A BIOMIMETIC BIOELECTRONIC TONGUE: A

SWITCH FOR ON- AND OFF- RESPONSE OF ACID

SENSATIONS

BIOINGENIERÍA

INTEGRANTES:
CABALLERO HERNÁNDEZ HUGO ALAN
HERNÁNDEZ SÁNCHEZ DIANA PATRICIA
VAGAS DÁVILA MILTON

GRUPO: 160701

FECHA DE ENTREGA: 11 DE FEBRERO DE 2019

 OBJETIVOS

 Realizar un análisis de un artículo acerca de la bioelectrónica, que nos

permita conocer la importancia, los métodos y los avances que esta ha tenido en la
actualidad, para el estudio y desarrollo de instrumental electrónico útil para el
diagnóstico, tratamiento e investigación en las áreas relacionadas con la biología y
la salud.
 Identificar los conceptos básicos de la bioelectronica que nos permitan hacer
una relación con el desarrollo de la nanotecnología.

PALABRAS CLAVE

Lengua bioelectrónica, bomimética con sensor híbrido, sensación de sabor agrio,

respuesta On, respuesta Off, Matriz de microelectrodos (MEA).

INFORMACIÓN ARTÍCULO
Título del artículo: A biomimetic bioelectronics tongue: A switch for On- and Off-
response of acid sensations. Vol. 92, 15 de Junio de 2017, Pag. 523-528

Investigadores: Wei Zhang, Peihua Chen, Lianqun Zhou, Zhen Qin, Keqiang Gao,
Jia Yao, Chuanyu Li, Ping Wang.

Información correspondiente a autores:

Correo electrónico: zhangw@sibet.ac.cn (W. Zhang), chenpeihua@ibp.ac.cn (P.
Chen), cnpwang@zju.edu.cn (P. Wang).
Lugar de desarrollo: Laboratorio clave de CAS de Diagnóstico Bio-médico,
Instituto Suzhou de Ingeniería y Tecnología Biomédica, Academia China de
Ciencias, Suzhou 215163, China.
Publicación: Biosensores y bioelectronica.
Editor: Elsevier.
Recibido el 30 de septiembre de 2016; Recibido en forma revisada el 24 de octubre
de 2016; Aceptado el 25 de octubre de 2016
Todo los derechos reservados para © 2017Elsevier B.V.
 RESUMEN
En este estudio, se desarrolló una lengua bioelectrónica biomimética híbrida como
un interruptor para la sensación de ácido On y Off. Para analizar teóricamente estas
respuestas pareadas, primero se construyó un modelo matemático de tipo Hodgkin-
Huxley de células receptoras del gusto sensorial de células enteras basadas en las
grabaciones electrofisiológicas de pinzas de parche. Se simularon y analizaron la
corriente de entrada proveniente de los canales de detección de ácido basados en
estímulos ácidos con diversos pH, los potenciales de acción evocados que brotan
durante y después de los estímulos ácidos con diferentes receptores de detección
de ácido y la frecuencia de fibridez basada en el pH ácido. Posteriormente, se
exploró la lengua bioelectrónica basada en MEA (matriz de microelectrodos) y las
células receptoras del gusto para detectar el sabor amargo de las células receptoras
del gusto durante y después del estímulo, que también funcionaba como un
interruptor. Este estudio proporcionó una plataforma poderosa y prometedora para
reconocer el sabor amargo y proponer una estrategia efectiva para dilucidar la
sensación de sabor agrio y el mecanismo de codificación.

