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FACULTAD DE CIENCIAS

DEPARTAMENTO DE QUÍMICA
PROTEÍNAS - BIOQUÍMICA
INFORME DE LABORATORIO

Nota
PRÁCTICA DE LABORATORIO:
FRACCIONAMIENTO DE TEJIDOS EN MACROMOLECULAS

Paula Andrea Beltrán pbeltran11@uan.edu.co

Fecha de realización de la
Docente:
Practica:
 Edwin Reyes
20/03/2019

RESUMEN

En la praá ctica de laboratorio se realizoá fraccionamiento en tejido de híágado de pollo para


identificacioá n de sus principales macromoleá culas como proteíánas, aá cidos nucleicos, carbohidratos
y líápidos. Estas biomoleá culas son extraíádas y fraccionadas utilizando teá cnicas centrifugacioá n y la
utilizacioá n de diferencia de solubilidad, separando y almacenando los sobrenadantes de cada
parte del procedimiento en diferentes recipientes rotulados.

Palabras clave: biomoleá culas, proteíánas, aá cidos nucleicos, carbohidratos, líápidos, centrifugacioá n,
solubilidad, fraccionamiento, extraccioá n.

ABSTRACT

In the laboratory practice, fractionation was carried out in the liver tissue for the identification of
its main macromolecules such as proteins, nucleic acids, carbohydrates and lipids. These
biomolecules are extracted and fractionated using centrifugation techniques and use of the
difference of solubility, separating and storing the supernatants of each part of the process in
different rotating containers.

Key words: biomecules, macromolecules, proteins, nucleic acids, carbohydrates, lipids,


centrifugation, solubility, fractionation, extraction.

INTRODUCCIÓN
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Los bioelementos son los elementos quíámicos tejidos han sido triturados y se han roto sus
que forman parte de los seres vivos, bien en membranas.
forma atoá mica o bien como integrantes de las
biomoleá culas. Los bioelementos se presentan El reactivo aá cido tricloroaceá tico es un aá cido
en proporciones diferentes y su abundancia, orgaá nico que en este caso se utiliza para la
que no su importancia, se emplea como criterio trituracioá n de componentes de la ceá lula, es un
para clasificarlos. derivado del aá cido aceá tico, en el cual tres
aá tomos de hidrogeno del grupo metilo han sido
La clasificacioá n de las moleá culas se realiza
reemplazados por aá tomos de cloro; para el
tambieá n seguá n muá ltiples criterios, uno de los
fraccionamiento se utiliza en bajas
cuales es que su presencia sea exclusiva de los
temperaturas el cual influencia de manera
seres vivos, biomoleá culas orgaá nicas: gluá cidos,
distinta en cada macromoleá cula:
líápidos, proteíánas y aá cidos nucleicos; o bien que
carezcan de dicha exclusividad y formen
- En carbohidratos: A baja temperatura los
tambieá n parte del mundo mineral,
monosacaá ridos son estables en medio aá cido,
biomoleá culas inorgaá nicas, como el agua y sales
mientras que, si se tratan en caliente, sufren
inorgaá nicas como fosfatos, carbonatos, sulfatos,
deshidratacioá n producieá ndose los furfurales.
etc.
Los polisacaá ridos en medio aá cido sufren
Las biomoleá culas o tambieá n llamadas
hidroá lisis del enlace glicosíádico, reaccioá n que
macromoleá culas desarrollan funciones muy
aumenta su velocidad a medida que se eleva su
variadas, desde un papel estructural o
temperatura. A temperaturas inferiores a 4°C,
arquitectoá nico, consistente en el
su velocidad es tan lenta que para fines
mantenimiento de la morfologíáa del
praá cticos se considera que no ocurre reaccioá n.
organismo; a una funcioá n energeá tica, para
En general se puede decir que los
sostener las funciones vitales, o bien una
carbohidratos son solubles en solucioá n de
actividad reguladora o de control ajustando
aá cido tricloroaceá tico al 10% a temperaturas
todos los requerimientos de materia, energíáa e
inferiores a 4°C y que no sufren cambios
informacioá n para el organismo.
quíámicos en estas condiciones.
Para reconocer y confirmar la presencia de
estas macromoleá culas en los seres vivos se
- En lípidos: estos compuestos son poco
llevoá a cabo experimentalmente el
solubles en soluciones acuosas, y no son
fraccionamiento celular que consiste en la
extraíádos si se trata el tejido en soluciones
separacioá n de la ceá lula en sus principales
acuosas de aá cido tricloroaceá tico.
componentes y permitir la separacioá n de cada
- En proteínas: Estas forman sales insolubles
uno de ellos de acuerdo a la diferencia de
en aá cidos como tricloroaceá tico o percloá rico,
solubilidad de cada uno de ellos sin la
por tanto no son solubles en soluciones de
interferencia de los demaá s, para eso se utilizoá
aá cido tricloraaceá tico al 10% en frio.
tejido de híágado de pollo para si obtener los
- En acido nucleicos: Lo mismo que las
diferentes componentes en teá rminos de
proteíánas, estos aá cidos son insolubles en
(carbohidratos, líápidos, proteíánas, aá cidos
soluciones de aá cido tricloroaceá tico al 10%. Por
nucleicos), por lo tanto se utilizaron teá cnicas
otra parte, el aá cido desoxirribonucleico (DNA)
de centrifugacioá n y propiedades de la
estaá unido a histonas, lo cual lo hace maá s
solubilidad diferencial.
insoluble en estas condiciones.
Posible entonces utilizar tales solubilidades
diferenciales para separarlos, una vez que los
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La teá cnica de centrifugacioá n es en el que se • Beaker 400 ml


