FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

PROCESO PLAN CURRICULAR

MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL

INFORME DE LABORATORIO

Asignatura: Microbiología Industrial Nota:

Número de 2
práctica:
Fecha de 2018//10/02 Fecha de entrega: 2018/11/09
realización:
Integrantes: Caizapanta Estalin, Guerrón Evelyn, Herrera Jenny, Vásquez
Grupo N°: Stefanía
C2

1. Título: Nutrición de los microorganismos. Preparación de un medio de cultivo para el

microorganismo Lactococos lactis Cremoris y Lactococos lactis subsp Lactis presente
en el queso crema de la marca Tony.

2. Objetivos

1. Objetivo general:

 Preparar medios de cultivo con nutrientes mínimos a partir de sus componentes básicos,
para favorecer el crecimiento de Lactococos lactis Cremoris y Lactococos lactis subsp
Lactis presente en el queso crema de la marca Tony.

2. Objetivos específicos:

 Determinar la composición porcentual del medio para las bacterias Lactotocos.

 Aislar el microorganismo Lactococos en el agar PCA y MRS
 Determinar el crecimiento de Lactococos y Bacillus Clausii en el medio de cultivo
preparado.

3. Fundamento teórico:

Descripción del microorganismo.

Lactococcus lactis, es un microorganismo gram positivo, no esporulado de fermentación

ácida láctica de metabolismo homofermentativo, produce ácido láctico a partir de
azúcares, tiene forma de cocos que generalmente se encuentra en la leche y productos
lácteos. Produce nisina como compuesto antimicrobiano. (González-Martínez, 2003)
Bacillus clausii, es un gram positivo, estrictamente aeróbico, formador de esporas,
produce efectos beneficiosos en el tracto gastrointestinal, mediante la liberación de
compuestos antimicrobianos que modulan de la actividad inmune aumentando la
producción de inmunoglobulina secretada en el organismo. (MacFaddin, 2003)
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Composición del medio formulado.

Es el conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes que crean

condiciones necesarias para el desarrollo del microorganismo.
El AGAR AGAR. Utilizado como agente gelificante para dar solidez al medio de cultivo,
su composición es dominante en un polisacárido que se obtiene de algas marinas, no es
utilizado como nutriente.
FUENTE DE PROTEÍNA Y FUENTE DE CARBONO. Se utilizó el lactosuero que se
produce como subproducto de la mayoría de las industrias queseras y debido a su alto
contenido de lactosa y diversas proteínas se considera una buena fuente de carbono y
nitrógeno. (M. Peñuela, 2001) Existen varios tipos de lactosuero: el primero, denominado
dulce, está basado en la coagulación por la renina a pH 6,5; el segundo, llamado ácido,
resulta del proceso de fermentación o adición de ácidos orgánicos o ácidos minerales para
coagular la caseína como en la elaboración de quesos frescos (Panesar, 2007).
Como FACTOR DE CRECIMIENTO se utiliza el Potasio del plátano ya que son
sustancias que deben ser aportadas preformadas, porque la bacteria las requiere, pero no
puede sintetizarlos a partir de nutrientes ya sea por falla o ausencia de una vía metabólica
determinada, el Potasio ayuda a que el microorganismo cumpla sus funciones
correctamente y lleve a cabo sus tareas básicas del día a día.

Datos Teóricos

Requerimientos nutricionales de los microorganismos

Tabla Nº1. Composición elemental aproximada de la célula microbiana
Elemento Porcentaje del peso seco
Carbono 50
Oxígeno 20
Nitrógeno 14
Hidrógeno 8
Fósforo 3
Azufre 1
Potasio 1
(Stainer, 1977)
Tabla Nº2. Componentes principales para la formulación del Agar destinado al
crecimiento de Lactococos.

FUENTE ALIMENTO SUSTRATO

Carbono y energía Suero Carbohidrato (Lactosa)
Nitrógeno Suero Proteína (Caseína y otras proteínas)
Factor de crecimiento Plátano Potasio K
Regulador e Inhibidor Mandarina Ácido ascórbico

 A continuación, se describirán los componentes principales de cada uno de los

alimentos empleados:
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Tabla Nº3. Tabla de los componentes principales del suero de leche

Componentes % Porcentaje
Agua 87,56
Carbohidratos (lactosa) 5
Ceniza 6,03
Proteínas 0,6
Caseína 0,003
Grasa 0,10
Minerales: K, Ca ,P, Na , Mg ------
(Kosikowski & Mistry, 2018)
Tabla N°4. Tabla de los sustratos principales del plátano y la mandarina
ALIMENTO COMPONENTES mg
Plátano Potasio K 1491
Mandarina Ácido Ascórbico 26,7
(USDA, 2018)
5. Cálculos

