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Escuela de ingeniería ambiental y de saneamiento

Informe de laboratorio
“MICROSCOPIA Y TINCIÓN DE GRAM; PREPARACIÓN DE
MEDIOS DE CULTIVO, SIEMBRA Y AISLAMIENTO DE
MICROORGANISMOS.”

Luis Jesús Calderón Quintero


Freddy Antonio Pérez Cárdenas
Milton Javier Sánchez Navarro

Docente
Karol Ibeth Meza Acosta
Microbiología

2019 – A
MARCO TEÓRICO

MICROSCOPIA Y TINCIÓN DE GRAM


El microscopio, este término designa, en sentido amplio, a todo instrumento utilizado para
amplificar la imagen de objetos que, por su tamaño, no son observables a simple vista”. El
descubrimiento del microscopio compuesto tuvo un precedente atribuido a Galileo (1564-
1642). El verdadero impulsor de la Microscopía fue, sin duda, el holandés Anton Van
Leeuwenhoek, (1632-1723). Construyó microscopios simples, con lentes muy convexas
que él mismo pulía y con los cuales realizó observaciones muy diversas: estudió la
composición de la sangre, fue el primero en observar y dibujar los protozoos, descubrió las
bacterias, etc. Sus trabajos fueron publicados por la Real Sociedad de Londres (1683). Hoy
día, hay unanimidad en considerar a los holandeses Hans y Zacarías Janssen, padre e
hijo, como constructores del primer microscopio compuesto en 1590. Desde entonces y
hasta nuestros días, el microscopio compuesto no ha cesado de perfeccionarse,
incorporándole mejoras, revolver porta objetivos, visión binocular, iluminación halógena de
gran rendimiento, filtros polarizadores, equipo de contraste de fase, microscopio de
contraste interferencial, microscopio de luz ultravioleta, etc.
La microscopía es el conjunto de técnicas y métodos destinados a hacer visible los
objetos de estudio que por su pequeñez están fuera del rango de resolución del ojo normal.
Si bien el microscopio es el elemento central de la microscopía, el uso del mismo se
requiere para producir las imágenes adecuadas, de todo un conjunto de métodos y técnicas
afines pero extrínsecas al aparato. Algunas de ellas son, técnicas de preparación y manejo
de los objetos de estudio, técnicas de salida, procesamiento, interpretación y registro de
imágenes.

La tinción de Gram: Es una técnica de laboratorio que se utiliza rutinariamente en los


estudios microbiológicos de las bacterias. Fue diseñada por Christian Gram, un científico
danés, en el año 1884. El objetivo de Gram era conseguir una prueba con la que fuera
posible diferenciar diferentes grupos de bacterias para así poder estudiarlas y clasificarlas.
La prueba resultó todo un éxito y pronto se convirtió en una técnica muy útil no solo para
el estudio de las bacterias, sino también para poder identificarlas rápidamente en una
infección y seleccionar el antibiótico más adecuado para tratarla.

La técnica se basa en aplicar una serie de colorantes a una muestra de cualquier origen
(esputo, orina, pus, etcétera) que supuestamente contenga bacterias no identificadas. Los
colorantes tiñen la pared de las bacterias de color morado y, tras unos minutos, se realiza
un lavado del colorante. Después de eso puede que el colorante permanezca en la pared
bacteriana o que se haya ido. En el primer caso permanecería el color morado, y se trataría
de bacterias Gram positivas y, en el segundo, la pared tendría un color rosado, y serían
Gram negativas.
Colorantes:
En la tinción de gram se utilizan colorantes como la fucsina y el cristal violeta; y reactivos
tales como el lugol y el alcohol acetona
 La fucsina ácida es un colorante magenta utilizado en histología, en las tinciones
de Mallory, Van Gieson y de Gram

 El Lugol es un producto se emplea frecuentemente como desinfectante y


antiséptico, para cubrir deficiencias de yodo, y para la desinfección de agua en
emergencias. En microbiología, es empleado en la tinción de Gram para retener el
colorante cristal violeta.

 El violeta de metilo, comúnmente denominado cristal violeta o violeta de genciana,


es el nombre dado a un grupo de compuestos químicos empleados como
indicadores de pH y colorantes

 La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloración,


ya que en la misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Los organismos gram
positivos no se decoloran, mientras que los gram negativos sí lo hacen

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO, SIEMBRA Y AISLAMIENTO DE


MICROORGANISMOS

La preparación de medios de cultivos es una metodología de rutina usada en los


laboratorios para el crecimiento de microorganismos deseados. Los medios de cultivo son
preparaciones sólidas, líquidas o semi-sólidas que poseen todos los nutrientes necesarios
para el desarrollo de una población microbiana.
De manera general, los medios para cultivar microorganismos son ricos en proteínas
y aminoácidos y suelen contener algún componente que favorezca el crecimiento del
organismo que se desea estudiar, como vitaminas, sangre, suero, entre otros. No existe
un medio de cultivo general o universal, ya que la composición del mismo varía en función
de las necesidades del microorganismo de interés. Algunas bacterias pueden desarrollarse
en cualquier medio de cultivo, pero otras poseen requerimientos especiales.
Los microorganismos, como los hongos y las bacterias, no pueden ser estudiados de
manera individual por su tamaño tan diminuto. Por ello se deben cultivar en medios
artificiales que permitan el aumento significativo de la población.
Por ejemplo, si queremos estudiar bacterias tenemos que proporcionarles las condiciones
adecuadas para que puedan proliferar y forman una colonia (que puede ser observada a
simple vista).

La preparación de los medios de cultivo varia ampliamente dependiendo del tipo de


microorganismo que se desea cultivar. Antes de prepararlo, es menester conocer las
necesidades nutricionales básicas del organismo de trabajo.
A continuación se describirán los componentes más habituales usados en los medios de
cultivos para tener una idea general de su preparación:
Agar
Se usa en los cultivos como agente gelificante y se añade cuando se busca un medio sólido
o semisólido. El primer agente solidificante usado en la preparación de medios fue la
gelatina, pero en el año 1883 el agar fue introducido en el mundo de la bacteriología por
W. Hesse.
El agar de tipo bacteriológico posee como componente principal un polisacárido de
complejas ramificaciones extraído de algas. Este compuesto es usado como espesante de
alimentos comunes como helados y mermeladas.
Es un elemento muy valioso en la microbiología por varias razones. Principalmente porque
los microorganismos no pueden degradarlo, se licua a una temperatura de 100 °C y
permanece en estado líquido hasta alcanzar unos 45 °C o menos.
En caso de que se quiera preparar un medio sólido, la concentración de agar debe esta
alrededor de 1,5%, mientras que los semisólidos deben ser preparados desde 0,3 hasta
0,5%.

