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FACUL
TAD DE CIENCIAS FARMACEUTICAS Y BIOQUIMICA
Una de las características del laboratorio de análisis clínicos es la de utilizar muestras clínicas con el objeto
de obtener datos que sirvan de apoyo para el diagnóstico de enfermedades y como revisión rutinaria de
la salud del paciente.
Gracias a las pruebas que se realizan en el laboratorio de análisis clínicos podremos detectar
enfermedades frecuentes, tales como la anemia, la diabetes,infecciones varias, y otras menos fecuentes
y más graves como leucemias o enfermedades cancerígenas.
Esto plantea la necesidad de que el estudiante este preparado para poder utilizar la tecnología más
actualizada en el análisis de estas muestras asi como estar preparado para desarrollar las técnicas
necesarias con este fin.
El curso de Análisis Bioquímico y Clínico II esta diseñado para brindar al estudiante las herramientas
necesarias para en el futuro poder desempeñarse en el campo de los análisis clínicos y uno de los medios
para el logro de nuestros propósitos lo constituye la GUÍA DE PRÁCTICAS DE ANÁLISIS BIOQUÍMICO Y
CLÍNICO II, el cual ha sido concebido como un material educativo que va a servir para afianzar
conocimientos, desarrollar habilidades y destrezas, asi como orientar la autoeducación permanente. Por
ello se ubica como un material delectura independiente, es accesible, sirve de información y recreación,
desempeña un papel motivador, se orienta a facilitar la lectura comprensiva, a ampliar conocimientos en
otras fuentes, crear hábitos y actitudes, asi como a desarrollar destrezas para el procesamiento de
información, adquisición y generación de conocimientos.
Los alumnos deben leer detenidamente cada práctica, antes de su realización, para una mejor
comprensión en el desarrollo de esta, ademas debe realizar esquemas de lo observado el cual sera
revisado por el profesor responsable de práctica en los informes que los estudiantes entregarán luego
de cada práctica.
REGLAS BÁSICAS DE HIGIENE Y SEGURIDAD EN EL LABORATORIO
Las medidas de seguridad en Laboratorios son un conjunto de medidas preventivas destinadas a proteger
la salud de los que alli se desempeñan frente a los riesgos propios derivados de la actividad, para evitar
accidentes y contaminaciones tanto dentro de su ambito de trabajo, como hacia el exterior.
Las reglas basicas aquí indicadas son un conjunto de practicas de sentido comun realizadas en forma
rutinaria.
1. Se debera conocer la ubicación de los elementos de seguridad en el lugar de trabajo, tales como:
extinguidores, salidas de emergencia, botiquin de priemros auxilios.
2. No se permitira comer, beber, fumar o maquillarse.
3. No se deberan guardar alimentos en el laboratorio, ni en los refrigeradores.
4. Se debera utilizar vestimenta apropiada para realizar trabajos de laboratorio (guardapolvo
preferentemente de algodón y de mangas largas, zapatos cerrados, evitando el uso de accesorios
colgantes) y cabello recogido con gorro.
5. Es imprescindible mantener el orden y la limpieza. Cada persona es responsable directa de la zona
que le ha sido asignada y de todos los lugares comunes.
6. Las manos deben lavarse cuidadosamente despues de cualquier manipulacion de laboratorio y al
termino de cada practica.
7. Se deberan utilizar guantes apropiados para evitar el contacto con sustancias quimicas o material
biologico. Toda persona cuyos guantes se encuentren contaminados no debera tocar objetos, ni
superficies, tales como: telefono, lapiceros, manijas de cajones o puertas, cuadernos, etc.
8. No se permitira pipetear con la boca.
9. No se permitira corre en los laboratorios.
10.Siempre que sea necesario proteger los ojos y la cara de salpicaduras o impactos. Se utilizaran
anteojos de seguridad cuando se manipulen productos quimicos que emitan vapores o puedean
provocar proyecciones, se evitara el uso de lentes de contacto.
11.No se deben bloquear las rutas de escape o pasillos con equipos, maquinas u otros elementos que
entorpezcan la coreecta circulacion.
12.Las superficies de trabajo se descontaminan luego de finalizar el trabajo o al fin del dia y luego de cada
derrame o salpicadura de material viable con desinfectantes efectivos contra los agentes en cuestion.
13.Se requerira el uso de mascarillas descartables cuando exista riesgo de produccion de aerosoles
(mezcla de particulas en medio liquido) o polvos, durante operaciones de pesada de sustancias toxicas
o biopatogenas, apertura de recipientes con cultivos despues de agitacion, etc.
14.Las practicas que produzan gases, vapores, humos o particulas, aquellas que pueden ser riesgosas por
inhalacion deben llevarse a cabo bajo campana.
15.Se debera verificar la ausencia de vapores inflamables antes de encender fuego. No se operara con
materiales inflamables o solventes sobre llamas directas o cerca de las mismas.
16.El amterial de vidrio roto no se depositara con los residuos comunes. Sera conveniente ubicarlo en
cajas resistentes, envuelto en papel y dentro de bolsas plasticas.
