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Guía #8

Metabolismo Bacteriano

1. Defina: Metabolismo, Catabolismo y Anabolismo


i. Metabolismo: Es el conjunto de reacciones bioquímicas y procesos fisicoquímicos que ocurren en
una célula y en el organismo.
ii. Catabolismo: conjunto de reacciones bioquímicas que conducen a la producción de energía
utilizada por la célula (normalmente ATP).
iii. Anabolismo: Síntesis de moléculas complejas a partir de moléculas más sencillas con consumo de
energía (Prescott, Harley & Klein, 2004).
2. ¿Qué tipo de átomos transportan el NAD+ y el NADP+? ¿A qué se debe que el par redox
NADH/NAD+ puede transferir electrones al par O/H2O?
Transportan electrones. Es muy bueno donando electrones en reacciones redox ya que sus electrones
están en un nivel de energía alto, por lo que puede transferir sus electrones directamente al complejo.
(Prescott, Harley & Klein, 2004).
3. ¿Qué es el potencial de reducción (E°)? Realice un esquema con la Torre de electrones en donde
incluya a los pares donadores de electrones y a los pares aceptores principales como: 2H +/H2,
NAD+/NADH, NO3-/NO2 y 1/2O2/H2O y el E° de cada par.
E° es la medida de la tendencia de un reductor a ceder electrones. (Prescott, Harley & Klein, 2004).

4. La energía liberada en las reacciones redox debe conservarse para el funcionamiento celular.
En los organismos vivos la energía química liberada en estas reacciones se conserva
normalmente en forma de enlaces fosfato de alta energía. Elabore un cuadro con los
compuestos que en su estructura molecular poseen enlaces de alta energía, mostrando en
orden decreciente la energía libre de hidrólisis para cada uno.
Molécula Energía libre de hidrólisis (kJ/mol)
AMP -12.6
ATP a ADP -30.5
ADP a AMP -30.5
ATP a AMP -40,6
(Prescott et al., 2004).
5. ¿Qué es la coenzima A? ¿Por qué puede suministrar energía? ¿En qué vías interviene?
Es una coenzima de transferencia de grupos acilo que participa en diversas rutas metabólicas (ciclo de
Krebs, síntesis y oxidación de ácidos grasos). Cuando un grupo acetilo se añade a la cola de la coenzima A
(CoA), toda la molécula se conoce como Acetil-CoA, el lugar de enlace es en el grupo sulfhidrilo o tiol (-
SH). El enlace aciltioéster es rico en energía y por lo tanto funciona como transportador de grupos acilo.
(Prescott et al., 2004)
6. Enumere las tres formas principales por medio de las cuales las bacterias pueden producir
energía.
a. Producción anaeróbica o fermentación
b. Producción aeróbica o respiración
c. Producción fotosintética (cíclica y no cíclica). (Prescott et al., 2004).
7. ¿Cuál es la vía metabólica más utilizada por las bacterias para degradar carbohidratos? ¿Con
qué otro nombre es conocida esta vía?
La vía de Embden-Meyerhof (glucólisis)
8. Esquematice las reacciones de la Vía Glucolítica. En relación a esta vía conteste:

a. ¿Es anaeróbica o aeróbica?