Fluidos
El cultivo de organismos patógenos necesita de fluidos corporales para que puedan
desarrollarse como lo harían en su ambiente natural. Por esta razón, se añade sangre
completa o desfibrilada. El fluido se extrae de un animal sano y, una vez esterilizado, se
agrega en el medio de cultivo.

Extractos
Son obtenidos de distintas partes animales (como carne o hígado) o vegetales (semillas) y
se procesa para obtener un concentrado sólido en forma de pasta o polvo. Los más
comunes son de levadura, malta y carne.

Peptonas
Estos compuestos orgánicos se obtienen por hidrólisis enzimática o química de tejidos
animales o vegetales. La finalidad es añadir contenido rico en aminoácidos, los cuales son
las unidades fundamentales de las proteínas.

Amortiguadores
Los “buffers” o sistemas amortiguadores evitan los cambios bruscos de pH y ayudan a
mantener el rango óptimo que el organismo tolera.
La mayoría de los organismos pueden desarrollarse adecuadamente a un pH de 7, aunque
algunas bacterias prefieren los medios alcalinos. Sin embargo, existen bacterias que
resisten variaciones de pH entre los valores de 6 y 9.
En especies sensibles al pH, el daño no es producido por la cantidad excesiva de iones
hidrógeno o hidroxilo, sino por el aumento de ácidos o bases débiles que pueden penetrar
en la célula.
Igualmente, se añaden indicadores que pH para poder monitorearlo y evitar desviaciones
ocasionadas por fermentaciones u otros procesos.

Objetivos
El objetivo principal al preparar un medio de cultivo es añadir todos los componentes
necesarios para permitir el desarrollo exitoso del organismo que desea ser aislado. Debe
ser identificada la combinación de componentes y nutrientes más efectivo para lograr el
medio deseado.
Tanto la preparación como el almacenamiento del medio son críticos para garantizar un
crecimiento exitoso, ya que de estos pasos depende la composición del medio y la
disponibilidad de nutrientes.
Hay que tomar en cuenta que el cultivo de microorganismo es una tarea que se ve afectada
por varios factores externos al medio de cultivo, como la intensidad de luz recibida,
temperatura y nivel de acidez o alcalinidad del medio. Por ello, cada uno de estas variables
debe ser tomada en cuenta.

TIPOS DE MEDIOS

Basado en su composición
Basados en su composición existen tres tipos principales de cultivos: naturales o empíricos,
semi-sintéticos y medios definidos sintéticos o químicos.

Medio natural
En los medios naturales la composición exacta es desconocida. Estos incluyen
ingredientes como leche, sangre diluida, zumos vegetales, extractos e infusiones de carnes
y peptonas. Por razones económicas, suelen añadirse componentes de bajo costo como
extracto de soya, suero, melaza, etc.

Medios semi-sintéticos
Se llama medio semi-sintético si se conoce parcialmente la composición del mismo.
Cualquier medio que contenga agar pasa a ser un medio semi-sintético.
Entre ellos tenemos agar papa dextrosa, agar czapek-dox, agar avena, agar peptona de
carne, entre otros ejemplos.

Medio definidos sintéticos o químicos


En este caso la composición del medio – en cuanto a la cantidad de fuentes de carbono,
nitrógeno, azufre, fósforo y cualquier otro factor de crecimiento necesite – es totalmente
conocida. Es muy útil si se quieren obtener resultados reproducibles para otros
investigadores.
Para los llamados “microorganismos con requerimientos especiales de crecimiento” se
necesita añadir los componentes necesarios. Un ejemplo de este tipo son los Lactobacillus.

Basada en el tipo de microorganismo


Del mismo modo, existe otra clasificación para los medios de cultivo basada en el tipo de
microorganismo que puede crecer en él. Siguiendo este principio tenemos los siguientes
medios generales, de enriquecimiento, selectivos y diferenciales. Cada uno se describe a
continuación:

Medios generales
Estos admiten el desarrollo de una amplia variedad de microorganismos. Si algún
organismo necesita de condiciones especiales para su crecimiento no podrá desarrollarse
exitosamente en este tipo de cultivo.
Medios de enriquecimiento
Los medios de enriquecimiento favorecen el crecimiento de cierto tipo de microorganismo,
pero no se ha añadido ninguna sustancia para evitar que otra clase de microbios crezcan
en él.

Medios selectivos
Buscan el crecimiento específico de un microorganismo, llámese hongos, bacterias,
protozoarios, entre otros. Para ello, inhiben del desarrollo de los demás.
Para lograr este objetivo se pueden añadir compuestos químicos mortales para un amplio
grupo de microorganismos e inocuo para el organismo de interés o añadiendo fuentes de
energía que sólo sean asimilables por el microbio buscado.
Los medios selectivos son utilizados cuando se toman muestras médicas con el fin de
cultivar algún microorganismo patógeno. Acá es necesario favorecer el crecimiento del
patógeno e inhibir el desarrollo de la flora microbiana normal proveniente del paciente.
El agar sulfito de bismuto, por ejemplo, no permite el crecimiento de bacterias gram
positivas y una gran cantidad de bacterias encontradas en la cavidad gastrointestinal. Por
ello, es usado para cultivas la bacteria gram negativa causante de la fiebre tifoidea,
Salmonella typhi en muestras fecales.

Medios diferenciales
Este tipo utiliza alguna característica diagnóstica del organismo de interés (peculiaridades
en su metabolismo, por ejemplo) para poder identificarlas frente a otra especie que crece
en el mismo medio.
Tanto los medios diferenciales como los medios selectivos son de gran utilidad en el área
de la microbiología clínica y de la salud pública, ya que estas disciplinas necesitan detectar
la presencia de microorganismos específicos relacionados con patologías o condiciones
pobre de higiene.
Se pueden añadir sustancias indicadoras en el cultivo que otorguen una característica
distintiva a la colonia buscada. Por ejemplo, a los medio agar-eosina-azul de metileno
(abreviado EMB) y el agar-MacConkey se les añade lactosa y un indicador de pH.

Así, cuando se desarrolla una colonia en estos medios con la capacidad de fermentar la
lactosa y de producir aldehídos, pueden observarse de un color especial.

