Validación en Métodos

de Medición Analítica

Steve Acco García - INACAL/DM

Mayo 2017, Lima - Perú

Perú, calidad que deja huella

Difusión

Perú, calidad que deja huella

• Aprueba las Normas Técnicas Peruanas, que son voluntarias a diferencia de los
reglamentos técnicos.
• ESTANDARIZA los bienes y servicios, con el objetivo de incrementar su calidad y
seguridad.
• Contribuye a la competitividad, intensifica la competencia e incrementa las
exportaciones.

• Evalúa la competencia técnica de los organismos de evaluación de la conformidad para

dar garantía de un servicio confiable y reconocido nacional e internacionalmente.

• Apoyamos el desarrollo de productos y servicios competitivos en el ámbito nacional e

internacional, garantizando seguridad y cumplimiento de estándares de calidad.

• Garantiza la trazabilidad internacional de las mediciones.

• Presta servicios de calibración de equipos e instrumentos de medición a los laboratorios
de calibración y a la industria.
• Custodia los patrones nacionales para asegurar la uniformidad de las mediciones en el país.

• Promueve una adecuada gestión e implementación de la Política nacional para la Calidad

y el desarrollo de la Cultura de la Calidad.
• Investiga e identifica la demanda y oportunidades de desarrollo de la infraestructura de la
calidad, identifica las brechas en materia de calidad y el desarrollo de estrategias de
intervención.

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Contenido

1. Conceptos

2. Características de desempeño del método

3. Ejemplo de validación

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CONCEPTOS

Confirmación, a través de la aportación de evidencia

objetiva, de que se han cumplido los requisitos para un
uso o aplicación previsto (ISO 9000: 2005)

Confirmación, a través de examen y aportación de

evidencia objetivas, de que se cumplen los requisitos
particulares para un uso especifico previsto
(ISO/IEC 17025: 2005)

Verificación, donde los requisitos especificados son

adecuados para un uso previsto (VIM 2012)

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CONCEPTOS

Estándares de calidad

Clientes

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CONCEPTOS

¿Qué es validar un método?

Proceso para definir requisitos analíticos, y la confirmación de

que el método cuenta con capacidades consistentes con las
aplicaciones requeridas.

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CONCEPTOS

Diagrama para la validación de métodos

Necesidad del cliente

a resolver establecer
requisitos analíticos

Identificar/modificar un
Evaluar el Continuar con
método existente o
rendimiento el desarrollo del
desarrollar un nuevo
del método método
método SI

Es
Revisión NO
El método NO factible
de
se adecua un
requisitos
al uso? desarrollo
analíticos?
mayor?

SI SI

Edición del Redefinir

informe de la requisitos NO
validación analíticos

Utilizar el Imposible utilizar el

método método

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CONCEPTOS
Diagrama para la validación de métodos

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CONCEPTOS

¿Por que validar un método?

Proporciona resultados confiables para el cliente,

CONFIABILIDAD ya que se demostró la adecuación al uso previsto.

Proporciona confianza al laboratorio, ya que al

CONFIANZA realizar la validación adquirió un conocimiento
sólido y experiencia en los detalles prácticos del
método.
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CONCEPTOS

¿Validación o Verificación?
Definición de
requisitos
En el marco de la ISO 17025: analíticos

El laboratorio debe validar los métodos no normalizados,

los métodos que diseña y desarrolla, los métodos
Apartado 5.4.5.2 normalizados empelados fuera del alcance previsto, así
como las ampliaciones y modificaciones de los métodos
normalizados, para confirmar que los métodos son aptos
para el uso previsto.
Confirmación de
requisitos
especificados

El laboratorio debe confirmar que puede aplicar

Apartado 5.4.2 correctamente los métodos normalizados antes de
utilizarlos para los ensayos o calibraciones

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CARACTERISTICAS DE DESEMPEÑO

 Selectividad
 Límite de detección y límite de cuantificación
 Intervalo de trabajo
 Sensibilidad analítica
 Veracidad
 Precisión
 Incertidumbre

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CARACTERISTICAS DE DESEMPEÑO

Selectividad

Grado en el que un método puede ser

utilizado para determinar analitos
particulares en mezclas o matrices sin
interferencias de otros componentes de
comportamiento similar

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CARACTERISTICAS DE DESEMPEÑO

Límite de detección y límite de cuantificación

Limite de Cuantificación
Nivel más bajo en el
Limite de detección cual el desempeño es
Concentración más baja del aceptable para una
analito que puede ser detectada aplicación típica.
por el método a un nivel de
confianza especificado.

