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ESTUDIO DEL EFECTO DE LA EXPOSICIÓN A COLCHICINA EN LA LONGITUD DEL CROMOSOMA

DURANTE LA MITOSIS

ABSTRACTO

En el procedimiento de cariotipo de rutina del cultivo de linfocitos (cultivo de sangre) las células
están expuestas a colchicina para detener la división celular en metafase para visualizar los
cromosomas. Rutinariamente, la duración de la exposición a la colchicina varía de 1 a 2 horas. Para
obtener una mejor calidad de cromosomas, tanto la concentración como el período de exposición
a colchicina puede ser alterada.

Mientras que la estandarización de la prueba de laboratorio genético / investigación


departamental diferente período de exposiciónel tiempo de colchicina se hizo para obtener
cromosomas más largos con cromosomas divididos.

Se observó que se marcó que al acortar el período de exposición de colchicina más tiempo y mejor
calidad de los cromosomas se puede obtener, mientras que el período de exposición más largo de
la colchicina condensada cromosomas

INTRODUCCIÓN

Desde el punto de vista citogenético se ha observado queacortamiento de los cromosomas,


cromatinala condensación coincide con una notable prolongación de la fase sintética del ADN. El
embalajede la cromatina es flexible; cambia durante eucariotasciclo celular. En el momento de la
división, el material genéticose vuelve aún más empaquetado y más individual los cromosomas se
vuelven reconocibles El preciso segregación de cromosomas replicados a la hijalas células durante
la mitosis dependen de la formación del eje bipolar compuesto principalmente de microtúbulos
(MT).Desde que MTs es una estructura altamente dinámica cuyo espacialla organización es crítica
para la función apropiada del husillo.Agentes físicos y químicos que interfieren con MT el
comportamiento invariablemente interrumpe la mitosis.

Colchicineinihibitismescrotubule

polimerización uniéndose a tubulina, uno de los principales constituyente de microtúbulos inhibe


específicamente el desarrollo de husos o destruye los que ya presente, para que la célula no pueda
mover sus cromosomas alrededor y la celda puede terminar copiando algunos o todos los
cromosomas y no pueden parcelarlos en 4 nuevas células, por lo que nunca se divide Las placas
metafásicas mitóticas humanas se preparan rutinariamente empleando el método modificado de
Moorhead et al. (1960). El objetivo del estudio fue ver el efecto de diversos períodos de exposición
de la colchicina (la concentración de colchicina se mantuvo igual en cada exposición) en el cultivo
de linfocitos durante la mitosis midiendo la longitud del cromosoma más largo en la diseminación
en metafase.
MATERIAL AND METHOD

La sangre periférica (2 cc) se obtuvo por precauciones asépticas en jeringas heparinizadas de 10


donantes sanos del grupo de edad de 25 a 35 años. Tres tubos de cultivo codificados como "1", "2"
y "3" se rellenaron con 5 ml de medio MEM suplementado con suero de sangre de cordón
humano, antibióticos, glutamina y fitohemaglutinina (PHA-L, estimulante mitótico), se añadieron
0,5 ml de sangre a cada tubo de cultivo Los cultivos se incubaron a 37ºC durante un período de 68
horas, 70 horas y 71,5 horas para "1", "2" y "3", respectivamente. Se llevaron a cabo experimentos
de concentración y tiempo de exposición específicos de colchicina para obtener cromosomas en la
etapa de metafase ( Tabla 1).

Las culturas se procesaron de acuerdo con el procedimiento estándar y las diapositivas preparadas
se codificaron y se analizaron para la longitud cromosómica en diferentes condiciones que se les
dieron. La longitud del cromosoma más largo se usó como parámetro para ver el efecto de varios
tiempos de exposición de la colchicina. Cerca de 40 50 metafase se extendieron Cerca de 40 50
metafase se extendieron seleccionados al azar para cada muestra. Finalmente 30 bueno los
diferenciales se seleccionaron para medir la duración del cromosoma más largo. Longitud del más
largo el cromosoma se midió con micrómetro ocular escala bajo lente de inmersión en aceite.

Efecto de la exposición a la colchicina en el corto cromosomas no se observó en el estudio.

