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19/9/2018

Muerte celular.
¿Apoptosis ó necrosis?
Esa es la cuestión!

El desarrollo y la homeostasia de los organismos depende del


equilibrio entre la supervivencia celular y la muerte celular.
Simplemente, no hay vida sin muerte
1842 Karl Vogt: en la metamorfosis de anfibios, la reabsorción
de la notocorda y su reemplazo por vértebras implica la muerte
celular fisiológica

Wood et al Development 127:5245-52 (2000)

1964 Lockshin y Williams incorporan el concepto de "muerte


celular programada" al estudiar la metamorfosis de los insectos.
Physiol. 10, 643–649 (1964).

1973 Schweichel y Merker proponen tres morfologías de muerte


celular:
tipo I se asoció con heterofagia (Hoy: Apoptosis)
tipo II se asoció con la autodigestión (Hoy: Autofagia)
tipo III no implicaba digestión (Hoy: Necrosis)
Teratology 7, 253–266 (1973).

1986 Ellis & Horvitz en su trabajo pionero en Caenorhabditis elegans


(C. elegans) revelan el programa genético de apoptosis.
Cell 44, 817–829 (1986).

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Por mucho tiempo se consideró que la apoptosis era la forma


estándar de muerte celular durante el desarrollo, la homeostasis, la
infección y la patogénesis, mientras que la necrosis se consideraba
mayoritariamente como una muerte celular "accidental" que sólo
se producía en respuesta a insultos físico-químicos.

Hoy ha cambiado esta visión por la descripción de la existencia de


múltiples vías de necrosis regulada.

La necrosis regulada se define como un proceso de muerte celular


controlado genéticamente que resulta en la liberación de material
intracelular, y se caracteriza morfológicamente por granulación
citoplásmica y oncosis (inflamación de organelas y de la propia
célula).

2001 Leist & Jäättelä proponen 4


patrones de muerte celular según su
morfología nuclear:
Apoptosis cromatina condensada en
figuras compactas, globulares o con forma
de medialuna.
MCP Apoptosis-símil cromatina
condensada más laxamente.
MCP Necrosis-símil cromatina agrupada y
grumosa.
Necrosis edema celular con ruptura de la
membrana
Nat Rev Mol Cell Biol 2:589-98 (2001).

MCP: Muerte celular programada: puede


bloquearse por inhibición de una enzima o vía
de señalización

Apoptosis vs. necrosis


Apoptosis. MCP dependiente de caspasas. Las células presentan cambios morfológicos
en el núcleo (cromatina condensada y compacta en formas globulares y de medialuna),
exposición de fosfatidilserina, contracción citoplasmática, zeiosis (formación de
burbujas) y la formación de cuerpos apoptóticos.

La necrosis (muerte accidental/lisis celular) se evita


sólo mediante la eliminación del estímulo de muerte
(detergentes, oxidantes, ionóforos o insulto
patológico).
Células con edema (hinchazón de organelas) sin
burbujas. La morfología del tejido necrótico es
debido a eventos que ocurren después de la lisis de
la membrana plasmática.

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Necrosis

Muerte celular en respuesta a una lesión aguda. Las células se hinchan


y se lisan, liberando todo su contenido al intersticio y provocando una
respuesta inflamatoria

Cambios morfológicos de las células apoptóticas


Las células se encogen y se condensan, el citoesqueleto colapsa, la
envoltura nuclear se desorganiza, la cromatina se condensa y se
fragmenta.
La superficie celular emite protrusiones y la célula desprende
fragmentos rodeados de membrana llamados cuerpos apoptóticos.
Finalmente las células y cuerpos apoptóticos son fagocitados por
células vecinas.

Necrosis y apoptosis

• Mueren grupos de células • Mueren células individuales


• Destrucción del citoesqueleto • Fragmentación celular
(Bleb). (cuerpos apoptóticos).
• La célula se hincha • Hay contracción celular en
(dilatación). vez de aumento de volumen.
• Proceso controlado
• Proceso incontrolado pasivo (no dependiente de energía.
hay gasto de energía). • No hay liberación del
• Hay ruptura de la membrana, el contenido citoplasmático y
contenido citoplasmático sale y
hay atracción de células los restos celulares son
inflamatorias. rápidamente fagocitados

Apoptosis and Necrosis in the Liver: A Tale of Two Deaths? Harmeet Malhi,1 Gregory J. Gores,1,2 and John J. Lemasters3

