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DOI: http://dx.doi.org/10.15517/isucr.v17i35.25563
Resumen
El presente artı́culo contiene los detalles de la validación del método analı́tico para la cuantificación de ace-
taminofén, en este caso para aplicar a la prueba de uniformidad de contenido a tabletas de 500 mg, por la técnica de
espectroscopia ultravioleta a una longitud de onda de trabajo de 242 nm, empleando como disolvente ácido clorhı́dri-
co a una concentración de 0,1 M. Los parámetros evaluados fueron la linealidad, exactitud, repetitividad y precisión
intermedia, siguiendo estrictamente la guı́a y polı́tica de validación del Ente Costarricense de Acreditación (ECA),
para un método normalizado modificado.
* Máster en Sistemas Modernos de Manufactura y Bach. en Laboratorista Quı́mico. Docente UCR-Recinto Grecia. esteban.perezlopez@ucr.ac.cr
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InterSedes VALIDACIÓN DE UN MÉTODO PARA CUANTIFICACIÓN DE ACETAMINOFÉN, VOL. 17, NO. 35, 2016
Todos los parámetros evaluados arrojaron resultados satisfactorios por lo que se considera que el método es lineal,
preciso y exacto para el fin que se desarrolló; en este caso para la prueba de uniformidad de contenido en su primera
etapa donde la especificación es que el valor de aceptación (AV) calculado no sea mayor a L1 = 15, analizando 10
dosis individualmente según la USP 38 .
Palabras clave: Validación de métodos; control de calidad; espectrofotometrı́a ultravioleta; acetaminofén; parace-
tamol.
Abstract
This article contains the details of the validation of the analytical method for the quantification of acetaminophen,
in this case to apply to the uniformity test of content to tablets of 500 mg, by the technique of UV spectroscopy at a
wavelength of work 242 nm, using hydrochloric acid as solvent at a concentration of 0.1 M. the parameters evaluated
were linearity, accuracy, repeatability and intermediate precision, strictly following the guidance and validation policy
Costa Rican Accreditation Entity (ECA) for a modified standardized method.
All evaluated parameters yielded satisfactory results so it is considered that the method is linear, precise and accu-
rate for the purpose it was developed; in this case to test for content uniformity in its first stage where the specification
is that the acceptance value (AV) calculated not greater than L1 = 15, 10 doses analyzed individually according to
USP 38 .
Las actividades de confirmación de la calidad pa- Para [Prieto. Y. 2008] en la década de 1960 surge
ra la OMS (1999) tienen como objetivo realizar prue- en la industria farmacéutica norteamericana el concepto
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de Buenas Prácticas de Fabricación (BPF), a partir de do, con el fin de mejorar el tiempo de realización de las
varios incidentes relacionados con la fabricación de me- pruebas, de no emplear otras técnicas que conllevan ma-
dicamentos, que culminaron en serios perjuicios, incluso yor consumo de reactivos, horas analista, horas equipo y
la muerte de pacientes. Con él se establece un modo de requieren mayor capacidad técnica del operador.
“hacer bien” o “de forma correcta” todos los procesos
En este trabajo se presenta la validación de un
relacionados con la fabricación de los medicamentos, de
método espectrofotométrico para la cuantificación de
manera que se evite la posible afectación de la identidad,
acetaminofén en la prueba de uniformidad de conteni-
la seguridad y la eficacia de los productos, lo cual podrı́a
do aplicada a tabletas de 500 mg, comprendiendo solo el
constituir un riesgo para la salud de la población.
primer criterio de la prueba, en el que se analizan diez
Las buenas prácticas de laboratorio (BPL) han dosis individuales y cuya especificación es que el valor
logrado fomentar y corroborar que un medicamento de aceptación (AV) calculado no sea mayor a L1 igual a
cumpla con las especificaciones del fabricante. Esto por 15 (L1 = 15) según establece la farmacopea oficial.
medio de métodos válidos de análisis, para garantizar la
eficacia, seguridad y homogeneidad de un medicamento,
con resultados fiables y documentados desde la práctica
1 Fundamento
analı́tica [Lavaut, M & Rodrı́guez, J. 2009].
