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MARCHA FITOQUÍMICA PRELIMINAR DE LA ESPECIE CONIUM MACULATUM L.

(CICUTA)
*Chiappe, Andrea; Castañeda, Brian; Díaz, Jonnathan; Rodríguez, Diego & Romero, Juan Manuel
Corporación Tecnológica de Bogotá
Carrera 21 No. 53 D – 35, Bogotá Colombia
Tecnología en Regencia de Farmacia
*Docente asesora en la investigación

Resumen
Esta investigación se divide en tres partes principales, las cuales son esenciales en el proceso de una marcha fitoquimica
preliminar convencional: Extracción, identificación y separación cromatografica de los metabolitos secundarios. En la
primera parte (extracción de metabolitos) se hizo el correspondiente secado y macerado de las partes aéreas de las
planta (hojas y flores), por otro lado con el material seco se extrajeron el aceite esencial por el método de arrastre por
vapor y el extracto etanólico con el método Soxhlet. El aceite esencial no se obtuvo. En la segunda parte se efectuó la
identificación de metabolitos secundarios por medio de pruebas específicas para cada grupo dependiendo de sus
características químicas y estructurales. La preparación de las muestras se hizo con una disolución de la goma en etanol
y éter de petróleo. A cada muestra se le agrego un reactivo que determinaba la presencia de un tipo de metabolito en
particular. Se encontró la presencia de alcaloides en las raíces, hojas, semillas y frutos; presencia de Flavonoides en la
corteza y Cumarinas en los frutos, presencia de Carotenoides en las flores, presencia de compuestos parecidos a los
cardiotónicos (tremetona) en las hojas y presencia de esteroides (estigmasterol y β-citosterol) en las hojas. Por último, se
probaron varias mezclas de solventes (polares y apolares), a diferentes proporciones para determinar cuál de ellos corría
mejor con una muestra del extracto etánolico de la especie vegetal “Conium Maculatum L.” en cromatografía en capa
fina (TLC). Se determinó que el mejor solvente fue la mezcla entre Acetato de Isopropilo y cloroformo (1:1).
Palabras claves: marcha fitoquimica, metabolitos secundarios, muestra vegetal, cromatografía en capa fina, cicuta,
quimiotaxonomía y partes aéreas.
Abstract
This research is divided into three main parts, which are essential in the process of a conventional preliminary
phytochemical up : Extraction, chromatographic separation and identification of secondary metabolites . In the first part
(extraction of metabolites) and the corresponding macerated dried aerial parts of the plant (leaves and flowers) , on the
other hand with the dry material was the essential oil is extracted by steam drive method and ethanol extract with
Soxhlet method. The essential oil was not obtained . Identification of secondary metabolites was carried out by specific
tests for each group depending on their chemical and structural features in the second half. The sample preparation was
done with a solution of gum in ethanol and petroleum ether. To each sample was added a reagent which determined the
presence of a particular type of metabolite . The presence of alkaloids in the roots , leaves, seeds and fruits was found ;
Flavonoids present in the cortex and the fruits Coumarins , carotenoids present in the flowers , presence of cardiac -like
compounds ( tremetona ) on the leaves and the presence of steroids (stigmasterol and β - citosterol ) in the leaves. Finally
, various mixtures of solvents ( polar and nonpolar ) at different ratios to determine which one best running with a
sample of the ethanol extract of the plant species " Conium maculatum L. " on thin layer chromatography (TLC ) were
tested . It was determined that the best solvent was the mixture of isopropyl acetate and chloroform (1:1).
Keywords: phytochemical up, secondary metabolites, plant displays, thin layer chromatography, hemlock,
chemotaxonomy and aerial parts.

Introducción

La especie Conium Maculatum, se encuentra en Reino Plantae


extensas regiones de Europa, América, y norte de Subreino Trachebionta
África; se encuentra comúnmente en zonas de un División Magnoliophyta
ambiente húmedo, la planta apetece de los suelos muy Clase Magnoliopsida
Subclase Rosidae
ricos en nitrógeno, por lo cual se puede encontrar en
Orden Apiales
zonas tales como alrededores de establos, caminos Familia Apiaceae
transitados por el ganado y el hombre. Es una hierba Subfamilia Apioideae
perenne glabra. Género Conium
Especie Conium Maculatum L.
Tabla No. 1 Taxonomía de la especie Conium Maculatum L.
Las características morfológicas son: un tallo hueco, en naturaleza y distribución de los enlaces, produce una
donde se observan pequeñas manchas esparcidas a lo manifestación sensible como cambio o perdida de color,
largo del tallo, de color popular, con hojas de forma o provoca la precipitación del nuevo compuesto o el
triangular de tamaño pequeño, verde-negro, son desprendimiento de gas (Rodríguez, 1997).
blandas, divididas en gajos elípticos, puntiagudos y
dentados de hasta 5 cm de largo y 4 cm de ancho. La
altura de la planta puede abarcar entre 1,20 hasta 2,00
metro de alto. Tiene flores blancas pequeñas de forma
ovoide, que se organizan en forma de sombrilla. (San
Andrés, M.I et al, 2000).

