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COMPOSICION QUIMICA DEL PROPOLEOS

M.Sc. Julio César Bracho Dpto. de Química, Fac. de Ciencias, UNALM

INTRODUCCION El empleo del PROPOLEOS por parte del hombre data de miles de años desde que la sociedad comenzaba a desarrollarse. Sin embargo, el mundo a alcanzado estadíos de desarrollo en campos tan importantes para la salud del hombre como son la medicina, la farmacología y toxicología. Las experiencias y conocimientos alcanzados en esos campos de la ciencia demandan de todo un conjunto de estudios farmacológicos, toxicológicos, así como de caracterización química del propóleos como aspecto imprescindible para el empleo de este producto apícola con la certeza de que la salud humana no va a recibir un golpe de traición en el futuro. En la actualidad, ya no existen dudas de los beneficios del empleo del propóleos que cada día gana más adeptos y sin dudas el conocimiento de su composición química le ha dado un voto de confianza al mundo científico, así como las respuestas a innumerables incógnitas. Muchas incógnitas se han despejado con el desarrollo de estudios químicos de este valioso producto apícola. Sin embargo, han surgido otras que constituyen un reto a la sabiduría a la lucha del hombre por desentrañar los misterios de la naturaleza. El objetivo de este trabajo es describir la evolución que ha tenido el estudio de la composición química del propóleos desde principios de siglo hasta el momento actual, así como el interés del mundo científico por el conocimiento de su caracterización química.

COMPOSICION QUIMICA DEL PROPOLEOS Cada vez que nos asombramos de las maravillosas propiedades de los productos apícolas, denominadas muchas veces de increíbles, resulta imposible no pensar en el trabajo de las abejas, que puede catalogarse de gigantesco. Para obtener el propóleos estos himenópteros desprenden con sus mandíbulas y patas delanteras las resinas y bálsamos de las especies vegetales. Posteriormente lo mezclan con cera antes de su empleo en la colmena. Sin lugar a dudas, es un trabajo fatigoso, que en el decursar de la historia de la humanidad el hombre observaba cotidianamente (Asis, 1989). La forma en que el propóleos es obtenido por las abejas permite asegurar que su composición básica consta del resinas, bálsamos y ceras. Los primeros estudios de composición química del propóleos se desarrollaron a principios de siglo en Europa. Debido a la complejidad de este producto natural y por ser una sustancia de origen vegetal con características de resina que complican la extracción de sus constituyentes, esos primeros intentos de caracterización química se basaban en el fraccionamiento simple (Helfenberg, 1908; Bohrisch, 1908; Dieterich, 1908; Dieterich, 1911; Dieterich, 1911; Caillas, 1923; Jungkunz, 1932. Nicolas, 1947; Ghisalberti,

1979).

Los resultados eran discretos, pero de gran importancia, ya que se pudo llegar al conocimiento general de su composición burda (Tabla 1).

Tabla 1. Composición química burda del propóleos

COMPONENTES DEL PROPOLEOS

CONCENTRACION

(%)

Resinas y bálsamos

50 - 55 %

Ceras

25 - 35 %

Constituyentes volátiles

10 %

Polen

5 %

Otras materias orgánicas y minerales

5 %

La aplicación de técnicas clásicas de cromatografía solo permitían obtener resultados de caracterización limitados. No obstante, en los primeros albores de este siglo se lograron

identificar varios constituyentes, entre ellos: alcohol cinámico, ácido cinámico (Kustenmacher, 1911); vainillina (Dieterich, 1911) y la crisina (Jaubert, 1927) (Figura 1).

