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Pruebasbioqumicas 140410211118 Phpapp02 PDF
Pruebasbioqumicas 140410211118 Phpapp02 PDF
PARA ENTEROBACTERIAS
Susana González Gurrola
3°B
La mayor parte de las bacterias, teñidas con Gram, las podemos clasificar
como gram positivas o gram negativas, otras tinciones diferenciales, como la
ácido resistente, se aplican a otro tipo de bacterias.
Por ejemplo, las bacterias entéricas gram negativas, forman un grupo muy
grande y heterogéneo cuyo hábitat natural es el tracto gastrointestinal de
humanos y otros animales. Esta familia, Enterobacteriaceae, incluye a varios
patógenos que causan síndromes diarreicos.
Existen flujogramas, para la identificación bacteriana, mediante pruebas
bioquímicas de microorganismos.
El tubo se incuba a 35 °C
durante 24 a 48 horas.
RESULTADOS
• Salmonella
• Arizona Microorganismos Negativos
• Citrobacter • Edwarsiella
• Enterobacter • Yersinia enterocolítica
• Klebsiella • Escherichia coli
• Serratia licuefaciensis • Shigella
• Pseudomonas cepacia • Yersinia pseudotuberculosis
• Otras especies de Moraxella
• Proteus morganii
Ureasa
COLOR: ROSADO
• Escherichia coli
• Providencia
Voges-
Proskauer
PRINCIPIO
Voges-Proskauer es un epónimo doble, en honor de dos microbiólogos que
trabajaron a principios del siglo xx. Estos investigadores fueron los primeros en
observar la reacción de color rojo producida en medios de cultivo
adecuados después del tratamiento con hidróxido de potasio. Luego se
descubrió que el producto activo del medio, formado por el metabolismo
bacteriano, es el acetil metil carbinol, producto de la vía del butilenglicol.
• El acido pirúvico, se metaboliza da como resultado la producción de
acetoina (acetil metil carbinol).
• Los microorganismos del grupo Klebsiella- Enterobacter-Hafnia-Serratia
producen acetoina como producto metabólico final principal del
metabolismo de la glucosa y forman cantidades pequeñas de ácidos
mixtos.
• En presencia de oxigeno atmosférico e hidróxido de potasio al 40%, la
acetoina se convierte a diacetilo y el a-naftol sirve de catalizador para
producir un complejo de color rojo.
MEDIOS DE CULTIVO
El medio utilizado con mayor frecuencia es el caldo de rojo de metilo-
Voges-Proskauer (MR/VP) segun la formula de Clark y Lubs.
La prueba no debe leerse mas allá de una hora después de dejar los tubos en
reposo, porque los cultivos Voges-Proskauer negativos pueden producir un
color cobrizo, que se puede interpretar como un positivo falso.
Microorganismos positivos
• Klebsiella pneuminiae
• Yersinia enterocolítica
Microorganismos negativos
• Escherichia coli
• K. ozaenae
Rojo de
Metilo
PRINCIPIO
El rojo de metilo es un indicador de pH con un rango entre 6 (amarillo) y 4,4
(rojo). El pH al cual el rojo de metilo detecta los ácidos es mucho mas bajo
que el pH correspondiente a otros indicadores utilizados en medios de cultivo
bacteriológicos. Por lo tanto, para provocar un cambio de color, el
microorganismo en estudio debe producir grandes cantidades de acido del
sustrato de hidratos de carbono que se utilice.
Microorganismos positivos
• Escherichia coli
• Especies de Yersinia
Indol
SIM: Sulfuro indol movilidad
MIO: Movilidad indol ornitina
PRINCIPIO
Es uno de los productos de degradación metabólica del aminoácido
triptófano.
• Producción de Indol
• Movilidad
PRODUCCIÓN DE ÁCIDO
SULFHÍDRICO
La bacteria reacciona con el tiosulfato de sodio por medio de una reacción
de reducción que da un sulfito y un sulfato.
El gas incoloro SH2 reacciona con una sal pesada, citrato férrico de amonio
para producir un precipitado negro insoluble, sulfato ferroso.
PRODUCCIÓN DE INDOL
El triptófano es un aminoácido que puede ser oxidado por ciertas bacterias
para formar tres metabolitos principales: indol, escatol e indolacético.