Figura 2. Alcaloides presentes en la especie Conium Maculatum L.


Fuente: Vetter (2005)
Figura 1. Conium Maculatum L. Fuente: Vetter (2005)

Las características fitoquimica de la planta son que esta


constituida por alcaloides de piperidina: coniina (2- Los alcaloides presentes en la planta presentan
propilpiperidina), N-metil-coniina (1-metil-2- características toxicológicas, demuestran ser altamente
propilpiperidina), conhidrine 2 - (1-hidroxipropil) - tóxica para muchas especies de animales, incluido el ser
piperidina, pseudoconhidrine (5-hidroxipropil) - humano, en donde se puede anotar que los síntomas
piperidina (éstos están saturados piperidina alcaloides) observados cuando es consumida las planta, de forma
y C-coniceine (2n-propil-piperidina-1D), uno natural son: Convulsiones, disfagia, disnea, dilatación
parcialmente insaturado (ver. Fig. 2). Conhydrinone y N- pupilar, y muerte por parálisis respiratoria, y en
metil-pseudoconhydrine. (Corsi et al, 1991) De igual recientes investigaciones se ha encontrado que algunos
manera presenta la presencia de Flavonoides y de los alcaloides presentes en la planta, tiene efectos
Cumarinas en la corteza y el tallo; esteroides en las teratogénicos en los tejidos de la piel (Larsson, 2004).
hojas (estigmasterol y β-citosterol) (Fig. 3). (Radulovic,
2011) También se reporta la presencia de un compuesto
llamado Tremetona (Fig. 4) (Garland, 1996).

La marcha fitoquimica preliminar se apoya en un


tratamiento general de extracción y sucesivas
separaciones mediante solventes de diferentes
polaridades con el fin de agrupar en fracciones los
metabolitos estructuralmente semejantes y poder
caracterizarlos por su comportamiento químico frente a
ciertas reacciones químicas estandarizadas.

Las reacciones químicas estandarizadas consisten en Figura 3. Estructura general de los esteroides presentes en la
cambios químicos en algún grupo funcional de la especie Conium Maculatum L. (A. Estigmasterol y B. β-sitosterol)
estructura del metabolito, y desde luego, la formación Fuente: Radulovic et al (2011).
de otro compuesto químico que al generar cambio en la
con los reactivos indicados para cada metabolito. (Tabla
2) Para las pruebas de alcaloides se acidificó el extracto
etánolico.

Metabolito Prueba
Reactivos Extracto
secundario química

Carotenoides Salkoski H2SO4 85% Extracto etéreo


Figura 4. Estructura general de la Tremetona.

Materiales y métodos Reactivo de


Esteroides y Lieberman –
Lieberman- Extracto etéreo
trterpenoides Burchard
Burchard
Material vegetal
Cloruro Férrico Extracto
Se obtuvieron varias muestras vegetales de las partes Cloruro Férrico
1% etánolico
aéreas (flores y hojas) de la especie Conium Maculatum
L. en una zona cerca a Chiquinquirá, Boyacá. Estas se Acetato de Acetato de Extracto
Taninos
Plomo Plomo 10% etánolico
envolvieron en papel periódico y se dejaron a la
exposición del sol por dos semanas en donde se torno Extracto
Gelatina-Sal
completamente seca. etánolico

Extracto
Obtención de aceite esencial Shinoda HCl 10% y Mg
etánolico
Flavonoides
Leucoantociani Extracto
Las muestras vegetales secas se pusieron en un balón HCl 10%
das etánolico
de dos bocas de 100 mL, se utilizo la técnica de arrastre
por vapor, se uso agua para la producción de vapor, se
recogió el aceite obtenido en un enlermeyer de 100 mL. Comportamien
to ante acido y Zinc, HCl [ ] Extracto
Quinonas
donador de (NaOH 40%) etánolico
Obtención de extractos etanólicos. electrones.