FORMULACIÓN
La formulación se realizó con el propósito de identificar el crecimiento Lactococcus
lactis Cremoris o Lactococcus lactis subsp Lactis presentes en el Queso crema
Tony ambos pertenecientes a la especie Lactococos.
 Para la formulación del agar se consideró la formulación de 500 mL de agar de los
cuales la presencia de agua que corresponde a 80 % de agua y 20 % de solutos
(Stainer, 1977)

Obtención de Lactosa
Partiendo de la consideración que el suero de leche contiene 5% de lactosa se estable el
porcentaje de carbono.
20 g de solutos 100 % de la solución
X 50% de la solución
X= 10 g de solutos que corresponden a la Lactosa
100 mL de suero 5g de Lactosa
X 10g de Lactosa
X= 200mL de suero para 500 mL de solución

Obtención de factores de Crecimiento (Potasio)

Se agregó 0,6 gramos de potasio tomando en cuenta que está presente en forma de sales
(Stainer, 1977)

Obtención de los Reguladores e Inhibidores

Inicialmente se planteó el uso de mandarina que provee el sustrato ácido ascórbico como
inhibidor y para reducir el pH neutro =6,9 del suero teóricamente a un pH ácido de 4
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óptimo para el crecimiento de Lactococos, sin embargo luego de la dilución de 200 mL de

suero se alcanzó el pH requerido sin la necesidad de agregar el ácido ascórbico.

6. Resultados

Tabla N°5. Composición del agar expresado en porcentaje de materia

FUENTE SUSTRATO CANTIDAD PORCENTAJE
Agua 300 mL 80%
Fuente de carbono y energía Lactosa 200mL 15,7%
Factor de crecimiento Potasio 0,6g 0,12%
Gelificante Agar-Agar 20g 4%

Nota: La cantidad de agar empleado inicialmente no gelificó el medio por lo cual fue
necesario duplicar el porcentaje de Agar - Agar del 2% al 4% .

Tabla N°6. Aislamiento de Lactococos en el agar PCA y MRS

AGAR PCA AGAR MRS

Crecimiento: Negativo Crecimiento: Negativo

Descripción: No se observa crecimiento
del microorganismo aislado, solo se puede
apreciar unos punto blancos en el 4
cuadrante causado por una contaminación
en el medio.
Descripción: No se observó crecimiento
del microorganismo solo se puede
apreciar un olor de lácteo por este motivo
tomamos un inóculo de este medio y se
procedió a inocular en caldo BHI.
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Tabla N°7. Propagación del inóculo del medio MRS al caldo BHI.
Crecimiento: Negativo

Descripción:

Durante el proceso de siembra del Lactococos en el caldo

BHI no se observó el enturbiamiento del medio por lo tanto
no se procedió a continuar con el microorganismo.

 MEDIO DE CULTIVO
Posteriormente se cambió el microorganismo a Bacillus Clausii obtenido de la
Enterogermina inoculados en el agua estéril hasta obtener la escala McFarland 0,5 M en
el medio de cultivo preparado en el laboratorio. Se procedió a sembrar en el medio
formulado en donde se obtuvieron los siguientes resultados.

Tabla N°8. Resultados obtenidos del Bacillus Clausii obtenido de la Enterogermina

inoculados en el agua estéril hasta obtener la escala McFarland 0,5 M en el medio de
cultivo formulado.
AGAR ANTES DE INOCULAR AGAR DESPUÉS DE INOCULAR

Resultado: Crecimiento Negativo

Descripción: El medio es color blanco Descripción: No se observa el
pálido con puntos blancos, propio del crecimiento de microorganismos.
medio.
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7. Discusión de resultados:

En la presente práctica se preparó un medio de cultivo, para favorecer el crecimiento de

Lactococos lactis Cremoris y Lactococos lactis subsp Lactis presente en el queso crema
de la marca Tony; se utilizó como fuente de carbono y energía además de nitrógeno el
suero de leche (lactosa), como factor de crecimiento el plátano (Potasio K) y gelificante
agar-agar, no se utilizó el ácido ascórbico presente en la mandarina debido a que el medio
tenía un pH bajo acido siendo el necesario para el microorganismo.

Se evidencio un precipitado blanco en el medio después de la esterilización, esto se debió

a la temperatura provocando una desnaturalización de las proteínas del suero de leche
principalmente la caseína, lactalbúmina y lactoglobulina. Al provocarse esta
precipitación no afecta el valor nutritivo del medio, pero pueden hacer difícil la
observación y la valoración cualitativa del desarrollo microbiano. (Stainer, R, 1977 pg
93).

El medio no fue productivo porque el queso crema de la marca Tony presenta Lactococos
lactis Cremoris y Lactococos lactis subsp Lactis estos microorganismos ayudan a la
palatabilidad de los quesos, además en sus ingredientes (Anexo Nº1) se declara la
presencia de preservante (Sorbato de potasio), este va a inhibir el crecimiento de los
mismos, teniendo por lo tanto microorganismos no viables. En la práctica no se observó
crecimiento en el agar PCA ni MRS (Tabla Nº6).