Por lo que en conjunto las BPL, las farmacopeas Para [Arias. T. 1999] el efecto de un fármaco está dado
y los métodos introducidos estandarizados, forman las por el principio activo, el cual es una sustancia o mezcla
bases para constituir un adecuado plan de calidad que de sustancias afines dotadas de un efecto farmacológi-
asegure el cumplimiento de parámetros obligatorios, con co especı́fico o que, sin poseer actividad, al ser adminis-
respecto a estándares internacionales, logrando la homo- trados al organismo la adquieren luego que sufren cam-
geneidad de las actividades de manufactura. bios en su estructura quı́mica, como es el caso de los
profármacos.
Para [Lavaut, M & Rodrı́guez, J. 2009], lo ante-
rior indica que no solo se debe considerar aspectos fı́si- En el caso especı́fico de la acetaminofén, el cual
cos de calidad, sino también las formas analı́ticas de co- es uno de los analgésicos de más amplio uso en el
rroborar las propiedades del producto, siguiendo méto- mundo, su buen perfil de seguridad, eficacia y el he-
dos adecuados, o adecuando nuevos métodos, según las cho de ser un medicamento de venta libre, hacen que
restricciones de trabajo, pero que sean funcionales y la formulación y la utilización de este fármaco sea muy
equivalentes en cuanto a resultados con los oficiales. común, tanto en la población adulta como en la pediátri-
ca [Fernández. D, Fernández. D & Mancipe. L. 2010].
Según [Caridad. M, Garcia. P, Porto.] los méto-
dos espectrofotométricos resultan de gran utilidad para Según [Hendrickson R.G. 2015] la acetaminofén
el control de la calidad porque son rápidos, sencillos y o paracetamol, es un analgésico y antipirético no este-
económicos. Basado en esto, se determina la importan- roideo, cuyo mecanismo de acción es único, inhibiendo
cia de utilizar un método por espectrofotometrı́a valida- la enzima ciclooxigenaza y prostaglandinas responsables
de la aparición del dolor. Debido a su efectividad y gran
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consumo de la población, la acetaminofén es un medica- en las unidades que sirven de muestra de un determi-
mento foco de constante investigación y del cual se debe nado lote. Se recomienda aplicar esta prueba a las for-
velar por su calidad y monitoreo. mas farmacéuticas que contienen una cantidad relativa-
mente pequeña de un principio activo sumamente poten-
Según las Buenas Prácticas de la OMS (2010),
te [Arias. T. 1999]. Aunque según la farmacopea de los
el control de calidad de productos farmacéuticos son por
Estados Unidos puede aplicarse en todos los casos.
lo general análisis repetitivos de muestras de ingredien-
tes farmacéuticos activos o de un número limitado de La validación del método para la uniformidad, en
productos farmacéuticos, por lo tanto es asegurar que este caso, se realiza por medio de la técnica de espectro-
las materias primas, productos intermedios, materiales fotometrı́a ultravioleta, por las ventajas que esta técnica
de envase y productos farmacéuticos terminados cum- tiene. Para reseñar la técnica espectrofotométrica y par-
plan con las especificaciones establecidas para identidad, ticularmente la absorción en la región ultravioleta, esta
contenido, pureza y otras caracterı́sticas. utiliza radiación del espectro electromagnético compren-
dida entre 100 y los 300 nm que provoca transiciones
La seguridad de que un producto cumple con
electrónicas entre los orbitales atómicos, lo que provoca
las especificaciones, sólo es relevante si los métodos
la excitación de electrones de valencia, y como conse-
a través de los cuales se llega a los resultados, son
cuencia se pueden identificar espectros donde la longitud
oficiales o están validados. De aquı́ la importancia de
de onda de los picos se puede relacionar con determina-
contar con procedimientos validados, los cuales según
dos enlaces. Para generar el espectro se emplea un espec-
[Durán, D. 2011] se define como la acción en la que se
trofotómetro el cual genera un barrido espectral, que es
prueba que cualquier material, proceso, procedimiento,
empleado para identificar sustancias y su posterior cuan-
actividad, equipo o mecanismo empleado en la fabrica-
tificación [Skoog, Holler & Nieman. 2001].