OBSERVATIONS AND RESULTS

Experimentos con la misma concentración de colchicina (10 μg / ml) y diferente tiempo de


exposición dio resultados como se muestra en la Tabla-2. Las imágenes 1a y 1b muestran la
longitud más larga cromosoma de una propagación en metafase de la muestra expuesto a la
colchicina durante 4 horas con una longitud media que van desde 3.80 hasta 4.90 μm.

A Las Figuras 2a y 2b muestran la longitud más larga, Fotografía que muestra la longitud del
cromosoma más largo de propagación de metafase expuesta a colchicina durante 4 horas

B Fotografía que muestra la longitud del cromosoma más largo de propagación metafásica
expuesta a colchicina para 2 horas

C Fotografía que muestra la longitud del cromosoma más largo de propagación metafásica
expuesta a colchicina por 1/2 hora

Tabla 1 Tiempo de adición y período de exposición total de colchicina al cultivo de linfocitos

Tabla 2 Longitud media del cromosoma más largo de cada grupo de cultura

Tabla 3 Longitud media del cromosoma más largo de cada cultura


Tabla-4 Datos estadísticos que muestran la comparación de la longitud de cromosomas de toda la
cultura

cromosoma de una propagación en metafase de la muestra expuesto a colchicina durante 2 horas


con una longitud media que van desde 5.00-6.00 μm. Las imágenes 3a y 3b muestran la longitud
más larga cromosoma de una propagación en metafase de la muestra expuesto a colchicina
durante 1/2 horas con una longitud media que van desde 5.53 hasta 7.70 μm.

La Tabla 3 muestra el rango de longitud media de cromosomas más largos de cada grupo de
cultivo. Los longitud media de los cromosomas más largos de cada grupo de tubo de cultivo se
comparó entre sí

La Tabla-4 muestra los datos de comparación entre todos los grupos de cultivo celular. Longitud
media y S.D. fueron funcionó. 't' prueba se aplicaron, para ver la diferencia entre la longitud de los
cromosomas más largos en las células de tubo de cultivo-1,2 y 3. 't' dio lugar a pruebas
significativas resultados entre las tres comparaciones. Estadístico los resultados del presente
estudio muestran que una exposición más corta período de colchicina da cromosomas más largos
y un período de exposición más largo da condensado cromosomas que pueden usarse para
estudio citogenético.

DISCUSIÓN

En el presente estudio observamos el cromosomas en un estado más condensado cuando


colchicina se añadió a la 68ª hora de incubación en cultura -1. En cultura -3 se añadió colchicina ½
hora antes de completar el período de incubación de 72 horas.

La longitud de los cromosomas más largos se encontró más tiempo en células de cultivo -3 en
comparación con la de otra célula grupo de cultura.

Chin Yuet Meng en su estudio citogenético de CML afirmó que una exposición más prolongada de
colchicina da como resultado una mayor propagación en metafase, pero en estos extiende los
cromosomas será más corto porque los cromosomas se condensan a medida que avanzan a través
de metafase En el presente estudio también más largo período de exposición de colchicina dio
condensado cromosomas y menor duración de exposición dio cromosomas más largos

V.Nandini y S.K.Shyama mostraron con su experimentos que durante el uso de diversas


concentraciones y varios tiempos de exposición de la colchicina a cultivo de linfocitos dio mejores
resultados en la final concentración de 10 microgramos / ml y una exposición periodo de 15
minutos.

De laat encontró una correlación directa entre Condensación cromosómica y prefijación


temperaturas Tratamiento de baja temperatura de las células que se dividen mitóticamente
resultaron en cromosomas pegajosos.
La condensación de cromosomas depende de concentración de metabolitos en diferentes fases de
ciclo celular; fases del ciclo celular en sí mismo; prefijado temperatura y humedad.

Más tiempo la longitud de los cromosomas dará buenos resultados en bandas GTG y allí por
buenos resultados en cariotipo también.

CONCLUSIÓN

Los resultados estadísticos del presente estudio muestran ese período más largo de exposición de
la producción de colchicina cromosomas condensados en comparación con los más cortos período
de exposición que produce cromosomas más largos.

Cromosomas más largos en comparación con los más cortos dan mejores resultados para el
cariotipo y técnicas de bandas.