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DNA IN A BOTTLE

María de los Angeles Pajares


Gemma Rodríguez-Tarduchy
Colaboradores
Material y consejos

Pipetas de plástico Vasos de precipitado

Tubos eppendorf

Enjuagar antes de reutilizar

Guantes Recipiente para el ADN


Tubos Falcon

NO introducir más de 1ml de


DNA y sellar

Utilizar de forma continuada


Obtención de células epiteliales del interior de la boca

Durante 30 segundos rascar CUIDADOSAMENTE con los dientes la parte interna


de la boca

Introducir los 3 ml de agua del tubo de tapa azul en la boca. NO TRAGAR.


Enjuagar durante 30 segundos. CUIDADOSAMENTE verter el agua nuevamente
en el tubo de tapa azul.

Las células epiteliales que recubren el


interior de la boca se renuevan
contínuamente, especialmente cuando
masticamos y comemos. Las células viejas
de desprenden dejando paso a células
nuevas.
Rotura (lisis) de células epiteliales

Añadir 2 ml de buffer de lisis (tubo tapa verde) sobre los 3 ml del eluido de la boca

Buffer
de lisis

Eluido
Rotura (lisis) de células epiteliales

Para extraer el ADN del núcleo celular


necesitamos romper las membranas plasmática
y nuclear de las células. El buffer de lisis
contiene detergentes capaces de disgrerar los
fosfolípidos de las membranas y disolver otros
componentes celulares como azúcares y grasas

Detalle de una
membrana celular

Esquema de las
partes de una célula
Degradación de la proteínas “contaminantes”
Añadir 5 gotas de proteasa (tubo eppendorf) al tubo.
Tapar y agitar la solución invirtiendo el tubo cuidadosamente varias veces.
Incubar los tubos durante 10 minutos a 50ºC.

Proteasa

La proteasa es un enzima con capacidad proteolítica que


utilizamos para degradar las proteínas de la mezcla incluidas
las enzimas capaces de degradar el ADN que queremos
obtener. La temperatura óptima a la que esta enzima actua
son 50ºC
Condensación del ADN
Añadir MUY LENTAMENTE sobre el tubo colocado en un ángulo de 45º 10 ml de etanol
al 95% (tubo tapa azul con pegatina amarilla). Mantener el tubo en la gradilla sin agitar
durante 5 minutos.

Las hebras de ADN son tan finas que es imposible visualizarlas en solución. Para
observarlas podemos “concentrarlas” precipitando el ADN en presencia de sales y
alcohol. Las sales neutralizan la carga negativa del ADN permitiendo que las moléculas
se agreguen unas a otras. El ADN es insoluble en presencia de sal y alcohol
Condensación del ADN

Agitar invirtiendo el tubo 5 veces para ayudar a la agregación del ADN.

Las sales neutralizan la carga negativa del ADN permitiendo que las moléculas
se agreguen unas a otras. El ADN es insoluble en presencia de sal y alcohol
DNA in a bottle
Con ayuda de la pipeta transferir el ADN (no más de 1 ml) al tubo de cristal.
Cerrar con el tapón de plástico y sellar con pegamento

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