Un microorganismo se puede sembrar en un medio líquido o en la superficie de un medio


sólido de agar. Los medios de cultivo contienen distintos nutrientes que van, desde
azúcares simples hasta sustancias complejas como la sangre o el extracto de caldo de
carne. Para aislar o purificar una especie bacteriana a partir de una muestra formada por
muchos tipos de bacterias, se siembra en un medio de cultivo sólido donde las células que
se multiplican no cambian de localización; tras muchos ciclos reproductivos, cada bacteria
individual genera por escisión binaria una colonia macroscópica compuesta por decenas
de millones de células similares a la original. Si esta colonia individual se siembra a su vez
en un nuevo medio crecerá como cultivo puro de un solo tipo de bacteria.

Cultivar un microorganismo significa promover intencionalmente el desarrollo de éste en


medios de cultivo y condiciones de laboratorio controladas. La población de
microorganismos desarrollada en un medio se denomina cultivo. Cuando éste contiene una
sola especie de microorganismo, se denomina cultivo puro o axénico, cuando contiene más
de una especie de microorganismos se denomina cultivo mixto. Un cultivo tipo contiene
una especie conocida de microorganismos y es conservada en el laboratorio para realizar
diversos ensayos y estudios.

Un cultivo axénico consiste en una sola especie microbiana, proveniente de una sola célula.
Los cultivos axénicos son muy raros en la naturaleza. En los medios naturales -por ejemplo,
en el suelo, agua, o en el cuerpo humano- existen cultivos mixtos. En un cultivo mixto, viven
muchas y diferentes especies de forma conjunta. Un cultivo axénico se obtiene
artificialmente en el laboratorio. A la hora de obtener un cultivo axénico se han de tomar
precauciones especiales, ya que los microorganismos están por todas partes, en la
naturaleza, en el laboratorio y en los instrumentos y recipientes usados en los
experimentos. Estos microorganismos no deseados o contaminantes deben ser eliminados
de un cultivo para que éste pueda ser axénico. El segundo paso para obtener un cultivo
axénico es inocular o introducir, una sola célula de un microorganismo en un medio sólido
o liquido, esterilizado previamente. De esta manera, aislamos un solo microorganismo del
resto y se podrá multiplicar en condiciones favorables. Un clon está constituido por una
población de células descendientes de un solo microorganismo. Una colonia es un clon lo
suficientemente grande como para ser visible sobre la superficie de un medio sólido.
Un cultivo microbiano que ha estado creciendo por cierto tiempo en el mismo tubo o matraz,
debe ser transferido a un medio de cultivo nuevo, de otra manera el crecimiento y
sobrevivencia no pueden continuar. En esta transferencia se deben considerar dos
aspectos básicos referentes a: no introducir microorganismos indeseables (contaminantes)
y concentración o carga microbiana de la muestra (inóculo) a sembrar.
Con relación a la concentración del inóculo, un error frecuente del principiante consiste en
tomar muestras grandes, lo que es innecesario. Una colonia de bacterias del tamaño de la
cabeza de un alfiler contiene varios millones de microorganismos, es obvio que con una
cantidad pequeñísima (casi invisible) que se adhiera al asa, será más que suficiente para
efectuar una transferencia exitosa.
Dispositivos empleados en la transferencia de muestras microbianas: hisopo, pipeta (para
uso microbiológico son terminales y la parte superior o boquilla debe estar protegida con
filtro de algodón), pipeta pasteur, cable de Kolle o portasa con alambre de platino dispuesto
en forma de: aguja, asa, espátula y/o gancho.
En la transferencia de microorganismos se emplean agujas, asas de inoculación, hisopos,
pipetas o pipetas pasteur que deberán esterilizarse previamente. La utilización de estos
dispositivos, así como de los diferentes medios de cultivo tienen aplicaciones específicas.
Por ejemplo: los medios líquidos se preparan en tubos o matraces que se cubren con
tapones de algodón o tapones especiales. Un cultivo líquido puede ser transferido mediante
un asa microbiológica, un hisopo, pipeta o pipeta pasteur; el inóculo se deposita dentro del
caldo o medio líquido. En este tipo de cultivos los microorganismos presentan un desarrollo
particular que se manifiesta en la superficie o a través de todo el líquido. Una de las
ventajas que presenta este tipo de cultivo se refiere a la posibilidad de agitarlos acelerando
la velocidad de microorganismos anaerobios, por otra parte, en este tipo de cultivos, las
poblaciones se encuentran suspendidas y e fácil homogenizarlas, lo que permite
estandarizar la concentración del inóculo. La desventaja que presentan, e que en ellos e
difícil detectar contaminación a simple vista.
Los medios semisólidos e preparan en tubos, se inoculan con aguja de siembra (asa recta)
o pipeta pasteur; en este último caso es necesario calentar el medio y cuando se encuentra
en estado líquido y a una temperatura de aproximadamente 42ºC se agrega el inóculo, se
homogeniza y se deja solidificar. Estos medios se emplean para estudiar la movilidad de
los microorganismos y para favorecer la separación de microorganismos con diferentes
requerimientos de oxígeno.
Los medios sólidos e preparan en tubos o matraces dependiendo de la cantidad o de las
necesidades, después de esterilizarlos, estos se inclinan o vierten en cajas de petri. La
siembra se realiza con el asa, inoculando la superficie del agar con mucha suavidad; en
estos medios, los microorganismos al multiplicarse forman agregados que se hacen
visibles a simple vista; a estos agregados se les denominan colonias, las que presentan
características que varían con el tipo de microorganismo cultivado y el medio de cultivo
empleado.
En cualquier medio de cultivo es de primordial importancia ajustar el pH, ya que aún cuando
la mayoría de los microorganismos crecen mejor en pH neutro, algunos requieren de pH
alcalino o ácido, por lo que al proporcionar un pH adecuado se favorecerá el crecimiento
del microorganismo de interés y la obtención del cultivo. Con este mismo propósito durante
la incubación se deben proporcionar las condiciones adecuadas para el microorganismo
en estudio. El crecimiento óptimo de los microorganismos se presenta a temperaturas que
la mayoría de las veces están relacionadas con la de su hábitat natural.
Algunos microorganismos crecen por debajo de 15ºC, otros requieren temperaturas más
elevadas (30 a 45ºC) y algunos hasta 80ºC. Para alcanzar y mantener estas temperaturas
se puede usar una incubadora microbiológica o un baño de agua a temperatura constante,
en tanto que para lo microorganismos que presentan su crecimiento óptimo a temperaturas
entre 20 y 25ºC se pueden incubar en la gaveta o cajón del laboratorio, a temperatura
ambiente.
En general las incubadoras microbiológicas satisfacen las necesidades en cuanto a los
rangos de temperatura requeridas por los microorganismos. La desventaja que tienen es
que estos aparatos funcionan con aíre seco, lo que determina la deshidratación de los
medios de cultivo. Por lo tanto, el crecimiento de cualquier cultivo
experimental que se realice en incubadora no debe prolongare por más de nueve días. Con
relación a las necesidades gaseosas, no todos los microorganismo crecen en presencia de
oxígeno atmosférico; los que sólo crecen en presencia de aíre se llaman aerobios
obligados; los que sólo crecen en ausencia de oxígeno se denominan anaerobios obligados
o estrictos, un tercer grupo se adapta a las dos condiciones y se le conoce como
facultativos. Existe una cuarta categoría que comprende bacterias que requieren oxígeno,
pero sólo lo utilizan cuando éste existe en concentraciones reducidas; a estos se les llama
microaerofílicos. El desarrollo de estos diferentes grupos e favorece mediante la agitación
de los cultivos o mediante la exclusión de oxígeno para lo que se emplean sustancias
reductoras o equipos especiales.