separan dos componentes de una mezcla • Beaker de 100 ml
utilizando uá nicamente la fuerza centrífuga, se • Frasco lavador
somete una solución heterogénea, a varias • Gradilla
veces la fuerza de la gravedad, por medio de • 5 tubos de ensayo
una centrifugadora; con el fin de • Termoá metro
sedimentar el pellet y poder separarlo del
sobrenadante.
Reactivos
• ATA al 10%
Para realizar la teá cnica de separacioá n por
• Arena lavada
solubilidades diferenciales se indica que en el
residuo de la extraccioá n con aá cido • Etanol del 96%
tricloroaceá tico al 10% a 4°C, se trata con • Etanol-eá ter-cloroformo (2:2:1)
solucioá n de etanol-eá ter-cloroformo, al solvente • NaCl al 10%
soá lo pasan los líápidos, mientras que las
proteíánas y los aá cidos nucleicos quedan en el METODOLOGIA
residuo; por consiguiente el residuo anterior se
suspende en una solucioá n de NaCl al 10% y se 1. Se pesa 2 g de tejido de híágado de
calienta en banñ o Maríáa (92°C) durante 20 pollo, se corta em trozos pequenñ os. Se
minutos, se desnaturalizan las proteíánas y los adiciona aproximadamente 0,5 g de
aá cidos nucleicos, principalmente el arena lavada, se macera con ATA 10%
ribonucleico (RNA)- quedan en solucioá n. Por (1,5ml/g tejido) y centrifugar a 2500
este procedimiento es posible separar rpm por 5 min.
entonces las proteíánas de los aá cidos nucleicos.
Si al sobrenadante se le agrega ahora etanol 2. Separar el sobrenadante que contiene
absoluto en un volumen igual al doble de la (carbohidratos mono y polisacaá ridos),
solucioá n original y se enfríáa en banñ o de hielo pasar a un tubo de vidrio y colocar en
durante 10 minutos, se obtiene un precipitado hielo; en el residuo quedaron (líápidos,
que puede ser separado por centrifugacioá n y proteíánas, aá cidos nucleicos y arena).
que contiene los aá cidos nucleicos.
3. Al sobrenadante que contiene
MATERIALES Y MÉTODOS carbohidratos se le adiciona etanol al
96%, se deja enfriar por 5 min y luego
Materiales y equipos se centrifuga 2500 rpm por 5 minutos.
• Bisturíá Se obtiene un residuo que es
• Espaá tula glucoá geno y un sobrenadante que es
• Eortero con pistilo mono y oligosacaá ridos.
• Pipetas de 1,2 y 10 ml
4. Al residuo que contiene líápidos,
• 6 tubos de centríáfuga
proteíánas, aá cidos nucleicos y arena se
• Beaker 600 ml
le realiza la extraccioá n con etanol-eá ter-
• Mechero bunsen o placa de cloroformo y se centrifuga a 2500 rpm
calentamiento por 5 min. Se obtiene un sobrenadante
• Pipeta Pasteur plaá stica (gotero) que son los líápidos y un residuo que
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son aá cidos nucleicos, proteíánas y Imagen 1: Centrifugado 1: tejido macerado con


