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Efecto de varias citoquininas en la micropropagación de

Arbutus × andrachnoides

Enlace

K.F. Bertsouklis y M. Papafotiou

Laboratorio de Floricultura y Paisajismo

Departamento de Ciencias de Cultivos

Universidad Agrícola de Atenas

Iera Odos 75, 118 55 Atenas

Grecia

Palabras clave: aclimatación, Ericaceae, in vitro, planta nativa, enraizamiento, multiplicación de
brotes,zeatina

Resumen

Arbutus × andrachnoides Link. (A. unedo × A. andrachne) es uno de los dos híbridos entre especies
del género Arbutus que se encuentran en la zona de la Macchia mediterránea.

Se trata de un arbusto perenne tolerante a la sequía o de un pequeño árbol con un follaje verde
oscuro brillante y una corteza de color canela que se divide en tiras que revelan el interior verdoso.
La planta es particularmente atractiva durante el período invernal, cuando se fructifica con
pequeños frutos,

frutas rojas-anaranjadas similares a las fresas. Estas características confieren al Arbutus ×
andrachnoides el potencial de ser introducido para su uso en el paisaje urbano y suburbano, así
como para la reforestación a medida que rebrota después de un incendio. En este estudio se
investigó la micropropagación de la planta. Para la iniciación del cultivo in vitro, se utilizaron
segmentos del tallo nodal como explantes extraídos en mayo de plantas adultas cultivadas en
estado silvestre cerca de Kalamos (Attiki, Grecia). Los explantes se cultivaron en sales medias de
plantas leñosas sólidas (agar de 8 g/l) con 3% de sacarosa, 100 mg/l de mio-inositol, 1 mg/l de
tiamina, 0.5 mg/l de ácido nicotínico y 0.5 mg/l de piridoxina (WPM), complementadas con 2.5 mg/l
de benciladenina.

(BA), kinetina (KIN), 2-isopentenil adenina (2iP) o zeatina (ΖΕΑΤ). El 70% de los explantes cultivados
en el medio ZEAT produjeron brotes, mientras que los de las otras citoquininas produjeron brotes
en porcentajes inferiores al 50%, con un mínimo del 25% en KIN. El número de brotes producidos
por explante no se vio afectado por el tipo de citoquinina, pero la longitud del brote y el número de
nudos por brote fueron de dos a tres veces mayores en ZEAT en comparación con BA y 2iP, mientras
que en KIN los brotes no se alargaron. En la subcultura, la ZEAT fue mucho más efectiva para la
multiplicación de brotes que la 2iP, lo que da una tasa de multiplicación cuatro veces mayor,
mientras que los medios complementados con BA o KIN no produjeron ningún brote. Por lo tanto,
la ZEAT demostró ser la citoquinina más efectiva para el inicio del cultivo y la multiplicación de A. ×
andracnoides. 95% de los microbrotes enraizados in vitro sobre WPM(medio de cultivo de plantas
leñosas) con 1 mg/L IBA (acido indolbutirico familia de las auxinas)y el 80% de las microplantas se
establecieron con éxito ex vitro en 1 perlita:1 compost para plantas ericáceas