17.Sera necesario que todo recipiente que tubiera conteniendo amterial inflamable, y deba ser
descartado sea vaciado totalmente, escurrido, enjuagado con un solvente apropiado y luego con agua
varias veces.
18.Esta prohibido descartar liquidos o material biologico por los desagues de las piletas. En cada caso se
deberan seguir los procedimientos establecidos para la gestion de residuos.
19.Todos los cultivos y otros desechos bioogicos se descontaminan antes de ser desechados mediante
un metodo de descontaminacion aprobado, como por ejemplo, mediante autoclave.
20.Los laboratorios contaran con un botiquin de primeros auxilios con los elementos indispensables para
atender casos de emergencia.
PRÁCTICA N° 1
Introducción:
Para las pruebas inmunohematológicas es necesario trabajar con glóbulos rojos lavados y suspendidos al
5%.
Los glóbulos rojos deben lavarse para reducir la concentración de leucocitos y aumentar la remoción de
plaquetas y restos celulares, los cuales podrían provocar resultados falsos positivos si se confunden con
aglutinados. Este lavado se realiza con solución salina (pH: 6.5 - 7.5).
Materiales:
Método:
Introducción:
El sistema de grupo sanguíneo ABO sigue siendo el más significativo en medicina transfusional. Es el único
en el cual el suero de la mayoría de las personas no expuestas a eritrocitos humanos posee anticuerpos
recíprocos constantes y previsibles. A causa de estos anticuerpos la transfusión de sangre ABO
incompatible podría provocar hemolisis intravascular grave, así como también las otras manifestaciones
de las reacciones hemolíticas transfusionales agudas.
Materiales:
Enfrentamos un reactivo que nos indica la presencia del Antígeno del Glóbulo Rojo, en caso de Rh (el
Antígeno D)
Procedimiento:
Procedimiento:
Hemólisis: Sobrenadante color vino tinto, nos dice que no ha habido Rx. Ag – Ac.
Cuestionario:
Explique la relación entre el grupo sanguíneo duffy y la resistencia natural al plasmodium vivax.
PRÁCTICA N° 3
Introducción:
La prueba de Coombs (también conocida como prueba de antiglobulina) es un examen de sangre que
se usa en inmunología y hematología. Este análisis puede detectar la presencia
de anticuerpos en suero que reaccionan con antígenos en la superficie de los glóbulos rojos.
Hay dos tipos distintos de la prueba de Coombs: el directo y el indirecto. La prueba de Coombs
directa detecta anticuerpos ya unidos a la superficie de los glóbulos rojos, y la prueba de Coombs
indirecta detecta anticuerpos libres que pueden reaccionar in vitro con glóbulos rojos que tienen
antígenos específicos.
Materiales:
Procedimiento:
Procedimiento:
4+ 10
3+ 8
2+ 6
1+ 4
½+ 3
½+ 1
0 0
Cuestionario:
Introducción:
Son un conjunto de pruebas que sirven como su nombre lo indica para diagnosticar enfermedades que
cursan con fiebre, como Fiebre tifoidea (Salmonella), Brucelosis (fiebre ondulante, fiebre de Malta) y
Rickettsiosis (Fiebre Q, fiebre manchada de las montañas rocallosas).
Materiales:
Placas de vidrio.
Palillos desechables.
Kit de antígenos febriles (“O”, “H” “Paratífico A”, “Paratífico B” y BRUCELLA)
Pipeta automatizada de rango variable.
Suero problema.
PRUEBA CUALITATIVA:
Positividad:
Si la prueba cualitativa sale positiva, pipetear: 20, 10 y 5 µl del suero problema y repetir los pasos 3 al 7.
CUESTIONARIO:
Explique por qué no puedo utilizar sueros hemolizados para la prueba de investigación de anticuerpos
para brucella.
Explique por qué se podría dar un fenómeno de zona en la investigación de anticuerpos contra brucella.
PRÁCTICA N° 5
Introducción:
Se basa en la migración de una muestra (suero, plasma, orina, entre otros)a través de una membrana
de nitrocelulosa la cual contiene anticuerpos específicos contra el antígeno o analito que se desea
detectar.
Materiales:
Suero problema
Tira reactiva
Papel toalla
PRUEBA CUALITATIVA:
Sumergir la tira en el recipiente que contiene el suero problema, en forma vertical con las flechas
señalando hacia la orina, durante 15 segundos.
Cuida que el suero moje la tira, solo hasta la zona que indican las flechas.
Retirar la tira de prueba del recipiente y coloca en una superficie horizontal no absorbente.
Espera hasta que aparezcan uno o dos líneas coloreadas. Lee el resultado a los 3 minutos. No interpretes
los resultados luego de 10 minutos.
CUESTIONARIO:
2. ¿En qué
Materiales:
Solución salina.
Palillos desechables.
PRUEBA DE RPR:
Método Cualitativo:
INTERPRETACION DE RESULTADOS:
Método Cuantitativo:
La última dilución que tiene agregados macroscópicos indica el título de la muestra. Si la última dilución
tiene resultados positivos, la serie de diluciones debe ser extendida.