Línea basal Ruido

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CARACTERISTICAS DE DESEMPEÑO

Límite de detección y límite de cuantificación

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CARACTERISTICAS DE DESEMPEÑO

Intervalo de trabajo

El ‘intervalo de trabajo’ es el intervalo en el cual el método proporciona resultados con una

incertidumbre aceptable. El extremo inferior del intervalo de trabajo está determinado por
el límite de cuantificación, LOQ. El extremo superior del intervalo de trabajo está definido
por las concentraciones a las cuales se observan anomalías significativas en la sensibilidad
analítica.

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CARACTERISTICAS DE DESEMPEÑO

Sensibilidad analítica

Es la variación de la respuesta del instrumento que corresponde a una variación de la

magnitud medida (por ejemplo, una concentración de analito), es decir, el gradiente de la
curva de respuesta.

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CARACTERISTICAS DE DESEMPEÑO

Veracidad

La veracidad de medición
no es una magnitud y no
puede expresarse
numéricamente
VIM Por lo general, esta
evaluación se expresa
cuantitativamente en
términos de 'sesgo'

Exactitud de medición Veracidad de medición

Grado de concordancia entre un Grado de concordancia entre la

valor medido y un valor verdadero media de un número infinito de
de un mensurando valores medidos repetidos y un
valor de referencia

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CARACTERISTICAS DE DESEMPEÑO

Precisión

Grado de concordancia entre las indicaciones o los valores medidos obtenidos

en mediciones repetidas de un mismo objeto, o de objetos similares, bajo
condiciones especificadas (VIM).

Se expresa mediante parámetros estadísticos que describen la propagación de

los resultados, típicamente la desviación estándar (o desviación estándar
relativa), calculada a partir de los resultados obtenidos mediante la realización
de mediciones repetidas en un material adecuado en condiciones especificas.

Límites de precisión:
Para un número de relativamente grande de grados de libertad y a un nivel de
confianza al 95 %, t se aproxima a 2.

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CARACTERISTICAS DE DESEMPEÑO

Incertidumbre

Parámetro no negativo que caracteriza la dispersión de los valores atribuidos a un

mensurando, a partir de la información que se utiliza (VIM).

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VALIDACIÓN

Método para la determinación de etanol

acuoso por cromatografía gaseosa

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VALIDACIÓN
Método para la determinación de etanol acuoso por
cromatografía gaseosa

 La determinación del alcohol se realiza empleando la técnica de cromatográfica

gaseosa con sistema de detección de Ionización de Flama.

 El método de cuantificación es curva bracketing con estándar interno.

 No existe fase de tratamiento (extracción, concentración, etc).

 Las muestras a analizar provienen de lotes elaborado a partir de etanol

comercial de pureza mayor o igual a 99,9 % y agua purificada.

 El estándar interno empleado es el 3 pentanol de pureza mayor o igual a 99,5 %.

 La columna empleada es HP-FFAP; longitud: 50 m; ID: 0,32 mm y Film: 0,50 um

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VALIDACIÓN
Método para la determinación de etanol en agua por
cromatografía gaseosa

 Las mediciones realizadas con este método servirá para caracterizar al

candidato a material de referencia de etanol en agua.

 USO PREVISTO: CARACTERIZAR MATERIAL DE REFERENCIA PARA CALIBRACIÓN

DE ALCOHOLIMETROS EVIDENCIALES.

Requisito: Incertidumbre expandida menor o igual a 3 %.

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VALIDACIÓN
Método para la determinación de etanol en agua por
cromatografía gaseosa

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VALIDACIÓN
Método para la determinación de etanol en agua por
cromatografía gaseosa
Selectividad

Las muestras a analizar poseen una matriz no compleja, etanol y 3-

pentanol (purezas > 99,5 %), diluidos en agua purificada.
Se avaluará la separación de ambos compuestos en los cromatogramas
obtenidos con la metodología analítica indicada en el procedimiento. Para
la evaluación se empleará soluciones de referencia (material de referencia
certificado del NIST, diluido gravimétricamente). Así también, se evaluará
los cromatogramas de 5 muestras en blanco (agua purificada), no se espera
presencia de interferentes en la muestra.

Se aceptará resolución de los componentes mejor a 2.

Solo se debe observar la presencia de dos picos en todo el cromatograma.

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VALIDACIÓN
Método para la determinación de etanol en agua por
cromatografía gaseosa

Selectividad
Nombre de Datos del cromatograma Tiempo de retención (min) Ancho del pico W (min) Resolución entre
la muestra Fecha Identificación Etanol 3-pentanol Etanol 3-pentanol compuestos
nivel 1 20/06/2013 001F0901 3,565 4,353 0,17 0,09 3,7
nivel 1 20/06/2013 001F0902 3,567 4,355 0,17 0,09 3,7
nivel 1 20/06/2013 001F0903 3,567 4,355 0,17 0,09 3,7
nivel 1 20/06/2013 001F1701 3,566 4,353 0,17 0,09 3,6
nivel 1 20/06/2013 001F1702 3,565 4,353 0,17 0,09 3,6

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VALIDACIÓN
Método para la determinación de etanol en agua por
cromatografía gaseosa

Limite de detección y limite de cuantificación

El propósito de uso del método es caracterizar muestras provenientes
de lotes de concentraciones establecidas:
- 0,00038 g/g
- 0,00063 g/g
- 0,00102 g/g
De acuerdo a la NMP 012:2010, la menor concentración expresada en
fracción masa/masa a emplear en las calibraciones es 0,00013 g/g,
por lo que se analizaron réplicas de estándares de concentración
0,00008 g/g.

