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Química María Teresa de Jesús Saavedra

ENZIMAS
Un catalizador es un agente capaz de acelerar una reacción química, sin formar parte de
los productos finales ni degradarse en el proceso.
En el medio biológico de desempeñan como catalizadores un grupo numeroso y variado
de sustancias denominadas ENZIMAS, como todo catalizador, las enzimas actúan
disminuyendo la energía de activación (Ea) de una reacción, aumentando la velocidad
de reacción en el orden de 1014. Por otro lado las enzimas no modifican la constante de equilibrio.

Diagrama Energético
Las enzimas biológicas son mucho más efectivas que la mayoría
de los catalizadores inorgánicos. Además las Enzimas muestran
mucho mayor especificidad. Un catalizador inorgánico suele
actuar acelerando reacciones químicas muy diversas mientras
que una enzima sólo cataliza una reacción química determinada.
Las sustancias sobre las cuales actúan las enzimas reciben el
nombre genérico de SUSTRATOS.
Las enzimas debido a su especificidad pueden distinguir aún
entre dos sustancias que son isómeros ópticos

.
NOMENCLATURA Y CALIFICACION M. T. S
 Pueden designarse agregando el sufijo “ASA” al nombre del sustrato sobre el cual actúan.
Por ejemplo: Amilasa sustrato: almidón,
También según el tipo de reacción catalizada.
Por ejemplo: Deshidrogenasa catalizan sustracción de hidrógenos
Descarboxilasas catalizan la eliminación de un grupo carboxilo
 Otras tienen nombres arbitrarios, por ejemplo: pepsina, ptialina salival, etc.
 Todas las enzimas poseen un Nombre Sistemático, se basa en identificar el sustrato preferente de la Enz, el tipo de
reacción catalizada y la terminación “asa”, la identificación consiste en un código numérico ( de 4 números)
encabezado por las siglas EC (Enzyme Commission). El primer número indica la Clase, el segundo la Subclase y
el tercero y cuarto los Grupos Químicos que intervienen en la reacción. Ej: ATP glucosa fosfotransferasa: E.C.
2.7.1.1(2: clase: transferasa, 7: subclase: fosfotransferasa, 1: sub-subclase: fosfotransferasa que utiliza grupo
hidroxilo como receptor), cuyo nombre trivial es Hexoquinasa.

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CLASIFICACION:
1. OXIDORREDUCTASA: catalizan reacciones de ox–red, es decir la transf.. de e-. Ej: lactato de hidrogenasa
2. TRANSFERASAS: catalizan la Transf.. de grupos qcos, ej.: aminotransferasas, quinasa (grupos de alta energía).
3. HIDROLASAS: catalizan la hidrólisis del sustrato (son reacciones hidrolíticas las que catalizan), ej.: ribonucleasa,
lipasa (hidroliza a los trigliceridos), amilasa (al almidón).
4. LIASAS: catalizan la adición de grupos químicos a dobles enlaces o viceversa.
5. ISOMERASAS: incluyen a todas las enzimas que catalizan interconversión de isómeros de cualquier tipo: ópticos,
geométricos o de posición. Es decir la transferencia de grupos dentro de la misma molécula para dar isómeros.
6. LIGASAS O SINTETASAS: catalizan la unión de 2 compuestos para formar otro más complejo.Formación de
enlaces C-C, C-S, C-O y C-N por reacciones de condensación acopladas a hidrólisis de ATP.
EJEMPLOS:
1-OXIDOREDUCTASAS:
-Peroxidasa: utilizan como oxidante H2O2 en lugar de oxígeno. Ej: NADH peroxidasa, citocromo oxidasa
NADH + H+ + H2O2 → NAD+ + 2 H2O
-Catalasa: Transforma dos moléculas de H2O2 en dos moléculas de agua con desprendimiento de oxígeno.
H2O2 + H2O2 → 2 H2O + O2
2-TRANSFERASAS:
-Aminotransferasas: transfieren grupos aminos de un aminoácido a un alfa cetoácido.
α cetoglutarato + L-aminoácido → L-glutamato + α cetoácido
-Quinasa: transferencia de un grupo fosforilo del ATP a una molécula de sustrato.
ATP ADP
Glucosa Glucosa 6 fosfato
-Glucosiltransferasa: Transferencia de glucosa activada (UDP-Glucosa) a la cadena creciente de glucógeno.
3-HIDROLASAS:
-Ureasa: Urea + agua → CO2 + 2 NH3
4-LIASAS:
H2O M. T. S
-Fumarasa: Fumarato → L- Malato
5-ISOMERASAS:
-Epimerasas: catalizan la inversión a nivel del carbono asimétrico.
-Mutasas: catalizan la transferencia intramolecular de un grupo funcional.
Ej: 3-Fosfoglicerato 2-Fosfoglicerato
Fosfoglicerato
mutasa
-Interconversión Aldosa-Cetosa
-Interconversión Cis-Trans
6-LIGASAS:
-DNA Ligasa: unión fosfodiéster entre nucleótidos, con ruptura de ATP.

