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DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE VIDA Y AGRICULTURA

INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA

PERFIL DEL PROYECTO INTEGRADOR/


INFORME FINAL DEL PROYECTO INTEGRADOR

NIVEL: V
“Extracción del Ganoderol B, un metabolito secundario del hongo Reishi (Ganoderma
lucidum Curtis) y evaluación de su efecto inhibidor con el enzima alfa-glucosidasa, para
ayudar a la reducción de los niveles de glucosa acumulada en sangre”

GRUPO DE PROYECTO
Esparza Carlos
Mejía Jean
Leiva Luis
Quinga Joseph

Sangolquí -2018

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Título del proyecto

“Extracción del Ganoderol B, un metabolito secundario del hongo Reishi (Ganoderma

lucidum Curtis) y evaluación de su efecto inhibidor con el enzima alfa-glucosidasa, para ayudar

a la reducción de los niveles de glucosa acumulada en sangre”

1. Definición y Justificación del Problema

Debido al estilo de vida moderno, la ingesta de alimentos con gran cantidad de azúcar

se está volviendo habitual en niños, adolescentes y adultos jóvenes en su día a día. Los efectos

a corto y a largo plazo son muy preocupantes; pues enfermedades como la diabetes puede

presentarse en niños a edades tan tempranas como los 11 años, y si no se controla sus niveles

de glucosa en sangre, el cuadro clínico puede terminar en enfermedades como aterosclerosis.

(Castillo, 2012)

Los adultos jóvenes por su parte, debido a sus actividades académicas cuentan con poco tiempo

para alimentarse de una manera correcta, por lo cual buscan lo más rápido a pesar de ser lo

menos saludable. (Macedo, 2008) Otro factor que se ha vuelto muy común el consumo de

bebidas energizantes con altos niveles de azúcar para poder soportar sus arduas jornadas de

estudio, estas bebidas se han vendido como curas mágicas para el cansancio y los estudiantes

universitarios son sus principales consumidores, debido a las causas descritas anteriormente.

Solo en América Latina, un 64,9 % de las personas afirman haber ingerido estas bebidas en

algún momento de su vida, sin embargo muchas de las personas no conocen los efectos

adversos que estas pueden tener debido a sus altas concentraciones de azúcar lo cual puede

ocasionar problemas de salud relacionados con las actividades cerebrales, tales como la

depresión, trastornos del aprendizaje, problemas de memoria entre otros. (Yépez, 2017)

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Tomando en cuenta todos los problemas que puede ocasionar el exceso de glucosa en sangre

se ha propuesto la idea de disminuir su concentración en sangre mediante el consumo moderado

de hongos Reishi (Ganoderma lucidum Curtis ) gracias al enzima alfa-glucosidasa, ya que este

ayuda a la reducción de los niveles de glucosa y por lo tanto se podría también evitar de manera

significativa los problemas que pueden ocasionar los malos hábitos alimenticios relacionados

con la ingesta de alimentos con exceso de azúcar. (González, 2016)

2. Objeto de estudio

Terpenos (ganoderol B); hongo Ganoderma lucidum, enzimas (α-glucosidasa)

3. Campo de investigación

Linea: Fitoquímica

Sublinea: Bioquímica y Enzimología

4. Sistema de Objetivos

 Objetivo General

o Evaluar el efecto inhibidor del Ganoderol B un metabolito secundario

del hongo Reishi (Ganoderma lucidum Curtis) con el enzima alfa-

glucosidasa, en la reducción de los niveles de glucosa acumulada en

sangre.

 Objetivos Específicos

o Identificar y aplicar protocolos de extracción y purificación de terpenos

presentes en el hongo Reishi (Ganoderma lucidum).

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o Utilizar ratas Wistar como animales de prueba para la evaluación del

nivel de azúcar en la sangre antes y después del experimento.

o Establecer mediante experimentación el consumo adecuado del hongo

Reishi en una dieta balanceada.

5. Hipótesis/ Idea a defender

El Ganoderol B se encontrará en la solución de terpenos que vaa a ser extraída a partir

del hongo Reishi (Ganoderma lucidum) y presentará actividad inhibidora sobre el enzima -

Glucosidasa, evitando que exista un incremento de glucosa en sangre por la hidrólisis del

almidón en el aparato digestivo de la rata Wistar.