Actúa tanto en presencia como ausencia de O2
b. Indique las fases y reacciones donde se consume ATP y donde se genera ATP. ¿Cuál es
la ganancia neta de ATP?
Primera fase (fase de 6 carbonos): La glucosa es fosforilada dos veces y finalmente
convertida en fructuosa 1,6-bifosfato, esta etapa no produce energía; de hecho, se
consumen dos moléculas de ATP por cada molécula de glucosa. Estos pasos iniciales
ceban el sistema al añadir fosfatos a cada extremo del azúcar. Los fosfatos se utilizarán
después para sintetizar ATP.
Segunda fase (fase de 3 carbonos): La enzima fructosa 1,6-bifosfato aldosa cataliza la
escisión de la fructosa 1,6.bisfosfato en dos mitades, cada una de ellas con un grupo
fosfato. Uno de los productos, el gliceraldehído 3-fosfato, se convierte directamente en
piruvato en un proceso de cinco pasos. Debido a que el otro producto, dihidroxiaetona
fosfato, puede transformarse fácilmente en gliceraldehído 3-fosfato, ambas mitades de
la fructosa 1,6- bisfosfato se utilizan en la etapa de tres carbonos. En primer lugar, el
gliceraldehído 3-fosfato se oxida con NAD+ como aceptor de electrones, incorporándose
al mismo tiempo un grupo fosfato para formar una molécula de alta energía denominada
1,3-bisfosfoglicerato. El grupo fosfato de alta energía unido al carbono 1 es cedido al ADP
para formar ATP (Fosforilación a nivel sustrato). Un proceso similar genera un segundo
ATP por fosforilación a nivel sustrato. El grupo fosfato del 3-fosfoglicerato pasa al carbono
2, y el 2-fosfoglicerato es deshidratado para formar el fosfoenolpiruvato. Esta molécula
cede su grupo fosfato al ADP y forma ATP. La producción neta de ATP es de 2 moléculas.
(Prescott et al., 2004).
c. Indique en qué reacciones el NAD+ se reduce a NADH + H+ y también cuántos NADH se
producen en esta vía por mol de glucosa.
En la conversión del gliceraldehído-3-fosfato a ácido 1,3 difosfoglicérico, se producen 4
NADH.
d. Explique en qué consiste el proceso de reciclaje del NAD +/NADH+H+ y por qué este
proceso es tan importante para la sobrevivencia de los microorganismos.
El NAD+, que es un agente oxidante, acepta electrones de otras moléculas y pasa a ser
reducido, formándose NADH, que puede ser utilizado entonces como agente reductor
para donar electrones. Es importante ya que el NADH producido en la vía Glucolítica
durante la oxidación de gliceraldehído 3- fosfato a 1,3-bisfosfoglicerato todavía debe ser
oxidado a NAD+, si no existe esta regeneración, la glucólisis se detiene.
e. ¿Cuál es el producto final de la vía Glucolítica? ¿Cuántos moles de este producto se
forman?
2 Piruvato + 2ATP + 2NADH + 2H+
9. Defina el proceso de fermentación ¿Qué tipo de bacterias fermentan azúcares?
La fermentación es un proceso metabólico productor de energía en el cual compuestos orgánicos sirven
como donadores de electrones y también como aceptores de ellos. Los compuestos que efectúan estas
funciones usualmente son dos diferentes metabolitos, derivados de un substrato fermentable. Los
carbohidratos son los principales substratos para la fermentación, pero también otros compuestos
pueden ser fermentables, tales como ácidos orgánicos, aminoácidos, purinas y pirimidinas.
Las bacterias que
10. En general: ¿Cuántos moles de ATP se producen en el proceso de fermentación?
Por cada mol de glucosa fermentada se producen 2 moles de ATP
11. Explique cuál es la diferencia entre la fosforilación a nivel de sustrato y la fosforilación oxidativa.
La Fosforilación oxidativa es el proceso de formar ATP mediante reacciones Rédox (Óxido-reducción), el
fósforo inorgánico que se acopla al ADP proviene de reacciones de oxidación biológica.
La fosforilación a nivel de sustrato es el proceso por el cual se produce la fosforilación de ADP a ATP por
transferencia de un grupo fosfato, desde un determinado sustrato.
12. Existen microorganismos que NO usan la vía de Embden-Meyerhoff-Parnas (Glucólisis) para
degradar a los carbohidratos. Las otras dos vías que pueden usar son la Vía de las Pentosas-
Fosfato y la vía de Entner Doudoroff.
a. Enumera los principales productos y la ganancia neta de ATP y de NADH o NADPH de
cada vía.
 En la vía de las pentosas-fosfato los principales productos son pentosas, hexosas; la carga
de ATP es -2 y la de NADPH es de 2.
 En la vía Entner-Doudoroff el principal producto es el piruvato, se obtienen 1 ATP como
ganancia neta y 1 NADH y NADPH. (Prescott et al., 2004).
b. Indique la principal función de la Vía de la Pentosas-Fosfato.
Operar de forma aerobia o anaerobia, importante en la biosíntesis como en el
catabolismo. La síntesis de pentosas. (Madigan, Martinko, Bender, Buckley & Stahl, 2015).
c. Escriba los nombre de los géneros de bacterias que usan la Vía de las Pentosas-fosfato
y de la vía de Entner Doudoroff.
Pentosas-fosfato: Lactobacillus; Entner-Doudoroff: Pseudomonas, Azotobacter y
Agrobacterium. (Madigan, Martinko, Bender, Buckley & Stahl, 2015).