Previamente se macero una muestra vegetal seca con Extracto


etanol al 78% por 24 horas. Por otro lado, en el Saponinas Espuma Agua
etánolico
laboratorio se cogió la muestra seca y se puso en un Reactivo de Extracto
Antrona
balón de 100 mL, se agregó Etanol absoluto, se monto Molish etánolico
Cardiotónicos
el equipo Soxhlet y se calentó hasta obtener el Reactivo de Extracto
Molish
correspondiente extracto. Antrona etánolico
Solución
Metalónica 2N
de Clorhidrato
Sesquiterpenla Hidroxamato Extracto
de
ctonas férrico etánolico
hidroxilamina,
KOH 2N
Metalónico
Solución
Metalonica 2N
de Clorhidrato
Hidroxamato Extracto
de
férrico etánolico
Cumarinas hidroxilamina,
Imagen No. 1 Macerado y equipo Soxhlet KOH 2N
Metalónico
Identificación de metabolitos secundarios Reactivo de Extracto
Erlich
Erlich etanólico
Reactivo de
Se concentró la muestra hasta la obtención de una Valser Extracto ácido
Valser
Alcaloides
goma, esta se diluyó por un lado en etanol y por otro en Reactivo de
Mayer Extracto ácido
éter de petróleo. Se cogió 1 mL de los extractos y se Mayer
hicieron las correspondientes pruebas de identificación
Reactivo de liberando la esencia y atrapándola en las gotas del
Dragendorff Extracto ácido
Dragendorff vapor que luego se condensará. Frente a esto podemos
Reactivo de concluir que nuestra trituración del material vegetal no
Schleiber Extracto ácido
Schleiber fue la adecuada, por lo cual estos reservorios antes
Reactivo de mencionados no tuvieron una exposición considerable
Wagner Extracto ácido
Wagner
ante el vapor de agua circulante dentro del montaje.
Tabla 2. Reactivos y tipo de extracto utilizado en las pruebas
cualitativas de identificación. Obtención de extracto etanólico con método Soxhlet y
Maceración

Separación en Cromatografía en capa fina (TLC) Se obtuvieron 25 mL de extracto etanólico a partir de 10