A partir de este momento se intensificó el interés por el conocimiento de la composición química

del propóleos. La crisina era el primer flavonoide identificado en el propóleos, cuya presencia comenzaba a dar respuesta a las tantas incógnitas que existían alrededor de la potente actividad biológica de este producto apícola.

la potente actividad biológica de este producto apícola. Fig. 1 Constituyentes químicos del propól eos

Fig. 1 Constituyentes químicos del propóleos identificados a principios de siglo

Los trabajos de aislamiento e identificación de constituyentes volátiles desarrollados por Janes y Bumba (-bisabolol, acetil--betuletol y el ácido benzoico entre otros) abrieron un nuevo campo de investigación, lo que conjuntamente con los estudios desarrollados en Rusia por Prokopovich

y cols. en los años 50 y más tarde los de Petri y cols. en Hungría, evidenciaron la necesidad de conocer la composición química de la fracción de volátiles con el mismo rigor que se venía trabajando con los constituyentes no volátiles (Janes y Bumba, 1974; Petri y cols., 1986; Prokopovich y cols., 1956; Prokopovich y cols.; 1957). En estos años se lograron identificar una gran diversidad de constituyentes, fundamentalmente flavonoides. Los investigadores europeos vislumbraban que la presencia de flavonoides constituía la respuesta a la actividad que presentaban los propóleos del viejo continente. Por tanto, era imprescindible aplicar técnicas de análisis más eficientes como la Cromatografía

Líquida de Alta Resolución (CLAR), Cromatografía de Gases (CG), Cromatografía de Gases- Espectrometría de Masas (CG-EM) y los métodos espectroscópicos (UV, IR, EM y RMN). Solo el empleo de esas técnicas hizo posible trabajar eficazmente con los flavonoides, que debido a su carácter de polifenoles complejos y de gran polaridad complicaban excesivamente los estudios de aislamiento y caracterización. Su aplicación dió un impulso palpable al conocimiento de la composición química del propóleos, posibilitando la identificación de un número de constituyentes superior a la centena en los 80. (Tabla 2) (

Tabla

2.

Resumen

de

constituyentes

identificados

en

propóleos

europeos hasta principio de los años 80

FAMILIA DECOMPUESTOS

CANTIDAD

Acidos aromáticos y sus ésteres

41

Acidos grasos y sus ésteres

11

Alcoholes

8

Aldehídos

6

Aminoácidos

26

Azúcares

11

Cetonas

3

Esteroides

4

Flavonoides

37

Hidrocarburos

21

Terpenoides y otros compuestos

10

Total de componentes

178

Las investigaciones desarrolladas en Europa, llegaron a lo que se podría denominar de cúspide a finales de los años 80 y principio de los 90 con los estudios de investigación de Greenaway y cols en Inglaterra. Se llevó a cabo la caracterización química más completa que existe hasta el momento en propóleos mediante CG-EM, demostrándose que esa técnica es la más potente para

el estudio del propóleos, así como en lo específico de los flavonoides. Se lograron identificar más de 150 constituyentes químicos en muestras puntuales. En la Tabla 3 podemos ver un resumen actualizado de los constituyentes identificados en propóleos europeos (Greenaway y cols., 1987; Greenaway y cols., 1989; Greenaway y cols., 1990; Greenaway y cols., 1991).

Tabla 3. Resumen actualizado de constituyentes identificados en propóleos europeos.

FAMILIA DECOMPUESTOS

CANTIDAD

Aminoácidos

27

Acidos grasos y sus ésteres

21

Acidos aromáticos y sus ésteres

56

Alcoholes

9

Aldehídos

7

Azúcares

11

Cetonas

6

Esteroides

4

Flavonoides

44

Hidrocarburos

23

Terpenoides y otros compuestos

15

Total de componentes

223

Por esto, el conocimiento de la composición química de los propóleos europeos es muy amplio, tal es así que en todas las latitudes solamente se relacionaba su actividad biológica con la presencia de los flavonoides que ya se habían identificado en el viejo continente. Sin embargo, los estudios desarrollados por Ghisalberti y cols. con propóleos de origen australiano comenzaron a originar dudas respecto a la mal impuesta homogeneidad de composición química

como una alternativa ante el desconocimiento de los constituyentes del propóleos de otras regiones del mundo. Se identificaron estructuras novedosas reportadas por primera vez en el propóleos, tales como el pterostilbeno y el xantorreol, el resto de los constituyentes identificados coincidían con los reportados en propóleos europeos como los flavonoides (Figura

2).