NATURALEZA QUIMICA DE LAS ENZIMAS:


 La mayoría (todas prácticamente) de las enzimas tienen naturaleza PROTEINICA. Pero también se han aislado
moléculas de ácido ribonucleico (RNA) con actividad catalítica (RIBOZIMAS), pero estas constituyen muy pocas
excepciones.
 Hay enzimas que solo pueden realizar sus funciones catalíticas en asociación con otra molécula:COFACTOR:
puede ser INORGANICO u ORGANICO.
El ORGANICO puede ser:
COENZIMA: - Son moléculas orgánicas pequeñas derivadas generalmente de vitaminas.
- Intervienen activamente en la reacción. Por ej. Aceptando o cediendo hidrógeno, electrones o
grupos químicos
- Las oxidoreductasas, transferasas, isomerasas y ligasas requieren la participación de
coenzimas.
GRUPO PROSTETICO: Similar al cofactor pero está unido fuertemente a la apoenzima.
EL INORGANICO: iones inorgánicos: Fe, Cu, Zn, Mo, Mg
Los cofactores pueden participar de las siguientes maneras:
- Fijándose fuertemente a la proteína y no son modificados al salir del sitio catalítico.
- Como un segundo substrato, salen modificados del sitio catalítico y por lo general requieren de otra enzima para
volver al estado original.
Las dos posiciones, proteínica y no proteínica, son indispensables para la actividad de la enzima y al sistema completo
se lo llama HOLOENZIMA, y está constituido por la proteína, a la cual se llama APOENZIMA y el COFACTOR, que
es la molécula no proteínica.
HOLOENZIMAS = APOENZIMA + COFACTOR
Se sabe que la porción proteínica o apoenzima es la que tiene capacidad de reconocer con precisión al sustrato y dar la
ESPECIFICIDAD a la enzima (HOLOENZIMA).
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METALOENZIMA: En algunas enzimas la presencia de iones metálicos en la molécula es indispensable para la
acción catalítica, para el mantenimiento de la estructura terciaria o cuaternaria de la proteína o para ambas cosas. Si el
componente metálico no está se pierde la actividad catalítica (actividad enzimática)
Ejemplo: Fe (hierro): Citocromos, son hemoproteínas
Cu (cobre): ácido ascorbico oxidasa
Zn (zinc): anhidrasa carbónica.
Mn (manganeso): acetil CoA carboxilasa
CATALISIS ENZIMATICAS: Las enzimas aumentan la velocidad de reacción disminuyendo la energía de activación
(Ea). De esta manera mayor número de moléculas alcanzan más rápidamente el estado de transición para la
transformación química.
Es importante que las ENZIMAS (como todo catalizador) NO MODIFICAN EN ABSOLUTO EL CAMBIO NETO DE
ENERGIA, NI LA CONSTANTE DE EQUILIBRIO.
La reacción enzimática ocurre así:
E + S ⇋ ES ⇋ E + P
Enzima Sustrato Complejo E/S Enzima Producto
La enzima es reutilizable muchas veces.

En una Enzima tenemos:


CENTRO DE FIJACION DEL SUSTRATO: Formado por determinadas cadenas laterales de aminoácidos que
reconocen y unen el sustrato, por lo que dá la especificidad de sustrato.
SITIO ACTIVO: El sustrato se une a un lugar definido de la enzima, es decir a determinadas cadenas laterales de
aminoácidos, denominado sitio activo, centro activo, sitio catalítico, que es el responsable de la acción catalítica. Este
sitio puede o no coincidir con el centro de fijación del sustrato. Los modelos de unión ENZIMA – SUSTRATO son:
- LLAVE-CERRADURA ( FISCHER): La enzima contiene una impresión negativa del sustrato.

M. T. S

- ADAPTACION O AJUSTE INDUCIDO (KOSHLAND): La interacción del sustrato adecuado con la enzima
induce un cambio conformacional en la misma, que induce a la formación del centro activo. Es decir que el centro
de fijación y el sitio activo no están completamente formados, sino que al acercarse el sustrato se induce un cambio
conformacional que provoca la adaptación entre sustrato y enzima.

- AJUSTE INDUCIDO Y DE TENSION SOBRE EL SUSTRATO: La tensión sobre el sustrato inducida por su
unión a la enzima “deforma” los ángulos de enlace y “activa” al sustrato.

ZIMOGENOS: Ciertas enzimas son producidas en las células, al estado de precursores inactivos llamados
ZIMOGENOS, PROENZIMAS o PREENZIMAS. Generalmente son proteínas simples que se transforman en enzima
activa por un proceso de hidrólisis.