13. Realice un cuadro en donde se pueda resumir el nombre de las fermentaciones que se producen
por la vía de Embden-Meyerhof y de acuerdo a cada fermentación indique:
Tipo de fermentación Productos Género de bacterias
Alcohólica Etanol y CO2 Zymomonas
Homoláctica Lactato y H+ Streptococcus y algunos
Lactobacillus
Heteroláctica Lactato, etanol, CO2, H+ Leuconostoc y algunos
Lactobacillus
Ácido propiónico Propionato, acetato, CO2, H2O Propionibacterium,
Clostridium propionicum
Ácido Mixto Etanol, 2,3-butanediol, Bacterias entéricas,
succinato, lactato, acetato, incluyendo Escherichia,
formiato, H2, CO2 Salmonella, Shigella,
Klebsiella, Enterobacter.
Ácido Butírico 2H2, butirato, CO2, H+ Clostridium butyricum
Butanol Butanol, acetona, CO2, H2 Clostridium acetobutylicum
Caproato/Butirato Butirato, caproato, H2, H2O, H+ Clostridium kluyveri
Acetogénica Acetato y H+ Clostridium aceticum
Acetileno Etanol, acetato, H+ Pelobacter acetylenicus
Glicerol Acetato, H+, H2O Acetobacterium spp
Resorcinol Acetato, butirato, H+ Clostridium spp
Fluoroglucinol Acetato, H+ Pelobacter massiliensis
Pelobacter acidigallici
Putrescina Acetato, butirato, NH4+, H2, H+ Bacterias anaerobias no
esporulantes gram-
positivas sin clasificar
Citrato Formato, acetato, HCO3-, H+ Bacteroides spp
Aconiato CO2, acetato, H2 Acidaminococcus
fermentans
Glioxilato CO2, H2, glicolato Bacterias gram-
negativas sin clasificar
Benzoato Ciclohexano, carboxilato, acetato, Syntrophus aciditrophicus
HCO3-, H+
(Madigan et al., 2015).

a. ¿Qué transportador de hidrógeno y de electrones usan? ¿Qué compuestos se forman?


