UN MODELO MATEMÁTICO PARA LA SACARIFICACIÓN Y LA

FERMENTACIÓN SIMULTÁNEA (SSCF) DE LOS AZÚCARES C6 Y

C5 *
RESUMEN: La producción confiable de biocombustibles y específicamente bioetanol ha
atraído una cantidad significativa de investigación recientemente. En este contexto, este
estudio trata de la simulación dinámica de los procesos de producción de bioetanol y, en
particular, tiene como objetivo desarrollar un modelo matemático para describir la
sacarificación y la fermentación simultánea (SSCF) de los azúcares C6 y C5. El modelo
se construye combinando modelos matemáticos existentes para la hidrólisis enzimática y
la co-fermentación. Se introduce una inhibición del etanol en la conversión de celulosa
para aumentar la fiabilidad. El modelo matemático para el SSCF se verifica al comparar
las predicciones del modelo con los datos experimentales obtenidos de la producción de
etanol a partir del lodo de la fábrica de papel kraft. Cuando se ajustó el modelo a los
datos, solo se ajustaron los coeficientes de rendimiento para el metabolismo de la glucosa
y la xilosa, que resultaron ser 0,43 g · g? 1 (etanol / glucosa) y 0,35 g · g? 1 (etanol /
xilosa) respectivamente. Estos resultados de validación prometedores alientan la
aplicación de modelos adicionales para evaluar las diferentes configuraciones de
procesos para la tecnología de bioetanol lignocelulósico.

Palabras claves: bioetanol, modelado dinámico, sacarificación simultánea y co-

fermentación

1. INTRODUCCION

Una de las principales áreas de investigación es el desarrollo de productos y procesos

sostenibles que apuntan en particular a la emisión cero y la reducción del impacto sobre el
calentamiento global. El logro de estos objetivos requiere una producción de energía cada
vez más eficiente y el desarrollo de fuentes alternativas de suministros de energía con
bajas emisiones de gases de efecto invernadero [1]. La producción de biocombustibles a
partir de biomasa lignocelulósica es una de las tecnologías alternativas que a menudo se
estudia, y tiene diferentes rutas de proceso, como la conversión bioquímica frente a la
física / química [2]. El diagrama de flujo de proceso convencional para la producción de
bioetanol implica diferentes operaciones unitarias tales como pretratamiento físico /
químico, hidrólisis enzimática, fermentación (o sacarificación simultánea y fermentación o
co-fermentación), y varios procesos posteriores [3]. Uno de los principales problemas es
que la ampliación de estos procesos desde la prueba de concepto hasta la escala
industrial todavía se realiza principalmente sobre una base empírica (por ejemplo, basada
en experimentos), que suele ser ineficiente y costosa en términos de tiempo y recursos.
Este estudio tiene como objetivo el desarrollo de un modelo matemático para
sacarificación simultánea y co-fermentación (SSCF) de pentosa y azúcares de hexosa. El
principal desafío es combinar modelos matemáticos que describan los pasos
involucrados, es decir. hidrólisis enzimática para sacarificación y co-fermentación. El
modelo matemático propuesto para la unidad SSCF se verifica comparando los resultados
de la simulación con los datos experimentales de una producción de bioetanol utilizando
lodo de la fábrica de papel kraft como materia prima [4]. Es importante resaltar que
también se pueden usar otras materias primas leñosas o fibrosas (tales como pasto
varilla, paja de trigo y astillas de madera), empleando la composición de biomasa
correspondiente. Matlab / Simulink se utiliza como plataforma de desarrollo y simulación
de modelos.

2. MODELOS MATEMÁTICOS PARA EL FUNCIONAMIENTO DE LA UNIDAD SSCF

El modelo matemático SSCF se construye combinando los modelos de hidrólisis
enzimática [5] y la co-fermentación [6], con especial énfasis en el acoplamiento de los
modelos individuales a través de funciones de inhibición adecuadas.

2.1 Hidrólisis enzimática

Entre muchos modelos en competencia, el modelo matemático desarrollado por Kadam et

