UNIVERIDAD NACIONAL SAN CRISTOBAL DE

HUAMANGA

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

ESCUELA DE FORMACIÓN PROFESIONAL DE INGENIERÍA

AGRÍCOLA

LABORATORIO DE BIOLOGIA

PRACTICA N° 5

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

FECHA DE EJECUCIÓN : 06-07- 2017

FECHA DE ENTREGA : 13 -07-2017

AYACUCHO - PERÚ

2017

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

I. INTRODUCCIÓN

Para desarrollo del estudiante. Breve y concisa (a más una cara). Incidir en las enzimas y su
mecanismo de acción.

 ENZIMA
Son proteínas, o asociaciones de proteínas y otras moléculas, orgánicas o inorgánicas, que catalizan,
de forma específica, determinadas reacciones bioquímicas uniéndose al sustrato.
 Las enzimas actúan catalizando los procesos químicos que se dan en los seres vivos, de tal manera,
que facilitan las transformaciones bioquímicas, acelerando considerablemente las reacciones; a la
vez que disminuyen la energía de activación que muchas reacciones requieren.
Toda transformación bioquímica parte de unos reactivos que se transformaban en productos de la
reacción.
Reactivos → Productos de la reacción
-Si se necesita energía para que se produzca el cambio, se trata de reacciones endergónicas.
Reactivos + Energía → Productos de la reacción. (Reacción endergónica).
-Si desprende energía en el cambio, se trata de reacciones exergónicas.
Reactivos → Productos de la reacción + Energía. (Reacciones exergónicas).
Los reactivos, en cualquier caso, tienen que alcanzar un estado de excitación, de inestabilidad, de
estado intermediario en el que inicien el camino para ser productos. Si no alcanzan ese estado
intermediario en el que el compuesto formado, por un periodo de tiempo, ni es reactivo, ni es
producto, no sucederá la reacción química.
Enzima + Sustrato - [Enzima-Sustrato] - Enzima + Producto.

 EL MECANISMO DE ACCIÓN
Sigue los siguientes pasos:
1) En primer lugar, se forma un complejo: enzima-sustrato.
2) En segundo lugar, el sustrato y, la coenzima si fuera necesaria, se unen al centro activo de la enzima.
En el centro activo, se encuentran restos terminales de aminoácidos que establecen interacciones
químicas con el sustrato; estas interacciones son las responsables de la transformación, ya que
producen reordenamientos de los electrones, que debilitan ciertos enlaces y favorecen la formación
de otros, desencadenando la transformación bioquímica.
3) Por último, los productos de la reacción se separan del centro activo, y la enzima se recupera intacta
para nuevas catálisis.

II. OBJETIVOS
 Demostrar el mecanismo de acción de la amilasa salival.
 Verificar la presencia de la catalasa en tejidos animales y vegetales.
 Conocer el afecto de la temperatura en la actividad enzimática.

III. MATERIALES

 Biológicos: saliva humana, mashua, rabanito, hígado de pollo.

 Peróxido de hidrógeno.
 Solución de almidón.
 Reactivo de Benedict.
 Solución de Lugol
  Mortero.
 Tubos de ensayo.
 Baño maría.
 Pipetas.
 Gradillas.
 Pipetas.
 Cuchillo o navaja.
 Marcador de vidrio

IV. PROCEDIMIENTO

1. ACTIVIDAD DE LA ENZIMA SALIVAL

 Añada a dos tubos de ensayo 5 ml de solución diluida de almidón. Agregue una pequeña
cantidad de saliva y sométalo al baño María a 37°C o en su defecto manténgalo a
temperatura corporal sujetándolo con las manos por una hora.

 Realice la prueba de lugol al tubo N° 1 y la reacción de Benedict al tubo N°2 e interprete

sus resultados.

NOTA: El resultado negativo del tubo 1 nos indicará que el polisácarido se ha

degradado; mientras que el positivo del tubo N° 2 referirá que el almidón se hidrolizó
en glucosa.

LUGOL BENEDICT
El precipitado que se formó presento un El precipitado que se formó presento un color
color celeste de tono claro ya que aún había morado oscuro ya que se llevó a cabo la
presencia de almidón, por lo tanto la prueba hidrólisis del almidón y había presencia de
fue positiva. azúcares. La prueba fue positiva.

2. PRESENCIA DE CATALASA EN TEJIDOS VEGETALES.

 Corte un trozo de mashua y adiciónele 1 ml de peróxido de hidrógeno (agua
oxigenada).
 Con un mortero triture otros trozos de mashua y adiciónele también peróxido
de hidrógeno.
 Proceda del mismo modo con la muestra de rabanito.
 Anote sus observaciones, compare e interprete sus resultados.

MASHUA RABANITO

El almidón se libera por el exceso de El almidón se libera por el exceso de

oxigeno oxigeno
Acción catalítica e inhibidora Acción catalítica e inhibidora
Se observará un intenso burbujeo debido al Se observará un burbujeo débil debido al
desprendimiento de oxígeno. desprendimiento de oxígeno
3. PRESENCIA DE CATALASA EN TEJIDOS ANIMALES.
 Corte trozos pequeños de hígado y dispóngalos en un tubo de ensayo,
adiciónele 1 ml de peróxido de hidrógeno.
 Con un mortero triture otros trozos de hígado, dispóngalos en un tubo de
ensayo y adiciónele 1 ml de peróxido de hidrógeno.
 Anote sus observaciones, compare e interprete sus resultados .