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VALIDACIÓN
Método para la determinación de etanol en agua por
cromatografía gaseosa

Intervalo de trabajo
El propósito de uso del método es caracterizar muestras provenientes
de lotes de concentraciones establecidas:

- 0,00038 g/g -> dilución por E.I -> 0,00034 g/g -> [0,00031 ; 0,00038]
- 0,00063 g/g -> dilución por E.I -> 0,00057 g/g -> [0,00051 ; 0,00062]
- 0,00102 g/g -> dilución por E.I -> 0,00092 g/g -> [0,00083 ; 0,00101]

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VALIDACIÓN
Método para la determinación de etanol en agua por
cromatografía gaseosa

Intervalo de trabajo

± 10 % alrededor de la concentración objetivo

Concentraciones objetivo

 Se espera r mejores a 0,9999

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VALIDACIÓN
Método para la determinación de etanol en agua por
cromatografía gaseosa

Sensibilidad Analítica

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VALIDACIÓN
Método para la determinación de etanol en agua por
cromatografía gaseosa

Incertidumbre
Para las mediciones se emplea MRC de NIST con incertidumbre de 2 %.

El modelo matemático identifica 10 magnitudes de entrada de las cuales

las principales son la incertidumbre de los estándares y la repetibilidad de
las áreas.

La incertidumbre relativa expandida obtenida para el rango mas alto es

aprox. 2,3 %

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VALIDACIÓN
Método para la determinación de etanol en agua por
cromatografía gaseosa

Veracidad
La determinación del sesgo se realizó en los tres rangos. Se empleo
MRC de NIST con incertidumbre de 2 %.
El propósito de uso del método es caracterizar muestras provenientes
de lotes de concentraciones establecidas:

- 0,00038 g/g -> dilución por E.I -> 0,00034 g/g -> [0,00031 ; 0,00038]
- 0,00063 g/g -> dilución por E.I -> 0,00057 g/g -> [0,00051 ; 0,00063]
- 0,00102 g/g -> dilución por E.I -> 0,00092 g/g -> [0,00083 ; 0,00101]

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VALIDACIÓN
Método para la determinación de etanol en agua por
cromatografía gaseosa
Datos del cromatograma
Nombre de la
Concentración
muestra Fecha Identificación
determinada
MRC r1 2013-08-16 033F0401 0,000902
MRC r2 2013-08-16 033F0801 0,000903
MRC r3 2013-08-16 033F1201 0,000902 x MRC  xmed  k  u 2 MRC  u 2 med .....(a )
MRC r4 2013-08-16 003F1601 0,000903
MRC r5 2013-08-16 003F2001 0,000902
MRC r6 2013-08-16 003F2201 0,000902
MRC r7 2013-08-16 003F2301 0,000902
MRC r8 2013-08-16 003F2401 0,000902
MRC r9 2013-08-16 003F2501 0,000902
MRC r10 2013-08-16 003F2501 0,000903 u(x)
Promedio de las mediciones 0,000902 0,000010
Valor de refenrencia 0,000901 0,000009
Sesgo relativo (%) 0,09

Si se cumple la relación (a), puede considerarse que el sesgo no es

significativo.

0,000001 ≤ 2 ∗ (0, 000009)2 + 0,000010 2 = 0,000027

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VALIDACIÓN
Método para la determinación de etanol en agua por
cromatografía gaseosa
Precisión
Debido a que la incertidumbre expandida máxima esperada es 3 % y
que las principales fuentes de contribución son la incertidumbre de los
estándares de calibración (u definido) y la repetibilidad de las
respuestas del GC (u a establecer), puede aproximarse el criterio para
el s o C.V. Para uno de los rangos, se tiene:
Nombre de la Datos del cromatograma Concentración
muestra Fecha Identificación determinada
MRC r1 2013-08-16 033F0401 0,000902
MRC r2 2013-08-16 033F0801 0,000901
MRC r3 2013-08-16 033F1201 0,000901
MRC r4 2013-08-16 003F1601 0,000901
MRC r5 2013-08-16 003F2001 0,000900
MRC r6 2013-08-16 003F2201 0,000901
Desviación estandar 0,000001
Desviación estándar relativa (%) 0,08

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Gracias

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