al. [5] se elige para describir la hidrólisis enzimática de lignocelulosa, que ha sido
previamente verificado y analizado [7 - 9]. El modelo para la hidrólisis enzimática de la
biomasa lignocelulósica cuantifica la descomposición de la celulosa en azúcares simples,
como la celobiosa y la glucosa. Este modelo, como se muestra en la Tabla 1, implica las
velocidades de reacción para: (1) la descomposición de la celulosa en celobiosa [Eq. (1)]
y glucosa [Eq. (2)] por las enzimas endo-ȕ-1,4-glucanasas (EG) + exoglucanasas
(celobiohidrolasas, CBH); (2) hidrólisis de la celobiosa en glucosa por la enzima ȕ-
glucosidasa (BG) [Eq. (3)]. El modelo describe adicionalmente la adsorción enzimática
[Eq. (4)], concentraciones de enzima libre y unida [Eq. (5)], reactividad del sustrato [Eq.
(6)], el efecto de la temperatura sobre la sacarificación mediante la ecuación de Arrhenius
[Ec. (7)], y la cinética de celulosa, celobiosa y glucosa [Eqs. (8? 10), respectivamente]. El
modelo matemático incluye los fenómenos de inhibición potenciales relevantes por
glucosa, xilosa y celobiosa que tienen lugar para la hidrólisis enzimática [5]. Además de
las enzimas celulolíticas, también se sabe que la enzima (derivada de Trichoderma
reesei) contiene bajas cantidades de actividades de endo-1,4-beta-xilanasa, que pueden
catalizar la degradación de xilano y también contienen una enzima beta-xilosidasa. que
cataliza la liberación de xilosa a partir de xilo-oligosacáridos [10, 11]. Además de la xilosa
liberada de la biomasa durante el pretratamiento, estas actividades enzimáticas
contribuyen a generar más xilosa durante el tratamiento de hidrólisis enzimática, pero las
tasas para la formación enzimática de xilosa no están incluidas en el modelo. Lo que se
considera en el modelo es la xilosa generada en el pretratamiento y su efecto inhibidor
sobre las enzimas celulolíticas se describe en la Tabla 1.
2.2 Co-fermentación

El modelo matemático empleado en este trabajo para la co-fermentación en el modelo

SSCF es de Krishnan et al. [6], donde se considera la conversión simultánea de xilosa y
glucosa a etanol. El modelo de co-fermentación se basa en la cepa recombinante
Saccharomyces cerevisiae 1400 (pLNH33). El modelo matemático para la co-
fermentación, como se muestra en la Tabla 2, implica las velocidades de reacción para:
(1) crecimiento celular en glucosa [Eq. (11)] y xilosa [Eq. (12)]; (2) la producción total de
células de levadura como el producto promedio del crecimiento celular en glucosa y xilosa
con sus fracciones de masa en la mezcla [Eq. (13)]; (3) consumo de glucosa [Eq. (14)] y
xilosa [Eq. (15)]; (4) formación de etanol a partir de glucosa [Eq. (16)] y xilosa [Eq. (17)];
(5) formación general de etanol [Eq. (18)]. El modelo explica la inhibición del sustrato y del
producto, así como el efecto del tamaño de inóculo empleado para el cultivo.
2.3 Desarrollo del modelo SSCF

La cinética de reacción para el modelo simultáneo de sacarificación y co-fermentación

(SSCF) se desarrolla combinando los modelos para la hidrólisis enzimática y la co-
fermentación (véase la Fig. 1) descritos anteriormente. Uno de los principales desafíos
para resolver es la inhibición de la etapa de hidrólisis enzimática por etanol. Se sabe que
la presencia de etanol durante la hidrólisis enzimática puede inducir un cierto nivel de
inhibición en la degradación de la celulosa [12]. Por lo tanto, para hacer el modelo SSCF
más realista, este estudio introduce un efecto de inhibición del etanol en la cinética de la
vía de hidrólisis enzimática de la celulosa para producir celobiosa. Sin embargo, para
concentraciones de etanol menores a 4 mol · L? 1 (equivalente a 184.2 g · L? 1 de etanol)
no fue significativa la inhibición de etanol en las actividades enzimáticas en la
sacarificación fue encontrada por Ooshirna et al [13]. Además, Philippidis et al. [14] han
demostrado que el valor del coeficiente de inhibición del etanol en la celulosa (conversión
a celobiosa) es aproximadamente 10 veces mayor que el de la celobiosa en la conversión
de celulosa. Por lo tanto, el valor de la constante de inhibición de celobiosa en celulosa
(K1IG2) propuesto por Kadam et al. [5] para la hidrólisis enzimática de celulosa a
celobiosa se multiplica por un factor 10 para obtener la constante de inhibición del etanol.
Con respecto a la inhibición del etanol en la hidrólisis de celobiosa, algunos autores [12,
14] han concluido que la inhibición por etanol en la hidrólisis de la celobiosa es
insignificante en comparación con los efectos de inhibición de la glucosa en la
despolimerización de la celobiosa. Por lo tanto, se descuida la inhibición del etanol en la
celobiosa a la glucosa (y, por tanto, en la vía de reacción de la celulosa a la glucosa). Por
lo tanto, solo la expresión matemática para la descomposición de celulosa en celobiosa
[Eq. (1)] se modifica añadiendo un factor adicional de inhibición de etanol CEt / K1IEt de la
siguiente manera:

Dado que las unidades de medida son diferentes en los modelos de hidrólisis y co-
fermentación por separado (véase más arriba), se supone en el modelo matemático para
el proceso SSCF que la densidad de la mezcla es igual a 1 kg · L? 1, de modo que ambos
los modelos pueden ser integrados. Los valores y la descripción de los parámetros
empleados en el modelo matemático se pueden encontrar en la sección de nomenclatura.
3. VERIFICACIÓN DEL MODELO MATEMÁTICO SSCF
3.1 Bioconversión de lodo de fábrica de papel kraft a etanol

Los datos experimentales para la producción de etanol de los lodos de la fábrica de papel
kraft [4] se emplearon para verificar el modelo matemático propuesto para la operación de
la unidad SSCF. La configuración de los experimentos utilizó una cepa modificada de
Escherichia coli (ATCC-55124), que metaboliza glucosa y xilosa en etanol. Los
experimentos se realizaron en modo discontinuo durante un período de 120 horas. Se
pueden encontrar más detalles sobre los experimentos en Kang et al [4]. Las ecuaciones
matemáticas para describir el reactor SSCF se obtienen utilizando un balance de masa
que se puede representar en su forma genérica de la siguiente manera:

Figura 1. Representación esquemática del desarrollo del modelo matemático SSCF como
combinación de dos modelos separados para hidrólisis y co-fermentación.

donde Qin y Qout son la tasa de flujo de alimentación y la tasa de flujo de salida
respectivamente, Cin, i es la concentración del compuesto i en la alimentación, ri, j es la
tasa de generación (+) / degradación (?) del compuesto i en la reacción j , V es el volumen
del reactor, y Ci es la concentración real del compuesto i en el reactor, que, suponiendo
que el reactor se comporte como un CSTR, será igual a la concentración en la salida
durante el período de estiramiento del reactor. En cuanto al volumen de reacción,
tenemos:

Para el funcionamiento por lotes, Qin y Qout son iguales a cero. Para la operación de lote
alimentado, Qin es diferente de cero durante el período de carga y Qout es diferente de
cero para el tiempo de dibujo. Con respecto a la operación continua, Qin y Qout son
idénticos durante la operación, es decir, se supone el volumen constante del tanque.
3.2 Plataforma de simulación

La simulación de la operación por lotes para la conversión de lodo de fábrica de papel

kraft a etanol se ha llevado a cabo utilizando la plataforma MatLab / Simulink orientada a
objetos [15]. Se elige este tipo de implementación, ya que permite abordar varios
problemas importantes para la simulación de diferentes hojas de flujo del proceso: (1)
realizar la combinación de operaciones de la unidad en modo fed-batch y continuo; (2)
obtener resultados confiables para la operación a escala industrial; (3) la implementación
directa de las estrategias de control, y la introducción de alteraciones del proceso para
analizar las respuestas en todo el proceso publicado por Morales-Rodriguez et al [16].

3.3 Datos

Los principales datos relacionados con la composición de materias primas empleadas

para la simulación de la producción de etanol se muestran en la Tabla 3. Se utilizan dos
tipos de lodos de plantas de papel kraft como materia prima: lodo primario descargado de
la máquina de papel y lodo reciclado. Es importante resaltar que el modelo matemático
permite simulación de diferentes materias primas mediante la adaptación de los valores
correspondientes de la concentración de biomasa para que coincida con la composición
de otras materias primas como el rastrojo de maíz, la paja de trigo y la paja de cebada. La
información con respecto a la carga de la enzima y la levadura, así como las condiciones
del proceso de la operación de la unidad SSCF se pueden encontrar en la Tabla 4.

3.4 Resultados de simulación para la unidad SSCF

El modelo matemático empleado no describe la descomposición de xilano en xilosa como

se ilustra en los valores experimentales. Para superar este problema, la cantidad de xilosa
producida durante los experimentos se calculó utilizando la concentración inicial y final de
xylan [4]. Por lo tanto, las concentraciones iniciales de xilosa utilizadas en la simulación
para lodos primarios y reciclados fueron 6.14 y 7.70 g · L? 1, respectivamente. La primera
simulación se realizó utilizando un conjunto predeterminado de valores de parámetros del
modelo informados por Kadam et al. [5] para la parte de hidrólisis y por Krishnan et al. [6]
para la parte de co-fermentación. Los valores de parámetros predeterminados se dan en
la sección de nomenclatura. Después de esta simulación de una unidad discontinua
SSCF, la Fig. 2 muestra los perfiles de concentración simulados para glucosa, xilosa,
celulosa, etanol (etanol original), levadura y los datos experimentales para: a) lodo
primario yb) lodo reciclado. Los resultados ilustran una buena predicción en comparación
con los datos experimentales para etanol y glucosa para el lodo primario y reciclado.