INTRODUCCIÓN
La sensación de sabor amargo es una de las cinco percepciones quimiosensoriales
básicas de las modalidades del gusto. Además, la sensación de acidez puede
ayudar a los mamíferos a evitar sustancias tóxicas. Las células receptoras del gusto
son el elemento fundamental en la detección del gusto, debido a los receptores
sensibles al gusto ubicados en las microvillas. La información del gusto es detectada
por las células receptoras del gusto, y luego se transmite a las fibras nerviosas
gustativas, más tarde a las neuronas de orden superior en el sistema nervioso
central y finalmente se proyecta a la corteza gustativa en el cerebro. Por lo tanto,
las células receptoras del gusto juegan un papel crítico en la integración de la
información del gusto primario y en la codificación en la periferia.
Se han propuesto varias moléculas candidatas para mediar en la detección de
ácidos, incluidos los canales iónicos sensibles al ácido (ASIC), los canales K + de
dominio de poro, los canales de potasio sensibles a los ácidos Kir2.1 y más
recientemente el heterodímero PKD2L1 / PKD1L3, un miembro de la familia de
canales de receptores transitorios
Las contribuciones no exclusivas de ASIC, TRPP o ambas se evidencian por los
patrones de expresión en células gustativas de mamíferos normales y en células
gustativas enfermas de seres humanos con edad agria Sin embargo, todavía faltan
pruebas directas que vinculen cualquiera de estos receptores con la percepción del
sabor amargo, el relleno y la codificación.
ASIC2a / 2b (canales iónicos sensibles al ácido) pertenece a una familia de canales
iónicos activados por protones relacionados con la superfamilia de degenerinas /
canales de sodio epiteliales, que es permeable a Na +. Cuando se aplica un estímulo
ácido, se puede observar una corriente interna relacionada. Los canales ASIC
desempeñan un papel central en la sensación de sabor amargo y la transducción
con respuesta On.
PKD2L1 (TRPP3) y PKD1L3 pertenecen a la superfamilia de canales de catión no
selectivos canales de receptor de potencial transitorio (TRP), permeables a Ca2 +
e involucrados en diversas funciones fisiológicas, en particular desempeñando roles
esenciales en la transducción sensorial de estímulos físicos o químicos
Estos dos miembros de TRPP, PKD2L1 y PKD1L3, son altamente homólogos a
PKD2 (TRPP2) y PKD1, cuyas mutaciones causan enfermedad poliquística renal
autosómica dominante (AKPKD). Los estudios indicaron que el complejo del canal
PKDL podría codificar estímulos ácidos por su única respuesta Off. Los canales de
PKDL se facilitaron a un pH básico y se inhibieron a un pH ácido, lo que indicó un
nuevo papel de la PKDL en la detección de protones y la señalización de protones
Los datos actuales sugieren que los receptores On (ASIC) y Off (PKDL) se
coexpresan funcionalmente en las mismas neuronas, presumiblemente células
receptoras del gusto tipo III. Funcionan como un interruptor para la sensación de
agrio. Sin embargo, todavía no sabe cuáles son los roles funcionales de estos
receptores pareados en la detección y codificación de ácidos

MÉTODOS Y EXPERIMENTOS

Los métodos y metodologías utilizadas fueron:

Figura 1. Esquema de
transducción de sabor agrio y
sistema de medición de la
lengua bioelectrónico basado
en MEA. (a) Los canales
ASIC y PKDL son dos
candidatos para la
transducción de sensaciones
de sabor agrio; (b) Diagrama
esquemático del biosensor
sensible al ácido; (c) Sistema
de medición de lengua
bioelectrónica para registros
electrofisiológicos
extracelulares de células
receptoras del gusto; (d)
Células receptoras del gusto
cultivadas en el chip MEA.
  Aislamiento y cultivo de células receptoras del gusto en chip.
Se obtuvieron células de sabor primarias de papilas fungiformes en la lengua frontal
de ratas Sprague Dawley hembras adultas, inyectando 1–1.5 ml de mezcla de
elastasa / colagenasa bajo el epitelio. Después de 40 minutos de incubación, el
epitelio lingual se puede pelar suavemente. Luego, el epitelio frontal se presionó
ligeramente sobre un tamiz metálico con orificios de 75 µm de diámetro. Así fue
similar al tamaño de las papilas gustativas. Y la papila gustativa podría pasar a
través de los poros de las papilas fungiformes a la solución de tyrode. De esta
manera, se podría obtener una mayor cantidad de papilas gustativas que en la
succión con pipeta pulida tradicional. Las células receptoras individuales se
disociaron de los brotes y se inmovilizaron directamente en un chip de matriz de
microelectrodos (MEA). (Fig.1). La superficie del chip se recubrió previamente con
poli-L-ornitina y laminina (PLOL) para un buen acoplamiento entre las células del
gusto y el chip. La solución de Tyrode contenía (en mM) 126 NaCl, 5 KCl, 2 CaCl2,
2 MgCl2, 5 HEPES, 1,25 NaH2PO4, 10 glucosa, pH 7.5.

 Sistema y chip MEA

El chip MEA fue fabricado en tecnología estándar de procesamiento de CMOS. En

primer lugar, se pulverizó una película fina de Cr a 30 nm sobre un vidrio de Pyrex
y luego se depositó Au de 300 nm. Se fabricó una matriz de electrodos de oro de 6
x 6 utilizando una técnica de grabado en húmedo. El diámetro de cada electrodo era
de 30 µm con la distancia de centro a centro de los electrodos de 200 µm. El nitruro
de silicio de la capa pasivada (Si3N4) con un espesor de 1 µm se depositó sobre la
capa de metal por PECVD. El sistema MEA multicanal USB-ME16-FAI se empleó
en la medición electrofisiológica extracelular. Las soluciones de estimulación ácida,
la solución tyrode y la solución residual se cambiaron con la bomba.

