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02/08/2016

CÉLULAS EUCARIOTAS
El NÚCLEO CELULAR
Envoltura
nuclear

Heterocromatina

Nucleolo

Es un compartimento intracelular recubierto por una doble membrana que


contiene al ADN celular aislado del citoplasma.

La MB externa es continuación del RE y el espacio inter-MBs tiene continuidad


con el lumen de RE. Ambas membranas se conectan en los poros nucleares.

2 redes de filamentos intermedios le dan soporte mecánico. La que recubre la MB


interna se llama lámina nuclear.

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CROMOSOMA PROCARIOTA

El ADN de los
organismos procariotas
se organiza en un único
cromosoma circular

LOS CROMOSOMAS EUCARIÓTICOS

El genoma se divide en un #
variable de cromosomas lineales.

Cada cromosoma está formado por


una única molécula de ADN
asociada a proteínas (cromatina).

La mayoría de las células humanas


poseen dos juegos completos de
cromosomas. Son DIPLOIDES.

Los cromosomas materno y paterno


de un par se llaman cromosomas
homólogos. En los machos el par
sexual no es homólogo (X, Y)

CROMOSOMAS HUMANOS IDENTIFICADOS POR HIBRIDIZACION

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CROMOSOMAS HUMANOS IDENTIFICADOS POR HIBRIDIZACION


CARIOTIPO

Hibridización con sondas específicas para cromosoma marcadas con un fluorescente diferente

Los cromosomas son de diferente tamaño

Fitohemoaglutinina
como factor inductor
de mitosis.

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BANDEO CROMOSÓMICO. CARIOTIPO

Posición del centrómero


(constricción primaria)

Posición del satélite


(constricción secundaria)

Coloración con Giemsa de


cromosomas en el inicio de
fase M. Bandas oscuras en
zonas ricas en AT.

CLASIFICACIÓN DE LOS CROMOSOMAS SEGÚN SU MORFOLOGÍA

a) Metacéntricos
b) Submetacéntricos
c) Submetacéntrico con zona satélite
d) Acrocéntricos
e) Telocéntricos

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CROMOSOMAS ABERRANTES DETECTADOS POR


COLORACIÓN DE GIEMSA Y POR HIBRIDACIÓN

(A) Cromosoma 4 y cromosoma 12 (Giemsa)


(B) Idem teñido fluorescente por hibridación

CORRELACIÓN
ENTRE EL NÚMERO
DE GENES Y LA
COMPLEJIDAD DEL
ORGANISMO

LOS PROCARIOTAS Y LOS EUCARIOTAS UNICELULARES POSEEN


UN GENOMA ALTAMENTE COMPACTADO

DOS ESPECIES CASÍ IDÉNTICAS TENDRÁN UN NÚMERO SIMILAR DE


GENES AUNQUE DIFIERAN EN EL NÚMERO DE CROMOSOMAS

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GENOMA Y GENES

GENOMA:
Es la totalidad de la información genética de una
especie

En los humanos comprende 3,2 109 pbs


distribuidos en 24 cromosomas nucleares (22
autosómicos y 2 sexuales) más una mínima
fracción de ADN mitocondrial.

GEN:
Unidad funcional de la herencia.

Segmento de ADN que contiene la información


para la elaboración de un ARN funcional

GEN EUCARIÓTICO:

Está constituido por porciones codificantes (exones)


interrumpidas por largas porciones no codificantes (intrones) y
está asociado a secuencias regulatorias de ADN.

Estas secuencias regulatorias son responsables de activar o


desactivar un determinado gen para que se exprese o no en un
determinado tiempo, nivel y tipo celular.

Las secuencias reguladoras están dispuestas a lo largo de miles


de pbs mientras que en organismos con genomas más concisos,
serán mucho más cortas.

La organización de genes en un cromosoma (Cromosoma humano 22)

Es el más pequeño (48 106 pbs., el 1,5% del genoma). La mayor parte del brazo
pequeño contiene secuencias repetitivas muy empaquetadas (hetrocromatina)

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REPRESENTACION DEL CONTENIDO DE LA SECUENCIA DE NUCLEOTIDOS DEL


GENOMA HUMANO SECUENCIADO COMPLETAMENTE

LINES, SINES, elementos símiles a retrovirus y trasposones son elementos


genéticos móviles.
Sec. Repetidas sencillas: secs de menos de 14pbs repetidas que forman largos
segmentos
Duplicaciones segmentales: largos bloques repetidos en 2 o más posiciones del
genoma

DIFERENTES ESTADOS DE LOS CROMOSOMAS DURANTE EL CICLO CELULAR

Cromatina Cromosoma
interfásica mitótico

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CENTRÓMERO, TELÓMEROS Y ORÍGENES DE REPLICACIÓN:


3 SECUENCIAS INDISPENSABLES EN UN CROMOSOMA LINEAL FUNCIONAL

CROMATINA = ADN + PROTEÍNAS

HISTONAS NUCLEOSÓMICAS
H2A, H2B, H3, H4
PROTEÍNAS HISTÓNICAS
Pequeñas proteínas con alto
contenido de aminoácidos HISTONAS NO NULEOSÓMICAS
básicos (alta carga positiva) H1

PROTEÍNAS NO HISTÓNICAS

La cromatina menos condensada se llama EUCROMATINA y la más condensada


HETEROCROMATINA.