Las bacterias son organismos procarióticos, se encuentran ampliamente distribuidas en la


naturaleza, habitan en el agua, el suelo, en la superficie o en el interior de plantas y
animales incluyendo al hombre. Pueden vivir en forma libre o en simbiosis con otros
organismos, ya sea como parásitos, comensales o mutualistas. Fisiológicamente este
grupo presenta características muy variables, hay bacterias móviles e inmóviles
fotosintéticas y quimiotróficas, autótrofas y heterótrofas; se desarrollan en un rango muy
amplio de temperatura, pH y condiciones gaseosas.
En el estudio de cultivos bacterianos algunos de los criterios que se emplean para
caracterizarlas incluyen: tamaño, morfología celular, forma de agrupación, reacción a la
tinción de Gram, formación de esporas, movilidad, presencia de inclusiones de reserva y
características culturales en medios líquidos y sólidos en los que presentan patrones de
desarrollo en cuanto a la forma, tamaño, elevación y color de las colonias.

TÉCNICAS DE SIEMBRA:
El método de siembra por estría en placa
Es el método más fácil y el más usado para obtener cultivos axénicos. Para ello, con un
asa de siembra se toma una muestra de la población mixta y a continuación se hacen
estrías sobre la superficie de un medio sólido preparado en una placa Petri (a las placas
Petri también se les denomina simplemente placas). Conforme se van haciendo estrías en
zigzag con el asa, cada vez se van depositando en la superficie del medio menos
microorganismos. A continuación, se flamea el asa, se toca en la región donde se han
realizado las últimas estrías y se continúa la siembra con la misma técnica, en la superficie
de medio sin sembrar aún. Repitiendo este proceso varias veces se logra separar células
individuales. A continuación, las placas se incuban en un lugar adecuado, permitiendo que
las células aisladas experimenten un número suficiente de divisiones para formar colonias
visibles. Aunque cada colonia posiblemente representa un clon derivado de una sola célula,
no podemos asegurarlo. Quizás, dos células quedaron depositadas tan juntas que han
originado una única colonia mixta. Por tanto, para asegurarnos de que hemos obtenido un
cultivo axénico, conviene repetir el procedimiento a partir de una colonia bien aislada en la
primera placa. Las colonias que se desarrollen la segunda vez, serán, casi con toda
seguridad, cultivos axénicos.

Los métodos de vertido en placa y extensión en placa


En estos métodos, las suspensiones de células microbianas se diluyen antes de su siembra
en placa. Se siguen estas técnicas cuando la muestra contiene tantos microorganismos,
que la dilución no se puede realizar en una sola etapa. Por ejemplo, una suspensión con
mil millones de células por mililitro debe ser diluida 107 veces para obtener una suspensión
con un centenar de células por mililitro, Por tanto, se realizan diluciones seriadas (en varias
etapas), normalmente de diez en diez, pero a veces de cien en cien. Para realizar
diluciones de diez en diez, se añade 1 ml de la suspensión bacteriana a 9 ml (le medio
estéril o solución salina, igualmente estéril. Se agita vigorosamente para diluir las células y
el proceso se repite cuantas veces sea necesario. A continuación, se puede proceder de
dos maneras diferentes.
Condiciones ambientales idóneas para el cultivo en el laboratorio
Un medio se formula para suministrar todos los nutrientes que un microorganismo necesita
para crecer, pero esto no es suficiente. En el laboratorio, también es preciso aportar las
condiciones ambientales adecuadas. Tanto la temperatura como el pH deben estar dentro
del intervalo apropiado; con respecto al oxígeno, según el caso, será aportado o eliminado.
Temperatura
Cada especie bacteriana se caracteriza por un intervalo de temperatura en el cual presenta
su crecimiento óptimo. Pero, en general, los microorganismos crecen más rápidamente
cuando se aumenta la temperatura, sin llegar hasta un punto en el cual se dañan las
proteínas. Así pues, para favorecer un crecimiento rápido, las bacterias se suelen cultivar
a la temperatura más alta a la cual crecen bien, y que suele ser la de su medio natural.
Escherichia coli la bacteria que más frecuentemente se utiliza en investigación, se
encuentra en el intestino humano y de otros mamíferos. Este microorganismo crece
óptimamente a 37ºC, la temperatura del cuerpo humano.
Los cultivos se mantienen a temperatura constante en incubadores o en baños de agua,
ambos controlados termostáticamente. Los incubadores, o estufas, son cámaras con aire
adecuados para el crecimiento tanto de cultivos sólidos como líquidos, preparados en
cualquier recipiente, incluyendo placas Petri, tubos de ensayo, o matraces. Los medios
líquidos, distribuidos en tubos o matraces, también pueden ser incubados en baños de
agua caliente. Estos baños resultan cómodos para incubar los cultivos que tienen que
manipularse con frecuencia, en la misma mesa de trabajo.
pH
El pH óptimo depende de la especie bacteriana, pero cada una de ellas crece en un
intervalo de pH relativamente estrecho. Casi todas las bacterias crecen mejor a valores de
pH próximos a la neutralidad, en el intervalo de 6,5 a 7,5. Sin embargo, los hongos crecen
mejor entre 4,5 y 6,0.
Aunque el pH de un medio sea el adecuado cuando se inicia el cultivo, a menudo el
crecimiento microbiano lo modifica. Esto sucede porque algunos microorganismos usan
selectivamente algún componente ácido o básico del medio; o bien, porque algún producto
de su metabolismo es un ácido o una base. Para disminuir los cambios de pH en los medios
definidos se suelen utilizar tampones. En los medios complejos no suele ser esencial,
porque sus materiales naturales actúan como tampones débiles. Los tampones más
eficaces para valores neutros de pH son los fosfatos y el carbonato cálcico. Ambos se
añaden normalmente como nutrientes (fuente de fósforo y calcio); pero si se desea que
actúen como tampones se precisarán cantidades mayores.
Oxígeno
La concentración de oxígeno del medio es un determinante crítico para el crecimiento
bacteriano. Algunos microorganismos, a los cuales se denomina aerobios estrictos, no
pueden vivir sin oxígeno porque lo necesitan para obtener energía. Otros microorganismos,
llamados anaerobios estrictos, no pueden vivir en presencia de oxígeno, para ellos es un
agente tóxico. Otros tipos de organismos, como los anaerobios facultativos o los
anaerobios aerotolerantes, pueden crecer tanto en presencia de oxígeno como en su
ausencia. Los anaerobios facultativos utilizan el oxígeno si disponen de él, pero también
pueden crecer sin él. Los anaerobios aerotolerantes no utilizan el oxígeno, pero tampoco
les afecta negativamente. Los organismos microaerófilos requieren ambientes con bajas
tensiones de oxígeno; las altas tensiones, como las que existen en el aíre son tóxicas para
ellos. Por tanto, dependiendo del microorganismo que se vaya a cultivar, se tendrá que
suministrar, restringir o eliminar el oxígeno.
Suministrar oxígeno a las bacterias que lo necesitan para crecer, o que crecen más
rápidamente en su presencia, representa una dificultad técnica. Los organismos aerobios
que crecen en la superficie de las placas de agar, obtienen suficiente cantidad de oxígeno
de la atmósfera, aunque el interior de toda colonia es completamente anaerobio. Cuando
los microorganismos crecen en medios líquidos es más difícil, porque no existe demasiado
oxígeno disuelto en el agua y los microorganismos aerobios lo consumen rápidamente.
Todos los cultivos líquidos con más de uno o dos centímetros de profundidad deben
oxigenarse. Esto se lleva a cabo haciendo pasar una corriente de aire a través del cultivo
o agitándolo vigorosamente de forma continua. En casi todos los laboratorios de
microbiología existen agitadores, que son plataformas en las cuales se pueden colocar los
matraces convenientemente sujetos, para ser sometidos a un movimiento de rotación o a
una agitación de vaivén, que mezclan el aire con el cultivo. El suministro de oxígeno a los
cultivos de cientos de litros, como los que se utilizan para producir antibióticos, es un
desafió para la ingeniería. Estos cultivos se remueven vigorosamente mediante grandes
propulsores, mientras se fuerza a que pasen a través de ellos enormes cantidades de aire.