g de muestra vegetal seca. Esta fue dejada 15 días en
Se prepararon 2 mL de tres mezclas de diferentes periódico con exposición continua al sol para eliminar la
solventes: éter de petróleo:etanol (7:3); humedad y luego fue puesta en un recipiente de vidrio
Cloroformo:acetato de Isopropilo (1:1) y tolueno:etanol con etOH al 78% de pureza por dos días más.
(3:7). Se saturó la cámara (vaso de precipitados) por 20
minutos y se dejó correr la fase móvil en una placa de La cantidad de extracto obtenido a través del método
cromatografía de Alúmina. Se agregó Vainillina a cada Soxhlet fue de 50 mL. En el procedimiento que tardo
una de las tres placas (Figura 13) y se calentaron en una aproximadamente una hora se produjeron cinco
plancha de calentamiento hasta su correspondiente sifones, los cuales son detallados en la tabla 1.
revelado.
Número del sifón Tiempo (min)
1 17
Resultados y discusión 2 20
3 3
Obtención del aceite esencial 4 3
5 4
Para el método de extracción por arrastre con vapor no Tabla 3. Duración de tiempo entre sifones.
se obtuvieron resultados, debido a que la cantidad de Este procedimiento consiste en la extracción de
aceite esencial obtenida fue nula. metabolitos presentes en las plantas. Las muestras
La extracción del aceite esencial de una muestra vegetal vegetales se colocan en la camisa de nuestro montaje,
de la especie Conium Maculatum L. (Cicuta) mostro un donde al hacer ebullir el disolvente, en este caso etanol,
rendimiento igual a cero. Esto pudo ser debido a que la pasa a la parte superior o refrigerante, donde se
cantidad de aceite esencial depende de la cantidad de condensa y cae gota a gota sobre el cartucho.
material vegetal, para nuestro caso la cantidad fue de 5 Continuando así hasta que se genera el sifón o volumen
g, lo que limitaba las posibilidades de obtener un máximo que pueda almacenar el brazo de sifón donde
rendimiento considerable, cabe resaltar que esta es una todo el etanol que se encontraba con la mezcla de las
desventaja que presenta este montaje en particular, sustancias absorbidas cae al balón a través de un orificio
debido a que el balón utilizado no es suficientemente que tiene el brazo con la extracción ya hecha.
grande como para almacenar una cantidad Los resultados detallados en la Tabla 3 demuestran que
representativa de material vegetal. se obtuvieron un gran número de sifones a la hora de
hacer este procedimiento y podríamos asumir que se
Sin embargo, podemos resaltar que el arrastre con obtuvo un buen rendimiento de extracto etanólico sin
vapor de agua es útil para extraer sustancias volátiles, necesitar mayor cantidad de solvente, siendo de esta
tales como los aceites esenciales, los cuales no son más manera un método económico. Además, siendo una
que una mezcla compleja de hidrocarburos, terpenos, extracción de tipo exhaustiva (Skoog 2001), esta puede
alcoholes, compuestos carbonilicos, aldehídos destilar, condensar y volver a pasar a través de la fase
aromáticos y fenoles. Estos se encuentran almacenados acuosa de forma automática y continua, generando así,
en las glándulas, conductos, sacos o reservorios dentro un proceso que equivale a varios centenares de
del vegetal, por lo cual Olaya et al. (2003) recomienda extracciones con un equipo que prácticamente no
desmenuzar bien la materia vegetal para que estos requiere atención y con un tiempo de duración de
reservorios queden expuestos a la acción del vapor de menos de una hora. Todo el proceso permite una mayor
agua. El vapor por presión entra en contacto con las solvatación de los metabolitos. Esta técnica tiene el
células de las diferentes partes de la planta y las rompe inconveniente de que puede causar daño a los
compuestos termolábiles, debido a que se debe Quinonas HCl [ ] - No hubo
calentar constantemente el extracto para llegar al punto (Comportamiento reacción.
ante acido y Precipitación
de ebullición del solvente usado (Satyajit et al). donador de del Zn
electrones) NaOH 40% + Coloración
Según Skoog (2001) es importante determinar que las amarilla.
sustancias iónicas y los compuestos orgánicos polares Precipitación
están en mayor proporción en la fase acuosa y que los del Zn
Saponinas Espuma - No hubo
compuestos orgánicos apolares están en la fase formación
orgánica. Por lo cual en esta técnica no se extraen de espuma
compuestos apolares tales como terpenos y en general Cardiotónicos Antrona + Coloración
aceites esenciales, debido en parte a la naturaleza polar azul-
verdosa
del solvente y a que cuando se usan solventes apolares
Molish + Cloración
estos se pegan a las paredes del montaje (Valcárcel violeta
1988). Sesquiterpenlacto Hidroxamato - No hubo
nas férrico reacción
Aunque al principio fue más lenta la generación de los Cumarinas Hidroxamato - No hubo
sifones, por la espera de que el etanol llegara a su punto férrico reacción
Erlich - No hubo
de ebullición, esta se volvió más constante a medida reacción
que pasaba el tiempo. El intervalo de tiempo del primer Alcaloides Valser - No hubo
sifón fue de 17 minutos, el del segundo de 20 minutos, reacción
el tercero y cuarto de 3 minutos y el quinto de 4 Mayer - No hubo
minutos. Esta secuencia nos da a entender que el reacción
Dragendorff - No hubo
procedimiento avanza a intervalos grandes al momento reacción
de iniciar y que luego estos van siendo más cercanos, Schleiber - No hubo
siendo a su vez más contantes las descargas del sifón, reacción
hecho que es normal entre 5 y 20 minutos (Núñez Wagner - No hubo
2008). El aumento de número de sifones y reducción del reacción
Esteroides Lieberman - + Formación
tiempo de contacto entre el material y el solvente Burchard inmediata de
conlleva a que pueda haber una disminución de los coloración
metabolitos presentes en cada descarga. Por lo cual no verde.
hay seguridad de que por el número de sifones Después de
5 minutos se
obtenidos se hayan extraído en su totalidad los
sigue la
metabolitos de la planta. tendencia.
Tabla 4. Resultados obtenidos a partir de las pruebas de
Identificación de Metabolitos secundarios identificación de la marcha fitoquimica preliminar.