La vegetación de Australia posee similitudes con la de Europa. Sin embargo, la presencia de xantorreol y derivados del estilbeno en especies endémicas de ese continente como la Xanthorrhoea presii y eucaliptos, respectivamente, permiten justificar el hallazgo de nuevos constituyentes en el propóleos como el xantorreol (Referencias??) A partir de este momento se rompían los esquemas impuestos a los propóleos de diversas latitudes respecto a las características de su composición química. Por otra parte, surgían nuevas incógnitas acerca de los propóleos de las zonas tropicales de América, donde la vegetación es mucho más rica y variada que en los continentes europeo y australiano.

y variada que en los continentes europeo y australiano. Figura 3. Constituyentes novedosos identifi cados en

Figura 3. Constituyentes novedosos identificados en propóleos de origen australiano

El estudio de muestras de propóleos americanos del trópico en los años 90 terminó definitivamente con el mito de los flavonoides como responsables principales de su actividad biológica. El análisis de propóleos venezolanos mediante CG-EM dieron a la luz resultados novedosos, los cuales se resumen a continuación (Tomás-Barberán y cols., 1993):

1. Presencia de 9 Benzofenonas Polipreniladas en las fracciones de compuestos fenólicos reportadas por primera vez en el propóleos.

El estudio de propóleos procedentes de Brasil permitió demostrar la existencia de una composición química inusual. Los polifenoles originados por el Alamo en propóleos de zonas templadas estaban prácticamente ausentes, lográndose aislar e identificar 3 constituyentes diterpénicos novedosos con una potente actividad antimicrobiana. (Aga y col., 1994)

Estudios realizados por Bankova y cols. con propóleos brasileños permitieron reconocer una composición química completamente inusual, cuyas características son las siguientes:

1. Presencia de constituyentes encontrados también en propóleos europeos (Hidroquinona, Acidos hidroxibenzoicos y en especial el Acido dihidroxicinnámico), se originan por el Alamo en Europa. sin embargo, en Sudamérica esas especies no existen y para colmo los niveles de esos constituyentes son muy superiores a los de los propóleos europeos. 2. Presencia de flavonoides y ésteres de ácidos fenólicos a niveles de trazas. 3. Presencia de Mono y Diprenilacetofenonas como mayoritarios y otros constituyentes reportadas por primera vez en el propóleos. 4. Presencia de elevados contenidos de Acido dihidroxicinámico y de Acetofenonas Preniladas, así como de algunos terpenoides específicos ( -terpineol y 2Z,6E-farnesol, ledol y spatulenol).

La composición químicas de las muestras estudiadas permiten diferenciarlas de otras procedentes de zonas templadas (Bankova y cols., 1995).

El estudio de propóleos cubanos ha arrojado resultados totalmente novedosos desde el punto de vista de su composición química. En este sentido, los trabajos de caracterización desarrollados

por Cuéllar en 1990 permitieron aislar y caracterizar una estructura novedosa en el propóleos. La misma conjuga la fusión estructural de una cromona (típica de flavonoides) y de una benzoquinona (Figura 3).

(típica de flavonoides) y de una benzoquinona (Figura 3). Figura 3. Estructura novedosa aislada e identificada

Figura 3. Estructura novedosa aislada e identificada del propóleos cubano

La caracterización de extractos hexánicos a partir de propóleos cubanos permitió aislar e identificar por primera vez la presencia de dos triterpenos nombrados Acetato de -amirina y Acetato de lupeol (Figura 4) (Bracho y cols., 1992; Bracho y cols., 1993)

(Figura 4) (Bracho y cols., 1992; Bracho y cols., 1993) Figura 4. Triterpenos aislados y caracter

Figura 4. Triterpenos aislados y caracterizados del propóleos de origen cubano

El aislamiento y caracterización de volátiles a partir de tres muestras de propóleos cubanos (P 1 , P 2 , P 3 ) mediante CG-EM, permitió alcanzar resultados novedosos (Bracho y cols., 1992; Bracho,

1995):

1. La composición de constituyentes volátiles fue de gran complejidad (Figura 5).

2. Estudios cualitativos permitieron identificar una familia de Naftoquinonas reportadas por primera vez en muestras de propóleos (Figura 6).

por primera vez en muestras de propóleos (Figura 6). Figura 6. Núcleo central de las quinona

Figura 6. Núcleo central de las quinonas presentes en propóleos de origen cubano

3. Desde el punto de vista cuantitativo esos constituyentes son mayoritarios para todas las muestras estudiadas (Tabla 4).