PRÁCTICA N° 7
Materiales:
FACTOR REUMATOIDE:
Método Cualitativo:
Utilizando una pipeta desechable, dispensar una gota de suero en un círculo de la tarjeta de prueba.
Utilizando el extremo plano de la pipeta desechable, difundir la muestra sobre toda el área del círculo
de prueba.
Repita los pasos 1 y 2 para los controles (Positivo y Negativo) usando una pipeta nueva.
Resuspender el reactivo FR LATEX con suavidad y permitir caer una gota sobre cada muestra.
Rotar la tarjeta de prueba de 80 - 100 r.p.m por 2 minutos.
Luego leer inmediatamente los resultados macroscópicamente en buena luz.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:
Método Cuantitativo:
Utilizando la Solución salina, diluir la muestra 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32 o según sea necesario.
Proceder como en la prueba cualitativa desde el paso 2 en adelante.
INTERPRETACION DE RESULTADOS:
ANTIESTREPTOLISINA O (ASO):
Método Cualitativo:
Utilizando una pipeta desechable, dispensar una gota de suero en un círculo de la tarjeta de prueba.
Utilizando el extremo plano de la pipeta desechable, difundir la muestra sobre toda el área del círculo
de prueba.
Repita los pasos 1 y 2 para los controles (Positivo y Negativo) usando una pipeta nueva.
Resuspender el reactivo ASO con suavidad y permitir caer una gota sobre cada muestra.
Rotar la tarjeta de prueba de 80 - 100 r.p.m por 2 minutos.
Luego leer inmediatamente los resultados macroscópicamente en buena luz.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:
POSITIVO: Aglutinación observable en la mezcla. Indica una concentración de ASO igual o mayor a 200
UI/ml. Se debe ejecutar el método cuantitativo.
Método Cuantitativo:
Utilizando Solución Salina, diluir la muestra 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32 o según sea necesario.
Proceder como en la prueba cualitativa desde el paso 2 en adelante.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:
El nivel aproximado de Antiestreptolisina O en la muestra, puede ser calculada por la formula siguiente:
Ejemplo: la muestra presenta un título de 1:2. El nivel de ASO es de 2 x 200 = 400 UI/ml.
PRÁCTICA N° 9
Las materias fecales están constituidas en unas tres cuartas partes por agua. Las sustancias sólidas del
cuarto restante comprenden:
El estudio de laboratorio de muestras fecales de origen humano, permite obtener datos que nos sirve
para determinar:
2.- Infecciones intestinales causadas por virus, bacterias y hongos. 3.- Infecciones causadas por
parásitos intestinales.
Este estudio tiene su máxima indicación en las diarreas crónicas, y comprende la observación
macroscópica y microscópica de las heces, así como su análisis /químico, bacteriológico y
parasitológico.
Con este estudio procuramos saber la digestión de los principios inmediatos. La digestión es el conjunto
de fenómenos mecánicos y bioquímicos que transforman los constituyentes orgánicos más o menos
complejos de los alimentos en sustancias simples directamente asimilables.
Los alimentos son triturados en la boca sufriendo una división física. Luego comienza una disgregación
química mediante fermentos digestivos y elementos bacterianos, siendo absorbidas, las sustancias
transformadas, por la mucosa intestinal y por último los residuos no aprovechables de la digestión son
expulsados fuera del organismo.
Carne: Se investiga el tejido conjuntivo y fibras musculares. Debe comerse lo más cruda posible.
Patatas: Se investiga la digestión de almidón.
Grasa: Se tomará en forma de leche, mantequilla o carne.
Este plan se sigue durante 3 días y luego se recoge la muestra de heces.
TOMA DE MUESTRA
Se recogerán las heces en un frasco limpio con cierre hermético, no es necesaria la esterilidad. El análisis
se hará en las 12 horas siguientes a la deposición, guardando la muestra en el frigorífico a 4-10º C.
Si el análisis se pospone más de 24 horas se añadirá un volumen igual al de las heces de una solución
acuosa al 5% de formol comercial.
CARACTERES ORGANOLÉPTICOS
OLOR:
Fecaloide normal.
Debido a la flora proteolítica aumentada. Provoca diarreas de putrefacción (heces alcalinas y gases).
Agrio penetrante o rancio Debido a la flora sacarolítica aumentada. Provoca diarreas de fermentación
(heces ácidas y gases).
COLOR:
VISCOSIDAD:
Se determina tocando las diferentes partes de las heces con un agitador de vidrio.
Viscosas (pastosas): Se adhieren al agitador.
Poco viscosas: No se adhieren al agitador.
Grasas: Tienen gran maleabilidad moldeándose en ellas el agitador, como tierra amasada.
EXAMEN MACROSCÓPICO
Para este examen se tritura ligeramente en un mortero con agua una cantidad de heces del tamaño de
una nuez. Luego se pasa a una placa de Petri y colocamos esta sobre una cartulina blanca y negra. Los
fragmentos de carne aparecen de color gris o marrón.
