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Que es un frotis

Un frotis consiste en la extensión de una muestra de fluido corporal sobre un portaobjetos


para su análisis clínico.
Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o
cultivo con objeto de separar lo más posible los microorganismos
Preparación de un frotis
1. Colocar una pequeña gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio. Es
necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra, ya
que en el extremo curvo de su filamento queda retenida una mínima gota de agua,
que resulta suficiente.
2. Flamear el asa de siembra, tomar, en condiciones asépticas, una pequeña cantidad
del cultivo bacteriano en medio sólido y transferirlo a la gota de agua. Remover la
mezcla con el asa de siembra hasta formar una suspensión homogénea que quede
bastante extendida para facilitar su secado.
Si la muestra se toma de un cultivo en medio líquido, no es necesario realizar los dos
primeros pasos ya que basta con colocar y extender una gota de la suspensión
bacteriana, que se toma con el asa de siembra, directamente sobre el portaobjetos.
3. Esperar hasta que el líquido se evapore o acelerar su evaporación acercando el porta
a la llama del mechero. En este caso hay que tener mucha precaución de no calentar
demasiado el porta pues las células pueden deformarse o romperse.
Clasificación de las tinciones en microbiología
Simples: utilización de un solo tinte con el cual podemos evaluar solamente la morfología.

 Las tinciones simples es cuando toda la muestra se tiñe del mismo color y se utiliza un
solo colorante.
b) Compuestas ó especiales: constituidas por 2 ó más tintes o reactivos y sirven para
clasificar las bacterias u observar sus características especiales.
c) Positivas: se observa teñida la célula sobre un fondo claro.
d) Negativas: El fondo se tiñe de oscuro para observar la célula o estructuras refringentes
Fundamento de Tinción de gram
Composición de la pared celular de las bacterias, las bacterias G+ está compuesta por
varias capas de peptidoglicanos, las bacterias G- tienen una membrana externa con un
componente estructural único que son los lipopolisacáridos. Las bacterias G+ retienen el
cristal-violeta después de la decoloración y aparecen de color azul intenso (purpura), las
bacterias G- no son capaces de retener el cristal-violeta después de la decoloración y son
teñidas de rojo con safranina.
Fundamento de tinción de BAAR
Se trata de un procedimiento de tinción diferencial, conocido como método de Ziehl-
Neelsen, que tiene gran relevancia por su aplicación clínica. Permite poder distinguir
aquellos microorganismos cuya coloración resiste la acción de alcoholes y ácidos suaves
(ácido-alcohol resistentes) de otros que no resisten la decoloración (no ácido-alcohol
resistentes).
Tinción de capsula
Es una tinción negativa en donde vemos la cápsula no teñida sobre un fondo morado y se
visualiza la bacteria en el centro de la cápsula, esta pude ser de glicoproteínas o
polisacáridos. La cápsula es una sustancia viscosa producida por algunas especies que la
sintetizan a partir de polipéptidos, polímeros de glucosa u otros amino azúcares que
contienen nitrógeno, que después de combinarse con el agua es segregada por todo el
contorno de la pared celular como un moco gelatinoso. Cuando la cápsula ha sido producida
puede observarse en los frotis coloreado por el método de Gram como un halo incoloro
alrededor de la bacteria. Cuando se requiere ver la cápsula con más detalle o inducir su
producción se recurre a coloraciones especiales.
Colocar leche descremada al 20% o leche litmus en un extremo del portaobjetos
b. Agregar la muestra de bacteria en la leche del borde
c. Realizar un extendido con la ayuda de otro portaobjetos
d. Se deja secar al aire (no se fija con calor ya que la leche se pega al portaobjetos)
e. Teñir por 2 minutos con violeta-cristal.
f. Lavar con sulfato de cobre.
g. Se deja secar al aire

Tinción de esporas
Las esporas permiten a las bacterias pasar a un estado latente en condiciones
ambientales adversas. Su principal componente es Ca2+ fijado a ácido dipicolínico. El
calor después de la tinción con carbol-fuscina con permite que rompa la estructura que
protege la espora para que así pueda penetrar el colorante. Con el lavado de agua se
retira todo tinte que se adhirió a la bacteria, para después teñirse con azul de metileno.
Resalta de color rojo la espora y de color azul, la bacteria
Se prepara el extendido de la muestra

b. Se deja secar y se fija con calor

c. Se tiñe con carbol-fuschina hasta llenar por completo el portaobjetos

d. Pase un mechero por debajo de la placa calentando hasta que vea que se emiten vapores y sin dejar que
hierva por 3 minutos. Si la placa se va secando, ir agregando más tinte hasta cumplir el tiempo. (Se calienta el
tinte para que penetre la espora que contiene dipecolinato de calcio)

e. Se enjuaga con agua y se coloca ácido sulfúrico al 1% por 2 minutos (decolorante para retirar el carbol-
fuchina)

f. Se enjuaga con agua y se tiñe finalmente con azul de metileno por 1 minuto

g. Dejar secar

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