ACTIVIDAD ENZIMATICA: La actividad de una enzima puede medirse midiendo la cantidad de producto formado,
o de sustrato consumido, en un tiempo dado, en una mezcla que contenga todos los factores requeridos para la reacción.
La cantidad de enzima se indica en UNIDADES INTERNACIONALES (UI), una unidad de cualquier enzima es la
cantidad que cataliza la transformación de un micromol de sustrato por minuto, bajo determinadas condiciones de Ph,
temperatura, etc.
-UI: μmoles/min (a 25°C)
-KATAL: moles/seg 1Katal: 6x107 UI

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FACTORES QUE MODIFICAN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA:

A. CONCENTRACION DE ENZIMAS: La velocidad es directamente proporc. a la [enzima]: enzima;  velocidad.


Velocidad
de reacción

[E]

B. CONCENTRACION DE SUSTRATO: Al comienzo de la reacción la actividad enzimática (  ) con el (  ) de


sustrato hasta llegar a un determinado valor máximo; a partir del cual la velocidad ya no se modifica por el  de
sustrato, esto se debe a que las enzimas se saturan. Teóricamente la velocidad máxima sólo se alcanzaría a una
CONCENTRACION INFINITA DE SUSTRATO. La km (constante de Michaelis) corresponde a la
concentración de sustrato con la cual la velocidad de reacción alcanza un valor igual a la mitad de la
máxima. Km tiene un valor fijo para cada enzima y sirve para identificarla. A mayor afinidad de la enzima
por el sustrato menor valor de Km.
CURVA DE MICHAELIS -MENTEN

[S] > Km, la veloc.


tiene una cinética
de orden cero

[S] < Km, la veloc. tiene


una cinética de 1er orden

M. T. S
La Ecuación de Michaelis –Menten es: V= Vmax . [S]
Km + [S]
-Si [S] = Km → Velocidad de reacción = ½ Vmáx

RECTA DE LINEWEAVER-BURK

CARACTERISTICAS DE Km:
- Es un parámetro de la actividad enzimática
- La Km es inversamente proporcional a la actividad enzimática
- Elevado valor de Km , baja afinidad, baja actividad.
- Bajo valor de Km , elevada afinidad, elevada actividad

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C. TEMPERATURA: La velocidad de una reacción química aumenta cuando la temperatura asciende, ya que se
incrementa la energía cinética. La velocidad de muchas reacciones biológicas prácticamente se duplican por cada
10°C de aumento de la temperatura. La T° óptima para la mayoría de animales Homeotermos es la de 37°C. En
gral a partir de los 60°C ocurre desnaturalización.

D. Ph: Para la mayoría de las enzimas la actividad óptima se encuentra entre valores de PH de 6 a 8. Pero hay
excepciones como ser: la PEPSINA del jugo gástrico que trabaja a un Ph óptimo muy ácido (1,5); la FOSFATASA
ACIDA a un PH de 4,5 y la FOSFATASA ALCALINA a un Ph de 9,5. Ph extremos provocan desnaturalización de
la molécula enzimática y por lo tanto inactivación.

INHIBIDORES ENZIMATICOS: M. T. S
Existen agentes químicos que inhiben la acción catalítica de las enzimas.
La inhibición puede ser reversible o irreversible.

 INHIBIDORES IRREVERSIBLES: Son las sustancias que producen cambio permanente en la enzima, por
medio de enlaces covalentes. Provocan modificaciones químicas en los grupos catalíticos. Al ser sometido a
diálisis, no se separan la enzima del inhibidor, lo cual indica que es una inhibición irreversible, esto lo diferencia de
un reversible. Ejemplo: venenos órgano – fosforados: FLUOROFOSFATO DE DIISOPROPILO (DFP): Inhibe a
la acetilcolinesterasa (la cual al estar inhibida no podrá pasar la acetilcolina a acetato y colina).
Dentro de este tipo de sustancias se incluye a los llamados “Inhibidores Suicidas”. Son sustancias que, por su
semejanza estructural con el sustrato, pueden ocupar el sitio activo y ser transformados por la enzima en productos.
Estos forman uniones covalentes con la enzima y bloquean irreversiblemente el sitio activo, es como si la enzima
se hubiese suicidado. Los inhibidores suicidas son muy específicos. Un ejemplo es el alopurinol, inhibidor de
xantina oxidasa, utilizado en el tratamiento de la gota.
 INHIBIDORES REVERSIBLES: Pueden ser de 3 tipos:
1. COMPETITIVOS: Actúan:E
a. Debido a que presentan similitudes estructurales con el sustrato y compiten ambos por el sitio
activo.
b. Algunos actúan uniéndose al sitio activo a pesar de no poseer similitud estructural con el sustrato.
c. O también puede pasar que el inhibidor y el sustrato se fijen a diferentes sitios de la enzima; pero la
unión de uno de ellos impida la del otro.
2. NO COMPETITIVOS: Son compuestos que se unen a la enzima en un lugar de la molécula diferente del
sitio activo y provocan una disminución de la velocidad.
3. ANTICOMPETITIVOS ó ACOMPETITIVOS: Se da en casos en los cuales participan varios sustratos
en la reacción.
Inhibidor Competitivo