El tejido conectivo tiene forma de membranas o paquetes filamentosos. Se puede confundir con moco.
Para diferenciarlo se añadirá ácido acético al 30% y si desaparece es tejido conectivo.
El moco se puede presentar de varias formas: amorfo, transparente, opaco (con restos celulares) y
membranoso (en forma de paquetes o moldes de la mucosa).
La presencia de moco es importante, salvo en los recién nacidos, y siempre deberá resaltarse en el
informe.
ANÁLISIS MICROSCÓPICO
Nos aporta datos más fidedignos acerca de los trastornos de la digestión. Para ello habrá que instaurar
la alimentación explicada anteriormente, si no se hace así la significación del estudio es muy limitada.
Para este estudio se hace una suspensión de heces en agua destilada o suero fisiológico.
Se coge una cantidad de heces, del tamaño de una castaña, y se coloca en un mortero, copa, vaso de
precipitado o tubo de ensayo.
Se añade agua o suero fisiológico y mezclar con una varilla hasta formar una papilla homogénea y fina,
ni muy fluida ni muy espesa.
Se coloca una gota de esta suspensión en un portaobjetos y se pone un cubreobjetos encima, cuidando
que se extienda formando una capa delgada, homogénea, sin burbujas de aire. No se debe aplastar el
cubre.
Se observará con el objetivo de x10 aumentos, obteniendo una visión de conjunto, y luego se enfoca
con el de x40 aumentos.
Cuando se trata de heces líquidas, se debe hacer una mezcla homogénea y se /coloca una gota
directamente al portaobjeto.
Podremos observar:
CÉLULAS: Normalmente epiteliales de las últimas porciones del intestino. No son patológicas.
HEMATÍES: Es muy raro observarlos ya que se digieren. Si aparecen será a causa de evacuación muy
rápida o hemorragias en tramos intestinales bajos.
Hay unos, característicos del parasitismo intestinal, llamados cristales de Charcot-Leyden, presentando
una forma típica de agujas de brújula.
FIBRAS MUSCULARES: Se pueden observar de diferentes formas dependiendo del grado de digestión:
Mal digeridas:
Parcialmente digeridas:
Trozos más pequeños con los bordes redondeados y las estrías longitudinales.
Bien digeridas:
La presencia de fibras musculares mal digeridas se llama CREATORREA. Se puede deber a una
insuficiencia gástrica o pancreática.
ALMIDÓN. Para su investigación se añade a la gota de emulsión fecal una gota de lugol. Los gránulos de
almidón tomarán un u otro dependiendo del grado de digestión. También podrán estar dentro de
células o aislados:
LÍPIDOS.
Para observarlas mejor usaremos el reactivo Sudam III. Una gota de este colorante se mezclará con una
gota de la suspensión fecal. Los lípidos o grasas se encuentran en las heces en forma de:
Ácidos grasos: Tienen aspecto cristalino, en forma de escamas o agujas finas rectas o curvadas.
Difícilmente se tiñen.
Si la temperatura es fría (< 20º C) las gotas se transforman en masas o placas algo amarillentas o rojas.
En la observación lo mas importante son las grasa neutras. Se informa positivamente a partir de 15-20
gotas/campo (objetivo x40). El aumento patológico de grasas en heces se llama ESTEATORREA. Si en el
microscopio se observa mas de 60 gotas /campo es seguro esteatorrea
Algunas veces, para observar las grasas se calienta el portaobjetos suavemente a la llama. De esta
forma todas las grasas (ácidos grasos, neutros y jabones) se transforman en gotitas de color rojo-
anaranjado (con Sudan III). En el estudio de las grasas en heces puede inducirnos a error, los
supositorios, los enemas oleosos y los portaobjetos y cubreobjetos mal desengrasados.
ESTUDIO FÍSICO-QUÍMICO
pH
Varía entre 6,8 y 7,2 dependiendo del régimen alimenticio. Los valores normales se van a modificar
según el proceso digestivo. La medición se hace impregnando un papel indicador con una varilla de
vidrio que contenga heces. La lectura se efectúa por el reverso del papel.
SANGRE
También se llama este análisis investigación de hemorragias ocultas. Se puede observar sangre en
heces, de color rojo, proveniente de fisuras anales o hemorroides. Esto no se considera importante.
Cuando proviene de hemorragias gástricas, duodenales, cáncer de colon, etc., la sangre se digiere,
tomando las heces un color oscuro, casi negro. Esta sangre si es importante.
Para este análisis es importantísimo que el paciente durante los 2-3 días anteriores a la toma de
muestras se someta a un régimen riguroso (“blanco”), sin carne, pescados, embutidos, lentejas,
espinacas, plátanos etc., es decir alimentos ricos en peroxidasas. Tampoco deberá tomar
medicamentos que contengan hierro o hemoglobina, o que puedan provocar pérdidas sanguíneas
como salicilatos o esteroides. La alimentación permitida consiste en: Huevos, patatas, cebolla, arroz,
garbanzos, pan y leche.