Ver cuadro.
b. Indique las diferentes fermentaciones que llevan a cabo los diferentes géneros de
bacterias.
Ver cuadro.
c. Menciona el uso que pueden tener los productos de las principales fermentaciones.
Las fermentaciones alcohólica y láctica son muy útiles para el hombre. La fermentación
alcohólica realizada por levaduras produce bebidas alcohólicas; el CO2 derivado de esta
fermentación hace que “suba” el pan. La fermentación láctica puede deteriorar alimentos,
pero también se utiliza para producir yogur, chucrut y pepinillos (Prescott et al., 2004).
d. Indique cuál es el microorganismo más usado para producir etanol a nivel industrial y
cuál es su principal uso.
La fermentación alcohólica realizada por levaduras produce bebidas alcohólicas (Prescott et
al., 2004).
14. Describa en qué consiste la Fermentación Heteroláctica, cuáles son sus principales productos y
cuántos ATP se forman. Indique los géneros bacterianos que llevan a cabo esta fermentación. Commented [1]: faltan
Es una fermentación que utiliza vías diferentes a la de Embden-Meyerhof
𝐂𝟔𝐇𝟏𝟐𝐎𝟔 → 𝐂𝐎𝟐 + 𝐂𝐇𝟑𝐂𝐇𝟐𝐎𝐇 + 𝐂𝐇𝟑𝐂𝐇𝐎𝐇𝐂𝐎𝐎𝐇
Leuconostoc fermenta la glucosa con producción de CO2, alcohol etílico y ácido láctico. La reacción clave
es el rompimiento fosforolítico de la xilulosa 5- fosfato en acetilfosfato y gliceraldehido 3-fosfato. La
producción de energía en este tipo de fermentación es aún más pobre que en la fermentación
homoláctica, generando 1 molécula de ATP. (Madigan et al., 2015).
15. Explique por qué Zymomonas mobilis no es usada para producir bebidas alcohólicas y para
producir biocombustible si. Indique qué vía utiliza para fermentar la glucosa.
Utiliza la vía de Entner-Doudoroff, se utiliza para biocombustibles porque en esta vía el piruvato es
directamente formado y no puede producir ATP como puede G-3-P, dejando esta vía la producción de ATP
en la mitad de la vía Glucolítica (Madigan et al., 2015).

16. En la fermentación coliforme unas bacterias llevan a cabo la fermentación Ácido-Mixta y otras
la fermentación Butanodiólica, Conteste
a. ¿Cuál es el uso de la prueba de Rojo de Metilo y como se interpreta?
Esta prueba tiene como base el hecho de que los fermentadores ácido mixtos producen
cuatro veces más productos ácidos que neutros, mientras que los fermentadores
butanodióicos forman principalmente productos neutros. Por tanto, los fermentadores
ácido mixtos acidifican los medios de incubación en una medida mucho mayor. Ésta es la
base de la prueba del rojo de metilo. La prueba es positiva sólo para la fermentación ácido
mixta debido a que el pH desciende por debajo de 4.4 y el color del indicador pasa de
amarillo a roo (Prescott et al., 2004).
b. Explique en qué consiste la prueba de Voges-Proskauer y como se interpreta.
La prueba de Voges-Proskauer es un procedimiento colorimétrico que detecta la acetoína,
precursor del butanodiol, siendo positiva con los fermentadores butanodióicos pero no con
los fermentadores ácido mixtos (Prescott et al., 2004).
c. ¿Qué géneros de Enterobacterias se pueden identificar y diferenciar con estas pruebas?
Los géneros Escherichia, Salmonella, Proteus, Enterobacter, Serratia, Erwinia y algunas
especies de Bacillus (Prescott et al., 2004).
17. Sobre la respiración Aeróbica
a. Esquematice el ciclo de Krebs o de los Ácidos Tricarboxílicos (ATC).

b. Indique en qué paso se genera NADH, ATP y FADH.