OBSERVACIÓN DE LAS BACTERIAS:

Observación macroscópica: El tamaño de las bacterias impide verlas a simple vista. Sin
embargo, las colonias que forman sobre medios sólidos sí son visibles, y en ellas se puede
estudiar una serie de características que nos ayudan a su identificación. A nivel
morfológico, podemos estudiar la forma de las colonias, su tamaño, aspecto del borde (liso,
rugoso, ondulado, ramificado, etc.), presencia de brillo, color, etc. Incluso sobre medio
líquido las bacterias producen modificaciones de interés para su clasificación y que tienen
que ver esencialmente con las características de su metabolismo. Así se observa si la
turbidez es uniforme, si crecen en el fondo, si lo hacen en la zona superficial, si producen
pigmentos, etc.
Observación microscópica: Puesto que la inmensa mayoría de las bacterias son
incoloras, la única forma de observarlas bien en el microscopio óptico consiste en
incrementar su contraste con respecto al medio. Esto se consigue mediante su teñido
con colorantes o mediante la disposición de una óptica especial de contraste,
generalmente de fases, en el microscopio.

Para observar las bacterias teñidas, hay que proceder previamente a su fijación.
Inicialmente se prepara un frotis a partir de medio líquido o dispersando en una gota de
agua una porción de células crecidas en sólido. Posteriormente se deshidrata el frotis
por calentamiento suave utilizando el reverso de la mano como control de temperatura
tras pasar repetidamente el portaobjetos sobre la llama del mechero. Tras la fijación por
calor se procede a la tinción.
GÉNERO Y ESPECIE MACROSCÓPICAS MICROSCÓPICAS TINTORIALES

Micrococcus luteus Aerobio estricto, coagulasa cocos Gram +


negativa, forma colonias
amarillo brillantes en agar
nutritivo
Escherichia Coli Móviles, aerobias, anaerobias Bacilos, capsula Gram -
facultativas, mesòfilas, pH 6-8, o
indol, lactosa y glucosa positivo microcápsula, flagelos
perìtricos
Pseudomona Móviles, colonias gris con brillo Bacilos, un flagelo polar o un Gram -
aeruginosa metálico, aroma semejante a mechón de 2 a 3
uva fermentada flagelos, pillis
Staphylococcus aureus Inmóviles, colonias pequeñas, Cocos, racimos o cadenas Gram +
circulares, borde continuo, cortas, 0.7 a 1.2 micras
cremosas, anaerobios
facultativos, fermentadores de
maltosa, lactosa, glucosa,
manitol, producción de
ácido láctico, catalasa
Streptococcus sp Inmóviles, colonias elevadas, Cocos en racimos, Gram +
lisas, circulares, aerobio y capsuladas
anaerobio facultativo
Bacillus anthracis Móviles o inmóviles, bacilos Gram+
esporulados, aerobios
Bacillus cereus Aerobio o anaerobio Bacilos esporulado Gram +
facultativo, móvil, hidroliza la
lecitina de huevo y no fermenta
el manitol
Bacillus subtilis Catalasa +, aerobio Bacilos que esporulan Gram +
Yersinia pestis inmóviles, aerobios, Bacilos con extremos Gram -
anaerobios facultativos, redondeados, flagelos
fermentadores, ureasa y perìtricos o anfitricos, de
catalasa+, en ocasiones prod pillis, cápsula poco
gas espesor
Mycobacterium leprae No se puede cultivar in Vitro, Bacilo delgado recto, en Ácido alcohol resistente
inmóvil empalizada o haces Gram +

Kleibsella pneumoniae Inmóviles, aerobios, Bacilos capsulados Gram -


anaerobios
facultativos, fermentadores y
catalasa+, prod. gas
Clostridium tetani Móviles, colonias brillantes, Bacilos solos en cadena o Gram +
traslucidas, gris amarillas pares, flagelos perìtricos,
borde irregular rizoide, prod esporas redondas
anaerobios estrictos, pH 7.2- terminales
7.6 T 37ºC, prod
gas y olor desagradable
Clostridium botullinum Colonias pequeñas, Bacilos aislados en parejas o Gram +
traslucidas, borde filamentoso, cadenas cortas, flagelos
centro opaco, blanco grisáceo, perìtricos
anaerobios estrictos
Mycobacterium Forman un pigmento amarillo bacilo delgado, extremos Acido-alcohol resistente,
tuberculosis en incubación, aerobios redondeados Gram +
estrictos
CUADRO DE CARÁCTERÍSTICAS DE BACTERIAS PATÓGENAS:

Nocardia Microaerofìlicos, anaerobios, Bacilos y cocobacilos Gram +; débilmente acido-


fermentadores + alcohol resistentes
Salmonella Typhi Móviles, colonias grandes de 2 Bacilos, flagelos perìtricos no Gram -
a 4mm rugosas o lisas, esporulados
aerobios, anaerobios
facultativos, mesòfilos,
fermentadores, prod. H2SO4
Shigella dysenteriae Inmóvil, colonias redondas bacilos Gram -
2mm, convexas, transparentes,
aerobios, anaerobios
facultativos, glucosa +
indol+ o -
Chlamydia trachomatis Inmóviles, filtrables cocoides Gram - ; tinción con
giemsa, castañeda o
machiavello
Brucella sp Inmóviles, aerobio, Bacilos cortos; Gram -
catalasa, oxidasa y cocobacilo
ureasa positivos s
Neisseria gonnorrhoeae Inmóviles, aerobios, Cocos en pares, 0.6 Gram -
anaerobios facultativos, capsulado de
pH de 6 a 8, oxidasa y s
glucosa positiva 1micra
Streptococcus Inmóviles, colonias en forma Cocos en cadena, 0.5 a Gram+
pyogenes de disco, mucosas, mate, lisas 2mm
o rugosas con hemólisis
alrededor, anaerobios
facultativos, producen ácido
láctico
Rickettsia pallidum Inmóviles, intracelulares Bacilos o cocobacilos, pared Gram - ; tinción con
obligados formada por 3 capas a Giemsa, Machiavello o
manera de cápsula, Jiménez
cubierta
mucilaginosa
Vibrio Cholerae Móvil, aerobio, anaerobio Bacilo curvo, un flagelo polar Gram -
facultativo, sensible a la
acidez, catalasa, indol,
oxidasa, rojo de metilo,
sacarosa y fermentador +
Corynebacterium Aerobio y microaerofìlico, Bacilo en forma de basto con Gram +; la tinción no es
diphtheriae inmóviles, catalasa + uno de sus extremos más uniforme debido a los
fermentadores + T 35ºC pH 7.6 angosto, agrupación en gránulos que contiene
empalizadas. en su citoplasma, que se
tiñen más intensamente
MATERIALES Y REACTIVOS
Nombre uso
Lugol Es empleado en la tinción de Gram para retener
el colorante cristal violeta.
Reactivos
Agar EMB Medio de cultivo utilizado

Azul de se utiliza como colorante en las tinciones para la


metileno observación en el microscopio
Agar plate Medio de cultivo utilizado
count
Alcohol Se usa en la preparación de muestras
cetona
Fucsina Colorante para tinción de gram

Cristal violeta Colorante para tinción de gram


Una bolsa de Se usó para hacer la disolución de la muestra
solución liquida
salina
Asa Con ella se realizó el frotis de la muestra
bacteriológica
Hisopos utilizado para recoger muestras
Laminas se utiliza para fijar muestras que posteriormente
portaobjetos serán examinadas con un microscopio
Laminillas Se coloca sobre un objeto que va a ser
observado bajo microscopio
Papel seda Para limpiar los lentes del microscopio
Toalla Para limpiar el área de trabajo
Jabón en Se usó para lavar los utensilios del laboratorio
Materiales polvo
Guantes de Protección personal: Usar guantes protectores
látex apropiados con materiales potencialmente
infecciosos
Bata Protección personal: se debe usar todo el
tiempo bata o uniformes especiales para el
trabajo en el laboratorio
Gorro Utilizado por bioseguridad
Bolsa roja Se utilizó para depositar las láminas porta
objetos luego de la practica al igual que los
guantes servilletas y de mas
Papel craft Utilizado para hacer un corcho para matraz
Bolsa negra Se usó para depositar los residuos una vez
terminada la practica
algodón Utilizado para hacer un corcho para matraz
Vinipel Para envolver las cajas de Petri antes de
llevarlas a la incubadora
Papel Utilizado como recipiente al momento de pesar
aluminio el medio de cultivo necesario
Cinta de Utilizado para hacer un corcho para matraz
enmascarar
Tijeras Herramienta de laboratorio
50ml de Muestra con la que se trabajo
lixiviados
PROCEDIMIENTO

MICROSCOPÍA
Y TINCION DE GRAM

se acudio al laboratorio donde fue trabajada la muestra


problema, la cual se encontraba en estado liquido pues
era agua contamida que la docente habia preparado
previamente a la practica

luego de la entraga de los materiales se procede a la


realizacion del frotis de la muestrade agua

para hacer el frotis de la muestra se tomo un poco de la


misma con las asas previamente esterilizadas ante el
mechero y se estrego sobre el porta objetos

una vez dispersa y estregada la muestra sobre el porta


objetos, se le aplico cristal violeta como colorante de
tincion dejandolo actuar por 1min, luego del lavado
para retirar el exceso del mismo se le aplico lugol como
reactivo de tincion durante 1min y alcohol acetona por
30seg. por ultimo se le aplico fucsina por 45seg como
segundo colorante

la muestra en el porta objetos y ya con los colorantes de


tincion es llevada cerca del mechero para su secado y
posterior mentente posada sobre la platina del
microscopio para su estudio

la observacion de la muestra se inicio con el objetivo de


4x, por consiguiente el de 10x; y por ultimo se paso al
objetivo de 40x ya que el de 100x estaba descompuesto y
por ende no se pudo utilizar

finalmente se retira el portaobjetos del microscopio, se


limpia el lente del mismo para apagarlo y desconectarlo;
se disponen los portaobjetos en la bolsa para residuos
peligrosos y se limpian y lavan los materiales utilizados
para hacer su dovolucion
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

Se debe hacer la disolución del medio de cultivo puesto que se


encuentra solido; para ello se hace regla de tres con el fin de saber
cuánta cantidad de cada cultivo es necesaria disolver en los ML de agua
que se trabajen ya que la cantidad estipulada en el envase de cada
medio de cultivo viene dada a una cantidad estandarizada de agua la
cual es diferente a que se trabajó en la practica

