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NOMBRES: Dania Marisley Rosas Alvarez 218076481

Harol Mauricio Gaviria Narvaez 218076219


Paola Alejandra Pardo Realpe 218076420

ENTREGADO A: Elina Oviedo García


Docente Departamento de Química

PRÁCTICA N°1
EXTRACCIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE ADN DE LEVADURA

MATERIALES Y REACTIVOS

 Balanza analítica
 Centrífuga
 Tubos falcon de 50 mL
 Mortero con su mango
 Beaker de 250 mL
 Termómetro
 2 Erlenmeyer de 125 mL
 Probeta de 50 mL
 Varilla de vidrio gruesa
 Levadura de panadería seca
 Arena lavada con ácido y agua
 Solución Salina EDTA: NaCL 0.1% en EDTA 0.1 M
 Solución de dodecil sulfato de sodio (SDS) al 25%
 Perclorato de sodio o de potasio 6M
 Solución de cloroformo: alcohol isoamílico 24:1 (v/v)
 Etanol absoluto o etanol 95%
 Molibdato de amonio 25%
 Cloruro estannoso 2%
 Reactivo de difenilamina. 0.8g. en 100 mL de ácido acético glacial. Añada
concentrado
 Reactivo de Shiff
JUSTIFICACIÓN
La extracción de ADN es un procedimiento fundamental para el análisis de esta
biomolécula, la cual a nivel clínico tiene una enorme trascendencia. El ADN
determina la estructura y función de todas las proteínas del cuerpo humano, por lo
tanto el poder estudiarla ha generado en la medicina grandes avances y una
comprensión global, de cómo funciona el organismo, sin embargo, los ácidos
desoxirribonucleicos son susceptibles a daños, además, si bien se encuentra en
todas y cada una de las células vivas, este se encuentra inmerso en un medio con
otras moléculas, es por ello, que dentro de la formación médica, el aplicar y
entender el proceso de extracción, además de identificar claramente cada uno de
sus pasos, le permitirá al médico en formación obtener un ADN puro y que no sufra
de desnaturalización en el proceso, ya que es primordial para todo los estudios y
resultados moleculares, contar con una muestra óptima que servirá para muchos
análisis importantes, como pruebas de paternidad, criminalística o la determinación
de enfermedades hereditarias.

FUNDAMENTO TEÓRICO

El ADN que se encuentra en todas las células, tanto animales como vegetales y
procariotas, contiene ADN (Ácido desoxirribonucleico), conformado por una
secuencia de nucleótidos, cuya codificación, va a determinar la secuencia de
aminoácidos que conforman a todas las proteínas del cuerpo, las cuales tienen
diversas funciones importantes en el organismo, como la señalización,
estructuración, protección, comunicación, entre otras, sin embargo, el ADN y su
estructura, se vuelve vulnerable, fuera del núcleo de la célula, es decir que, para
sacar una muestra de ADN, se deben tener ciertos cuidados y un proceso óptimo,
eso evita tanto la desnaturalización, como la aparición de impurezas en el momento
de análisis del ADN.

Una extracción adecuada sigue ciertos pasos y en general 4 fases:

1) Rotura de las células, para esta práctica, de levadura; esto se hace con el fin de
desestabilizar las membranas que protegen al ADN, y que este pueda ser liberado
de ellas 2) posteriormente se realiza su homogeneización en presencia de un
detergente, este ayuda a que los compuestos lipídicos de las membranas se
disuelvan, además en el medio habrá una elevada fuerza iónica, EDTA se aplica
para secuestrar los iones que puedan precipitar el ADN, es decir que, EDTA ayuda
a protegerlo y mantenerlo estable, sin que sufra desnaturalización
3) El cloroformo ayuda a desnaturalizar las proteínas de la muestra, formándose
aglomerados de proteínas, esto ayuda a purificar la muestra de ADN
4) Una vez purificado, se precipita el ADN con etanol, ya que el ADN en agua es
soluble, al adicionar alcohol, el ADN podrá ser observado y “pescado”, para su
análisis.

Entre los pasos, se utiliza varias veces el método de centrifugación, lo cual ayuda a
separar el ADN según su gradiente de densidad, descartando así otros
componentes de la solución, hasta obtener un ADN puro.

Normalmente es difícil extraer una molécula de gran tamaño como lo es el ADN,


una caracterización, nos ayuda a comprobar su presencia en la muestra, reactivos
como el molibdato de amonio y cloruro estannoso, al reaccionar con la solución y
detectar los grupos fosfato del ADN, generar un color azul, por otra parte el ácido
tricloroacético ayuda a una hidrólisis ácida de desoxipentosas, las cuales al
reaccionar con fenilalanina, también generarán un color azul, demostrando que el
ácido desoxirribonucleico (ADN) si hace parte de las célula tomadas y fue extraído.
PICTOGRAMAS

CLOROFORMO CHCl₃

 Nocivo en caso de ingestión.


 Provoca irritación cutánea.
 Provoca irritación ocular grave.
 Tóxico en caso de inhalación.
 Se sospecha que provoca
cáncer.
 Se sospecha que daña al feto.

ETANOL C₂H₅OH

 Líquido y vapores muy


inflamables.
 Provoca irritación ocular grave.

DODECIL SULFATO DE SODIO


(SDS)  Sólido inflamable
C₁₂H₂₅OSO₂ONa  Nocivo en caso de ingestión
 Provoca irritación cutánea
 Provoca lesiones oculares
graves
 Puede irritar las vías
respiratorias
 Nocivo para los organismos
acuáticos, con efectos nocivos
duraderos.
PERCLORATO DE SODIO
NACLO₄*H₂O

 Puede provocar un incendio o


una explosión; muy
comburente.
 Nocivo en caso de ingestión.
 Provoca irritación ocular grave.
 Puede provocar daños en los
órganos (Tiroides) tras
exposiciones prolongadas o
repetidas.

ALCOHOL ISOAMÍLICO
(CH₃)₂CHCH₂CH₂OH
 Líquidos y vapores inflamables.
 Nocivo en caso de inhalación.
 Puede irritar las vías
respiratorias.
 La exposición repetida puede
provocar sequedad o formación
de grietas en la piel.

MOLIBDATO DE AMONIO
(NH₄)₆MO₇O₂₄ * 4 H₂O
 Nocivo en caso de ingestión.
 Provoca irritación cutánea.
 Provoca irritación ocular grave.
 Puede irritar las vías
respiratorias.

G
CLORURO ESTAÑOSO
SNCL₂

 Nocivo en caso de ingestión o


inhalación. Provoca
quemaduras graves en la piel y
lesiones oculares graves.
 Puede provocar una reacción
alérgica en la piel.
 Puede provocar daños en los
órganos tras exposiciones
prolongadas o repetidas.
 Muy tóxico para los organismos
acuáticos, con efectos nocivos
duraderos.

ACIDO ACETICO GLACIAL


CH₃COOH

 Líquidos y vapores inflamables.


 Provoca quemaduras graves
en la piel y lesiones oculares
graves.

DIFENILAMINA (C₆H₅)₂NH  Tóxico en caso de ingestión,


contacto con la piel o
inhalación.
 Puede provocar daños en los
órganos (Riñón, Hígado) tras
exposiciones prolongadas o
repetidas.
 Muy tóxico para los organismos
acuáticos, con efectos nocivos
duraderos.
ACIDO SULFURICO H₂SO₄

 Provoca quemaduras graves


en la piel y lesiones oculares
graves.