La mayoría de las pruebas para detectar hemorragias ocultas en heces se basan en la determinación de
peroxidasas como indicativo del contenido de hemoglobina. Las más importantes son:
REACCIÓN DE LA BENCIDINA:
Sobre un papel de filtro manchado de heces, se ponen unas gotas de bencidina y agua oxigenada de 10
volúmenes. Si el resultado es (+), como resultado de la presencia de peroxidasa, se formará un halo de
color verde-azulado en torno a la mancha.
La prueba es igual que la anterior pero en lugar de poner bencidina se pone guayaco
Estas pruebas son muy inespecíficas y dan habitualmente falsos positivos. La reacción de la bencidina es
más sensible que la del guayaco.
Tiene más sensibilidad y especificidad que las anteriores. Se basa en la capacidad del Cr radioactivo
(Cr51) para ser fijado por los hematíes y por el hecho de no ser reabsorbido en el tracto
gastrointestinal. Así pues, es excretado por las heces en las que puede ser medido por
espectrofotometría de rayos ã.
PIGMENTOS BILIARES
VERDE............................ BILIRRUBINA.
PRUEBA DE GRIGAUT:
VERDE..................................... BILIRRUBINA.
ROJO........................................ ESTERCOBILINÓGENO.
SUBLIMADO GRIGAUT
ENZIMAS PROTEOLÍTICAS:
Se intenta comprobar la presencia de Tripsina, Quimiotripsina, etc. Las heces normales (hasta una
dilución 1/100) licuan la gelatina.
La prueba se realiza aplicando una gota de diferentes diluciones (1/5, 1/10, 1/50, 1/100) de la heces a
estudiar de heces sobre una película de gelatina. Se considera un resultado positivo si la gelatina queda
disuelta en ½ hora.
Las heces deben de ser recientes, no debe dejarse pasar más de una hora desde que son emitidas hasta
que se realiza el examen.
Hay que diluir una parte de heces en dos partes de agua destilada, mezclar bien y centrifugar a un
número bajo de revoluciones (1.500 rpm.). Se toman 15 gotas del sobrenadante, se colocan en un tubo
de vidrio y se le añaden dos gotas de ClH 1 N. Luego calentamos para desdoblar la sacarosa.
Una vez que ha enfriado el líquido anterior, se añade una tableta de CLINITESTÒ (Ames) para azúcares
reductores y se deja disolver. A continuación comparamos con la escala de colores que lleva el reactivo.
El resultado se da en g./litro. El resultado será negativo si es inferior a 2,5 g./l. Entre 2,5 y 5 es dudoso y
será positivo si es mayor de 5 g./l.
PRÁCTICA N° 10
UROCULTIVO
Las infecciones del tracto urinario (UTI) son unas de las infecciones más comunes en humanos. En
general un limitado número de especies bacterianas son responsables de la mayoría de estas
infecciones. La presencia de microrganismos en orina se denomina bacteriuria , sean o no ,
causantes de infección. UTI puede ocurrir a toda edad desde neonatos hasta ancianos, en
personas sanas o comprometidas y debilitadas. Es responsable por el aumento de los costos en
programas de salud, como en morbilidad, mortalidad y pérdida de productividad.
MATERIALES
Muestras de orina
Placas con agar sangre de carnero (AS) o CLED Placas con agar Mc Conkey (McC)
PROCEDIMIENTO
Las placas con AS y McC que se utilizarán en el urocultivo deben estar a temperatura ambiente.
Rotular las placas.
Si el asa calibrada no es descartable, esterilizar el asa de siembra flaméandola en el mechero
Bunsen hasta que se ponga rojo vivo. Dejar enfriar el asa.
Tomar el frasco con la muestra de orina, abrir la tapa y flamear la boca del frasco en el mechero
Bunsen.
Tomar la muestra de orina con el asa de siembra estéril introduciéndola y sacándola del frasco en
forma vertical Tapar el frasco con la muestra.
Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra, hacia delante y
hacia atrás. Luego, sin quemar el asa, el inóculo se disemina uniformemente con trazos
perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa
Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey. Esterilizar el asa de siembra en el mechero.
Concluida la siembra, cerrar la placa y colocarla con la parte que tiene el medio de cultivo hacia
arriba. Incubar la placa de AS y Mc Conkey a 35 – 37° C en condiciones aeróbicas por 24 horas.
Tomar una azada de la muestra sin centrifugar, realizar un extendido y colorearlo por GRAM. Hacer
un sedimento de orina y observarlo. Realizar su reporte.
Lectura
Realizar la evaluación a las 24 horas, si no hay crecimiento bacteriano dejar incubar hasta las 48
horas.
RESULTADOS
FUENTES DE INFORMACION
1.-CUMITECH 2A: LABORATORY DIAGNOSIS OF URINARY TRACT INFECTIONS. ASM PRESS., MARCH
1987.-
PRÁCTICA N° 11
MATERIALES
Placas de Agar Manitol sal Placas de Agar chocolate Agar Triple Sugar Iron Agar Lisina Iron LIA
Reactivo de oxidasa Medio SIM
Agar Citrato de Simmons Tubos con agar Urea Tubos con caldo plasma
PROCEDIMIENTO
Realizar los cultivos en una cabina de bioseguridad o cerca del mechero Bunsen.