HÍGADO HÍGADO TRITURADO

 Se empezaron a genera burbujas, y el hígado
empezó a perder un poco su color.
la reacción no es tan rápida por que la catalasa
que se encuentran en los tejidos internos no se
encuentra expuesta
El hígado empezó a perder un poco su
color.
Se observa un burbujeo intenso.
Se observa una reacción más rápida

4. EFECTO DE LA TEMPERATURA EN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

 A un primer tubo de ensayo agréguele trozos de hígado fresco y añádale 1 ml
de peróxido de hidrógeno.
 A un segundo tubo de ensayo adiciónele trozos de hígado hervido y añádale 1
ml de peróxido de hidrógeno.
 Anote sus observaciones, compare e interprete sus resultados.

HÍGADO FRESCO HÍGADO HERVIDO

El hígado empezó a perder un poco su color. No hay reacción

Se observa un burbujeo intenso.
Se observa una reacción más rápida

V. RESULTADOS
 Elabórelos sobre los 4 procedimientos desarrollados.

1. ACTIVIDAD DE LA ENZIMA SALIVAL

Con el reactivo Lugol
Tomó un color azul-violeta porque en él solo empezó la degradación del almidón por la acción de
la enzima amilasa salival
Con el reactivo Benedict
Tomó un color rojo ladrillo porque se llevó a cabo la hidrólisis del almidón y se formaron azúcares
como la glucosa y la maltosa.

2. PRESENCIA DE CATALASA EN TEJIDOS VEGETALES.

En la mashua

La mashua posee más disponibilidad de la enzima, lo que hace que la actividad enzimática se haga
más veloz que la del rabanito. La mashua contiene una enzima (Catalasa) la cual es un poderoso
antioxidante, es decir, que impide la oxidación de las sustancias químicas.
Si agregamos agua oxigenada o Peróxido de Oxigeno (H2O2) a una mashua sin cocer, la catalasa
separara el Oxígeno del Peróxido de Oxigeno, liberando una gran cantidad de gas (O2).

3. PRESENCIA DE CATALASA EN TEJIDOS ANIMALES.

La formación de la espuma blanca es oxígeno, que se desprende como uno de los productos de la
reacción química de descomposición, del peróxido de hidrógeno, por acción de la enzima
peróxidasa que se encuentra en el hígado. El otro producto de esta reacción química es agua (H2O),
que se queda en el fondo del recipiente.

4. EFECTO DE LA TEMPERATURA EN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

Al agregar los mililitros de agua oxigenada pudimos notar que no hubo reacción alguna, esto
se debe como dice la teoría, a que la catalasa proteína presente en el hígado al ser sometida a
altas temperaturas se desnaturaliza, su estructura se desorganiza y se destruyen sus
interacciones de catalizador.

Ya que la catalasa químicamente es una proteína, podemos desnaturalizarla al someterla a altas

temperaturas. Puedes recordarlo en la práctica de proteínas. Al perder la estructura terciaria,
perderá también la función y como consecuencia su función catalítica, por lo que no podrá
descomponer el agua oxigenada y no se observará ningún tipo de reacción

VI. DISCUSIONES
 Tanto en las células de los tejidos animales como en las de los vegetales encontramos
catalasa aunque en el hígado su presencia es mayor que en la mashua.

VII. CUESTIONARIO

1. Explique qué factores afectan la actividad enzimática.

Estos factores son:

 La concentración de moléculas de sustrato:
Se puede comprobar su influencia atendiendo a la ecuación de Michaelis y Menten).
 La temperatura.
Existe una temperatura ideal a la cual las enzimas presentan mayor actividad catalítica.
 El pH del medio
Que influye notablemente en la conformación espacial de la enzima. Hay un pH ideal al cual
la actividad catalítica es la máxima posible, si el pH se hace más ácido o más básico, la actividad
enzimática disminuye.
 La cantidad de enzima,
Que influye considerablemente en la velocidad inicial (proporción directa), siempre y cuando
hablemos de una temperatura y pH óptimos.
 La actividad realizada por los inhibidores.
2. ¿Cómo se desarrolla el mecanismo enzimático de “encaje inducido”?

Modelo de encaje-inducido: este modelo sugiere una interacción más flexible y plástica entre la
enzima y su sustrato. La idea es que a medida que el sustrato se acerca a la enzima, induce cambios
de forma en ella, de manera de ‘’acomodarse’’ y así establecer la relación
específica que caracteriza a esta interacción

3. ¿Cómo se desarrolla el mecanismo enzimático de “llave-cerradura”?

El modelo llave-cerradura supone que la estructura del sustrato y la del centro activo son
complementarias, de la misma forma que una llave encaja en una cerradura. Este modelo es
válido en muchos casos, pero no es siempre correcto
 4. Defina los términos: enzima, sustrato, producto.

5. Presente las reacciones enzimáticas (ecuación) de la amilasa salival y de la catalasa.

VIII. REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA

http://urbinavinos.blogspot.pe/2015/03/concepto-de-enzima-estructura-y.html
http://www.monografias.com/trabajos-pdf900/actividad-enzimatica-amilasa/actividad-
enzimatica-amilasa.pdf

http://www.experimentosfaciles.com/hacer-una-reaccion-quimica-de-descomposicion-del-
agua-oxigenada/
https://es.scribd.com/doc/17469299/Informe-N%C2%BA9-laboratorio-de-BioquimicaI

https://www.blogdebiologia.com/factores-que-afectan-la-actividad-enzimatica.html

http://www.biologiasur.org/index.php/la-celula/base/enzimas

http://estudiarfarmacia.blogspot.pe/2011/04/factores-que-modifican-la-actividad.html

http://www.ehu.eus/biomoleculas/enzimas/enz2.htm