ción o control, logrará los resultados para los cuales se
destina. La obtención y documentación de datos demos- Lo anterior es la base del método de espectro-
trativos de la confiabilidad de un método debe producir fotometrı́a ultravioleta que se utiliza en este estudio, sin
el resultado esperado dentro de los lı́mites definidos. embargo, para asegurar que genera resultados fidedignos
se debe realizar su adecuada validación la cual se realizó
Con lo que respecta a la metodologı́a para el
basándose en la polı́tica y guı́a de validación del ECA
análisis cuantitativo de acetaminofén (determinación
(2012). Según esta guı́a, el procedimiento a validar se
de contenido y uniformidad de contenido), la prue-
encuentra dentro de la clasificación de “situación nor-
ba oficial aplicable a las tabletas según la Farma-
malizada modificada”, es decir, parte de un método ya
copea de los Estados Unidos (USP 38) es por la
estandarizado el cual ha sufrido modificaciones para ser
técnica de cromatografı́a lı́quida de alta resolución
aplicable al fin que se desea y para el cual se debe eva-
[Delfino. R, Radovancich. D & Sarno. M. 2006].
luar: linealidad, precisión, precisión intermedia y exacti-
En lo que respecta a la prueba de uniformidad, tud. En este caso, es importante reseñar que hay metodo-
esta se describe como el examen para determinar la va- logı́as de cuantificación de acetaminofén por espectrofo-
riabilidad de la cantidad del principio activo presente tometrı́a ultravioleta en diferentes farmacopeas, pero en
todos los casos difieren en condiciones con respecto a las
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con el mismo disolvente Por último se mide la absor- muestran en el cuadro 1; y se calculan los miligramos
bancia de los patrones y las muestras de acetaminofén, de acetaminofén presentes, ası́ como el porcentaje de lo
en el espectrofotómetro UV con las condiciones que se etiquetado en cada caso.
Cuadro 1: Condiciones de trabajo del espectrofotómetro para todos los parámetros de la validación.
Equipo Marca Modelo Haz λ (nm) Lámpara Cubeta Blanco
reactivo
Para la repetibilidad y precisión intermedia se modelo Lambda 20 y uno marca “P&G”. Se calculan los
realizaron tres pesadas independientes de polvo finamen- miligramos de acetaminofén presentes y el porcentaje de
te morterizado de tabletas previamente pesadas de aceta- lo etiquetado en cada caso.
minofén, en balones de 100 ml, equivalentes a cada una
La exactitud se realizó comparando los porcen-
de las tres concentraciones (80, 100 y 120 %), se llenan
tajes de recuperación con respecto al valor verdadero,
¾ partes del balón con HCL 0.1 M se llevan 10 minutos
independientemente de la cantidad de analito empleado
a baño ultrasónico, se afora con el mismo disolvente y
en la prueba.
se filtran. Posterior a esto se toman alı́cuotas de 1 ml en
balones de 50 ml obteniendo concentraciones de 8, 10 y
12 mg/l. Se toman seis repeticiones de cada concentra-
ción. Se prepara una disolución madre de acetaminofén
3 Resultados
en HCl 0.1 M, con una concentración aproximada a los
500 mg/L en un balón de 50 mL, a partir de un patrón
de pureza conocida, y se diluye 5 mL en 50 mL con HCl A continuación se muestra en la figura 1 la superposi-
0.1 M, para obtener una concentración de 50 mg/L. De ción de las tres curvas de calibración correspondientes a
esta se toman alı́cuotas de 3 a 7 ml en balones de 50 ml las curvas realizadas para la validación del parámetro de
y se aforan con el mismo disolvente. Por último se mide linealidad del método, en particular todas las curvas re-
la absorbancia de los patrones y las muestras de aceta- sultaron en la misma ecuación y se obtuvo un coeficiente
cuadro 1.
