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Microbiología General

BIO250
Química y Farmacia

Morfología y Agrupaciones Bacterianas


Taxonomía Bacteriana

Alejandro Hidalgo Ph.D.

Bioquímico, Universidad de Chile


Ph.D. en Bioquímica, State University of New York
Clasificación, características y dimensiones

de los seres vivos


3 Dominios: contienen organismos Procariontes y Eucariontes
Procariontes y Eucariontes
Los tres dominios de la vida
Bacteria Archaea Eukarya

Estructura procarionte procarionte eucarionte


celular
DNA/cromosoma circular circular Lineal, multiples
Cromosomas
Histonas ausentes presentes presentes

DNA plasmidial presente ausente ausente

Núcleo definido no no si
por membranas
Peptidoglicán Normalmente si no no

Ribosomas 70s 70s 80s

RNApol solo un tipo Varios tipos Tres tipos


Diferencias entre procariontes y eucariontes

Cual de las siguientes es una diferencia clara entre una


célula eucarionte y una procarionte

a) Poseer pared celular


b) Poseer flagelo
c) Tener ribosomas
d) Poseer mitocondrias
e) Poseer membrana plasmática
¿Qué tan pequeños son los microorganismos?
Unidad Ojo Humano Microscopio de Luz Microscopio Electrónico

3 cm Yema de Huevo

Huevo de pescado
1 mm

100 mm Ovulo humano

Células Animales-Vegetales
10 mm

1 mm Escherichia coli (bacteria)

100 nm Virus de gran tamaño

1 Metro = 102 cm =103 mm = 106 mM = 109 nm


¿Qué tan pequeños son los microorganismos?

Bacilos en la punta de un alfiler

100 μm 20 μm 1 μm
Microscopía

Microscopio de van Leeuwenhoek

1632 – 1723 Microscopio de Hooke


1635 – 1703

Microscopio óptico
Microscopio primitivo

Microscopio de Van Leeuwenhoek

Dibujo original de los “animáculos”


observados por Leeuwenhoek
Engraving of sperm cells seen under a microscope by Antonie
van Leeuwenhoek who was the first to observe them
Robert Hooke (1635-1703)

También diseña un
microscopio que utiliza
para observar las
estructuras microscópicas
de la materia viva

En 1665 publica su libro MICROGRAPHIA donde


por primera vez se utiliza la palabra célula para
referirse a la unidad fundamental de la vida
Evolución del microscopio óptico
Refutando la teoría de la generación espontanea

Camara de Tyndall para


preservar caldo en aire
que es opticamente puro

Tanto la cámara de Tindall como el matraz cuello de cisne fueron


presentados en un concurso organizado por la academia de ciencias de
París en 1859 para refutar la cuestionada teoría de la generación espontanea

Sin contacto con aire contaminado los caldos permanecieron estériles…..


Pauster continuo sus investigaciones y contribuyó mas tarde con:

- El proceso de pasterización: calentar líquidos a 56°C

-Vacuna contra la rabia hecha a partir de la espina dorsal de un conejo


infectado con el virus de la rabia

Sin embargo no existía una forma de obtener cultivos puros de


microorganismos
France v/s Germany

Existía rivalidad y competencia feroz por caracterizar y encontrar cura


contra los microorganismos que producen enfermedad

Pero la clave vino de la cocina!

No existía métodos para obtener cultivos puros, pero Angelina, la


esposa de Walther Hesse, asistente de Robert Koch, sugirió usar
agar… el mismo que ella usaba en la cocina para solidificar caldos y
dulces pero para el medio de cultivo
La técnica de aislamiento que se desarrollo
en el Laboratorio de R. Koch es la misma
que aun se utiliza

Las investigaciones de Koch lo llevaron a


describir el Bacillus anthracis y luego a
establecer los 4 postulados de Koch

1. El agente patógeno debe estar presente en los animales enfermos y ausentes en los sanos

1. El agente debe ser cultivado en un cultivo axénico puro aislado del cuerpo del animal

2. El agente aislado en un cultivo axénico debe provocar la enfermedad en un animal susceptible


al ser inoculado

3. El agente debe ser aislado de nuevo de las lesiones producidas en los animales de
experimentación y ser idéntico al inoculado originalmente.
Microscopía

Microscopía óptica Microscopía electrónica


Campo claro (luz)
Transmisión (en 2D)
Campo oscuro
Barrido (3D)
Fluorescencia, etc.
Aumento efectivo: 1.200 veces Aumento efectivo: 1.000.000 de veces
Microscopía Óptica
Campo claro Campo oscuro

Cianobacteria Bacterias Espermios Treponema pallidum


(al fresco) (teñidas)

Bacterias

Fluorescencia
Microscopía Electrónica de transmisión

Virus Bacteria en división

Amplificación de 106 veces

Es análogo al microscopio óptico de campo claro pero utiliza electrones en vez de luz
Microscopía Electrónica de barrido

Bacterias creciendo en el estoma Bacilos

Permite tomar imágenes tridimensionales porque capta los electrones que


rebotan

Esto es posible, ya que las células son cubiertas con una delgadísima película de
un metal denso
Tinciones
Tinciones para microscopía óptica

Tinciones diferenciales
Tinciones simples o inespecíficas

Gram positivo Gram negativo

Levaduras Bacterias
Tinción Gram

Tinciones específicas o especiales

Cápsulas Esporas
Tinciones simples
Levaduras

Bacterias
Tinciones diferenciales

Gram positivo Gram negativo

Creada por el danés Hans Christian Gram en 1884

Es capaz de clasificar a las bacterias en dos grupos diferentes según


sus propiedades de tinción

Corresponde a la tinción más importante en la microbiología

Indicada para la observación de morfología y agrupación bacteriana

https://www.youtube.com/watch?v=aJpZzF3h3kc
Protocolo de la tinción de Gram

Gram (-)

