Está en la página 1de 6

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA


CARRERA DE Q.F.B.
DESARROLLO ANALÍTICO
Laboratorio

CUESTIONARIO
Potencia Microbiológica

Equipo 2: López Hernández Cruz Alfredo, Martínez Esteban Dulce C., Pacheco Silva
Alejandro

Conteste las siguientes preguntas de manera clara y ordenada, indique en cada respuesta la
referencia consultada.

1. Defina los siguientes términos;


Antibiótico: es una substancia producida por un microorganismo, o una substancia similar
(producida completamente o en parte por síntesis química), la cual en concentraciones bajas
inhibe el crecimiento de otros microorganismos.
Potencia microbiológica: es la comparación del grado de inhibición de microorganismos
sensibles y específicos determinada por concentraciones conocidas del antibiótico analizado
y una sustancia de referencia.
Esterilización: es la aplicación de un agente biocida o proceso físico aplicado a un producto
o preparación con el objetivo de matar o remover todos los microorganismos.
Sanitización: destrucción de las formas vegetativas de los patógenos.
Halo de inhibición. Zona alrededor de un disco de antibiótico en el que se no se produce
crecimiento en una placa de agar inoculada con el microorganismo.

2. Explique del desarrollo del crecimiento microbiológico mediante una gráfica.

FASE VELOCI CARACTERÍSTICA


DAD K
A Rezago 0 Ninguna bacteria se multiplica

B Aceleración ≠K Algunas bacterias se multiplican

C K Todas las bacterias se multiplican al


Exponencial mismo tiempo

D Retardo ≠K Se agotan nutrientes y se acumulan


desechos

E 0 Las bacterias ya no se multiplican


Estacionario

F -K Se muere la mayoría de las bacterias


Declinación o
muerte

3. Lea el procedimiento MGA 0100. Valoración Potencia Microbiológica de antibióticos que


indica la FEUM y…
a. Menciona los diferentes métodos para determinar la potencia microbiológica de un
antibiótico.
Método de cilindro-placa.
Método turbidimétrico.
b. Esquematice con un diagrama los procedimientos indicados.
c. Para determinar la potencia de una ampicilina ¿qué cepa utiliza?
Micrococcus luteus (ATCC: 9341)
Condiciones de incubación:
Medio:1 Temperatura: 32 a 35 °C Tiempo: 24 horas.
Medio de cultivo (capa siembra): 11 Volumen (mL/100mL): 1.5.

4. ¿Cómo relaciona la ley de Fick en el fundamento del ensayo cilindro en placa?


Cuando en un sistema termodinámico multicomponente hay un gradiente de
concentraciones, se origina un flujo irreversible de materia, desde las altas concentraciones
a las bajas. A este flujo se le llama difusión. La difusión tiende a devolver al sistema a su
estado de equilibrio, de concentración constante. La ley de Fick nos dice que el flujo
difusivo que atraviesa una superficie (J en mol cm-2 s -1) es directamente proporcional al
gradiente de concentración. El coeficiente de proporcionalidad se llama coeficiente de
difusión (D, en cm 2 s -1). Para un sistema discontinuo (membrana que separa dos cámaras)
esta ley se escribe: δ c J D ∆ = ​⋅ donde ∆c es la diferencia de concentraciones molares y δ el
espesor de la membrana.
Tiene relación con el ensayo cilindro en placa ya que este se basa en la difusión del
antibiótico desde un cilindro vertical, a través de una superficie con agar inoculado con el
microorganismo de prueba. La difusión origina zonas de inhibición del microorganismo
cuyo tamaño (diámetro) está en relación con la concentración del antibiótico.

5. Menciona las condiciones que se requieren para realizar la esterilización y/o sanitización de
los materiales que se utilizan en este ensayo.
2
Autoclave: 1.05 Kg/ cm a 121 °C por 15 min.
Estufa: 170 °C por 2 horas.

6. Explique al menos 5 factores que pueden afectar el desarrollo de los halos de inhibición en
un ensayo cilindro en placa.

- ​Distribución de los cilindros; deben colocarse equidistantemente para evitar


interferencias entre los halos
-​ ​Cantidad de antibiótico usado

- ​Profundidad estandariza; dado que existe una relación inversamente proporcional

entre el diámetro del halo formado y el grosor de la placa de agar solidificado.


- ​Concentración del inóculo; la magnitud del diámetro del halo es inversamente

proporcional a la concentración del inóculo con las demás concentraciones


constantes.
- ​Temperatura de incubación; todas las placas estudiadas deben recibir la misma

temperatura de incubación para evitar variabilidad entre el crecimiento del


microorganismo.
-​ ​Tiempo de incubación

-​ ​Velocidad de servido de las diluciones de antibiótico en los pozos de las placas

- ​Concentración crítica; concentración del agente microbiano por debajo del cual no

se puede evitar el crecimiento del microorganismo.

