Gemma Rodríguez-Tarduchy Colaboradores Material y consejos
Pipetas de plástico Vasos de precipitado
Tubos eppendorf
Enjuagar antes de reutilizar
Guantes Recipiente para el ADN
Tubos Falcon
NO introducir más de 1ml de
DNA y sellar
Utilizar de forma continuada
Obtención de células epiteliales del interior de la boca
Durante 30 segundos rascar CUIDADOSAMENTE con los dientes la parte interna
de la boca
Introducir los 3 ml de agua del tubo de tapa azul en la boca. NO TRAGAR.
Enjuagar durante 30 segundos. CUIDADOSAMENTE verter el agua nuevamente en el tubo de tapa azul.
Las células epiteliales que recubren el
interior de la boca se renuevan contínuamente, especialmente cuando masticamos y comemos. Las células viejas de desprenden dejando paso a células nuevas. Rotura (lisis) de células epiteliales
Añadir 2 ml de buffer de lisis (tubo tapa verde) sobre los 3 ml del eluido de la boca
Buffer de lisis
Eluido Rotura (lisis) de células epiteliales
Para extraer el ADN del núcleo celular
necesitamos romper las membranas plasmática y nuclear de las células. El buffer de lisis contiene detergentes capaces de disgrerar los fosfolípidos de las membranas y disolver otros componentes celulares como azúcares y grasas
Detalle de una membrana celular
Esquema de las partes de una célula Degradación de la proteínas “contaminantes” Añadir 5 gotas de proteasa (tubo eppendorf) al tubo. Tapar y agitar la solución invirtiendo el tubo cuidadosamente varias veces. Incubar los tubos durante 10 minutos a 50ºC.
Proteasa
La proteasa es un enzima con capacidad proteolítica que
utilizamos para degradar las proteínas de la mezcla incluidas las enzimas capaces de degradar el ADN que queremos obtener. La temperatura óptima a la que esta enzima actua son 50ºC Condensación del ADN Añadir MUY LENTAMENTE sobre el tubo colocado en un ángulo de 45º 10 ml de etanol al 95% (tubo tapa azul con pegatina amarilla). Mantener el tubo en la gradilla sin agitar durante 5 minutos.
Las hebras de ADN son tan finas que es imposible visualizarlas en solución. Para observarlas podemos “concentrarlas” precipitando el ADN en presencia de sales y alcohol. Las sales neutralizan la carga negativa del ADN permitiendo que las moléculas se agreguen unas a otras. El ADN es insoluble en presencia de sal y alcohol Condensación del ADN
Agitar invirtiendo el tubo 5 veces para ayudar a la agregación del ADN.
Las sales neutralizan la carga negativa del ADN permitiendo que las moléculas se agreguen unas a otras. El ADN es insoluble en presencia de sal y alcohol DNA in a bottle Con ayuda de la pipeta transferir el ADN (no más de 1 ml) al tubo de cristal. Cerrar con el tapón de plástico y sellar con pegamento