Tabla 4. Concentración (ppm) y porcentaje (%) de cada familia

respecto al total de compuestos orgánicos presentes

Familia de compuestos orgánicos

Concentración ( % del total ) P 2

P

1

P

3

alcoholes

22.16 (3.6)

14.89 (1.5)

3.61 (0.7)

aldehídos

20.60 (3.3)

4.75 (0.5)

0.76 (0.1)

cetonas

6.83 (1.1)

6.21 (0.6)

0.46 (0.1)

ésteres

2.81 (0.5)

-

-

éteres

263.99 (42.9)

225.04 (23.3)

116.30

 

(21.7)

fenoles

2.20 (0.4)

1.45 (0.2)

-

hidrocarburos

106.48 (17.3)

171.98 (17.8)

171.00

 

(31.9)

naftoquinonas

187.39 (30.4)

540.01 (56)

243.38

 

(45.3)

otros

3.06 (0.5)

0.39 (0.04)

1.29 (0.2)

Actualmente la caracterización de volátiles se continúa con el objetivo de lograr la caracterización total de un conjunto de naftoquinonas presentes en los propóleos estudiados, cuyas estructuras no han podido ser establecidas totalmente. Finalmente, Fajardo y cols. en 1996, estudiaron las fracciones de ácidos grasos e insaponificables pertenecientes a las ceras presentes en propóleos de diferentes localidades de Cuba, obteniéndose resultados muy interesantes (Tabla 5) (Fajardo y cols., 1996)

Tabla 5 Componentes identificados en las fracciones de ácidos grasos e insaponificables de las ceras pertenecientes a propóleos cubanos

COMPONENTES IDENTIFICADOS

Acidos Grasos

A. Palmítico

A. Esteárico

A. Oleico

A. Linoleico

A. Araquíco

A. Behénico

A. Lignocérico C 24 (

Alcoholes

C 12, C 14, C 16 , C 18 C 20-30,. C 32, C 34, C 36

Dioles

C 16 (0) 1,23

C 18 (0) 1,25

C 18 (2 1,29

tetracosanodiol

hexacosanodiol

C 18 (1) 1,27 octacosanodiol

triacontanodiol

C 20 (0) Triterpenoide

C 22 (0 -amirina

Los estudios cuantitativos permitieron establecer que el ácido palmítico es el componente mayoritario en las fracciones de los ácidos grasos de los propóleos investigados. Este resultado constituye una novedad, ya que según la literatura el ácido mirístico constituía el constituyente mayoritario de esa fracción (Heinen y Linkens, 1972).

CONCLUSIONES Teniendo en cuenta los resultados alcanzados en el estudios del propóleos se puede asegurar que su composición química depende de la formación vegetal presente en la zona de recolección de las muestras. Desde este punto de vista deja de tener sentido el carácter de homogeneidad que se le atribuía a la composición química del propóleos de diversas latitudes. Pruebas fehacientes de ello lo constituyen los resultados alcanzados con muestras de origen Venezolano, Brasileño y Cubano. Las zonas tropicales a diferencia de las templadas presentan una mayor diversidad de especies vegetales. El Abedul, el Alamo, el Pino y las coníferas en general constituyen la fuentes fundamentales del propóleos en el continente europeo, en América las fuentes de propóleos en su mayoría son otras y por ende la composición química es diferente. Todo esto le confiere un carácter de suigeneris a los propóleos del continente americano por cuanto la actividad biológica de esos propóleos es potente y novedosa desde el punto de vista de diferentes aplicaciones médico-farmacológicas, que en muchos casos puede ser más potente que lo reportado hasta el momento. Por todo esto, se debe continuar los estudios químico-farmacológicos de los propóleos tropicales

y

de esa forma lograr en un futuro no lejano su más eficaz empleo en el mejoramiento de la salud

y

el bienestar del hombre.

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