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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TUMBES

FACULTAD DE INGENIERÍA PESQUERA

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE


INGENIERÍA PESQUERA

PROYECTO DE TESIS

CRECIMIENTO BACTERIANO EN EL INTESTINO


DEL LANGOSTINO (Litopennaeus vannamei)

PRESENTADO POR:

Alumno: Barrientos Gaona, José Alexander

PARA OPTAR POR EL TÍTULO DE INGENIERO PESQUERO

TUMBES, PERÚ
2010
GENERALIDADES

1.1. Título

Crecimiento bacteriano en el intestino del langostino


(litopenaeus vannamei)

1.2. Personal investigador

Ejecutor:
Alumno: Barrientos Gaona, José Alexander

Asesor:
Ing. Tessy Peralta Ortiz

1.3. Tipo de investigación


- De acuerdo al fin que persigue: Aplicada
- De acuerdo al diseño de contrastación: Experimental

1.4. Lugar de ejecución


Departamento: Tumbes
Provincia: Tumbes
Distrito: Tumbes
Localidad: Puerto Pizarro
Local: Laboratorio de Microbiología y Patología de la
Facultad de Ingeniería Pesquera de la Universidad de
Tumbes.

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1.5. Cronograma de actividades

TABLA 1

CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES DEL PROYECTO DE INVESTIGACIÓN


semanas
ACTIVIDADES
1 2 3 4 5
Recolección de información
x x x x x
bibliográfica
Formulación del proyecto x x x
Recolección de la muestra x
Ejecución de cultivos x
Análisis de datos x
Redacción del informe final x
TOTAL 5 semanas

1.5.2 Fecha de inicio: Al aprobarse el proyecto

1.5.3 Fecha de término: 5 semanas después de aprobarse el proyecto

1.5.4 Costo total: S/. 4433.00

1.5.5 Financiamiento: Con recursos de los ejecutores.

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PLAN DE INVESTIGACIÓN

1. ANTECEDENTES

Actualmente la acuicultura se presenta como una alternativa de


producción en muchas regiones del mundo y participa de manera
importante en la solución de los problemas de desempleo y alimentación
de tres billones de personas, los modelos de acuicultura con mayor
probabilidad de beneficiar al sector más pobre de la humanidad caen en
dos categorías principales, aquellos que generan empleo e ingresos para
el pobre y aquellos que están dirigidos a mejorar el suministro de
alimentos, ambos son importantes.

El cultivo de camarones peneidos ha sido tradicionalmente hecho en


aguas marina y salobres, sin embargo recientemente se ha incursionado
en el cultivo de algunas de estas especies en aguas dulces, con éxitos
que han estimulado el uso de este método de cultivo, el cual se presenta
como una alternativa para reducir las constantes pérdidas que sufre la
industria camaronera por la incidencia de enfermedades y por el impacto
negativo de las descargas acuícolas el cual se minimiza
considerablemente utilizando los efluentes para el riego.

El camarón del pacífico L.vannamei, es la especie de peneidos que se


cultivan con mayor intensidad en America debido al mayor conocimiento
de su cultivo y a los altos rendimientos. Recientemente se han
implementado cultivos de esta especie en agua dulce o salinidades muy
bajas.

Las enfermedades del camarón en los últimos tiempos presentan


características asociadas a muchos factores físico-químicos y también a
protozoarios, parásitos, bacterias y virus que estan presentes en las
piscinas de cultivo. Por tal motivo se hace necesario la identificación de los

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causantes de tales patologías, y la determinación de la influencia de los
patrones ambientales sobre el camarón.

Las enfermedades de origen bacteriano representan una limitante


importante para la camaronicultura que pueden llegar a desmeritar la
calidad de los productos y a disminuir la rentabilidad económica de los
cultivos de camarón.

En los últimos 5 años se ha visto estancada por epidemias bacterianas las


cuales han disminuido la industria de la camaronicultura en Asia,
Centroamérica y Sudamérica

El estudio de los daños que causan las bacterias en los organismos


acuáticos es de gran importancia para establecer alternativas con el fin de
prevenir y erradicar las enfermedades generadas por las mismas. La
patogenicidad de Vibrio parahaemolyticus y Vibrio sp son bacterias
extracelulares que causan enfermedades en todas las clases de
langostinos.

Las especies del género Vibrio han sido reportadas como la causa de
serias pérdidas económicas en la producción de camarón de cultivo en
diversos países La mortalidad de camarón originada por este grupo de
bacterias puede variar desde intervalos insignificantes hasta presentar
mortalidades del 100%, afectando principalmente a las postlarvas y
juveniles. La vibriosis, nombre común de la enfermedad originada por los
Vibrios, pueden generar una patología muy agresiva que puede
desembocar en la muerte de los organismos en 24 horas.

Las bacterias tipo vibrio solo se puede cultivar en medio agar TCBS, y
presenta colonias verdes

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El medio TCBS es un medio selectivo para el aislamiento y cultivo de
Vibrio cholerae, Vibrio parahemolyticus y otras especies de Vibrio a partir
de heces, agua etc . También es conocido como Agar Tiosulfato Citrato
Bilis Sacarosa, o como Agar Selectivo para Vibrios.

En el medio de cultivo, el extracto de levadura, la peptona de carne y la


tripteína aportan nutrientes para el desarrollo bacteriano. Es este, el medio
selectivo más adecuado para el aislamiento de las especies de Vibrio, e
inhibidor para la mayoría de las enterobacterias. Esta inhibición se basa
en las altas concentraciones de tiosulfato y citrato, la presencia de bilis y
un pH fuertemente alcalino. La degradación de la sacarosa es variable
entre las especies de Vibrio y las colonias son verdes para las cepas que
no la utilizan y amarillas para aquellas que producen ácido a partir de este
azúcar. Es importante tener en cuenta, que la proporción de sacarosa en
el medio está equilibrada de forma tal que no inhiba el crecimiento
bacteriano por exceso de ácido.
El cloruro de sodio favorece el crecimiento de microorganismos. El
tiosulfato de sodio aporta azufre y junto con el citrato férrico permiten la
detección de producción de ácido sulfhídrico.