Utilizar placas con medios de cultivo cuando éstas hayan alcanzado la temperatura ambiente.
Con una porción de la muestra hacer un extendido y colorearlo por GRAM. Inoculación de la
muestra:
Muestra de aspirado purulento: Con una pipeta Pasteur inocular una gota de la muestra en un
extremo de la superficie de la placa de agar de sangre de carnero, agar Mc Conkey, agar manitol
sal y agar chocolate.
Hisopado de secreción: Frotar rotando el hisopo sobre la superficie de los medios de cultivo
tratando que toda su superficie haga contacto con el agar, empezando con el agar chocolate, agar
sangre de carnero, Mc Conkey u otros medios.
Esterilizar el asa de siembra en el mechero de Bunsen hasta que se ponga rojo vivo. Dejar enfriar
el asa.
Utilizando el asa de siembra y tomando como referencia central el inóculo de la muestra, realizar
la siembra por dispersión agotamiento en cuatro cuadrantes de la placa con el propósito de
obtener colonias aisladas.
Concluida la siembra, cerrar la placa y colocarla con la parte que tiene el medio de cultivo hacia
arriba.
RESULTADOS
FUENTES DE INFORMACION
-ESSENTIAL PROCEDURES FOR CLINICAL MICROBIOLOGY H.D.Isenberg. American Society for
Microbiology, 1998.-
-CUMITECH 23: INFECTION OF THE SKIN AND SUBCUTANEOUS TISSUE. ASM PRESS., JUNE 1988.-
-CLINICAL LABORATORY TECHNICAL PROCEDURE MANUALS 3RD EDITION NCCLS DOCUMENT GP2-
A3 1996.-
PRÁCTICA N° 12
Las infecciones vaginales son aquellas en las cuales el agente etiológico coloniza la mucosa vaginal
produciendo secreción asintomática. Los tres agentes etiológicos más importantes son la flora
vaginal mixta aeróbica y anaeróbica , levaduras y Trichomonas vaginalis .menos común es el
Streptococcus agalactiae y Staphylococcus aureus
.MATERIALES
Hisópos estériles
medio de transporte Amies. Tubos con suero fisiológico estéril
agar chocolate
agar sangre
agar Mac Conkey
agar Sabouraud
agar manitol sal
Reactivos de la tinción de Gram.
Agar Triple Sugar Iron
Agar Lisina Iron LIA
Reactivo de oxidasa
Medio SIM
Agar Citrato de Simmons
Tubos con agar Urea
Tubos con caldo plasma
PROCEDIMIENTO:
DIA 1:
Suspender la muestra en suero fisiológico sobre una lámina portaobjetos, colocar la laminilla
cubreobjetos y observar al microscopio con el lente de 400X buscando la presencia de
Trichomonas vaginalis y levaduras.
Sembrar la muestra en las placas de agar sangre, agar chocolate, agar Mac Conkey y Sabouraud
según las indicaciones del profesor.
DIA 2:
Las placas de cultivo se deben leer a las 48-72 horas de incubación. La presencia de colonias
sospechosas con las pruebas de identificación presuntiva y posteriormente definitivas indican la
presencia de patógenos en las muestras en las muestras.
RESULTADOS:
FUENTE DE INFORMACION
Murray, PR et al., Manual of Clinical Microbiology, 9th Ed., ASM Press, Washington, DC, 2007 .
Baron, EJ et al., Cumitech 17A: Laboratory diagnosis of female genital tract infections, Amer.
Soc. for Microbiol., Washington DC, 1993.
PRÁCTICA N° 13
ESPERMATOGRAMA
MUESTRA: Semen
RECOLECCION DE LA MUESTRA
Por lo general, no se deben usar condones para recoger semen porque pueden comprometerse la
viabilidad de los espermatozoides.
El coitus interruptus no es aceptable para hacer la recolección del semen, porque puede perderse
la primera porción del eyaculado, que suele contener la mayor concentración de espermatozoides.
Además habrá contaminación celular y bacteriana de la muestra y el pH ácido del líquido vaginal
ejercerá una influencia adversa sobre la motilidad de los espermatozoides.
Las muestras deben protegerse de las temperaturas extremas (no menos de 20 oC ni más de 40
oC) durante el traslado al laboratorio.
El recipiente debe rotularse con el nombre del sujeto, la fecha y la hora de la recolección y la
eyaculación y la duración de la abstinencia.
Una muestra de semen normal se licúa dentro de los 60 minutos de la eyaculación, a temperatura
ambiente. En algunos casos la licuefacción no es completa a los 60 minutos y esto debe ser
informado. La presencia de hilos de moco, señal de licuefacción incompleta, puede interferir con
el recuento celular. El semen normal puede contener gránulos gelatinosos que no se licúan y cuya
significación no es conocida.