Sin embargo, las predicciones del modelo son ligeramente más altas que los valores
experimentales para el etanol en ambos casos. Por lo tanto, se realizó un análisis
adicional de los parámetros, con especial énfasis en el rendimiento del producto de etanol
en glucosa y xilosa. Los valores de parámetros originales para el rendimiento del producto
de etanol en glucosa y el rendimiento del producto de etanol en xilosa fueron iguales al
92% y 78% del valor teórico [6] (ver Tabla 5) respectivamente, lo que resulta en una
sobreestimación de la formación del producto (ver Fig. 2, Ethanol Original) cuando se
compara con los datos experimentales para el lodo primario y de reciclado. Por lo tanto,
se introdujeron valores más bajos para las constantes de rendimiento del producto con el
fin de obtener una mejor correspondencia entre las predicciones del modelo y los datos.
Para etanol / glucosa el rendimiento se redujo al 85% del valor teórico, mientras que para
etanol / xilosa se redujo al 70% como se ilustra en la Tabla 5. La predicción utilizando los
valores modificados de las constantes de rendimiento del producto para etanol / glucosa y
etanol / xilosa está en mejor acuerdo con los datos experimentales para etanol (ver Fig. 2,
Etanol Mod.), en comparación con la predicción que emplea los valores originales (ver
Fig. 2, Ethanol Original) de los parámetros del modelo [6].

La Tabla 6 muestra las predicciones finales de concentración de etanol obtenidas con el

modelo para los valores originales y modificados de las constantes de rendimiento del
producto para el lodo primario y reciclado. Las predicciones del modelo se mejoran
considerablemente cuando se emplean valores de rendimiento de producto reducidos.

4 DISCUSIÓN GENERAL

El perfil de concentración para la unidad SSCF (figura 2) también ilustra que la glucosa se
convierte completamente en etanol antes de la xilosa, que es el ejemplo clásico de
consumo diatásico de sustratos en los que se prefiere la glucosa a la xilosa [4]. Este
fenómeno se describe adecuadamente mediante el modelo matemático SSCF propuesto.
Las pequeñas diferencias entre las predicciones del modelo y los datos experimentales
pueden explicarse por los factores intrínsecos del sistema. Por ejemplo, el modelo
matemático para la co-fermentación se ajustó a partir de experimentos con una cepa 1400
recombinante de Saccharomyces cerevisiae (pLNH33) mientras que los datos
experimentales para validar el modelo de SSCF eran de una cepa modificada de
Escherichia coli (ATCC-55124). A pesar de estas diferencias, los resultados previstos son
bastante buenos. El único ajuste fino necesario en los parámetros del modelo se relacionó
con los coeficientes de rendimiento del producto. En consecuencia, los valores más
apropiados de las constantes de rendimiento del producto de glucosa y xilosa a etanol en
el sistema de lodo de la fábrica de papel kraft fueron 0,43 g · g? 1 (etanol / glucosa) y 0,35
g · g? 1 (etanol / xilosa ), respectivamente. Los resultados generales respaldan
convincentemente la aplicabilidad futura del modelo matemático de SSCF para diferentes
sistemas de fermentación de enzimas, materia prima. El modelo matemático para SSCF
ya ha sido aplicado por Morales-Rodriguez et al. [16] para la simulación de diferentes
diagramas de flujo de procesos para la producción de bioetanol de segunda generación.
Se desarrolló una plataforma dinámica de bioetanol lignocelulósico (DLB1.0), que permite
la simulación cuantitativa y la comparación de diferentes configuraciones de proceso para
plantas de bioetanol de 2ª generación (2G), proporcionando una base para la evaluación
del diagrama de flujo del proceso más prometedor.

Figura 2 Perfiles de concentración en la unidad SSCF para glucosa, xilosa, celulosa,

etanol y levadura y datos experimentales [4] con parámetros modelo de [5] y [6] glucosa;
xilosa; celulosa; etanol original; etanol mod .; levadura; ƶ? Exp. valor etanol; ƻExp. valor
de glucosa
5. CONCLUSIONES

Se desarrolla un modelo matemático para la sacarificación y la fermentación simultáneas

(SSCF). El modelo se construye combinando dos modelos matemáticos ya validados para
la hidrólisis enzimática y la co-fermentación. Se introduce una inhibición del etanol en la
conversión de celulosa acoplando los dos modelos para aumentar la fiabilidad del modelo
SSCF resultante. El modelo matemático SSCF desarrollado se valida utilizando la
producción de etanol del lodo de la fábrica de papel kraft en un reactor discontinuo. Los
resultados del modelo matemático muestran buenas predicciones en comparación con los
datos experimentales para dos tipos diferentes de lodo con coeficientes de rendimiento
del producto de 0,43 g · g? 1 (etanol / glucosa) y 0,35 g · g? 1 (etanol / xilosa). Estos
resultados sugieren que el modelo con sus suposiciones simplificadoras y complejidad
moderada tiene la capacidad de describir una gama de sistemas simultáneos de
sacarificación y co-fermentación.