pavarii Pampanini (costa de Libia). andrachne (fresa y oriental. × andrachnoides Link... así como para la reforestación a medida que rebrota después de un incendio. (The European Garden Flora. rubra) se reportan como follaje menor. Se informa (desconocido. Α. 2003) que una pareja de Α × andracnoides se encuentran en algunas islas croatas y son un poco misteriosos. 2002. cuando se fructifica con pequeñas. Algunos botánicos yugoslavos consideran que el yugoslavo A. Hay 12-20 spp. de color naranja-rojo.. andrachne L. unedo (Gonçalves y Roseiro. según el autor. 1994. La planta es particularmente atractiva durante el período invernal. 2002). andrachne en la región del Mediterráneo oriental) y A. (A. Gomes y Canhoto. Estas características le dan a Αrbutus × andrachnoides el potencial para ser introducido para su uso en el paisaje urbano y suburbano. unedo y A. canariensis Veill. canariensis. . andrachne es. 1997). A. en los territorios americanos. en las Islas Canarias) (Torres et al. como primer paso para su introducción como planta ornamental.. 2002). × androsterilis Salas. Informes sobre la micropropagación de Α × andrachnoides.griego o chipriota. × andrachnoides es un arbusto de hoja perenne tolerante a la sequía o un pequeño árbol con un aspecto brillante. andrachne (Bertsouklis y Papafotiou.. (Islas Canarias). unedo × A. × andrachnoides está incluida en una lista de especies vegetales protegidas en Croacia (Baricevic et al. unedo × A.según el autor). A. 1992). respectivamente). La micropropagación es un método sugerido para la propagación de especies raras. Α × andrachnoides Link. y A. × andracnoides.(v/v). (región del Mediterráneo oriental) A. 2009). de hecho. que incluye taxones leñosos de arbustos perennes con forma de laurel. unedo) crece de forma silvestre en Croacia. INTRODUCCIÓN El género Arbutus pertenece a la subfamilia Vaccinioideae (o Arbutoideae. ya que sólo uno de ellos la especie de los padres (A. Algunas plantas con flores rojas (var. Α. Α. 2002). En Grecia se encontraron A. aunque hay informes sobre la micropropagación de su especie parental A. como fresas. mientras que en el Mediterráneo En la zona de la Macchia sólo hay cuatro especies y dos híbridos: Arbutus unedo L. (Bačic et al. 2009). Mereti y otros. follaje verde oscuro y una corteza de color rojo canela que se divide en tiras que revelan el color verdoso interior. Acebes y Arco (A. y hojas esclerófilas de la familia Ericaceae (Torres et al. así como su híbrido Α. El propósito de este estudio fue desarrollar un protocolo eficiente para la propagación in vitro de Α × andrachnoides.

). Para los subcultivos subsiguientes. en enero.8% (p/v) agar.6% w/v hipoclorito de sodio) con 0. agua. extirpados finales de mayo a partir del crecimiento joven de una planta adulta que crece en estado silvestre cerca de Kalamos (Attiki. 100 mg/L de mio-inositol. para plantas Ericaceous (Max.8-1. con agua destilada estéril y sus bases recortadas antes de colocarlas verticalmente en tubos de ensayo (25×100 mm. que incluían 1-2 yemas. Los tubos de ensayo estaban cubiertos con película plástica transparente. Los microproyectos se basaron en WPM con IBA de 1 mg/L.0 cm de largo.1% de Tween 20. seguido de cuatro enjuagues de 3 min. Se utilizaron 48 explantes por tratamiento. 3%. 1974). fotoperíodo de 16 h bajo 37. Después de la escisión. Para la aclimatación ex vitro se transfirieron microbrotes bien enraizados a recipientes de plástico transparente de 500 ml. todos los explantes se lavaron bien con un grifo de agua corriente. RESULTADOS Y DISCUSIÓN . Ericaceous Compost.5 mg/L de ácido nicotínico y 0.6-5. La importancia de los resultados fue probada por ANOVA y los medios fueron comparados por la t de Student a P=0. se registraron los datos evaluando brotes de más de 3 mm. se extirparon de toda la longitud de los brotes jóvenes. 2- isopentenil adenina (2iP) o zeatina (ΖΕΑΤ). 1981). inicialmente recubiertas de película transparente. repetidos 4 veces por tratamiento. Geeste. el mismo tipo de explantes mencionado anteriormente se transfirió a recipientes Sigma de 100 ml cubiertos por tapas Magenta B (Sigma-Aldrich Inc.5 mg/L cada una fue en comparación: benciladenina (BA). (p/v) sacarosa y 0.05. Los explantes fueron esterilizados en la superficie con 30% (v/v) de blanqueador comercial (4. que contenían 1 parte de perlita y 1 parte de compost (v/v). Los explantes de 0. Klanmann-Deilmann.5 mg/L de piridoxina) (Mullin et al. Se utilizaron dieciséis explantes.5 μmol m-2 s-1 luz fluorescente. El pH del medio se ajustó a 5. vitaminas Mullin (1 mg/L) Tiamina.. Alemania). un explante por tubo) con un medio de 10 ml. Después de 45 días en cultivo. se utilizaron segmentos del tallo nodal como explantes.MATERIALES Y MÉTODOS Para la iniciación del cultivo in vitro. GmbH. kinetina (KIN). bajo la niebla. Se utilizó el diseño completamente aleatorio. Grecia). con fotoperíodo de 16 horas (luz natural de día extendida con luz incandescente). El efecto de 4 citoquininas a 2. durante 10 min.7 antes de esterilizar en autoclave a 121°C durante 20 min. y se realizó un subcultivo utilizando los medios del cultivo inicial. excluyendo la punta del brote. Los cultivos se incubaron a 25°C. 0. El medio de cultivo consistía en el medio de la planta leñosa (WPM) sales basales (McCown y Lloyd.

