UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA DEL USUMACINTA

DIVISIÓN DE BIOTECNOLOGÍA

ANALISIS INSTRUMENTAL

M. C. MANUELA DE JESÚS CAMBRANES CHI

Determinación Espectrofotométrica de KMno4

PRESENTAN
Daniel Gómez Gómez
Jorge Martínez Vázquez
Pedro López Villegas

Educación Tecnológica con Valores:

Una solución pertinente

Emiliano Zapata Tabasco, Octubre 18 de 2010.

 INTRODUCCIÓN

Un método espectrofotométrico está basado en la medida directa de la absorción

de radiación electromagnética por parte de una muestra, cuantificable a través de
la Absorbancia, y la correlación de esta variable con la concentración de la
especie de interés en dicha muestra.
Todo analito molecular tiene la capacidad de absorber ciertas longitudes de onda
características de la radiación electromagnética. En este proceso, la radiación es
transferida temporalmente a la molécula y, como consecuencia, disminuye la
intensidad de la radiación. Dicha disminución, debida a la absorción
experimentada por el analito, puede ser cuantificada utilizando diversas
magnitudes, siendo la Absorbancia, A, la más comúnmente utilizada en la
espectrofotometría de UV-VIS. Dicha absorbancia se define por la expresión:

Donde A es la Absorbancia, P0 la potencia del haz de radiación incidente y P la

potencia de dicho haz tras atravesar la muestra.

LEY DE BEER
De acuerdo con la ley de Beer, la absorbancia está relacionada linealmente con la
concentración de la especie absorbente, c, y con la longitud de la trayectoria de la
radiación en el medio absorbente o camino óptico, b. Esto es:

Donde a es una constante de proporcionalidad llamada absortividad. Cuando la

concentración c se expresa en moles por litro, y b en centímetros, la constante de
proporcionalidad se denomina absortividad molar, y se designa por el símbolo e, y,
puesto que la absorbancia es una magnitud adimensional, tendrá unidades de L
cm-1 mol-1. En este caso, la ley de Beer adquiere la forma:
ESPECTROS DE ABSORCIÓN

Un espectro de absorción es una representación gráfica de la absorbancia de un

analito (o de otra magnitud equivalente) en función de la longitud de onda de la
radiación, l, (o de otro parámetro relacionado con la energía de la radiación
utilizada). El máximo de absorbancia obtenido en el espectro de absorción de un
analito, nos dará la longitud de onda que proporciona la mayor sensibilidad
posible, y por tanto será la que se utilizará en el análisis espectrofotométrico de
dicho analito.
Todas las disoluciones que presentan color, absorben radiación electromagnética
perteneciente al espectro visible, el cual puede dividirse en varias zonas según se
muestra en la tabla siguiente:

En dicha tabla, la columna del "color" indica la porción del espectro que es
absorbida, mientras que la correspondiente al "color complementario" indica la
porción de radiación electromagnética que no absorbe la muestra y que por tanto
es transmitida a través de ella y puede ser captada por el ojo humano (color de la
disolución). Así, por ejemplo, una disolución de color amarillo absorbe la radiación
de color azul, y por tanto cabe esperar que presente un máximo de absorbancia
en la zona de longitud de onda en la banda de 435-480 nm
ANÁLISIS CUANTITATIVO

Para llevar a cabo el análisis cuantitativo de una especie mediante la

espectroscopía de absorción molecular, es preciso realizar una etapa previa de
calibración. En dicha etapa se mide la absorbancia de varias muestras de
concentración conocida, las cuales serán utilizadas para, mediante "comparación",
calcular la concentración de una muestra problema tras medir su absorbancia.
Para llevar a cabo la etapa de calibración, se representa la absorbancia de las
muestras de concentración conocida (llamadas patrones) a la longitud de onda de
máxima absorbancia, frente a la concentración de dichas muestras. De esta
manera se obtiene la Curva de Calibración. Según la ley de Beer, el resultado
obtenido será una línea recta, cuya expresión matemática puede ser obtenida
mediante un tratamiento de ajuste estadístico por mínimos cuadrados.
 OBJETIVO DE LA PRÁCTICA

• Determinar cuantitativamente la concentración de la muestra problema

MnO4 mediante espectroscopia de absorción molecular UV-Vis.
• Conocer el procedimiento para la preparación de la recta de calibrado.
• Conocer el procedimiento para la medición de la absorbancia de la muestra
patrón.
• Interpretar los resultados del análisis aplicado en el espectrofotómetro
UV/Vis.
 MATERIALES Y REACTIVOS

MATERIALES
• 3 matraces aforados de 50mL.
• 1 matraz aforado de 100 mL.
• 3 vasos de precipitado de 100 mL.
• 2 pipetas graduadas de 1ml
• 2 cubetas para espectrofotómetro de cuarzo y plástico
• Agua destilada
• 3 micropipetas

REACTIVOS
 KMnO4
 METODOLOGÍA
Preparación de la solución madre para la obtención del espectro de
absorbancia.
La determinación se realizo de la siguiente forma:
1. Disolución 0.1M de KMnO4 en 100 ml
2. Con la pipeta graduada, se tomo un 1ml de la disolución 0.1M de KMnO 4 y
se vertió en el vaso de precipitado y se aforó a 100 ml.
3. En un matraz aforado de 100 ml, se preparó una disolución de KMnO 4 0.01
M. Para ello, se tomó una cantidad de la disolución de KMnO 4 0.1M en un
vaso de precipitado y se pipeteó el volumen necesario.
4. A partir de esta disolución de KMnO4 0.01M, se preparó las demás
disoluciones con las siguientes concentraciones 2 x 10-5 M, 6 x 10-5 M y 1 x
10-4 M.
5. Todos se aforaron a 50 ml.(ver anexo para los cálculos estequimétricos)

OBTENCIÓN DEL ESPECTRO DE ABSORBANCIA

1) De las tres muestras diluidas se tomó treinta microlitros de cada una de

ellas.
2) Se tomó 30 microlitros de blanco (agua destilada) y se coloco en la celda de
cuarzo, para registrar la absorbancia.
3) Una vez tomada la lectura, en la grafica se seleccionó el pico que tenga
mejor apariencia.
4) La medición de la absorbancia de los tres patrones debe realizarse en
orden creciente de concentraciones y utilizando una misma cubeta. Para
ello, después de cada medida:
a. Desechar la disolución patrón ya medida.
b. Limpiar la cubeta con agua destilada varias veces.
c. Limpiar la cubeta con la nueva disolución patrón una vez.
d. Llenar la cubeta con la nueva disolución patrón y medir.
5) Se colocó 30 microlitro de la muestra menos diluida a (1x10-4 M), en la celda
y se colocó en el espectrofotómetro para un scan o barrido y determinar su
absorbancia.
6) De nueva cuenta se colocó 30 microlitro de la muestra diluida a (6x10 -5 M),
en la celda y se colocó en el espectrofotómetro para un scan o barrido y
determinar su absorbancia.
7) Se colocó 30 microlitro de la muestra más concentrado a (2x10 -5 M), en la
celda y se coloco en el espectrofotómetro para un scan o barrido y
determinar su absorbancia.
 RESULTADO

La absorbancia de blanco 526 nm,