arena. la adicioá n de ATA 10% (sobrenadante que
contiene carbohidratos mono y polisacaá ridos y
5. El residuo de aá cidos nucleicos, residuo que contiene líápidos, proteíánas, aá cidos
proteíánas y arena se le realiza nucleicos y arena).
extraccioá n con NaCl 10% en banñ o de Imagen 2: Sobrenadante del centrifugado 1
maríáa por 20 min y se centrifuga a que contiene carbohidratos mono y
2500 rpm por 5 min. Se obtiene un polisacaá ridos con la adicioá n de etanol al 96%
residuo que con tiene proteíánas
desnaturalizadas y arena; y el
sobrenadante que contiene aá cidos
nucleicos.

6. Al sobrenadante que contiene aá cidos


nucleicos se le adiciona etanol al 96%
y se centrifuga a 2500 rpm por 5 min;
se obtiene un sobrenadante y un
residuo que contiene aá cidos nucleicos.

7. El sobrenadante se desecha.

RESULTADOS Y ANALISIS
Imagen 3: Centrifugado 2: el sobrenadante del
centrifugado 1 que son los carbohidratos mono
y polisacaá ridos (sobrenadante que contiene
mono y oligosacaá ridos y el residuo contiene
glicoá geno)

Imagen 4: Centrifugado 3: residuo que


contiene líápidos, proteíánas, aá cidos nucleicos y
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arena del centrifugado 1 (sobrenadante líápidos Se tomo una pequenñ a parte del tejido de
y residuo proteíánas, aá cidos nucleicos y arena) híágado de pollo, se pesoá 2 g y se llevoá a macerar
con ATA 10%, en esta parte del procedimiento
hay una completa trituracioá n y rompimiento
del tejido por lo que se puede deducir que hay
presencia de las principales biomoleá culas que
componen el tejido que son carbohidratos,
líápidos, proteíánas y aá cidos nucleicos.

En la imagen 1 se observa el centrifugado 1 del


correspondiente fraccionamiento de tejido en
sus componentes principales que por lo tanto
podemos ver por diferencia de densidad la
separacioá n de los carbohidratos en la parte
superior del tubo y un residuo que contiene
líápidos, proteíánas, aá cidos nucleicos y arena.
Imagen 5: Sobrenadante del centrifugado 3 En la imagen 2 ya se realizoá la separacioá n de
que contiene líápidos los carbohidratos al cual se le adicionoá etanol
al 96% frio para posteriormente realizar la
centrifugacioá n y observar en la imagen 3 como
quedoá el centrifugado 2; se puede observar que
allíá hay un sobrenadante que es
correspondiente a los monosacaá ridos y
oligosacaá ridos y el residuo blanco que contiene
glucoá geno. El glucoá geno puede separarse de los
monosacaá ridos y otros compuestos
hidrosolubles por precipitacioá n con alcohol,
porque los polisacaá ridos son mucho menos
solubles en alcohol acuoso que los
monosacaá ridos. La separacioá n del glucoá geno
del tejido se consigue mediante la adicioá n de
etanol (precipita polisacaá ridos y elimina los
monosacaá ridos solubles) y sulfato de sodio
Imagen 6: Centrifugado 4: residuo que
contiene proteíánas, aá cidos nucleicos y arena (coprecipitante). Asíá, se produce un
del centrifugado 3 (sobrenadante aá cidos precipitado que contiene una mezcla de
nucleicos y en el residuo proteíánas glucoá geno, proteíánas y aá cidos nucleicos. Para
desnaturalizadas y arena) realizar una completa identificacioá n de este se
podríáa realizar caracterizacioá n cualitativa de
ANALISIS DE RESULTADOS
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carbohidratos por medio de ensayo de Molish, carbohidratos se puede realizar ensayo de