La HETEROCROMATINA: ES RESISTENTE A LA EXPRESIÓN GÉNICA. En una


célula de mamífero constituye más del 10% del genoma

HETEROCROMATINA CONSTITUTIVA Y FACULTATIVA

CONSTITUTIVA: Es idéntica para todas las células del organismo, carece de


información genética, incluye a los telómeros y centrómeros del cromosoma.

La heterocromatina constitutiva contiene un tipo particular de ADN denominado


ADN satélite, formado por gran número de secuencias cortas repetidas en
tándem.

FACULTATIVA: diferente en los distintos tipos celulares, contiene información que


podría ser transcripta, genes que no se expresan o que están silenciados pero que
podrían activarse en algún momento. Un ejemplo típico es el cromosoma X
inactivado en las células somáticas femeninas.
La heterocromatina facultativa se caracteriza por la presencia de secuencias
repetidas tipo LINE.

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ADN repetido en tándem


Son repeticiones que se ordenan de manera consecutiva, de modo que
secuencias idénticas se disponen unas detrás de otras.

Satélite: en centrómero, brazos cortos de cr acrocéntricos.


Son secuencias de entre 5 y varios cientos de nucleótidos que se repiten en tándem miles de
veces generando regiones repetidas con tamaños entre 100 kb y varias megabases.

Minisatélites: en telómeros y VNTR que se utilizan en medicina forense.


Son secuencia de 10 - 60 nucleótidos que se repite en tándem generando secuencias de
entre 100 y 20.000 pb. El genoma humano contiene unos 30.000 minisatélites.

VNTR: número variable de repeticiones en tándem

Microsatélites: STR que se utilizan en el test de paternidad


Secuencias básicas de 2-4 nucleótidos, su repetición en tándem origina secuencias de menos
de 150 nucleótidos.

STR: Short Tandem Repeats

INACTIVACIÓN DEL CROMOSOMA X EN MAMÍFEROS


El cromosoma sexual X
posee unos 1000 genes
mientras que el Y sólo unos
100.
En mamíferos existe un
mecanismo de
“compensación de dosis”
mediante el cual, en las
células somáticas de las
hembras (cuyo par sexual es
XX), se inactiva
transcripcionalmente por
condensación uno de sus
cromosomas X (ya sea el
paterno -Xp- o el materno –
Xm-).
Las células somáticas de una
hembra son mosaico ya que
este proceso se activa en el
embrión de 1000 células
donde cada una inactiva Xp o
Xm al azar.

Cromatina vista al microscopio electrónico

(A) Cromatina aislada de un núcleo interfásico. Fibra de 30 nm.

(B) Cromatina experimentalmente desempaquetada. Fibra de 11 nm (collar de nucleosomas)

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ORGANIZACIÓN DEL NUCLEOSOMA

ORGANIZACIÓN DEL
NUCLEOSOMA
El NUCLEOSOMA se
compone de:
núcleo de la partícula
nucleosómica (8 histonas +
ADN -147 pbs-)
+
ADN espaciasdor (de hasta
80 pbs).
A veces al referirnos al núcleo de
la partícula nucleosómica lo
hacemos directamente como
“nucleosoma” y no estamos
incluyendo al espaciador.

HISTONAS: Proteínas pequeñas (102-135 aa) que conservan


un motivo estructural llamado “PLIEGUE DE HISTONA” que
consta de 3 hélices-α unidas por 2 lazos

Todas las histonas nucleosómicas poseen:


Un motivo “pliegue de histona” y
una cola N-terminal que puede sufrir modificaciones covalentes.

PLIEGUE DE Formación
HISTONA del dímero
H2A H2A-H2B

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Las H2A y H2B forman un dímero y las H3


y H4 otro.

El dímero H3-H4 se asocia con otro


idéntico formando un tetrámero H3-H4 que
se asocia con 2 dímeros H2A-H2B.

Las colas N-terminal de las H se extienden


hacia el exterior del octámero.