Agar plate count


Agar EMB

36g ------- 1000ml H20 23,5g ------ 1000ml H20


X---------25ml H2O X---------25ml H2O

X= 0,9G de cultivo EMB X= 0,59G de cultivo


plate count

Se procede a pesar en la balanza lo que se


necesita de cada medio de cultivo

Las medidas ya calculadas y pesadas se disuelven cada


una en 25ml de agua destilada y luego se sellan con un
corcho de algodón y papel para así llevarlas a la
plancha de calentamiento hasta elevarlas a
temperatura de ebullición

Por último se deja reposar y


se sirve cada medio de
cultivo en las cajas de Petri
SIEMBRA Y AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS

Fue necesario hacer un aislamiento por diluciones decimales a Aislamiento por estría
la muestra de lixiviados con el fin de no obtener una
sobrepoblación de microorganismos en los resultados
impidiendo así su cuantificación y su clara identificación
Se Destapo el tubo que contenía el cultivo de
microorganismos y se tomó el inóculo con el
asa estéril, depositando el inóculo sobre la
superficie de la placa de agar EMB, y se
prosiguió a deslizar el asa con el inóculo sobre
el medio de cultivo y hacer una serie de
estrías para lograr un aislamiento exitoso

Extensión Vaciado en
con varilla placa

Con una pipeta estéril Con una pipeta estéril se


de 1 mL se tomó 0.1 mL tomó 1 ml de la dilución
de la dilución 10-6 de la 10 -6 de la muestra de
muestra de lixiviados y lixiviados y coloco en el
se posó en el centro de centro de una caja Petri
la superficie de una caja vacía estéril, en Luego de terminar los estriados se
de Petri que contenía condiciones asépticas, marcó y sello la caja de Petri para luego
agar plate count luego de esto a la caja de llevarla a la incubadora
gelificado Petri se le agrego agar
plate count

Se mezcló inmediatamente en la
caja la muestra de lixiviados con el
medio de acuerdo a los
movimientos establecidos en la
guía; se realizaron 4 veces

Se lleva a la incubadora
RESULTADOS

TINCIÓN DE GRAM
Durante la observación de la muestra problema tomada del tubo que contenía el cultivo
de microorganismos cada integrante se familiarizo con ésta mediante la utilización del
microscopio y visualización de la misma por medio de este, cada vez que se fue
cambiando de objetivo.
Se realizó una tinción de gram durante la práctica ya que se utilizaron varios colorantes
de tinción como lo fue la fucsina y el cristal violeta.
 Objetivo de 4x
Visibilidad totalmente nula de los posibles microorganismos presentes en la
muestra problema; esto debido a distancia y enfoque de este lente y también al
micro tamaño de los organismos posiblemente presentes

 Objetivo de 10x
Se perciben manchas tipo colonias pero es difícilmente confirmar si realmente lo
son o por lo contrario solo son residuo o manchas de colorantes, sin embargo en
otras zonas del porta objeto se divisan pequeños puntos que al parecer son
cocos

 Objetivo de 40x
Los puntos efectivamente son coco, y además se pueden notar diplococos,
estreptococos

Imágenes capturadas con el objetivo de 40x el cual permitió


identificar cocos, diplococos, estreptococos tal como se
alcanza a evidenciar en las fotografías
 Objetivo de 100x
Este objetivo estaba descompuesto y por lo tanto no se utilizó para analizar la
muestra a través de él.

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO


Con éxito se lo logro la preparación del agar EMB para hacer en él la siembra por estría,
al igual se tuvo éxito en una de las preparaciones de agar plate count en la cual se
realizó la siembra por extensión con varilla de vidrio mientras que en la otra preparación
de agar plate count en la cual se hizo la siembra por vaciado en placa fallo; esto quizás,
por no permitir la solidificación del medio antes de llevarlo a la incubadora o al momento
de empacar la caja de Petri para llevarla a la misma no se trató con delicadeza
ocasionando que todo el medio se volcara hacia un solo lado de la misma y
posteriormente regándose.

Agar plate count Agar plate count Extensión Agar EMB


con varilla de vidrio Aislamiento por estría
Vaciado en plata

ail

Fotografías de los medios de cultivo después de haber sembrado en ellos y de haber pasado por su
respectiva incubación

SIEMBRA Y AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS


Solo en uno de los medios de cultivos que se hicieron se fracasó conforme al objetivo de
esta parte de la práctica, pues no se logró preparar correctamente el medio de cultivo
agar plate count en el cual se realizaría la siembra por vaciado en placa, en los medios
restantes se obtuvo éxito en cuanto a la siembra de microorganismos, esto en la técnica
de extensión con varilla de vidrio y aislamiento por estría, sin embargo en este último no
se logró el objetivo de aislar microorganismos mediante esta técnica; cabe resaltar que
pasadas las 24 horas de incubación y al momento de identificar macroscópicamente los
posibles microorganismo presentes se dificulto ya que la dilución que se utilizó, 10^-6,
de la muestra problema aún estaba muy cargado de microorganismo generando así una
reproducción excesiva de microorganismo.

Siembra por vaciado en placa Siembra extensión con varilla Siembra aislamiento por estría

Agar plate count Agar plate count Agar EMB

Medio de Cultivo mal preparado; Medio de cultivo exitoso; siembra Medio de cultivo exitoso, siembra
siembra por vaciado en placa de por extensión con varilla de vidrio de aislamiento por estría a partir de
microorganismos a partir de la microorganismos a partir de la agua contaminada sembrada.
dilución 10^-6 de lixiviados. dilución 10^-6 de lixiviados.
En este instancia de la práctica
las diluciones realizadas no fueron
Debido a la mala preparación del no se logró cumplir con el objetivo
suficientes para reducir la carga de
medio no se pudo cumplir con el microorganismos para la muestra a
el cual era el aislamiento de
objetivo de la siembra fracasando trabajar, pues la reproducción de microorganismo mediante la
de este modo en la cuantificación microorganismos fue excesiva técnica menciona, tal vez porque
e identificación de los posibles complicando así la cuantificación de no se realizó correctamente la
organismos presentes en la los mismos y las posibles colinas técnica o simplemente por haber
siembra mediante esta técnica presentes en el medio de cultivo, por tomado mucha muestra y al
lo tanto se debió utilizar una dilución momento de hacer las estrías se
de 10^-8 o 10^-9 de la muestra con arrastraba todo
el fin de obtener mejores resultados;
sin embargo se logró identificar 7 Sin embargo se identificaron
colonias de las cuales 6 tenían colonias de bacterias circulares e
morfología circular y bornes irregulares con una tonalidad lila
regulares y 1 contaba con con una textura lisa
morfología irregular. Todas 7 con
textura corrugosa
DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS
TINCIÓN DE GRAM
Durante la práctica se afianzaron conocimientos fundamentales de la asignatura,
logrando así un óptimo entendimiento del funcionamiento del microscopio y manejo de
muestras al igual que el procedimiento para realizar la tinción de gram.
Conforme a los resultados obtenidos y los microorganismos identificados se denota el
funcionamiento de los reactivos y colorantes al interior de las células bacterianas
utilizando como soporte para ello la literatura disponible en internet y libros a cerca del
tema; siendo así los cocos y diplococos identificados y los cuales estaban teñidos de
color rosado son bacterias gram negativas las cuales constan de una pared celular que
está formada por dos membranas lipídicas, una interna (citoplasmática) y otra externa,
con un espacio entre ellas denominado espacio periplasmático en el que se dispone una
capa de una sustancia llamada peptidoglicano; debido a su delgada capa de este último
se les clasifico como gram negativas pues por esta característica este tipo de bacterias
no pueden retener los colorantes quedando teñidas de color rosado
Por otra parte los estreptococos que se encontraron se clasifican como gram positvos
por su tinción color violeta, Esta característica química está íntimamente ligada a la
estructura de la envoltura celular, pues esta consta de una pared celular con un alto
contenido de peptidoglicano lo que les permite teñirse de este color.