Una vez transcurrido este tiempo, agregar 15 gotas del reactivo haciendo
que se deslicen por la pared del tubo.
1. Descarboxilación de ornitina
2. Producción de indol
3. Movilidad
• Descarboxilación de ornitina: mide la
capacidad enzimática de un
organismo para descarboxilar un
aminoácido para formar una amina,
con la consiguiente alcalinidad.
• Producción de indol: El triptófano es un
aminoácido que puede ser oxidado
por ciertas bacterias para formar tres
metabolitos principales: indol, escatol
e indolacético.
PROCEDIMIENTO
Inoculación: picadura en forma vertical
Tiempo: 28-48 hrs
Temperatura 35 -37°C
RESULTADOS
Ornitina descarboxilasa
Positivo: color púrpura del medio
Negativo: color amarillo en el fondo del tubo que puede ser púrpura al final
Indol:
Positivo: anillo rojo en la superficie del medio
Negativa: No se Produce color / Color naranja en la superficie del medio,
indica desarrollo de escatol
Movilidad:
Positiva: los organismos móviles migran de la línea de siembra y se difunden
en el medio provocando turbiedad.
Negativa: crecimiento bacteriano acentuado siguiendo la línea de siembra.
Microorganismos ornitina
positivos
• Especies de Enterobacter
• Proteus mirabilis Microorganismos ornitina
• Proteus morganii negativos
• Yersinia enterocolitica • Especies de Klebsiella
• Enterobacter aglomerans
• Proteus vulgaris
• Proteus rettgeri
• Yersinia pestis
• Yersinia pseudotuberculosis
Bacterias Producción Indol Movilidad Producción H2S
Salmonella typhi - + +/-
Otras Salmonellas - + +/-
E. coli + +/- -
Klebsiella +/- - -
Enterobacter - + -
Citrobacter - + +
Shigella +/- +/- -
TSI: Triple azúcar
Hierro
MEDIO DE CULTIVO
Agar hierro de klinger (AHK)
Composición:
Estracto de carne Extracto de levadura
Peptona Proteasa
Lactosa Dextrosa
Sulfato ferroso Cloruro de Na
Tiosulfato de Na Agar
Agua destilada Indicador: Rojo fenol
Ácido: amarillo
Alcalino: Rojo
Medio no inoculado: naranja rojizo, pH 7.4
PRINCIPIO
Una vez que se ha reducido toda la glucosa piruvato, este se metaboliza por
el ciclo de Krebs formando productos finales ácidos.
El ácido en el medio hace virar el amarillo del indicador de pH, rojo fenol.
A 6 horas de la incubación, la zona de la estría y el fondo del tubo tendrán un
color amarillo (fermentador de glucosa)
Si el fondo permanece rojo, no hay variación de pH (no fermentador de
glucosa)
Si el color rojo es mas intenso que el original, hay alcalinización (no es
miembro de la familia enterobacteriaceae)
Al agotar la glucosa la bacteria utiliza la lactosa o sacarosa.
Después de 18-24 hrs, el medio permanece amarillo, reacción ácido sobre
ácido (A/A). Fermentador de lactosa.
La producción de gas romperá el agar o lo empujara hacia arriba. Reacción
A/A más gas.
Si no utiliza la lactosa, hará uso de proteínas o aminoácidos.
El metabolismo proteico se produce en la superficie de la zona inclinada
donde el oxígeno es abundante.
18-24 hrs de incubación: zona inclinada roja fondo del agar amarillo
(metabolismo anaerobio de glucosa inicial). Reacción alcalina sobre ácido
K/A.
Las bacterias que fermentan glucosa también pueden formar productos
alcalinos a partir de la utilización de la peptona, sobre la zona inclinada.
Reacción K/K.
PROCEDIMIENTO
Inoculación: picadura y estría en pico de flauta.
Tiempo: 18-24 hrs
Temperatura:35-37°C
RESULTADOS
COLOR: LILA
Composición:
Peptona Extracto de carne
Piridoxal L-lisina
Citrato de amonio Tiosulfato de sodio
Glucosa Agua destilada
Agar Indicador de pH: Purpura de bromocresol
Ácido: Amarillo pH 5.2
Alcalino: Púrpura pH 6.8
Medio no inoculado: Purpura intenso brillante pH 6.0
PRINCIPIO