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Apoptosis
(del griego “caer como las hojas de un árbol”)
La muerte celular NO es un proceso aleatorio, se produce a través de
una secuencia ordenada de procesos moleculares por los que se
destruye a sí misma desde su interior en forma sistemática, siendo
posteriormente ingerida por otras células

- Embriogénesis y desarrollo fetal


- Mantenimiento de las poblaciones
celulares de los tejidos como mecanismo
homeostático
- Reacciones inmunitarias como
mecanismo de defensa
- Respuesta a lesiones por enfermedad o
agentes lesivos subletales
- Envejecimiento

Fosfatidilserina
Es un fosfolípido que se encuentra
normalmente en la cara citosólica de
la bicapa lipídica, cuando se presenta
en la monocapa externa actúa como
un marcador que es reconocido por
células fagocitarias.

Patología Estructural y Funcional. Robbins. Sexta Edición

Páncreas exocrino de ratón

Células apoptóticas que se encogen con el citoplasma


condensado, presentan núcleos picnóticos y
fragmentados. No se observa inflamación

Elmore S. Toxicol Patol 2007 35:495-516.

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Miocardio de una rata adulta con células apoptóticas

Macrófagos, algunos con


cuerpos apoptóticos
Células apoptóticas con engullidos
citoplasma condensado,
cromatina condensada e
hipercromática y fragmentada

Espacio
intersticial

Elmore S. Toxicol Patol 2007 35:495-516.

Linfocitos apoptóticos en timo de rata


Citoplasma Borde celular
condensado irregular

Cuerpo apoptótico
Cromatina sin material nuclear
condensada
y periférica
Núcleo
fragmentado

Micrografía electrónica de transmisión (TEM) del tejido timo apoptótico.


Elmore S. Toxicol Patol 2007 35:495-516.

Cuerpo apoptótico brotando de un linfocito de rata

Cuerpo
apoptótico
emergiendo
Vacuolas

Micrografía electrónica de transmisión (TEM) del tejido timo normal

Elmore S. Toxicol Patol 2007 35:495-516.

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Macrófago engullendo cuerpos apoptóticos


Cuerpos apoptóticos Macrófago

Micrografía electrónica de transmisión (TEM) del tejido timo apoptótico.


Elmore S. Toxicol Patol 2007 35:495-516.

CASPASAS

Son sintetizadas como cimógenos inactivos (procaspasas)


constituidos por un prodominio, una subunidad pequeña (de unos 10
KD) y otra grande (de unos 20 KD).
Al activarse por proteólisis forman un heterotetrámero.

Activación por clivaje proteolítico.

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Pérdida ó ganancia
de función de la
proteína diana

Las caspasas pueden actuar de dos


formas principalmente:

• Inactivando sustratos por clivaje


proteolítico (Cadenas polipeptídicas
simples o estructuras complejas).

• Activando sustratos (Eliminando


secciones inhibitorias o reguladoras)

Mecanismo general de activación

Dianas de las caspasas efectoras


Láminas nucleares
Inhibidores de endonucleasas
Prots. del citoesqueleto
Prots de adhesión celular

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Fragmentación del ADN por endonucleasas

CAD: endonucleasa
iCAD: inhibidor de CAD

Mecanismo general de activación


La apoptosis puede ser desencadenada por
varios estímulos

Extracelulares Intracelulares

• Activación de receptores en la superficie de la célula.


• Daños en el ADN causados por defectos en sus
mecanismos de reparación.
• Tratamiento con drogas citotóxicas o radiación.
• Ausencia de señales de supervivencia.
Apoptosis: A Review of Programmed Cell Death Susan Elmore NIEHS, Laboratory of Experimental Pathology, Research Triangle Park, North
Carolina 27709, USA

Dos vías de activación de la apoptosis

The biochemistry of apoptosis. NATURE VOL 407 12 OCTOBER 2000

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La Vía Extrínseca

Ligando externo

Receptor de
muerte

Adaptadores

DISC

Caspasa iniciadora

Caspasas efectoras

Muerte

Vía extrínseca. Receptores de muerte.


La transducción de la señal apoptótica depende de la presencia de un
dominio de muerte citoplasmático (DD [Death Domain])

Se asocia con moléculas adaptadoras que poseen un


dominio efector de muerte (DED)

Se forma DISC
(Death Inducing Signaling Complex).