 Modelo y simulación de células de sabor amargo.

Se construyó un modelo matemático de células del gusto tipo Hodgkin-Huxley de

células enteras basado en las corrientes iónicas de Na +, K + y HCN obtenidas de
experimentos de pinzamiento de parches de células completas.
Se utilizó un algoritmo de mínimos cuadrados no lineal en Matlab para ajustar las
grabaciones para la estimación de parámetros. Los modelos de corrientes iónicas
individuales y la célula receptora de sabor amargo de células completas se crearon
en la plataforma del software NEURON. El potencial de membrana de las células
del gusto se puede describir mediante la siguiente ecu:

𝒅𝑽 𝑰𝒊𝒐𝒏 + 𝑰𝒔𝒕𝒊𝒎
=−
𝒅𝒕 𝑪𝒎
V es el potencial a través de la membrana y Cm es la capacitancia de la
membrana. Iion es la corriente transmembrana total y Istim es la fuente de corriente
externa agregada a Iion.
  Corriente a través de los canales iónicos de detección de ácido ASIC
ASICa es el parámetro de activación de los canales ASIC y ASICi es el parámetro
de inactivación. GASIC y EASIC denotan la conductancia máxima de los canales
ASIC y el potencial de reversión, respectivamente.
𝐼𝐴𝑆𝐼𝐶 = 𝐺𝐴𝑆𝐼𝐶 ∙ 𝐴𝑆𝐼𝐶 𝑎 ∙ 𝐴𝑆𝐼𝐶𝐼 ∙ (𝑉 − 𝐸𝐴𝑆𝐼𝐶 )

 Corrientes a través de canales PKDL IPKD

PKDa es el parámetro de activación y PKDi es el parámetro de inactivación de los
canales PKDL. GPKD y EPKD son la máxima conductividad de los canales PKDL
y el potencial de reversión, respectivamente.

𝐼𝑃𝐾𝐷 = 𝐺𝑃𝐾𝐷 ∙ 𝑃𝐾𝐷 𝑎 ∙ 𝑃𝐾𝐷𝐼 ∙ (𝑉 − 𝐸𝑃𝐾𝐷 )

 Grabaciones en MEA de señales gustativas de estimulación ácida

En el experimento, se utilizaron soluciones de ácido clorhídrico de pH 4 y pH 2 en
solución de tyrode como estimulaciones ácidas. En un ensayo de tratamiento único,
antes de las estimulaciones ácidas, se registraron las actividades básicas de las
células receptoras del gusto durante 120 s. Luego, se seleccionaron soluciones de
ácido clorhídrico de pH 4 o pH 2 para tratar las células respectivamente. Después
de 120 s de estimulación, las células receptoras del gusto se lavaron rápidamente
con solución de tyrode y se registraron durante otros 120 s. En el ensayo de
tratamiento consecutivo, se aplicaron estimulaciones ácidas en consecuencia,
también después de que las estimulaciones se lavaron con solución de tirodo. Se
registraron tanto las respuestas de respuesta como las respuestas de las células.
Todas las grabaciones se realizaron a temperatura ambiente (20–23 ° C).

 Análisis de datos y estadísticas.

Los datos fueron analizados en software igor y origin. El error estándar de la media
(S.E.M.) y la prueba de la t de Student (dos colas con criterios de significación p
<0.05) se calcularon cuando correspondía.

RESULTADOS Y ANÁLISIS DE RESULTADOS

Las células receptoras de sabor con un tamaño de aproximadamente 15 a 20 µm,
se cultivaron en chips de MEA, se adhirieron y se acoplaron al microelectrodo. Se
detectaron actividades evocadas espontáneas y ácidas de las células receptoras
del gusto. La fase descendente de las señales debe ser debida al flujo de iones Na
+. Y la fase ascendente fue causada principalmente por el el flujo de iones K +.
A partir de las señales registradas en el ensayo de tratamiento único, las células
receptoras del gusto sensibles al ácido se pueden clasificar en tres grupos. Se
encontró 30.4% de células gustativas sensibles al agrio (7 células en 23 células)
con un pH de estimulación igual a 2 actividades eléctricas mostradas durante la
estimulación ácida (en respuesta) sin respuesta Off después del lavado. La amplitud
de los picos fue de 100–300 μV, con una duración de 50–80 ms. Desde el simulador
de modelado y simulación de células receptoras, parece que los canales de ASIC
deberían ser responsables de la respuesta On. No hay canales PKDL expresados
en este grupo de células gustativas. Y el 21.7% de las células gustativas (5 células
en 23 células) no mostraron respuesta de respuesta durante la estimulación ácida
(pH 2), sin embargo, con respuesta de Off después del lavado, con una magnitud
de 100–450 μV Duración de 50–80 ms. Los canales PKDL pueden estar ubicados
en este grupo de células gustativas, no en los canales ASIC. Además, el 47.8% de
las células gustativas (11 células en 23 células) se inflaman durante y después del
estímulo agrio. La amplitud de los picos fue de 100–200 μV, con una duración de
50–80 ms. Pensamos que en estas células gustativas, tanto los canales PKDL como
los ASIC contribuyen a las actividades eléctricas. Cuando se aplicó un estímulo
agrio con pH 4, la proporción cambió de alguna manera.