ASPECTO
Puede aparecer menos opaca cuando la concentración de espermatozoides es muy baja y marrón
cuando contiene glóbulos rojos.
VOLUMEN
El volumen del eyaculado debe ser medido en un cilindro graduado de base cónica o por
aspiración de la muestra completa en una pipeta, utilizando un aparato de aspiración mecánica. Si
la muestra será utilizada para un espermocultivo, se debe utilizar material estéril para su manejo.
Las jeringas plásticas y agujas de inyección no deben ser utilizadas para este propósito pues
alteran la calidad del semen, especialmente la motilidad.
CONSISTENCIA
La consistencia de la muestra (viscosidad) puede ser estimada aspirando la muestra en una pipeta
de 5 ml. Y permitiendo la libre caída de gotas, en las que se observa la longitud del filamento
formado. En una muestra normal se observan gotas pequeñas y bien definidas mientras que en
una muestra de consistencia aumentada se formará un filamento mayor de 2 cm. Como método
alternativo, la consistencia se puede evaluar introduciendo una varilla de vidrio en la muestra y
observando la longitud del filamento que se forma al retirarla. Este no debe exceder los 2 cm.
Una consistencia anormal, por ejemplo debida a un alto contenido de moco, puede interferir con
la determinación de varias características del semen, como ser la motilidad y la concentración.
PH
Se distribuye una gota de semen sobre papel de pH (rango de 6.1 a 10). Al cabo de 30 segundos el
color de la zona impregnada debe ser uniforme y se compara con la cartilla de calibración para
determinar el pH de la muestra.
Todo tipo de papel de pH utilizado para este análisis debe ser controlado con estándares de pH
conocido antes de ser usado.
El pH de la muestra debe ser medido dentro de los 60 minutos de la eyaculación y debe caer en el
rango de 7.2 a 8.0. cuando el pH es menor de 7.0 en una muestra con azoospermia se debe
sospechar disgenesia del conducto deferente, las vesículas seminales o el epidídimo.
EXAMEN MICROSCOPICO
Este preparado se examina con una magnificación de 400 x. El peso del cubreobjetos distribuye la
muestra para una visión óptima y se debe permitir la estabilización de la misma durante un
minuto. Dado que la motilidad y la velocidad de los espermatozoides son muy dependientes de la
temperatura, estas determinaciones deben hacerse a una temperatura tan próxima a los 37 oC
como sea posible. El resto del examen debe ser realizado a temperatura ambiente, procurando
estandarizar entre los 20 y 24 oC.
MOTILIDAD
G0 inmóviles
Usualmente hace falta contar 4 a 6 campos para acumular 100 espermatozoides y obtener un
porcentaje de cada categoría. Se repite la cuenta con otros 100 espermatozoides y se obtiene un
promedio para cada categoría, que luego será informado.
Es recomendable repetir este recuento de la motilidad en una segunda gota de semen preparada
de la misma manera. Los resultados de ambos recuentos, si no difieren en más del 10 %, se
promedian. Para verificar si se cumple este criterio, se suman los porcentajes de categorías G3,
G2, G1 (motilidad total) y se establece que la suma de los valores de las dos muestras no difiera en
más de 1/20 entre cada recuento. En aquellas muestras en que la motilidad total sea menor al 50
%, se compara el porcentaje de espermatozoides clase
Como regla general, un eyaculado normal debe contener menos de 5 x 106 células redondas/ml y
el número de leucocitos no debe exceder 1 x 10 6/ml.
Las células redondas no identificadas como leucocitos incluyen las espermáticas, espermatocitos y
espermatogonias. Debido a que solo se incluyen los espermatozoides en el recuento, la
concentración de las otras células germinales y los leucocitos pueden ser calculados de manera
relativa a aquellos.
Si (N) es la cantidad de un tipo celular dado contado en los mismos campos que 100
espermatozoides y si (S) es el recuento de espermatozoides en millones por ml, se puede calcular
la concentración de la célula dada en millones por ml (C) con la siguiente fórmula, puesto que la
relación entre el número de células y el número de espermatozoides se considera igual en el
extendido y en el semen:
C= N x S 100
100
AGLUTINACION
Mezclese una gota (10 a 15 ul) de semen fresco con una gota de solución de eosina al 0,5% en un
portaobjetos y cúbrase con el cubreobjetos.
Al cabo de dos minutos obsérvese el preparado a 400 X con luz intensa o contraste de fase.
RECUENTO DE ESPERMATOZOIDES
Así, para las muestras que contienen menos de 20 x 106 espermatozoides/ml, se puede emplear
una dilución 1:10 mientras que para las que contienen más de 100 x 106 espermatozoides/ml
corresponde una dilución 1:50.
La muestra diluida se debe mezclar muy bien y luego se pasa una gota a una cámara de Newbauer.
Déjese reposar por uno a cinco minutos, con preferencia en una cámara húmeda para reducir a un
mínimo el secado. En este tiempo las células sedimentan y luego se cuentan con el microcopio
óptico o de contraste de fase con una magnificación de 100 X o 400 X. Solo se cuentan los
espermatozoides con cola. Los espermatozoides sin cabeza y las cabezas sin cola no se cuenta.