Al no obtener microorganismos viables del queso crema de la marca Tony se procedió

a cambiar de microorganismo utilizando el Bacillus Clausii presente a la Enterogermina.
Por lo tanto para elaborar un medio de cultivo para un microorganismo debe tener una
mezcla equilibrada de los nutrientes requeridos para Bacillus Clausii a concentraciones
que permitan un buen crecimiento (Stainer, R, 1977 pg 86). Entonces el medio que se
preparó a partir de los componentes antes mencionados fue para el Lactococos al cambiar
de microorganismo al Bacillus Clausii no tuvo los requerimientos nutricionales para su
crecimiento Tabla N º8.

Conclusiones:

Se preparó un medio de cultivo con nutrientes mínimos como fuente de carbohidrato y

nitrógeno el suero de leche, factor de crecimiento el potasio del plátano. El Lactococos
lactis Cremoris y Lactococos lactis subsp Lactis declarado en el queso crema de la marca
Tony, no evidenció crecimiento en el medio de cultivo.

Se determinó las cantidades de los componentes de un medio para las bacterias Lactotocos
presente en el queso crema de la marca Tony, las cuales fueron de agua 300 mL siendo
su porcentaje en materia del 80%, lactosa 200 mL aportando 15,7% de la composición
final, potasio 0,6 g, agar-agar 20 g aportando el 4% de la composición final del medio.

No se aisló Lactococos en el agar PCA y MRS presentando este último un olor lácteo en
el medio pero no se evidenció la presencia de colonias.
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No se determinó el crecimiento de Lactococos y Bacillus Clausii por lo tanto el medio

formulado no es un medio óptimo para el crecimiento de estos microoganismos.

9. Cuestionario:

Mencione 3 microorganismos homofermentativos y 3 microorganismos

heterofermentativos.

HETEROFERMENTATIVAS:
Lactobacillus buchneri es el mejor ejemplo de un heterofermentador. En la fermentación
heteroláctica los Lactobacillus están formados por: Lactobacillus plantarum,
Lactobacillus ramnosus, Lactobacillus kéfir, Lactobacillus reuteri. (Parra, 2010); (Pérez,
2006 ).

HOMOFERMENTATIVAS:
La especie homofermentativas más común es Lactobacillus plantarum. Otras especies
comunes homofermentativas incluyen Lactobacillus o Pediococcus y Enterococcus
faecium.
Bacterias ácido-lácticas homofermentativas: Mesófilas: Lactococcus lactis subesp.
Lactis; Lactococcus lactis subesp. Cremoris (Rodríguez, 2012).

9. Bibliografía:

 González-Martínez, B. E.-T.-S. (2003). Bacteriocinas de probióticos. Salud Pública y

Nutrición, 2, 4.
 M. Peñuela, G. V. (2001). Evaluación de medios de cultivo preparados a partir de suero
de leche enriquecido, para la producción de ácido láctico, con Lactobacillus plantarum y
Lactobacillus casli. Facultad de Ingeniería, 24, 35-39.
 MacFaddin, J. F. (2003). Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de
importancia clínica. Ed. Médica Panamericana.
 Panesar, P. K. (2007). Bioutilización de suero para la producción de ácido láctico.
 Kosikowski, F., & Mistry, V. (2018). Cheese and Fermented Milk Foods. Connecticut. .
 Stainer, R. (1977). Microbiología . Madrid .
 USDA. (Abril de 2018). Base de datos nacional de nutrientes del Servicio de
Investigación Agrícola del Departamento de Agricultura de los Estados Unidos .
Obtenido de
https://ndb.nal.usda.gov/ndb/foods/show/09041?fgcd=&manu=&format=&count=&m
 Parra, R (2010). Bacterias acido lácticas papel funcional en los alimentos. Recuperado de
http://www.scielo.org.co/pdf/bsaa/v8n1/v8n1a12.pdf. Obtenido el 08/11/18.
 Pérez, M. (2006 ). Inoculantes Microbiales para ensilaje. Recuperado de
https://fyi.uwex.edu/forage/files/2014/01/Microbial-Inoculants-for-Silage-Espanol.pdf.
Obtenido el 08/11/18.
 Rodríguez, E (2012). Industrias alimentarias, productos lácteos fermentados. Recuperado
de https://edgardopedullarodriguez.wordpress.com/tag/heterofermentativas/. Obtenido el
08/11/18.
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10. ANEXO

ANEXO Nº1. Descripción de los microorganismos presentes en el Queso crema Tony

Microorganismos

Lactococos lactis
Cremoris
Lactococos lactis
subsp Lactis

ANEXO Nº2. Descripción de la Enterogermina

Microorganismos

Bacillus Clausii