El ensamblado de los monómeros y


dímeros para formar el octámero está
asistido por chaperonas de histonas

ORGANIZACIÓN DEL NUCLEOSOMA

En cada NUCLEOSOMA se establecen las siguientes


interacciones entre proteína y ADN:
numerosas interacciones electrostáticas (entre las lisinas
y argininas de las histonas y las cargas negativas del
ADN)
142 puentes de H entre histonas y ADN
numerosas interacciones hidrofóbicas

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LA CURVATURA DEL ADN EN EL NUCLEOSOMA

DINÁMICA DE LOS NUCLEOSOMAS

REMODELACIÓN DE NUCLEOSOMAS POR CORRIMIENTOS DEL ADN MEDIANTE


COMPLEJOS REMODELADORES DEPENDIENTES DE ATP

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ELIMINACIÓN O CAMBIO DE UN OCTÁMERO DE HISTONAS MEDIANTE


COMPLEJOS REMODELADORES DEPENDIENTES DE ATP

Las chaperonas de
histonas tienen
carga negativa (alto
contenido de
aspartato y
glutamato

MODELOS DE LA FIBRA DE 30 nm

ZIG-ZAG
SOLENOIDE

Regiones de la fibra de 30 nm libres de nucleosoma que poseen unidas proteínas


de pegado específico al ADN. Estas regiones son susceptibles de degradación

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MODELOS DE ESTABILIZACIÓN DE LA FIBRA DE 30 nm


COLA N-TERMINAL DE HISTONAS NUCLEOSÓMICAS

MODELOS DE ESTABILIZACIÓN DE LA FIBRA DE 30 nm


HISTONA H1
Histona H1 (verde) consistse en un core globular y dos colas.

REGULACIÓN DE LA ESTRUCTURA DE LA CROMATINA

La condensación o descondensación de regiones de los cromosomas,


son mecanismos utilizados para la regulación de la expresión de algunos
genes
Ciertas estructuras de cromatina son heredables: es un tipo herencia
EPIGENÉTICA ya que se basa en una estructura proteica en vez de una
secuencia de ADN.

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LAS HISTONAS NUCLEOSÓMICAS SUFREN MODIFICACIONES


COVALENTES REVERSIBLES

La mayoría de MODIFICACIONES COVALENTES REVERSIBLES se


producen en las cola N terminal aunque también pueden aparecer en el
pliegue

Las acetil
transferasas:
agregan grupos
acetilo a residuos de
Lys mientras que las
desacetilasas los
retiran

Las metil
transferasas:
agregan grupos
metilo a residuos de
Lys mientras que las
desmetilasas los
retiran

EL CÓDIGO DE HISTONAS:
Viene dado por las
modificaciones covalentes y la
presencia de ciertas variantes
de histonas.

El código de histonas permite


descifrar qué acción biológica
debe llevarse a cabo en esa
región:
Reparación, transcripción,
indica si ha sido replicado
recientemente

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ALGUNOS SIGNIFICADOS DEL CODIGO DE HISTONAS

CROMATINA Y REPLICACIÓN

Diferentes regiones de un
cromosoma se replican a
distintos momentos

El ADN de la
heterocromatina se
replica más tarde pero
no más lentamente.

DISTRIBUCIÓN DE LAS HISTONAS DURANTE LA REPLICACIÓN

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DISTRIBUCIÓN DE LAS HISTONAS


DURANTE LA REPLICACIÓN

Estrategia mediante la cual los patrones de modificaciones de las histonas


pueden ser heredadas

UNA VARIANTE DE HISTONA PUEDE CREAR ESTRUCTURAS


ESPECIALES:
CENP-A ES UNA VARIANTE DE H3 INDISPENSABLE PARA LA
FORMACIÓN DEL CENTRÓMERO

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CENTRÓMEROS EN CROMOSOMAS HUMANOS

DISTRIBUCIÓN DE LAS HISTONAS DURANTE LA REPLICACIÓN DEL


CENTRÓMERO

HERENCIA DE LAS MODIFICACIONES COVALENTES DE LAS HISTONAS

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CONDENSACIÓN DE CROMOSOMAS MITÓTICOS

CROMOSOMAS PLUMULADOS EN OOCITOS DE ANFIBIOS

MODELO DE ORGANIZACIÓN DEL CROMOSOMA INTERFÁSICO:


BUCLES ANCLADOS A UN EJE PROTEICO

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CROMOSOMAS POLITÉNICOS EN
DROSOPHILA:
luego de sucesivas replicaciones no
acompañadas de división celular, las
copias de los cromosomas permanecen
asociadas lateralmente. Por lo tanto, son
células poliploides.

Cromocentro: los 4 cromosomas se unen por esta


región heterocromatínica cercana al centrómero

LOS CROMOSOMAS MITÓTICOS ESTÁN CONSTITUIDOS


POR CROMATINA EN SU FORMA MÁS CONDENSADA

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CONDENSINA (DÍMEROS DE PROTEÍNAS Smc)

TERRITORIOS CROMOSÓMICOS Y DIDTRIBUCIÓN DE


CROMATINA

DESPLAZAMIENTO DE LOS GENES EN EL NÚCLEO


CUANDO CAMBIA SU EXPRESIÓN

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