Metabolito Prueba Resultad Observacion Para el análisis de taninos en la cicuta los resultados
secundario o es fueron negativos en las tres diferentes pruebas
Carotenoides Salkoski + Formación realizadas, según Valderrama (2002) este tipo de
de
coloración
compuestos en la familia Apiaceae se encuentra en
azul en la plantas forestales y de corteza abundante, la especie
interfase Conium Maculatum L. no posee un volumen de tallo o
Taninos Cloruro férrico - No hubo corteza abundante por lo que la presencia de este tipo
reacción
de metabolitos queda descartada.
Acetato de plomo - No hubo
reacción
HO OH
Gelatina – sal - No hubo HO OH
- 2-
reacción Fe (OR)
+ 3HCl
+ FeCl3
Flavonoides Shinoda - Coloración
OH
amarilla. No OH

hubo
reacción.
Leucoantiocianidi - Coloración
Prueba del cloruro férrico
nas amarilla. No
hubo
reacción
- -
HO O HO O
O O

+ (Ac)2 Pb Pb-O-R +2H3C-CO 2H +Mg/ 2HCl + MgCl 2


OH OH O O

n n
Figura 8. Prueba de Shinoda
Figura 5. Prueba del acetato de plomo
Los resultados para las Cumarinas fueron negativos en
- - - - - - -

OH
R CO NH R CO NH R``
puente de hidrogeno
las diferentes pruebas. Según Larsson (2004) en la
OH
O
-
-
Conium Maculatum L. se ha evidenciado la presencia de
O
- - - - - - - furano Cumarinas lineales, pero su lugar de biosíntesis y
HO CO 2 + R CO NH R CO NH R``
acumulación no ha sido bien identificado. Se dice que su
HO CO 2
OH
HO
HO
OH
concentración se da primordialmente en las frutas.
-
CO 2 -
CO 2
CH3

Figura 6. Prueba de la gelatina - sal O + H2N OH + Na OH


H3C O
En la identificación de Saponinas, no se produjo ninguna
espuma al agregar los reactivos correspondientes, CH2
H3C
Según Tundías (2009) las saponinas en la familia H3C

Apiaceae se encuentran solo en algunos casos, H3C


CH2 Fe
3+
+ HCl
comúnmente en las especie Physospermum vercillatu, OH + O
O N
de la cicuta no hay un reporte sobre la presencia de -
O
este tipo de compuestos. 3

Aunque bibliográficamente no se reporta la presencia


Figura 9. Prueba del Hidroxamato férrico
de Carotenoides en la Conium Maculatum L. podemos
suponer que algunas flores fueron añadidas a nuestra
muestra, y por consiguiente a nuestro extracto. Los
Carotenoides son compuestos que pueden actuar como
pigmentos en las flores, dándoles su color
característico. Podemos inferir en la idea de que la
presencia positiva de estos se debe al análisis indirecto
de las flores de esta planta, las cuales tienen un color
amarillo.

La presencia de quinonas en medio básico fue positiva,


aunque en la literatura no se encuentra
caracterizaciones que hablen sobre su contenido en
este tipo de plantas o familia. Figura 10. Prueba de Erlich
O
OH

++
Los resultados para los metabolitos de tipo cardiotónico
+
+ 2H /Zn + Zn fueron positivos en las dos pruebas realizadas, sin
O OH embargo, en la literatura no se reporta presencia de
estos metabolitos en las hojas de la Conium Maculatum
Figura 7. Comportamiento ante acido y donador de electrones
L.
Los resultados de las pruebas para la detección de OH OH
OH
Flavonoides dieron negativo, según Larsson (2004) la H OH
+ OH
O
H OH
familia Apiaceae presenta tejidos que son H OH
H2SO4
OH
O
O
OH