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO, SIEMBRA Y AISLAMIENTO DE


MICROORGANISMOS
Los medios de cultivos preparados cuentan con características propias diferentes uno
del otro permitiendo de este modo la reproducción de microorganismos distintos.
El agar plate count es un medio de crecimiento microbiológico comúnmente utilizado
para evaluar o monitorear el crecimiento bacteriano "total" o viable de una muestra. No
es un medio selectivo. La composición del agar de placa puede variar, pero típicamente
contiene:
 Peptona al 0,5%
 0,25% de extracto de levadura
 0.1% de glucosa
 Agar al 1.5%
 pH ajustado a neutro a 32 C durante 48 horas

El agar PMB Se emplea como medio diferencial para el aislamiento y diferenciación de


bacterias entéricas Gram-negativas, de rápido desarrollo y escasas exigencias
nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia
Enterobacteriaceae.
Por la combinación de estos dos colorantes y los dos hidratos de carbono se pueden
distinguir algunos géneros. Las bacterias lactosa-negativas y sacarosa negativas
(Salmonella y Shigella) dan colonias incoloras, mientras que las lactosa y/o
sacarosapositivas dan colonias púrpura-violetanegruzco con o sin un centro oscuro y
quedan rodeadas de una zona incolora. La diferenciación entre organismos capaces de
utilizar la lactosa y sacarosa, ya aquellos que son incapaces de hacerlo, está dada por
los indicadores eosina y azul de metileno; éstos ejercen un efecto inhibitorio sobre
muchas bacterias Gram positivas. También es posible la identificación de Candida
albicans. Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp. Presentan un
característico brillo metálico.

Conforme a la literatura consultada en los medios disponibles y en relación a los


resultados obtenidos durante la práctica de cada medio de cultivo y por medio de las
técnicas descritas anteriormente se puede identificar aproximadamente el tipo de
organismos que se reprodujeron en cada medio y también la morfología de las colonias
presentes en los mismos

 Extensión con varilla de vidrio:


Se denotaron 7 colonias con características propias las cuales posiblemente
corresponden a Bacillus subtilis debido a sus bordes irregulares, su textura y
el medio donde crecen.

 Aislamiento por estría:


En el medio Agar (EMB), las colonias de Klebsiella pneumoniae son de color
rosa a púrpura sin brillo metálico verde, lo cual es de gran importancia para
diferenciar K. pneumoniae de otras bacterias que normalmente se encuentran en
el espécimen y especialmente en E. coli que crece. Con brillo metálico verde.
CONCLUSIONES

 Se vive en presencia de microorganismos presentes en el ambiente

 Se puede concluir que el ser humano esta expuestos a diversos patógenos que
pueden hacernos daño en caso de no tener un sistema inmunológico en óptimas
condiciones

 El microscopio es un instrumento fundamental para muchas disciplinas


permitiendo avances en ciencia y tecnologías

 La microbiología es muy importante para lograr un pleno entendimiento de


muchas enfermedades causadas por bacterias, pues esta disciplina nos permite
conocer el funcionamiento de los microorganismos mencionados.
CUESTIONARIO RESUELTO

1) Investigue las características de los siguientes medios de cultivo:

a) Medios naturales
Son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o vegetal
como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composición química no se
conoce exactamente.

b) Medios sintéticos
Son los medios que contienen una composición química definida cualitativamente
y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles.

c) Medios definidos
Se conoce la cantidad exacta de cada uno de los compuestos que hay en el medio.

d) Medios complejos
Se realizan a partir de extractos naturales (extracto de levadura, sangre, etc.); no
se conoce exactamente cuál es la composición del medio; sin embargo, presenta
la ventaja de que ya están presentes todos o casi todos los elementos que una
célula puede requerir.

e) Medios selectivos
Son utilizados para favoreces el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en
una población polimicrobiana. El fundamento de estos medios consiste en facilitar
nutricionalmente el crecimiento de una población polimicrobiana específica. Un
ejemplo de estos medios es el Caldo Selenito

f) Medios diferenciales:
Se utilizan para poner en evidencia características bioquímicas que ayuden a
diferenciar géneros o especies. Algunos ejemplos de este tipo de medios de
cultivo son el C.L.E.D. (lactosa +/lactosa), el agar sangre (tipo de hemólisis), el SS
(que es doblemente diferencial), entre otros.

g) Medios de enriquecimiento
Contiene los nutrientes necesarios para apoyar el crecimiento de una amplia
variedad de microorganismos, se utiliza para la cosecha de diferentes tipos de
microorganismos en un mismo medio.
BIBLIOGRAFÍA

 DOMÍNGUEZ MUÑOZ DEYANIRA (16 de septiembre de 2015) PRÁCTICA 3.-


MICROSCOPÍA
 G. Acevedo (18 de marzo de 2016) tinciones básicas
 ASDRUBAL PALACIO(2 de octubre de 2015) slide share Bacterias, Cocos y
Bacilos
 YESENIA LOPEZ (17 de agosto de 2014) slide share práctica microbiología
 ANTONIO FERNANDEZ (12 de mayo de 2016) tus consultas.com. disponible en:
https://www.webconsultas.com/pruebas-medicas/tincion-de-gram-13399
 SOFIA URTADO (13 de junio de 2017) franrzmn.org.
https://www.franrzmn.com/tincion-de-gram/#Tecnica
 CARLOS FERREIRA (4 de enero de 2011) tus practicas. Disponible en:
https://www.lifeder.com/preparacion-medios-cultivo/