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1 99,10
En el cuadro 2 se muestran los resultados de las 2 101,47
3 101,72
concentraciones obtenidas para cada nivel, de las tres 8,00 1,30 ≤2 %
4 101,68
curvas de calibración que comprenden la validación de
5 101,76
la linealidad del método, y se observa gran similitud en- 6 99,17
Cuadro 3: Resultados de la validación del parámetro de En el cuadro 4 se muestran los resultados obtenidos por
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1 97,17 98,53
2 100,01 100,75
3 98,60 100,95
8,00 1,40 1,36 ≤2 %
4 96,45 97,92
5 98,38 99,54
6 96,51 97,92
1 101,00 98,9
2 100,45 98,42
3 101,72 99,68
10,00 0,49 0,47 ≤2 %
4 101,05 98,74
5 100,94 99,05
6 100,35 98,42
1 99,22 97,83
2 98,85 97,42
3 99,21 97,69
0,34 0,31 ≤2 %
4 12,00 99,46 97,83
5 99,74 98,23
6 98,89 97,42
Promedio 99,33 98,62
DS 1,53 1,04
DSR % 1,54 1,06
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Cuadro 5: Resultados para la exactitud del método, comparados con el valor de referencia obtenido del método oficial.
Conjunto de % etiquetado Valor de refe- % de recupe- Parámetro de
datos promedio rencia ( %) ración aceptación
1 100,58 99,68
2 101,28 100,90 100,38 97-103 %
3 102,26 101,35
Promedio 101,37 100,47
DSR % 0,83 0,83
4 Discusión
mayor a 0,995 lo cual se cumple eficientemente y existe grama estadı́stico Minitab, se indicó un valor de P de
una correlación significativa. 0,631 el cual es mayor a 0,05 por lo que no se recha-
za la hipótesis nula, la cual indica que las varianzas no
Debido a lo anterior, el modelo de la regresión difieren entre sı́. Se demuestra que no existe suficiente
puede explicar el 100 % de la variación, consecuente- evidencia estadı́stica que demuestre que las varianzas de
mente un valor de “y” puede predecir sin complicacio- las tres curvas de calibración varı́an entre ellas. Además,
nes una respuesta de “x”, por lo tanto existe una relación queda demostrado en la figura 2 que los intervalos se so-
estrecha entre las variables, lo cual es procedente de un breponen, indicando similitud y comportamiento homo-
comportamiento lineal. cedástico, aunque la varianza de la curva tres es mayor,
no se demuestra una diferencia significativa.
También se demostró la homocedasticidad como
criterio de linealidad, ya que para que un método sea li- Además el intercepto de la ecuación de las rec-
neal se desea un comportamiento homocedástico, es de- tas es de b= 0.0109 la cual esta aceptablemente cerca de
cir, similitud entre varianzas como se ilustra en la figura cero y la ecuación obtenida fue la misma para las tres
2.
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curvas con una pendiente de 0.0646, por lo que no hay lo que no se rechaza la hipótesis nula, es decir, no existe
desviación significativa (DS=0) respecto a la regresión. suficiente evidencia estadı́stica para determinar que los
resultados difieren entre sı́ con un nivel de significancia
Seguidamente en la figura 3, se muestra el análi-
de a=0,05. Por lo tanto ambos métodos demostraron re-
sis de residuos correspondiente a la validación de la li-
sultados similares y con una DSR % aceptable para am-
nealidad del método.
bos métodos.
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miento es aceptable, no obstante, en la curva de calibra- reproducido y utilizado con total confiabilidad ba-
ción 3 se presentó una tendencia mayor 102,26 %, esta jo las condiciones en las que fue validado. Si el
no sobrepasa el lı́mite máximo de aceptación 97-103 % método requiere alguna modificación para ser uti-
de recuperación, quedando dentro de lo establecido co- lizado por el mismo u otro laboratorio, deberı́a ser
mo satisfactorio por lo que se considera que el método sometido a una nueva validación para garantizar
es exacto. la efectividad del mismo bajo las nuevas condicio-
nes.
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