estas proteínas a su
destino
o “Una serie completa de enzimas se envía de forma incorrecta y se
libera en un lugar equivocado.
o Normalmente estas enzimas contienen una manosa 6-fosfato, pero
en la enfermedad, la manosa enlazada está sin modificar

 Ejemplo
 @Ser humano
o La unión de un carbohidrato estabiliza un conducto particular de
potasio (Una proteína que permite el flujo regulado de iones potasio
a través de la membrana celular) evitando su degradación
o Ciertos tipos de distrofia muscular
 Pueden descubrirse por la glicosilación inadecuada de las
proteínas de membrana
 De ha identificado una familia completa de enfermedades
humanas hereditarias → Anomalías congénitas de la
glicosilación
 Estas situaciones patológicas revelan la
importancia de la adecuada modificación de las
proteínas por los carbohidratos y sus derivados
 Enfermedad celular I
o = Mucolipidosis II
o Es una anomalía en el almacenamiento lisosómico

o Lisosoma
 Organulos que degradan y reciclan los componentes
celulares dañados o los materiales introducidos a la célula
por endocitosis
o Características
 Los pacientes sufren un grave retraso psicomotor
 Presentan deformaciones esqueléticas
 Son deficientes en la N-acetilglucosamina fosfotransfersa
 Que cataliza la primera etapa en la adición del
grupo fosforilo
 La consecuencia es el envío de 8 enzimas
esenciales a destinos equivocados
 Similares al síndrome de Hurler (“Gargolismo”)
o Un carbohidrato marcador dirige a ciertas enzimas degradativos
desde el Aparato de Golgi hacia los lisosomas
o Sus lisozomas contienen grandes inclusiones de glicosaminoglicanos
y glicolípidos sin digerir → I DE INCLUSIONES
o Estas inclusiones están presentes porque en los lisosomas afectados
faltan las HIDROLASAS ÁCIDAS NECESARIAS para la degradación de
esos compuestos
 Por otro lado, niveles muy elevados de estas enzimas se
detectan en sangre y orina
o Así pues, las enzimas activas se sintetizan pero se secretan en vez de
ser secuestrados por los lisosimas
o De hecho, la manosa 6-fosfato es el marcador que normalmente
envía a muchas enzimas hidrolíticas desde el Golgi hacia los
lisosomas
o Los oligosacáridos pueden “secuenciarse”
 ¿Cómo es posible determinar la estructura de una glicoproteína: las estructuras de los
oligosacáridos y sus puntos de anclaje?
 La mayoría de los planteamientos se basan en el uso de enzimas que separan
los oligosacáridos a nivel de enlaces específicos
 La primera etapa consiste en separar el oligosacárido de la proteína. Así, por ejemplo,
los oligosacáridos N-enlazados pueden liberarse de las proteínas por acción de una
enzima como la péptido N-glicosidasa F, que ro mpe el enlace N-glicosídico de estos
compuestos. Entonces, los oligo sacáridos pueden aislarse y analizarse. Mediante el
uso de MALDI-TOF u otra técnica de espectrometría de masas puede medirse la masa
del fragmento del oligosacárido. Sin embargo, debido al gran número de
combinaciones posibles de monosacáridos, muchas estructuras de oligosacáridos son
compatibles con una determinada masa.
 Se puede obtener una información más completa rompiendo el oligosacárido con
enzimas de diferente especificidad. Así por ejemplo, la β-1,4-galactosidasa corta los
enlaces β-glicosídicos exclusivamente a nivel de la galactosa
 Los productos resultantes pueden analizarse de nuevo por espectrometría de masas
 La repetición de este proceso utilizando otras enzimas de especificidades distintas
podrá develar la estructura del oligosacárido
 Los puntos de anclaje del oligosacárido en la glicoproteína pueden determinarse
utilizando proteasas. Cortando una proteína por aplicación de proteasas específicas
se obtiene un patrón característico de fragmentos peptídicos que se pueden analizar
por cromatografía
 Las propiedades cromatográficas de los péptidos unidos a oligosacáridos se
modificarán por el tratamiento con la glicosidasa
 El análisis por espectrofotometría de masas o la secuenciación directa del
péptido podrá revelar la identidad del péptido en cuestión y, con un esfuerzo
adicional, el sitio exacto de anclaje del oligosacárido

 La glicosilación aumenta enormemente la complejidad del proteoma. Una proteína

determinada con varios sitios susceptibles de glicosilación puede presentar formas
glicosiladas muy diferentes (A veces denominadas glicoformas), cada uno de las
cuales puede generarse en un tipo específico de célula o en diferentes etapas del
desarrollo
 Ahora que se ha completado la secuenciación del genoma humano conviene llevar al
cabo la caracterización del proteoma, mucho más complejo, que incluye las funciones
biológicas de las proteínas modificadas específicamente