Gram (+)
La pared celular define a las Gram(+) y Gram(-)

Gram (-) Gram (+)


La pared celular define a las Gram(+) y Gram(-)

Gram (-) Gram (+)


La pared celular define a las Gram(+) y Gram(-)

Gram (+) Gram (-)


Tinciones especiales: Ziehl-Neelsen
También llamada tinción de ácido – alcohol resistencia

Mycobacterium

Se calienta una solución fucsina básica, la cual penetra a la célula con la ayuda de fenol

Se decolora con solución ácido – alcohol y se agrega tinción de contraste (Az. de metileno)

Sólo las bacterias ácido – alcohol resistentes retienen el color rojo


Tinciones especiales: Cápsula

Se realiza como tinción negativa con tinta china


Luego se hace una tinción con safranina, fucsina o azul de metileno
Tinciones especiales: Esporas

Se realiza con verde malaquita (el cual presenta afinidad por las esporas) y
una tinción de contraste.
Resumen de tinciones especiales

Mycobacterium

cápsula
bacteria

Klebsiella

Tinción Ziehl-Nielsen o Ácido resistente


Tinción de Esporas
Tinción de Cápsula
Bacillus cereus (esporas en verde)
Morfología
de la bacteria y la colonia
Morfología celular bacteriana
Morfología celular: Forma bacteriana

ESFÉRICA
Staphylococcus aureus cocos, cocáceas

CILÍNDRICA ALARGADA
Bacillus cereus bacilos

CILÍNDRICA CURVA
Vibrio cholerae bacilos curvos

ESPIRAL
Treponema pallidum espirilos, espiroquetas
Morfología celular: forma bacteriana

ALARGADA
Actinomyces israeli filamentosa
Agrupaciones bacterianas
Planos de división celular definen la agrupación bacteriana
Esféricas (Cocos, cocáceas)

PARES (Diplo)

Moraxella catarralis

Microscopía electrónica de barrido Microscopía óptica; tinción de Gram

Agrupaciones
pequeñas y
empacadas
(Tétradas,
octetos)

Sarcina lutea
Esféricas (Cocos, cocáceas)
CADENA (del griego: Strepto)

Microscopía electrónica de barrido Microscopía óptica; tinción de Gram

Streptococcus pyogenes
Esféricas (Cocos, cocáceas)
RACIMO
(del griego: Staphylo)

Microscopía electrónica de barrido Microscopía óptica; tinción de Gram

Staphylococcus aureus
Cilíndrica Alargada (Bacilos)

Escherichia coli

Bacillus subtilis

Microscopía electrónica de barrido

Microscopía óptica; tinción de Gram


Otras morfologías

Cilíndrica curva
(Bacilos curvos)

Vibrio cholerae

Microscopía electrónica de barrido

Espiral
(Espirilos, espiroquetas)

Treponema pallidum

Microscopía óptica; tinción de Gram


Otras morfologías

Alargada
(Filamentosas)

(Bacteria filamentosa
presente en una
muestra de agua)

Microscopía óptica; tinción de Gram


Microscopía electrónica de barrido
Principales agrupaciones bacterianas

Morfología Agrupación

Estructura : Pared Celular Proceso Involucrado: División Celular


Ejemplos: Ejemplos:
Cocáceas Cadenas
Bacilos Racimos
Vibrios Duplas
Espirilos Tétradas, Octetos

1era Etapa en el Diagnóstico Microbiológico

Identificación del agente etiológico

Tratamiento
Morfología Macroscópica
Siembra y Aislamiento

Tubos Medio líquido y sólido: Placas Medio Sólido:


Sólo siembra Siembra y aislamiento
Morfología Macroscópica
Siembra y aislamiento en placa

Colonia
aislada
Morfología Macroscópica

Bacterias

colonia

Aislamiento en placa

Las colonias sólo pueden ser observadas en medio sólido. En medio


líquido, las bacterias se encuentran en suspensión.
Morfología Macroscópica
Identificación Bacteriana

Cultivo puro o axénico

Morfología de colonia y de tinción de Gram

Propiedades Propiedades Características


Bioquímicas Antigénicas de crecimiento

Fermentación de glucosa Reacciones serológicas Temperatura


Utilización de citrato Anticuerpos específicos Aerobiosis
Producción de H2S Anaerobiosis
etc. etc.
Identificación Bacteriana
Propiedades Propiedades Características
Bioquímicas Antigénicas de crecimiento

Características genéticas o moleculares

Porcentaje Homología en la
de G+C secuencia del genoma

Codones utilizados para codificar


Principalmente aquellos que codifican
los distintos aminoácidos.
para RNA ribosomales
TTA, TTG, CTT, CTC, CTA y CTG
Leucina
Resumen
• La microbiología es la ciencia que estudia los microbios

• Dimensiones de los microbios 1-10 µm; virus: <100nm

• Antoine Van Leeuwenhoek, creo el microscopio y se considera el padre de


la microbiología.

• El desarrollo del microscopio en combinación con las tinciones a permitido


la observación y clasificación
Preguntas

Cuál es la tinción mas importante?

En que se basa esta tinción?

En que contribuyó en la clasificación?


La microbiología estudia sólo a las bacterias?

R: NO! Esa es la bacteriología

La microbiología estudia a los microorganismos en general. Que son los


seres vivos que no se pueden observar a simple vista.

Esto incluye:

bacterias hongos virus protozoos.


Cuál es la principal diferencia entre procariontes y eucariontes?

Hay varias pero lo mas importante y evidente es:

la presencia organelos delimitados por membranas en las


células Eucariontes

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