Benedict, Lugol, y Lugol + HCl. hidrolisis y ensayo de pentosas.

Al residuo separado de la centrifugacioá n 1 el CONCLUSIONES


cual contiene líápidos, proteíánas, aá cidos
nucleicos y arena se le adicionoá etanol-eá ter- • Se pudo emplear meá todos diferenciales
cloroformo y se lleva a centrifugacioá n de solubilidad y de centrifugacioá n para
el fraccionamiento de un tejido animal
(centrifugado 3), en el cual el sobrenadante
en sus principales constituyentes.
soá lo pasa los líápidos, mientras que las
proteíánas y los aá cidos nucleicos quedan en el • Se pudo extraer las diferentes
residuo como se observa en la imagen 4. En la macromoleá culas que compone al tejido
imagen 5 se observa el separado de la de híágado de pollo
centrifugacioá n 3. Se realiza esta separacioá n ya
que por diferencia de solubilidad solo se puede
• Se puede realizar posteriormente de la
separar los líápidos. Para realizar un completa
extraccioá n de cada componente pruebas
identificacioá n de los líápidos se puede realizar experimentales correspondientes para
un ensayo de Liebermann- Burchard que es la completa identificacioá n
para identificacioá n de colesterol y
saponificacioá n. BIBIOGRAFIA
El residuo correspondiente de la centrifugacioá n
3 que contiene proteíánas, aá cidos nucleicos y • Martíánez J. C. Guíáas de Anaá lisis
arena se realiza extraccioá n con la adicioá n de Orgaá nico. Universidad Nacional de
Colombia., 1996.
NaCl y se lleva a banñ o de maríáa a 92°C por 20
• Shriner R.L. Fuson R.C. Identificacioá n
min, en esta parte del procedimiento se fue sistemaá tica de compuestos orgaá nicos.
perdiendo muestra al aumentar la temperatura Limusa Noriega editores, 1995.
por lo que solo se dejoá 10 min y por • Aguilera, D. INFORME N 1:
consiguiente la reaccioá n no se puedo dar por Fraccionamiento de tejidos en sus
completo, por lo que al llevar a la centrifuga si principales biomoleá culas:
se obtiene un precipitado y un sobrenadante Carbohidratos, Líápidos, Proteíánas y
AÁ cidos Nucleicos. Caracterizacioá n de las
pero no con tal claridad como se observa en la
fracciones obtenidas. Grupo 1
imagen 6, pero se puede identificar que en el (Mieá rcoles)–Ing. Agroindustrial.
sobrenadante hay aá cidos nucleicos y • Remota, P. A. (2013). PRAÁ CTICA No. 12-
en le residuo proteíánas desnaturalizadas y FRACCIONAMIENTO DE TEJIDOS EN
arena. SUS PRINCIPALES CONSTITUYENTES:
Para una completa identificacioá n de proteíánas CARBOHIDRATOS, LIÁPIDOS, PROTEIÁNAS
se puede realizar un ensayo de Biuret, Y AÁ CIDOS. UNIVERSIDAD NACIONAL
Ninhidrina, Xantoproteica y prueba de million; ABIERTA YA DISTANCIA, 119.
y para la identificacioá n completa de
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• Roca, P., Oliver, J., & Rodríáguez, A. M. Editorial Heá lice.


(2004). Bioquímica: técnicas y métodos.
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