INFORME DE LABORATORIO N°3

“Siembras de bacterias en medio de cultivo sólido, siembra de hongos en

medio de cultivo sólido, recuento en placa de colonias bacterianas,
observación microscópica de microorganismos, tinción de Gram,
observación microscópica de hongos”

Asignatura: Procedimientos y técnicas de laboratorio

Sección: 1 grupo 1
Docente: Karla Martínez
Integrantes: Karina Garrido
Daisy Soto
Yessenia toledo
Introducción:
Materiales:
- Asa de siembra tipo aro
- Mascarillas
- Alcohol yodado
- Contador de colonias
- Detergente enzimático
- Asa de siembra tipo aguja
- Agua peptonada
- Tubo de ensayo
- Agar tripticasa
- Pinzas
- Agar m’conkey
- Toalla nova
- Placas de Petri
- Guantes
- Mechero bunsen
- Marcador sharpey
- Gradilla fósforos
- Microscopio
- Lupa estereoscoscopica
- Cubre objetos
- Porta objetos
- Aceite inmersión
- Algodón hidrófilo
- Agua destilada
- Jabón desinfectante
- Gotario
- Decolorante
- Cristal violeta
- Lugol
- Decolorante
- Safranina

METODOLOGÍA
Actividad 1: Siembra de bacterias en medio de cultivo sólido:
- Dosificación de agar:
Antes de iniciar cada procedimiento se deben disponer las barreras de
bioseguridad.
1- Desinfección de área de trabajo.
2- Reunir material.
3- Sacar 2 placas Petri por persona (6 total).
4- Incorporar agar fundido en placa Petri.
5- Dejar enfriar agar unos minutos en la placa.

- Siembra de muestra
Una vez solidificado el agar se procede a sembrar la muestra:
1- Flamear asa de digralsky.
2- con asa de digralsky sembrar sobre superficie.
3- el sembrado es por extensión.
4- marcar nuestras placas.
5- llevar al horno cultivo.

Actividad 1: Siembra de hongos en medio de cultivo sólido:

- Dosificación de agar:
1- Incorporar agar fundido en placa Petri.
2- Dejar enfriar solidificar agar semitapada cerca del mechero.

- Siembra de muestra:
1- Esterilizar asa de siembra tipo aro al rojo.
2- Dejar enfriar asa de siembra.
3- Hundir asa en la muestra para luego sembrar en placa.
4- Sembrar con técnica triple estrías.
5- Marcar placa con nuestros datos.
6- Incubar en horno de cultivo a 25° por 5 días sin invertir las placas.

Actividad 2: Recuento en placa de colonias bacterianas:

1- Incubado proceder al recuento de colonias.
2- Encender el contador de colonias con ayuda del plumón sharpie.
3- Proceder con el conteo de colonias.
4- Anotar las estadísticas de nuestro conteo.

Actividad 3: Observación microscópica de microorganismos

1- Encender el mechero.
 2- Reunir placas Petri del laboratorio anterior.
3- Esterilización de asa de siembra y dejar enfriar.
4- En el portaobjetos poner una gota de agua destilada.
5- Sobre la gota de agua poner un inoculo de nuestra muestra.
6- Fijar nuestra muestra.

Tinción de Gram
Una vez fijada la muestra se procede a realizar la tinción de Gram
1- Colocar la muestra en el lavadero.
2- Adicionar 2 gotas de cristal violeta.
3- Dejar pasar 1 minuto y enjuagar.
4- Adicionar 1 gota de Lugol.
5- Esperar 1 minuto y enjuagar.
6- Poner 2 gotas de decolorante 30 segundos y enjuago.
7- Finalmente 2 gotas de safranina esperar un minuto y enjuagar.

Actividad 1: observación macroscópica de hongos

1- Reunir placas con nuestros cultivos.
2- Llevar placas al estereoscoscopio.
3- Observar morfología de cada hongo.
Actividad 2: Observación microscópica de hongos
1- Tener listo el agar rosa bengala.
2- Preparar frotis de colonia de levadura.
3- Agregar gotas de azul de metileno y dejar unos minutos.
4- Poner cubreobjetos.
5- Llevar al microscopio para observar e identificar estructuras.
Tinción de mohos filamentosos
1- Flamear pinzas para esterilizar.
2- Con las pinzas sacar un inoculo de mohos.
3- Dejar la muestra de mohos en el portaobjeto.
4- Adicionar gotas de azul de metileno y dejar unos minutos.
5- Colocar cubreobjetos.
6- Observar en microscopio para diferenciar estructura.