intermediarios en la biosíntesis de Flavonoides, pero H OH

O
estos se encuentran mayoritariamente en la corteza. No
se encuentra una caracterización fiable en donde se
detalle la presencia de este tipo de compuestos en la Figura 11. Prueba de Molish
especie Conium Maculatum L.
La identificación de esteroides fue positiva mediante la (2010) se encuentra presente en las semillas, con lo que
reacción de Lieberman-Burchard. El cambio a color podemos confirmar que el resultado negativo es
verde fue inmediato, después de pasados 5 minutos se verdadero al solo usar las hojas para el análisis. Vetter
siguió la misma tendencia. Según Radulovic et al (2011) (2004) reporta que cuando se hacen las pruebas en las
los esteroides predominantes que se encuentran en la raíces y las puntas de los brotes de plantas jóvenes
especie Conium Maculatum L. son el estigmasterol estas indican resultados positivos; en las plantas más
(stigmasta-5,22-dien-3β-ol) y el β-sitosterol (estigmast- maduras estas reacciones positivas tienden a
5-en-3β-ol). Las estructuras de estos compuestos desaparecer, como en nuestro caso. Las reacciones
pueden ser detallados en la Figura 3. Según Rodríguez positivas se muestran en las frutas sólo por conductos
(1999) el mecanismo de reacción para esta prueba no secretores. Corsi y Biasci (1998) sugieren que la Conium
ha sido descubierto. Maculatum L. es similar a otros miembros de la familia
Apiaceae, que tiene conductos secretores en órganos
- -
HgCl 2 + 2I -------2 Cl + HgI 2 vegetativos y frutas. Las concentraciones y las
PRECIPITADO ROJO proporciones relativas de los diferentes alcaloides en la
Conium Maculatum L parecen depender de diferentes
- 2-
HgI 2 + I ------- HgI 4 factores (temperatura, humedad, tiempo y la edad de
los la planta) (Vetter, 2004). Las fases de floración,
COMPLEJO DE COLOR PARDO
polinización y fertilización muestran un cambio brusco
en la distribución de alcaloides. La y-coniceina es el
componente alcaloide predominante durante la época
Hg
de lluvias y la coniina predomina durante el período
O NH 2I seco. El contenido de y-coniceina disminuye y el
Hg contenido de coniina aumenta notablemente durante la
COLOR AMARILLO INTENSO fase de maduración de la fruta (Fairbairn y Challen,
Figura 12. Reacción general para la identificación de alcaloides.
1959). En el caso de las hojas se dice que en las plantas
jóvenes (es decir, en la fase del crecimiento activo) la y-
La cicuta es una planta que está compuesta coniceina es el componente principal alcaloide, con
mayoritariamente por alcaloides. Los resultados para pequeñas cantidades de conhidrina. Vetter (2004) nos
este tipo de metabolito secundario fueron negativos en dice que la mayoría de las plantas de la familia Apiaceae
todas las diferentes pruebas efectuadas. Frente a esto, producen diferentes aceites volátiles en los tejidos
Farnsworth (1966) informa que si hay presencia de un claramente delimitados de los frutos. Se sabe que la
compuesto alcaloide el cual no tiene el nitrógeno especie Conium Maculatum L. produce y contiene
heterocíclico, si no que más bien es un protoalcaloide alcaloides de piperidina pero la síntesis y los sitios de
las pruebas especificas darán falsos negativos. De igual acumulación aún no se han identificado de manera
manera ocurre con los compuestos que tienen un grupo inequívoca. Por tanto, no se puede establecer la
oxigeno enlazado con el nitrógeno. Al observar la figura verdadera presencia de estos en las hojas de la planta.
2, en donde se detallan los diferentes alcaloides Cabe resaltar que se dice que estos compuestos se
reportados en la cicuta se puede detallar como este encuentran mayoritariamente en los aceites esenciales.
postulado no se cumple en nuestro caso en particular, López et al (1999) reporta que el contenido promedio
debido a que la mayoría de estos compuestos son de alcaloides en las hojas va de un 0,5% a un 1,5%. Al
alcaloides verdaderos, que si pueden ser fácilmente igual se puede resaltar malos procedimientos al
detectados por las pruebas de reconocimiento. Para efectuar las pruebas de identificación, o
determinar las posibles causas de estos falsos negativos sobrecalentamiento del extracto, lo cual daña los
se tuvieron que mirar otras características y aspectos de metabolitos secundarios termolábiles.
la planta. Entre ellos, la concentración de estos
alcaloides en las diferentes partes de la planta (cabe Técnicas cromatograficas de separación
resaltar que en nuestros experimentos solo se usaron Solvente apolar (A) Solvente polar (P) Proporción (A:P)
las hojas y alguna que otra flor) y la concentración de Éter de petróleo Etanol 7:3
metabolitos secundarios dependiendo del tiempo Cloroformo Acetato de 1:1