Factores de corrección
Dilución
25 10 5
(semen + diluyente)
1+9 10 4 2
1 + 19 5 2 1
1 + 49 2 0.8 0.4
De Mortimer, 1985.
Defectos de tamaño/forma de la cabeza: puede ser grande, pequeña, acintada, piriforme, amorfa,
vacuolada (> 20% del área ocupada por vacuolas no teñidas), doble y toda combinación entre
estos.
Defectos del cuello y pieza media: incluye la ausencia de cola (cabezas aisladas), cola mal insertada
o doblada (la cola en un ángulo de 90º con respecto al eje longitudinal de la cabeza), pieza media
distendida, irregular o doblada, pieza media anormalmente fina (falta la batería de mitocondrias),
y toda combinación entre éstos.
Defectos de la cola: puede ser: corta, múltiple, en horquilla, rota (ángulo > 90 grados), de espesor
irregular, arrollada, con gota citoplasmática terminal, y toda combinación entre éstos.
Las gotas citoplasmáticas mayores de 1/3 de la superficie de la cabeza normal. Las gotas
citoplasmáticas se encuentran, habitualmente, en el cuello y pieza intermedia pero algunas células
inmaduras pueden tenerla en algún lugar de la cola.
Sólo se cuentan las células reconocibles como espermatozoides. Las células inmaduras no se
cuentan como espermatozoides. Las cabezas aisladas se cuentan como formas anormales, pero no
se cuentan las colas libres. Si se nota una alta incidencia (>20% de los espermatozoides) de formas
en “cabeza de alfiler” esto debe ser informado separadamente. Estas formas no se cuentan como
defectos de la cabeza ya que rara vez contienen cromatina o estructuras propias de la cabeza.
Se pone una gota de semen en el medio de un portaobjetos limpio y se apoya otro portaobjetos
limpio sobre el primero. La gota se extiende entre ambas superficies que luego se separan
suavemente, deslizando uno sobre otro, para obtener dos extendidos.
El contorno de todas las partes del espermatozoide debe ser claramente visible. Con la tinción de
Papanicolaou la cabeza aparece teñida de azul claro en la región acrosomal y azul oscuro en la
zona posacrosomal. La pieza media puede teñirse de rojo, pero esto es considerado anormal sólo
cuando está groseramente distendida o es irregular. La cola también se teñirá de azul. Las gotas
citoplasmáticas, usualmente ubicadas detrás de la cabeza en la pieza media, se tiñen de verde.
Volumen 2 ml o más
PH 7,2 – 7,8
(categorías G3 y G2), o 25% o más con progresión lineal rápida a los 60 min. De la recolección.
DIAGNOSTICO DE VIH
Introducción:
El VIH el 1/2 una prueba rápida del paso es un immunoensayo rápido para la detección cualitativa
de tipo 1 y/o de type-2 del virus de inmunodeficiencia humana (VIH) en suero o plasma.
Principio:
El VIH el 1/2 una prueba rápida del paso es un immunoensayo cromatográfico del flujo lateral
basado en el principio de la técnica doble del antígeno-emparedado. La membrana está cubierta
con los antígenos recombinantes del VIH en la línea región de la prueba del dispositivo. Cuando un
espécimen es aplicado en un extremo de la membrana, reacciona con la conjugación cubierta
antígeno del oro del VIH en la prueba. La mezcla entonces emigra cromatográfico por la acción
capilar y reacciona con los antígenos recombinantes del VIH en la membrana en la línea región de
la prueba.
Si el suero o el plasma contiene los anticuerpos a HIV-1 o a HIV-2, una línea coloreada aparecerá
en la línea región de la prueba, demostrando un resultado positivo. La ausencia de la línea
coloreada de la prueba indica que el suero o el plasma no contiene los anticuerpos anti-VIH,
demostrando un resultado negativo. Una línea coloreada aparecerá siempre en la línea de control
región servir como control procesal.
Esto indica si han agregado al volumen apropiado de espécimen y esa membrana ha ocurrido el
wicking.
Característica de producto:
Sensibilidad: 100%
Especificidad: 99.8%
POSITIVO NEGATIVO
FUENTES DE INFORMACION:
Carrasco, Luis coord. / Almendral del Rio, Jose Ma. coord., "Virus patogenos", Madrid Helice
Fundacion BBVA cop. 2006
Flint, S. J., "Principles of virology Molecular biology, pathogenesis, and control of animal viruses",
Washington, D.C. ASM Press cop. 2004
Medvedeff, MG; Mereles. BE; Vedoya, MC; Chade, ME. . Guia De Trabajos Practicos. Catedra De
Micologia. Universitaria, 2007
T. J. Kindt, R.A. Goldsby y B. A. Osborne. Inmunología de Kuby (Sexta edición) Editorial McGraw-Hill
(2007).
Speroff L, Fitz M. Endocrinología ginecológica clínica e infertilidad, 7th ed. Lippincott Williams &
Wilkins; 2004.
S.A.U. 2007