 Luego de que el isocitrato se oxida y se descarboxila dos veces para formar a-
cetoglutarato y, a continuación succinil-CoA. En este punto el ciclo se forma dos NADH
y se pierden dos átomos de carbono en forma de CO2 (Prescott et al., 2004).
 Cuando el ciclo entra en la etapa de los cuatro carbonos, durante la cual dos pasos de
oxidación producen 1 FADH2 y 1 NADH por cada molécula de acetil-CoA. Además, se
produce GTP (Una molécula de alta energía equivalente al ATP) (Prescott et al., 2004).
c. ¿Cuál es el sustrato necesario con el que se inicia el Ciclo de los ATC?
Acetil-CoA
18. Explique cómo la energía almacenada en los transportadores NADH y FADH sintetizados
durante el Ciclo de los ATC, sirven para generar ATP en la Fosforilación oxidativa.
La energía que almacenan los transportadores (NADH y FADH) fluye con potenciales de reducción más
negativos a los transportadores con potenciales más positivos y, finalmente, se combinan con O2 y H+
para formar agua. La diferencia en los potenciales de reducción entre el O2 y el NADH hace posible la
liberación de una gran cantidad de energía, que posteriormente sirve para sintetizar ATP (Prescott et al.,
2004).
19. Explique cómo se genera la fuerza motriz de protones (FMP) durante la respiración aeróbica.
Conteste ¿Para qué utiliza la célula la fuerza motriz de protones?
Después de la cesión de dos átomos de hidrógeno del NADH al FAD, se liberan dos H+ cuando el FADH
cede dos electrones (solamente) a una proteína con hierro y azufre que forma parte del Complejo I,.
Cuando esta proteína con hierro no hémico reduce la coenzima Q, se toman dos protones de la disociación
del agua en el citoplasma. La coenzima Q pasa un electrón cada vez al complejo del citocromo bc1,
(Complejo III). La principal función del complejo citocromo bc1 es transferir electrones de las quinonas al
citocromo c, de modo acoplado a la translocación de protones a través de la membrana originando la
acumulación de OH- en el citoplasma y de protones en la superficie externa de la membrana. (Madigan
et al., 2015).
20. Incluya un esquema de una membrana de una procariota en donde se localice la cadena
respiratoria y sus cuatro complejos.

21. Ejemplifique un sistema transportador de electrones que realiza la transferencia de electrones


desde el NADH hasta el aceptor de los electrones O2.
La cadena transportadora de electrones mitocondrial está compuesta de una serie de transportadores de
electrones que operan conjuntamente para transferir electrones de dadores, como el NADH y el FADH, a
aceptores como el O2. Los electrones fluyen desde los transportadores con potenciales de reducción más
negativos a los transportadores con potenciales más positivos y, finalmente, se combinan con O2 y H+
para formar agua. La diferencia en los potenciales de reducción entre el O2 y el NADH es grande, unos
1.14 voltios, y hace posible la liberación de una gran cantidad de energía. El cambio de potencial en
algunos puntos de la cadena es suficientemente grande como para proporcionar la energía necesaria para
producir ATP, en analogía a la energía de una cascada que puede ser aprovechada para obtener energía
eléctrica (Prescott et al., 2004).
22. Explique cómo la fuerza motriz de protones puede generar energía para la síntesis de ATP.
Cuando los protones vuelven a la matriz mitocondrial por la fuerza motriz de protones, se sintetiza ATP
en una inversión de la reacción hidrolítica del ATP (Prescott et al., 2004).
23. Explique qué es la fosforilación oxidativa. ¿Cuantos H + se necesitan para generar un ATP por
fosforilación oxidativa?
Es el proceso metabólico final (catabolismo) de la respiración celular. Es la transferencia de electrones de
los equivalentes reducidos NADH y FADH, obtenidos en la glucólisis y en el ciclo de Krebs hasta el oxígeno
molecular, acoplado con la síntesis de ATP. (Madigan et al., 2015).
24. Elabore un cuadro donde se especifique cuántos moles de ATP se generan como consecuencia
de la glucosa hasta CO2 y H2O durante el proceso de Respiración Aerobia en una célula
procariota. Tome en cuenta los procesos de la Glucólisis, Ciclo de Krebs y la Cadena Respiratoria.
Fosforilación a nivel sustrato Fosforilación oxidativa Total ATP
Glucólisis 2 ATP 6 ATP 8 ATP
Ciclo de Krebs 1 GTP (Equivalente a ATP) 12 + 2 ATP 15 ATP (x2)

Total 38 ATP por molécula


de glucosa
(Madigan et al., 2015).

Referencias Bibliográficas
Madigan, M. T., Martinko, J. M., Bender, K. S., Buckley, D. H. & Stahl, D. A., (2015). Brock Biology of
Microorganisms. Glenview, United States of America: Pearson Education
Prescott, L. M., Harley, J. P. & Klein, G. A., (2004). Microbiología. Madrid, España: McGraw Hill