mientras que los de las otras citoquininas produjeron brotes con porcentajes inferiores al 50%.. reportado para A.4. 2009).0 y 2.9 cm) con ZEAT.7. la ZEAT a 2. en comparación con medios con BA. Del mismo modo. respectivamente (Fig. como varias especies de Vaccinium (Isutsa et al. 1b y 2). Sin un sistema radicular eficaz. Se ha informado de que en las plantas de la familia Ericaceae. 1994. Enraizamiento in vitro y ex vitro fueron similares a las de A. de estos atractivos miembros del género Arbutus encontrados en Grecia.4 nodos por explosión). unedo obtenidas in vitro se aclimataron fácilmente (Gonçalves y Roseiro. × andrachnoides. 1994).. la producción fue de 1. Ostrolucká y otros (2002) estudió la influencia de la zeatina en la propagación microclonal del Vaccinium corymbosum (Ericaceae) y reportó que la capacidad de regeneración de los brotes depende en gran medida del cultivar y tipo y concentración de citoquinina. la ZEAT fue mucho más efectiva para la multiplicación de brotes que la 2iP (Figs. respectivamente (Fig. mientras que en los medios con BA. andrachne (Bertsouklis y Papafotiou. con un mínimo del 25% en el medio con215 2. mientras que en los materiales con ZEAT o BA.5 mg/L ZEAT produjo brotes alargados..8. mientras que los medios complementados con BA o KIN no produjo ningún brote. La ZEAT fue muy efectiva en el número de nodos producidos por brote (11. Gomes y Canhoto.3 o 0.5 mg/L KIN (Fig.3 o 1. 2002. respectivamente) (Figs. 2009) y lo mismo es cierto para otros miembros de la familia de las Ericaceae. 4). En los materiales con KIN o 2iP sólo se produjo un brote por explante.. los compuestos naturales zeatina y iP son más eficaces que el otras citoquininas para la proliferación de brotes (George et al. Resultados similares sobre la eficacia de varias citoquininas en la producción de brotes. 1 y 3) dando un índice de multiplicación 5 veces mayor (formación de brotes (%) × media) número de brotes × longitud media de brotes) (Fig. Por lo tanto. El enraizamiento es esencial para el éxito de la micropropagación. 1c). Mereti et al. 2009). KIN o 2iP por sesión fueron sólo 3. En la subcultura. 0.El setenta por ciento de los explantes puestos en cultivo en mayo en el medio con 2. La longitud de los brotes fue mayor (1. la aclimatación de las plantas será difícil y la tasa de propagación de las plantas puede verse gravemente afectada (Gonçalves et al.6. las plántulas de A. KIN o 2iP (0. 2008). al.8.5 mg/L demostró ser la más efectiva citoquinina para el inicio del cultivo y la multiplicación de A. Noventa y cinco de los microbrotes fueron enraizados in vitro en WPM con 1 mg/L IBA y el 80% de las microplantas establecidas con éxito ex vitro en 1 perlita:1 compost para plantas ericáceas (v/v). . Se continúa el estudio para comparar las vías de cultivo in vitro. 1. 1998). 1d). 1a). andrachne (Bertsouklis y Papafotiou.

1. (c) número de brotes y (d) número de nudos por brote.5 mg/L en (a) formación de brotes (%). Comparación media con la t de Student. Efecto de varias citoquininas a 2.Fig. P=0.05 . (b) longitud del brote.

Subcultivo en WPM con 2. .5 mg/L en la tasa de multiplicación (formación de brotes (%) x número medio de brotes × longitud media de los mismos). 4. Fig. 3.5 mg/L ZEAT y 2iP. Cultivo inicial de nódulos en WPM con 2.Fig. KIN. 2.5 mg/L BA. ZEAT o 2iP. Fig. Efecto de varias citoquininas a una concentración de 2.