El análisis estadístico indicó que la frecuencia de respuesta On y Off muestra una

dependencia de pH similar. Con la disminución del pH, el aumento de la frecuencia
final, que es consistente con los resultados de la simulación. Y la frecuencia final de
respuesta On (5,18 ± 1,26 Hz) y Off respuesta (5,72 ± 0,57 Hz) con estimulación de
pH 2 fue significativamente mayor que On respuesta (2,83 ± 0,19 Hz) y Off
respuesta (3,2 ± 0,28 Hz) a pH 4 Y la actividad espontánea fue de 1.1 ± 0.49 Hz a
pH 7.5.
En el ensayo de tratamiento consecutivo, se aplicó primeramente un estímulo ácido
con pH 4, después del lavado se utilizó una solución más ácida con pH 2 como
estimulación ácidaf. Los canales ASIC y PKDL deben atribuirse a las respuestas On
y Off. Y la frecuencia final de la última estimulación con ácido (pH 2) no fue
significativamente diferente de la estimulación con pH 4. En otras palabras, la
respuesta se atenuó después de haber sido estimulada, debido a la inactivación o
desensibilización de los canales.
A partir de los datos experimentales y los resultados de la simulación, proponemos
que, en respuesta, podría codificar la información del sabor amargo de larga
duración y de inicio, sin embargo, la respuesta Off se refiere al conjunto de la
respuesta agria o la elevación del valor de pH. Además, en respuesta a los canales
de ASIC, se codifica el sabor agrio, que es paralelo a otras modalidades de sabor,
dulce, amargo y umami. La respuesta Off podría proporcionar una etiqueta para el
sabor agrio en la secuencia de tiempo para separarla de los otros tres tipos de
modalidades de sabor.
 Figura 2. Grabaciones de potencial extracelular de MEA antes, durante y después de la
estimulación ácida. (a) Fuego evocado solo respuestas On; (b) Fuego evocado con solo
respuestas off ; (c) Fuego evocado con respuestas tanto de On como de Off; (d) Estadísticas de
la proporción de tres grupos de células con estimulación ácida pH igual a 2 y 4; (e) La frecuencia
final con y después de la retirada del pH diferente de la estimulación ácida; (f) En el ensayo de
tratamiento consecutivo, los potenciales extracelulares se registran de la misma célula receptora
del gusto.

CONCLUSIONES DEL ARTÍCULO

La integración del sabor quimiosensorial y el microprocesador, dieron como resultado una
lengua bioelectrónica biomimética para la detección de agrio, la cual se diseñó como un
interruptor para el inicio On y el conjunto Off para la estimulación ácida. Se exploró este
sensor de sabor híbrido para la detección del sabor amargo y la codificación de la señal ácida.
Se detectaron actividades espontáneas antes del sabor amargo y evocado durante y después
de los estímulos agrios. Tres grupos de señales se dividieron con las respuestas On, Off y
On&O ff, por separado. Con el fin de dilucidar el mecanismo de codificación de la
información de detección de ácido y sabor ácido, se construyó un modelo matemático de tipo
Hodgkin-Huxley de células receptoras de sabor de detección de ácido de células enteras
basadas en las grabaciones electrofisiológicas de pinza de parche. A partir de la simulación,
proponen que los canales ASICs contribuyan a la respuesta On, y los canales PKDL que
codifican las estimulaciones Off respectivamente. Además, la respuesta se atenuó después
de haber sido estimulada, lo que podría deberse a las propiedades de inactivación o
desensibilización de los canales. Esta lengua bioelectrónica basada en células del receptor
del gusto y MEA proporcionó una plataforma prometedora para reconocer las estimulaciones
del gusto y ayudar a estudiar el mecanismo quimiosensorial y de codificación del gusto de
una manera no invasiva.
 CONCLUSIÓN DEL TRABAJO
Al finalizar este trabajo podemos conluir que la bioelectronica es un
¿
 BIBLIOGRAFÍA
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http://dx.doi.org/10.1016/j.bios.2016.10.069
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