Se activa la caspasa 8 (iniciadora) y luego las


efectoras (3, 6, 7): APOPTOSIS

Apoptosis and Necrosis in the Liver: A Tale of Two Deaths? Harmeet Malhi,1 Gregory J. Gores,1,2 and John J. Lemasters3

Vía extrínseca.

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Vía intrínseca
• Estímulos no mediados por receptores de membrana, atacan
blancos directamente dentro de la célula y son ejecutados por las
mitocondrias.
Un defecto del ciclo
Daños del ADN
celular
Otros tipos graves de
estrés celular (radiación) Hipoxia

La pérdida de factores de Desprendimiento de la


supervivencia celular matriz extracelular

• Estímulos pueden ser:


Negativos: Ausencias (factores Positivos: Presencia de
de crecimiento, hormonas o factores (radiación, toxinas,
factores tróficos) hipertermia…)
Apoptosis: A Review of Programmed Cell Death. Toxicol Pathol. 2007 ; 35(4): 495–516.

Vía intrínseca ó mitocondrial


• Estos mecanismos producen cambios en la
membrana mitocondrial (poros) y se liberan al
citosol proteínas pro apoptóticas.

The biochemistry of apoptosis. NATURE VOL 407 12 OCTOBER 2000

Vía intrínseca ó mitocondrial

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La Vía intrínseca

El citocromo c se une a la proteína adaptadora Apaf-1 que, a través de su


dominio de reclutamiento de caspasas [CARD], oligomeriza formando el
apoptosoma al que se unen varias caspasas 9 y se activan

Las proteínas Bcl2


• Su nombre deriva de un gen aislado involucrado en el Linfoma de
Células B.
• Controlan la permeabilidad de la membrana mitocondrial
• Pueden ser anti- ó pro- apoptóticas

Antiapoptóticas Bcl2 y Bcl X


impiden la liberación de citocromo c
Proteínas
Bcl2 Efectoras (Bax y Bak)
permiten la liberación de citocromo c
Proapoptóticas
“Sólo BH3” (Bad, Bim, Bid,
Puma y Noxa)
The biochemistry of apoptosis. NATURE VOL 407 12 OCTOBER 2000
Inhiben a las antiapoptóticas

Las proteínas Bcl2


Todas presenten dominios de homología Bcl2 (BH)
• El Dominio BH4 sólo está presente en las antiapoptóticas
• El dominio BH3 está presente en todas

impiden la liberación de citocromo c

permiten la liberación de citocromo c

Inhiben a las antiapoptóticas

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Las proteínas proapoptóticas Bcl2 forman un poro


para permitir la salida de Citocromo C

Proteínas sólo BH3 vs. Proteínas antiapoptóticas

Ante el daño en ADN, la proteína supresora de


tumores p53 se acumula y activa la expresión de
genes de proteínas “sólo BH3” (Puma y Noxa)

The biochemistry of apoptosis. NATURE VOL 407 12 OCTOBER 2000

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La proteína “sólo BH3” Bid vincula las vías


extrínseca e intrínseca

Las proteínas inhibidoras de apoptosis (IAP) y las


anti-IAP regulan la vía intrínseca
IAPs Anti-IAPs
c-IAP1, c-IAP2, XIAP, Survivina Smac/DIABLO y Omi

-Se unen a las caspasas -Son liberadas desde el espacio


y las inhiben intermembrana mitocondrial
cuando se activa la vía intrínseca
- Se unen a las caspasas y las
“marcan” para su ubiquitinación - Se unen a las IAP y las
y posterior degradación bloquean

Smac: second mithocondrial-derived activator of caspase


DIABLO: direct IAP-associated binding protein with Low PI
The biochemistry of apoptosis. NATURE VOL 407 12 OCTOBER 2000

Las IAP y las anti-IAP regulan la actividad de las caspasas

c-IAP1, c-IAP2, XIAP, Survivina

Smac/DIABLO (anti IAPs)

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La vía Intrínseca

Factores de muerte y de supervivencia

Durante el desarrollo del sistema nervioso, se genera un exceso de


neuronas que mueren por falta de señales de supervivencia liberadas
por la célula diana

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La respuesta celular depende de la combinación de señales


extracelulares que reciba
A

B SOBREVIVE

B CRECE Y SE DIVIDE

C E
D
A

B SE DIFERENCIA

C G
F

Célula
MUERE
apoptótica

Inhibición de apoptosis por factores de supervivencia

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