7. Diseñe un ensayo para establecer dosis- respuesta.


Preparación de la solución madre de Sref de ampicilina.
Pesar 10 mg de Sref de ampicilina, colocarlos en un matraz volumétrico de 100 mL,
solubilizar con 30 mL de agua y llevar a la línea de aforo. Esta disolución tiene una
concentración de 0.1 mg/mL.
Preparación de la solución buffer de fosfatos (B3)
Colocar 16.73 g de bifosfato de potasio y 0.523 g de fosfato diácido de potasio en un matraz
volumétrico de 1000 mL, disolverlos con 300 mL de agua y llevar a volumen con agua,
verificar el pH de la solución el cual debe ser de 8±0.1.
De la solución madre obtener diluciones utilizando la solución buffer de fosfatos a las
concentraciones descritas en la siguiente tabla.

Dilución Concentración (μg/mL)

a 0.05
b 0.075

c 1

d 1.25

e 0.15

Preparar 12 placas para la curva dosis respuesta, colocar seis cilindros en intervalos de 60°
con un radio de 2.8 cm. Tres placas por concentración exceptuando la concentración media
c, en cada placa colocar tres tubos de concentración c alternados con tres tubos de la
concentración respectiva. Después del periodo de incubación (24 horas) medir el diámetro
de las zonas de inhibición.
Preparación de la línea dosis-respuesta.
Promediar las zonas de inhibición de cada una de las concentraciones de la Sref de los
cuatro conjuntos de tres placas. Con el promedio de las 36 lecturas de la concentración
media de la Sref (punto “c”) se corrigen los promedios de cada una de las concentraciones
de la Sref (puntos a, b,d y e).
La corrección se efectúa de la siguiente manera: si el promedio de las 36 lecturas de la Sref
(punto “c”) es mayor al valor promedio de las lecturas del punto “c” en cualquiera de las
concentraciones de la curva, la diferencia se suma; si por el contrario el promedio de la Sref
de 36 es menor, la diferencia se resta.
Trazar la línea dosis-respuesta en papel semilogarítmico de doble ciclo usando la
concentración en μg/mL o en U/mL en las ordenadas (escala logarítmica y el diámetro de
las zonas de inhibición en las abscisas (escala milimétrica). La línea dosis-respuesta se traza
a través de los puntos corregidos o bien calcular el punto más alto (H) y el punto más bajo
(L) con las siguientes fórmulas:
L=(3a+2b+c-e)/5
H=(3e+2d+c-a)/5
Donde:
L= Diámetro de la zona de inhibición en milímetros para la concentración más baja de la
Sref.
H= Diámetro calculado de la zona de inhibición en milímetros para la concentración más
alta de la Sref.
a,b,c,d,e= Promedios de los valores corregidos para las concentraciones de la Sref.
8. Diseñe un ensayo 2+2 para potencia microbiológica
El método se realiza en placas de agar en el que el "microorganismo de referencia se
siembra masivamente, colocando posteriormente las soluciones de estándar y las muestras
en cilindros desde los que se dan la difusión del antibiótico, tanto el antibiótico de
referencia como la muestra se colocan en concentraciones altas y bajas. Cada uno de los
cuatro cilindros que contiene la caja incluye respectivamente una de las cuatro dosis, este
diseño se dice es simétrico o balanceado. El principio de este método es el resultado de dos
líneas paralelas, cada una correspondiente a la muestra o al estándar. Las soluciones de la
muestra y las del patrón de referencia tienen la misma potencia nominal, su diferencia en
potencia es revelada por la distancia vertical entre las dos líneas paralelas.

DISEÑO:
MUESTRA: 0.05µg/mL y 0.10µg/mL
ESTÁNDAR: 0.05µg/mL y 0.10µg/mL

9. Investigue el procedimiento matemático para el ensayo 2+2.

Donde:
S​1​: es el diámetro en mm del halo de inhibición del estándar a la concentración más baja
S​2​: es el diámetro en mm del halo de inhibición del estándar a la concentración más alta
T​1​: es el diámetro en mm del halo de inhibición de la muestra a la concentración más baja
S​1​: es el diámetro en mm del halo de inhibición de la muestra a la concentración más alta

10. ¿Cuál es la importancia de realizar este procedimiento analítico?


En los antibióticos puede haber ligeros cambios químicos que se traducen en pérdida de actividad
antimicrobiana que no pueden demostrarse por métodos químicos, por esta razón, en caso de duda
respecto a la actividad de un antibiótico, los métodos de valoración microbiológica prevalecen sobre
los métodos químicos.
El uso de los medicamentos a pesar de ser considerados como un bien social, no está exento de
riesgos entre ellos los relacionados con la dosificación, el incumplimiento de condiciones durante el
diseño, procesamiento, almacenamiento, distribución, prescripción, dispensación y modalidades de
conservación y uso por los pacientes. Por lo anterior, para todos los medicamentos, especialmente
para los antibióticos, es indispensable garantizar su eficacia y calidad, pues de lo contrario se pone
en riesgo la salud del consumidor