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TRABAJO PRACTICO Nº 10
ELECTROFORESIS
CONTENIDOS
OBJETIVOS
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inversamente proporcional al coeficiente de fricción (f) relativo a la talla y forma de la
molécula, o sea, a la resistencia que le ofrece el medio.
v=qE/f
u= v / E = q / f
como la movilidad depende del coeficiente de fricción, que a su vez es función de ciertos
parámetros físicos de las moléculas, el valor de u puede dar información acerca del tamaño y
forma de la partícula.
Cuando una mezcla de moléculas ionizadas y con una carga eléctrica neta son
colocadas en una campo eléctrico, éstas experimentarán una fuerza de atracción hacia el polo
que posea carga opuesta:
+ -
+ Neg -
+ -
+ -
+ Pos -
+ -
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Así, si se deja transcurrir un cierto tiempo las moléculas cargadas
positivamente se desplazarán hacia el cátodo (el polo negativo) y aquellas cargadas
negativamente se desplazarán hacia el ánodo (el polo positivo).
+ -
fricción
+ atracción
-
+ Pos electrostática -
+ ( +) -
+ -
+ Movimiento -
Browniano
La suma de todas estas fuerzas provoca que las moléculas no migren de una
manera homogénea, de tal manera que, si la moléculas son colocadas en un cierto lugar de la
solución, los iones comenzarán a moverse formando un frente cuya anchura aumentará con el
tiempo.
+ frente -
+ Efecto de -
+ la difusión -
+ -
+ -
+ -
Atracción
Electrostática
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intensidad del campo eléctrico, podemos acelerar la migración molecular, pero no por ello
variará la difusión y nuestro frente migrará de un modo cada vez más compacto. Así,
podemos mejorar la definición del frente aumentando la diferencia de potencial entre los polos
y esto estará limitado tan sólo la capacidad de la solución para disipar el calor generado por el
paso de la corriente eléctrica. Esto último, debido a que si el calor se acumula se puede hacer
hervir a la solución, e incluso descomponer el gel y/o los solutos.
Aunque el solvente puede, por si solo, producir una fricción diferente sobre
diversas moléculas, su efecto es muy poco apreciable cuando no existe el entramado del gel.
➢ Electroforesis convencional
➢ Electroforesis capilar.
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X.1.4.1 Electroforesis Convencional
Esto es importante para evitar que la disolución tampón se desplace por el gel
cuando se active el campo eléctrico.
Este tipo de electroforesis es ampliamente utilizado en la esfera biotecnológica, aspecto este
que se ha podido comprobar a partir de los numerosos resultados que se encuentran en la
literatura más actual.
Existen otros tipos de electroforesis en gel como son la electroforesis en geles
desnaturalizantes de agarosa, electroforesis en campo pulsado y la electroforesis preparativa.
Estas técnicas no son de aplicación tan general pero no por ello dejan de ser importantes.
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un tubo capilar con un diámetro interno inferior a 0,1 mm y una longitud de 50 cm a 1 m. lo
cual aumenta de manera considerable la disipación del calor generado y por lo tanto permite
incrementar el voltaje aplicado.
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X.2 PROCEDIMIENTOS
Una vez resumido a grandes rasgos lo que pretendemos con esta practica, tenemos que
proceder a la preparación de todos los elementos necesarios para la misma.
Pasadas unas horas, se procede al corte del gen, ( a un milímetro), logrando de esta manera
tres planchas de gel.
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Electrodos (LiOH/Bórico):
- LiOH..........................................1.2 gramos
Gel (Tris/Citrato):
-TRIS.............................................5.58 gr.
- Agua desionizada...........................900 ml
- NAD ( 0 Mg)
- PMS
Tinción de Glutamato-Oxalacetato-Transaminasa:
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- Agua desionizada (25 ml)
- Fast - Blue.
Esterasas:
- Tampón fosfato:
*PO4HNa (0.48g)
Una vez que tenemos todo lo referente al laboratorio finalizado, nos queda lo mas
importante, ver e interpretar teóricamente lo que vemos, aplicar los conocimientos y
razonar los resultados, quizá con una sola frase, podamos resumir perfectamente que
podemos interpretar: Si dos proteínas tienen la misma movilidad, será que los
alelos son iguales, y en consecuencia el organismo será homizigoto, por el
contrario, a movilidad desigual, los alelos serán diferentes aceptando en este
caso que el individuo es heterozigoto.
En realidad lo que vemos es una serie de puntos mas o menos alineados, en los que
dependiendo de estos puntos, podemos fácilmente determinar la homozigosis o no
del individuo, combinando muchos individuos, podremos entonces analizar la
variabilidad genética de una determinada población, también con este método
podremos calcular la frecuencia.
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