vegetativo o de crecimiento de la planta. Isopropilo
Tolueno Etanol 3:7
La especie Conium Maculatum presenta la presencia del Tabla 4. Mezcla de solventes (apolares y polares) y
alcaloide coniina, este compuesto según Gonzales proporciones utilizadas en la práctica.
La selección de cloroformo (apolar/polar) y acetato de
isopropilo (polar) en una proporción 1:1, como fase
móvil, permitió una mejor separación de cada uno de
los compuestos presentes en el extracto etanólico de la
Conium Maculatum (Figura 13), hecho que al ser
comparado con la fase móvil sugerida por Rodríguez
(1997) es aproximado, ya que en la literatura sugiere
como fase móvil cloroformo y etanol o
hexanocloroformo y Dietilamina al 0.05% en una
proporción 3:7 cuando la fase estacionaria es una placa
Figura 13. Recorrido de la muestra del extracto etánolico y la
de alúmina, con el objetivo de separar alcaloides que es
tinta china en las diferentes mezclad de solventes. 1. Éter de
el blanco de la investigación de la planta. Al observar las
petróleo:Etanol (7:3); 2. Cloroformo:Acetato de Isopropilo
proporciones que se sugieren, la fracción polar es (1:1) y 3. Tolueno:Etanol (3:7).
mayor que la apolar, siendo en este punto donde se
clarifica la razón por la cual la separación no fue optima; Al observar la fase móvil utilizada (Alúmina) se puede
ya que la proporción escogida en la práctica fue de 1:1. decir que no es la adecuada para la separación de
compuestos que contienen un grupo Amina (alcaloides)
De otro lado, Baerheim-Svendsen recomienda que para ya que debido a que según UAM esta es útil para la
separar los alcaloides de la cicuta por cromatografía se separación de compuestos apolares tales como
debe emplear como solvente Cloroformo-etanol hidrocarburos, haluros de alquilo, éteres, aldehídos y
absoluto y amonio 25% (18:2:2) con platos de silica gel cetonas. De esta manera la literatura recomienda que
activa. Stahl (2007) recomienda el uso de acetona, para la separación de compuestos aminados se debe
dietil éter y amonio concentrado (50:50:3) y silica gel usar la Silice-gel como fase estacionaria ya que retiene
para la separación de los alcaloides de la cicuta y la con más fuerza sustancias más polares. Este proceso se
identificación de la arecolina. da debido a las interacciones intermoleculares de tipo
dipolo-dipolo o enlaces de hidrogeno entre el soluto y el
Ahora bien, la mayoría de metabolitos encontrados en
adsorbente, de este modo a medida que corre la fase
la cicuta son alcaloides piperidinicos, los cuales pueden
móvil va arrastrando al compuesto y este va siendo
ser identificados con la mezcla de solventes descrita
retenido por dichas interacciones con la fase
anteriormente. (Hui, 1997). Los alcaloides piperidinicos
estacionaria, en este caso la alúmina, cada metabolito o
pueden ser resueltos en TLC de silica gel eluido con
sustancia tiene un tiempo de retención especifico.
cloroformo y etanol (7:3) y visualizados con el reactivo
de Dragendorff. La Gamma Coniceina (Figura 2) puede Cabe resaltar que nuestro extracto etanólico no estaba
ser determinada en presencia de otras piperidinas por bien concentrado, es decir, no tenía una cantidad
reacción con nitroprusiato de sodio. (Hui, 1997). suficiente de metabolitos secundarios como para hacer
una corrida eficaz. Esta variable pudo ser la que más
Al no ser óptimamente separados los compuestos
infirió en los resultados poco concluyentes de la
presentes en el extracto etanólico, se creó un conflicto
práctica. No obstante, se pudo evidenciar que si hubo
entre cada uno de los compuestos, puesto que están
una corrida en las placas, pero que estas no estaban
superpuestos creando impedimentos que dificultan la
resultas de forma tal que pudieran dar una correcta
reacción, por lo cual al momento de ser revelados con
separación e identificación del compuesto en particular.
vainillina-ácido fosfórico, revelador indicado para
cetonas, no mostro la coloración que cita el autor como Conclusiones
positiva, que es rosa, las cuales si se encuentran en los
esteroides, compuestos presentes en la especie Conium Se realizó una marcha fitoquimica preliminar que
Maculatum L. (estigmasterol (stigmasta-5,22-dien-3β- comprendió tres etapas: extracción, identificación y
ol) y el β-sitosterol (estigmast-5-en-3β-ol)). separación cromatografía de los metabolitos
secundarios de las partes aéreas de la especie Conium
Los reveladores adecuados para la identificación de
Maculatum L., ante esto se concluyó lo siguiente:
alcaloides son: Disolución de yodoplatinico en yoduro
de potasio, o reactivo de Dragendorff o permanganato
- Se pudo determinar que el mejor método para
de potasio-bicarbonato de sodio, para tal objetivo. Por