Resultados:
Clase 1
Las muestras que pusimos en la placa fueron de puerta del laboratorio. Las cuales
al incubar crecieron colonias en nuestras placas, las placas tenían diferente
número de colonia y diferentes aspectos luego de sacarlas de la incubación. Mas
adelante en las siguientes actividades registramos estos parámetros. En esta
nuestro resultado y objetivo general fue aprender a preparar un agar y aplicar las
siembras en el medio de cultivo solido
Clase 2
Al contabilizar nuestras colonias podemos hacer la siguiente estimación numérica,
y también observar la morfología y colores que presentaron las colonias de cada
una de las placas del grupo.

Nombre Numero de Aspecto de colonia Colores Colonia

alumna colonias
Karina Garrido Agar tripticasa Agar levine eosin muy pequeñas En agar levine eosin
nos arrojó 28 su color
colonias Agar tripticasa eran representativo era
filamentosas y un poco m negro.
Agar levine eosin grandes.
tenía 3 colonias En agar tripticasa
eran más diversa la
coloración en
crecimiento negro,
rojos, amarillos y café
Daysi Soto Agar levine eosin Agar levine eosin las 6 colonias En la placa se vieron
presento 6 con aspecto muy parecidos en colores rojizos,
colonias tamaño alrededor 0,1 cm, su alguno de color
aspecto era cremoso. crema y otros con un
Agar tripticasa 21 En el agar tripticasa se tono amarillento
colonias diferenciaron 4 colonias con
mayor tamaño, mientras que el
resto eran bastante más
pequeñas. Presentaban
filamentos.
Yessenia En el agar levine En el agar levine eosin En el agar levine
Toledo eosin había 4 presentaron 4 colonias las eosin y agar tripticasa
colonias cuales su tamaño era similar a se nos dieron
un punto echo con un lápiz, colonias de color
En el agar aspecto cremoso. anaranjado, amarillo
tripticasa había En el agar tripticasa se pudo y colores crema
25 colonias observar 1 colonia de mayor
tamaño aproximadamente 0,6
cm de diámetro y las otras más
pequeñas aproximadamente 0,3
cm de diámetro, contextura
filamentosa.
Clase 3
Los resultados que se obtienen en esta actividad fue diferenciar en la tinción de
Gram.
 A cuáles pertenecían a Gram positivas y Gram negativas, se aprendió a hacer la
tinción de Gram en levaduras y mohos. se observaron que los mohos tienen
aspecto filamentoso y con un color crema a simple vista, cuando se puso la placa
en el estereoscoscopio el color era casi el mismo, pero se observó mejor con el
equipo. En el microscopio se observó a grandes rasgos que había estructuras
cocales ya que tenían forma redonda, y una que otra basilares por su forma
alargada.
En el estereoscoscopio, las estructuras de los mohos en 2 placas fotografiamos
las de aspecto cremoso, mientras tanto que en la placa de Karina fotografiamos
una de aspecto filamentoso no aumentada por el estereoscopio.
Estructuras observadas en el microscopio

Placa Daysi placa Karina placa yessenia

Estructuras observadas en estereoscoscopio
Placa Daysi placa yessenia placa Karina
Discusión
En la clase uno al poner una muestra en diferente agar se puede apreciar que no
todos eran iguales, al comprar las placas, en ella se apreció diferencia de color y
de aspecto, también la siembra por estrías fue necesaria para después llevar a
cabo un conteo más específico y más exacto.
En clase 2 al comparar cada placa con respecto al conteo, los números de
colonias presentes en las placas eran muy similares, en promedio en el agar
tripticasa eran de 24 colonias mientras tanto que en el agar levine eosin el
promedio de nuestro conteo de colonias fue de 4 colonias.
En la clase 3 al comparar resultados las morfologías eran casi idénticas siendo en
su mayoría cocales, en los hongos presentaron menos filamentosos y de mayor
tamaño, en las que tenían aspecto cremoso era su tamaño inferior, pero habían
más que los filamentosos.