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-Aumenta la Km y no cambia la Vmáx
-Este tipo de inhibición es revertida por aumento de la concentración de Sustrato
-Ejemplo: SULFANILAMIDAS (SULFAS), es análogo estructural al ácido para aminobenzoico(PABA), por lo
cual compite con este.
El PABA es necesario para la síntesis de ácido fólico necesario para el desarrollo y multiplicación de varios
Patógenos.
Con la SULFA no se genera ácido fólico (ya que la sulfa compite con el PABA) por lo cual el patógeno no posee
dicho ácido fólico para su desarrollo y multiplicación.

Ácido para amino benzoico (PABA) Sulfanilamida

Inhibidor No Competitivo M. T. S

-No cambia Km y disminuye la Vmáx


-Este tipo de inhibición no es revertida por aumento de la concentración de Sustrato
-Ejemplo: CN-

Inhibidor Anticompetitivo ó Acompetitivo

-Disminuye la Km y la Vmáx
-Este tipo de inhibición no es revertida por aumento de la concentración de Sustrato

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REGULACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA
Existen diferentes maneras de regular la actividad enzimática, como ser: regulación estequiométrica, por
compartimentalización, inducción o represión de enz, reg. por subunidades reguladoras, regulación alostérica,
regulación covalente y otras. Las que se desarrollaran son:

-REGULACION ALOSTERICA
ENZIMAS ALOSTERICAS: Son aquellas que pueden ser inhibidas o activadas reversiblemente por un agente
modificador que actúa uniéndose a la enzima en un sitio distinto al del sitio catalítico. Estas enzimas presentan
estructura cuaternaria, y no siguen la cinética de Michaelis-Menten, poseen una CURVA SIGMOIDEA, lo que indica
COOPERATIVIDAD entre las subunidades (la unión de un sustrato afecta la unión a los otros sitios)
Las enzimas alostéricas pueden adoptar dos conformaciones: Relajada (R) y Tensa (T). La forma R es la mas activa
porque se une al sustrato con mas afinidad.
Los agentes que se fijan al sitio alostérico se llaman: moduladores, modificadores o efectores alostéricos, que provocan
un cambio conformacional en la enzima y asi se altera la afinidad por el sustrato. Los moduladores POSITIVOS
aumentan la afinidad, estimulando la actividad enzimática, y los NEGATIVOS disminuyen la afinidad, y
deprimen la actividad enzimática.
Cuando el modulador es distinto al sustrato, el efecto se denomina HETEROTROPICO, y si el modulador es el
mismo que el sustrato se denomina HOMOTROPICO.
Los moduladores alostéricos se dividen en dos clases:
- CLASE K: alteran la Km, pero no la Vmáx.
- CLASE V: alteran la Vmáx., pero no la Km.

Curva de actividad de una Enzima alostérica:

Activ. Catal.

[Sustrato]

M. T. S
-REGULACION COVALENTE

Se establece cuando la actividad de una enzima se ve modificada por la adición o e eliminación de grupos químicos con
uniones covalentes. Este tipo de regulación puede ser:- Irreversible: enzimas de la coagulación sanguínea, enzimas de
la digestión, caspasas de la apoptosis, etc..
- Reversible: permanente, por ej: fosforilación – desfosforilación
Acetilación – desacetilación, metilación - desmetilacion, oxidación-reducción, etc..
Un ejemplo de reg covalente por fosf-desfosf es la enzima
GLUCOGENO FOSFORILASA, la cual inicia la degradación del glucógeno.
ATP ADP
GF(b) GF P (a)

Pi H20

ISOENZIMAS O ISOZIMAS: Son las distintas proteínas que presentan la misma actividad enzimática. Es decir que
son distintas formas moleculares de una misma enzima que presentan especificidad por el mismo sustrato. Ej: La
Láctico deshidrogenasa presenta cinco isoenzimas: LDH1, LDH2, LDH3, LDH4 y LDH5, de mayor a menor migración
electroforética. Las cantidades relativas de estas isoenzimas son distintas en cada órgano o tejido, siendo la LDH5 la
más abundante en hígado, y la LDH1 en riñón.
El método más utilizado para la demostración de ISOENZIMAS es la ELECTROFORESIS EN GELES.