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CORPORACIÓN TECNOLOGICA DE BOGOTÁ Fecha: 15/12/2017

MACROPROCESO MISIONAL
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PROGRAMA NOMBRE DEL CURSO

Tecnologia en regencia de farmacia – TRF
Análisis instrumental
Tecnologia en química industrial – TQI

PRACTICA No NOMBRE DE LA PRACTICA DURACIÓN EN HORAS

Cromatografía líquida HPLC 3: Cuantificación
06 (0044) de un producto comercial y principios de 3
validación de la técnica

1. INTRODUCCIÓN:

La cromatografía es un método físico en el cual uno o más componentes se distribuyen entre dos
fases, una de ellas sólida. Es una de las técnicas experimentales más utilizadas para la detección
específica de moléculas. Usando esta técnica se puede cuantificar por diferentes metodologías como
la curva de calibración, adición patrón y estándar interno. En el caso de sistemas de detección se
tiene que se puede cuantificar en la región UV o Visible según el componente que tenga encendido
en el equipo. Es una técnica usada ampliamente en la industria química dando por entendido que
incluye la farmacéutica para el análisis de principios activos y materias primas.

En esta sección de laboratorio usted aprenderá, cálculos de cuantificación, cuando usar la altura o
el área del pico, la diferencia entre precisión y exactitud, como integrar apropiadamente un
cromatograma, calibración por estándar externo. Aumento de la precisión con el estándar interno que
permite compensación por cualquier variación en el área del pico y corrige variaciones debidas a la
inyección, o la preparación de la muestra.

La precisión se evaluará mediante el diseño de una secuencia de análisis con 10 determinaciones

con tres niveles de concentración. Los resultados obtenidos se indican los valores de la desviación
estándar relativa (DER) lo que confirma la precisión del método analítico.

La linealidad de la respuesta se determina preparando soluciones de concentración variable e

inyectando cada una de ellas por duplicado en un sistema HPLC. Con las áreas de pico medias
obtenidas y partir de la pendiente de resultados se calculan los coeficientes de interceptación y de
correlación (r). Al aplicar el método propuesto, se sigue el concepto de linealidad en el rango de
concentración de concentración establecido.

2. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA:

En la actualidad, la técnica de HPLC con detección de arreglo de diodos, detector masas, índice de
refracción es muy usada en donde se presentan muchas ventajas con respecto a la detección UV-
Visible convencional, esto se debe a su alta sensibilidad y selectividad. La revisión de múltiples
longitudes de onda permite obtener el espectro en la región ultravioleta visible a la longitud de onda
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de máxima absorción para cada pico cromatográfico ayudando al analista a identificar a realizar su
trabajo con más certeza. La metodología en analítica y su validación para la determinación de
componentes es una tarea muy importante en cromatografía.

3. OBJETIVOS:

3.1 General:

 Realizar la cuantificación en producto comercial y comprender los principios de validación de la

técnica HPLC

3.2 Específicos:

 Establecer las mejores condiciones cromatográficas que demuestren que se pueden separar e
identificar componentes de una matriz.
 Demostrar que la técnica HPLC es confiable, mediante la selectividad, linealidad en su respuesta.

4. MATERIALES Y REACTIVOS:

MATERIALES
Balones aforados 250 mL
Balones aforados 100 mL
Balones aforados 10 mL
Pipeta aforada 1 mL
Pipeta aforada 2 mL
Pipeta aforada 5 mL
Pipeta aforada 10 mL
Pipeta graduada 1 mL
Pipeta graduada 5 mL
Pipeta graduada 10 mL
Vaso de precipitado 250 mL
Vaso de precipitado 50 mL
Pera de succión
Microespatula
Vidrio de reloj
Filtros para fase móvil y muestras
viales
REACTIVOS
Agua HPLC
Metanol HPLC
Acetonitrilo HPLC
Cafeína
Paracetamol
Ácido fosfórico 85%
INSTRUMENTOS
Cromatógrafo líquido HPLC marca SHIMADZU-EZCHROM ELITE
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Balanza analítica
Sistema de filtrado para fase móvil
ultrasonido

5. PRECAUCIONES:

 NO OLVIDAR el uso de EPP (elementos de protección personal): gafas, guantes y bata

 Revisar el manejo del equipo según especificaciones del docente.

6. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

IDENTIFICACIÓN DE CAFEÍNA, ACETAMINOFÉN EN ANALGÉSICOS DE PRESENTACIÓN

COMERCIAL (DOLEX FORTE]:

 Identificar cafeína, acetaminofén en un fármaco de presentación comercial usando la técnica de

cromatografía de líquidos de alta eficiencia (HPLC).
 Optimizar las condiciones de análisis para la mezcla de componentes en el fármaco
(composición de fase móvil y/o proporción de fase móvil)
 Determinar los parámetros cromatográficos
 Comparar la precisión del análisis y la precisión del lote de pastillas

7. SEGÚN EL DESARROLLO EXPERIMENTAL REALICE LAS SIGUIENTES ACTIVIDADES:

Realizar la consulta de la metodología propuesta en la monografía oficial de la USP, para la

determinación analítica de cafeína y paracetamol por cromatografía liquida de alta eficiencia (HPLC),
tomar nota de la metodología utilizada para ser comparada con la utilizada en el laboratorio

8. BIBLIOGRAFÍA SUGERIDA:

 QUATTROCHI O, Andrizzi S., Laba R. "Introducción a la HPLC". Artes Gráficas Farro S.A.
Buenos Aires- Argentina, 1992.
 SKOOG D, Holler F, Nieman T. "Principios de análisis instrumental 5a ed". Madrid-España.
McGraw-Hill. 2001
 Willar. H., Lynne. L., Métodos instrumentales de análisis. Grupo editorial Iberoamericana
México 1991. p 82-83, 93-94.
 Skogg D., Stanley C., Holler F. Principios de Análisis Instrumental. 6 ed. Mc Graw-Hill. México
2008 capitulo 25
 Vogel, Arthur Israel. Vogel's textbook of practical organic chemistry /Arthur Israel Vogel. Rev.
by Brian S. Furniss 5th. ed New York. Longman Scientific & Technical 1989. p. 561

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Juan David Parra D.

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