la obtención de extracto etanólico es el método
lo cual no fue posible identificar los alcaloides,
de soxhlet, ya que es una técnica exhaustiva
metabolitos que más se encuentran en la planta.
que requiere poca cantidad de reactivo, menos
tiempo para la extracción y genera un
rendimiento notable. - Al no tener una separación adecuada de los
metabolitos en la placa cromatografica no se
- La extracción de aceites esenciales por arrastre puede establecer una identificación clara de los
con vapor de agua demostró ser una técnica compuestos hallados en la cicuta.
que se ve afectada por dos factores en general:
la cantidad de muestra vegetal y la trituración Referencias
de la misma.
- Baerheim-Svendsen, R. & Verpoorte. (1983).
- Se determinó mediante pruebas positivas y Chromatography of alkaloids, part A: thin-layer
especificas que la composición de metabolitos chromatography. Nueva York, USA: ELSEVIER
secundarios en las hojas de la especie Conium SCIENTIFIC PUBLISHING COMPANY. Pp. 61- 62.
Maculatum L. es la siguiente: Carotenoides (en
- Corsi, G. & Biasci, D. (1998). Secretory structures
las flores), cardiotónicos, quinonas y esteroides.
and localisation of alkaloids in Conium
Aunque la literatura no justifica la presencia de
maculatum L. (Apiaceae). Annals of Botany
estos metabolitos (excepto los esteroides).
(81). pp. 157–162.
- Fairbairn, W., Suwal, N., 1961. The alkaloids of
- Se determinó que la presencia de los diferentes
hemlock (Conium maculatum L.) II. Evidence for
metabolitos secundarios (en especial alcaloides)
a rapid turnover of the major alkaloids.
reportados por la literatura no se encuentran en
Phytochemistry (1). pp. 38–46.}
su totalidad en las hojas, si no que esto
- Farnsworth, N. (1966). Biological and
depende de los sitios de biosíntesis y
Phytochemical Screening of Plants. Journal of
acumulación. Al igual también son factores
pharmaceutical sciences. Volumen (55). pp. 225
importantes el clima, la temperatura, la
– 269.
humedad y en particular el tiempo de
- Fonnegra, R. Jiménez, S.L., (2007). Plantas
crecimiento. Aunque se reporta que la cicuta
medicinales aprobadas en Colombia (2 edición).
tiene gran cantidad de alcaloides en su
Medellín Colombia: editorial universidad de
composición, cabe aclarar que las reacciones
Antioquia. pp. 7.
positivas de identificación tienden a
- Garland, T. & Barey A. (1996). Toxic Plants and
desaparecer al madurar la planta.
other natural toxicants. Washington, USA: CAB
INTERNATIONAL. pp. 418 -422.
- Se logró determinar a partir de las pruebas
- González, G. (2010) Plantas tóxicas de
específicas de identificación y la literatura la
importancia en salud y producción animal en
quimiotaxonomía general de la especie Conium
Colombia. Bogotá, Colombia: Editorial de la
Maculatum L., en la que se encuentra:
Universidad Nacional de Colombia.
Presencia de alcaloides en las raíces, hojas,
- Hui, Y.H., Smith, R.A. & Spoerke, D.G. (2001)
semillas y frutos; presencia de Flavonoides en la
Foodborne Disease Handbook, Second Edition,:
corteza y Cumarinas en los frutos, presencia de
Volume 3: Plant Toxicant. (2ª edición). Basel,
Carotenoides en las flores, presencia de
Suiza: Marcel Dekker. pp. 357 – 359.
compuestos parecidos a los cardiotónicos
- Larsson, T (2004) Some history and effects of
(tremetona) en las hojas y presencia de
Conium Maculatum L. Estocolmo, Suecia:
esteroides (estigmasterol y β-citosterol) en las
Uppsala Universit.
hojas. Las quinonas no son justificadas debido a
- López, A. Cid, S. & Bianchini, L. (1999).
que no hay una fuente confiable que confirme
Biochemistry of hemlock (Conium maculatum L.)
su presencia en este tipo de plantas.
alkaloids and their acute and chronic toxicity in
livestock. A review. Toxicon 37, 841–865.
- Se determinó que los compuestos que pudieron - Núñez C.E. (2008) Extracciones con equipo
posiblemente correr sobre la fase estacionaria Soxhlet. Fuente:
son el estigmasterol (stigmasta-5,22-dien-3β-ol) http://www.cenunez.com.ar/archivos/39-
y el β-sitosterol (estigmast-5-en-3β-ol)), debido extraccinconequiposoxhlet.pdf
en parte al grupo cetona presente en su - Olaya, M.J. & Méndez J. (2003) Guía de plantas
estructura, que según la literatura corre con el y productos medicinales. (ed.) Bogotá,
tipo de solventes y fase estacionaria utilizados. Colombia: Convenio Andrés Bello. pp. 17 – 18.
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Monica R. Loizzoa, Federica Menichinia,
Filomena Confortia, François Tillequinb and
Francesco Menichinia (2009). “Cytotoxic activity
and inhibitory effect on nitric oxide production
of triterpene saponins from the roots
of Physospermum verticillatum (Waldst & Kit)
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