2. PROBLEMA

El éxito de la camaronicultura se debe gracias a los muchos estudios


realizados en microbiología y a los cultivos microbianos que se han
realizado en diversos organismos acuáticos, por eso hoy en dia se sabe
con exactitud el tipo de bacteria que atacan a dichos organismos
acuaticos.

En esta ocasión se realizara un cultivo de bacterias en el intetstino de


litpenaeus vannamei, por lo tanto realizaremos la siguiente pregunta:

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¿Qué bacterias encontraremos en el intestino de langostino Litopennaeus
vannamei?

3. HIPÓTESIS

Las bacterias que encontraremos en el intestino de langostino


Litopenaeus vannamei son de tipo vibrio (Vibrio alginolyticus y Vibrio
cholerae)

4. OBJETIVOS

El desarrollo del presente proyecto, se plantean los siguientes objetivos:

1. Determinar que bacterias atacan directamente al intestino del


langostino (Litopenaeus vannamei)

2. Determinar el numero, color y forma de colonias de las bacterias


cultivadas

5. MATERIAL Y MÉTODOS

5.1. MATERIAL

5.1.1. Material biológico

3 ejemplares de Litopenaeus vannamei.

5.1.2. Equipos y materiales

* Equipos
- 1 estufa
- 1 autoclave
- 1 incubadora
- 1 balanza analitica

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- 1 aireador pequeño
- 1 microondas

* Insumos
- 8,9g de medio TCBS

* Reactivos
- 1.2g de cloruro de sodio
- alcohol al 90% de pureza
- lejía

* Materiales

- 2 guantes
- 1 mascarilla
- 1 cucharita
- 4 bolsas plásticas
- papel toalla
- 1 bolsita de algodón
- agua destilada
- 1 atarraya
- pabilo
- paño
- 3 papel kraf
- 2 balde de 10 litros
- 1 reloj.
- 1 cámara fotográfica digital.

* Material de laboratorio

- 1 estuche de disección
- 2 agujas de bisturí
- 6 placas petri

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- 1 asa de barrido
- 1 vagueta
- 3 matraz erlenmeyer
- 1 probeta de 100 ml
- 1 mechero bunsen

5.2. MÉTODOS

5.2.1. Desinfección y esterilización de materiales de laboratorio

Los materiales de laboratorio (vagueta, matraz erlenmeyer, placas


petri, el equipo de disección, asa de barrido) serán desinfectados con
15 ml de lejía en 10 L de agua en un balde por 10 minutos,
terminado esto se procederá a escurrir dichos materiales para
posteriormente envolverlos en papel kraf y esterilizarlos en la estufa
a una temperatura de 200º C por el tiempo de una hora.

5.2.2. Preparación de medio de cultivo

5.2.2.1 medio TCBS

Con ayuda de una balanza analítica pesamos 8,9g de medio TCBS y


colocamos en un matraz erlenmeyer ya esterilizado, ahora medimos
100 ml de agua destilada en una probeta, también pesamos 1.2g de
cloruro de sodio y colocamos en el erlenmeyer, con ayuda de una
vagueta mezclamos los insumos para obtener un medio homogéneo,
posteriormente llevamos a un microondas y calentamos por un lapso
de 1 min. Luego con ayuda de un mechero bunsen hervimos hasta
que se disuelva completamente para después colocar en las placas
petri y llevarlas a refrigeración para mantenerlas frescas

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5.2.3. Obtención de muestras y cultivo de bacterias

Las muestras de Litopenaeus vannamei serán obtenidas en el canal


de mareas puerto rico mediante una atarraya y colocadas en un
balde de 10 L lleno de agua marina para transportarlos hasta el
laboratorio de microbiología y patología, ya allí con ayuda del
aireador daremos oxigeno para que se mantengan vivos hasta
posteriormente que realizaremos la disección del intestino del
langostino (Litopenaeus vannamei).

Ya disectado el intestino del langostino (Litopenaeus vannamei)


extraeremos los desechos que ha comido dicho langostino para
macerarlo y homogenizarlo con una vagueta, posteriormente con el
asa de barrido colocamos parte la muestra homogenizada en el
medio de cultivo, asi después llevaremos a una incubadora donde a
las 24h procederemos a observar el tipo de colonias y el tipo de
bacterias que se han cultivado, entonces tomaremos nota del color,
forma y el numero de colonias que se han formado.

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6.0. REFERENCIAS BIBLIOGRÀFICAS

1. Suarez, C. 2008. Cuantificación y caracterización molecular de


bacterias de hemolinfa de camarones Litopenaeus vannamei durante
brotes del síndrome de mancha blanca y evaluación a 5 productos
antibacterianos. Tesis Microbiólogo Industrial., Pontificia Universidad
Javeriana.

2. Olivas, J , J. Cáceres y R. Vásquez. 2010 Patógenos que afectan el


cultivo de Litopenaeus vannamei en ambiente marino y dulceacuícola
en el estado de Baja California, México. REDVET 11(3):3-5
www.veterinaria.org/revistas/redvet/n030310/031020.pdf

3. Valenzuela, M , J. Suárez , A. Sánchez y C. Rosas. 2002. Cultivo de


camaron blanco del golfo de méxico (litopenaeus setiferus) en
estanques de manto freatico.

4. 2003. INSTRUCCIONES DE USO – MEDIOS EN PLACA LISTOS PARA


USAR. BD
www.bd.com

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