6. Materiales y métodos

6.1 Esquema metodológico

En la figura 1 se representa el esquema que se pretende desarrollar

Recolección de la Maceración con acetato


Secado de la muestra
muestra de etilo y metanol

Obtención de posibles Obtención de


Fraccionamientos de los
metabolitos secundarios metabolitos secundarios
extractos totales
(terpenos) totales

Evaluación de la
actividad biológica de los
metabolitos extraídos
con α-glucosidasa

Figura 1 Esquematización de la metodología a realizar

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6.2 Recolección del hongo

La recolección de la especie G. lucidum se lo realizará en la ciudad de Loja (Ecuador)

que se encuentra una altura de 450 msnm. El transporte se lo realizará guardándolo en hielo en

un recipiente donde se pueda conservar de manera adecuada, sin llegar a humedecerse. Se

procederá a dejarlo secar por un intervalo de (5-10) días, a una temperatura de 36ºC, luego se

triturará para poder realizar los estudios correspondientes.

6.3 Obtención de extractos totales

Los extractos se obtendrán a partir de 500g de material seco mediante la técnica de

maceración estática, proceso que según De Leon, 2016 deberá quedar 24 horas utilizando

disolventes de polaridad creciente (Metanol y Acetato de Etilo).

Se procederá a filtrar el contenido mediante rotaevaporación a presión reducida a una

temperatura de 36ºC hasta obtener los extractos tanto de acetato de etilo como de metanol.

6.4 Evaluación de la actividad biológica de los terpenos extraídos con α-

glucosidasa

Se comprarán 8 ratas Wistar y se las utilizará como animales de prueba, estos serán

trasladados a casa de Carlos Esparza quien alimentará y cuidará de ellas por 1 mes.

Antes de alimentarlas con balanceado rico en almidón y con el extracto de terpenos; las

ratas serán sometidas a una evaluación de glucosa en el laboratorio interdisciplinario de la

Universidad de las Fuerzas Armadas, con la supervisión de la docente Patricia Jiménez PhD.

Se tomarán 2 factores principales para realizar los estudios estadísticos correspondientes

que serán: Sexo del animal y concentración de extractos en la dieta del mismo.

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Al ser 8 las ratas de prueba se dividirá en 4 grupos de dos individuos machos y hembras

a los cuales se los separará para evitar que haya reproducción entre ellos, donde el grupo 1 será

el control, al cual no se añadirá a su dieta el extracto, mientras que al segundo grupo se colocará

0.5g de extracto por cada comida, al tercer grupo un gramo y al cuarto grupo 1.5 g durante un

mes.

La evaluación del nivel de glucosa en sangre se lo realizará una vez por semana con un

kit- de glucosa.

7. Marco teórico

Familia Ganodermataceae

En China la familia Ganodermataceae es empleada en la medicina. Algunas de sus

especies: G. australe, G. applanatum, G. tsugae, G. labatum, G. sessile, G. colossum, G.

curtisii, G. camosum y G. lucidum, han sido estudiadas químicamente encontrando dos clases

principales de compuestos: triterpenos y polisacáridos, a los cuales se les atribuye actividad

farmacológica. Los triterpenos han mostrado efectividad en la disminución de la presión

sanguínea, actúan como antiinflamatorios, antivirales, función hipolipemiante y

hepatoprotectora. Los polisacáridos poseen efecto hipoglicémico e inmunopotenciador

antitumoral (Salgado et, al. 2016).

En Colombia, la familia Ganodermataceae está agrupada en 4 géneros representados por

25 especies, dentro de las que se encuentra Ganoderma australe (Fr.) Pat., un hongo leñoso,

perenne, no lacado. La especie descrita por Patouillard, es también conocida como Polyporus

australe Fr., Ganoderma tornatum (Pers.) Bres., y ha sido 8 Pinzón-Osorio CA, Pinzón-Osorio

J estudiada sobre todo por causar grandes pérdidas en la industria maderera al ser agente

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patógeno en los bosques tropicales y por su potencial farmacológico anticancerígeno (Bolaños

et. al, 2016).

Generalidades de Ganoderma lucidum Curtis

Ganoderma lucidum Curtis, es un hongo de la familia Ganodermateaceae, proveniente

de continentes asiático (China, Japón y Corea); denominado el hongo de la longevidad, o

inmortalidad. Nombre común: Reishi y Lingzhi. Entre los componentes del hongo

encontramos: adenosina, proteínas, vitaminas, fenoles, oligoelementos, polisacáridos y

triterpenoides (Postemsky P. et. al, 2015). Sus propiedades de acuerdo a estudios realizados,

demuestran que son: anticancerígenos, inmunomoduladores, antiflamatorios,

hipoglucemiantes, hipolipemiantes y hepatoprotectoras.

El empleo del extracto de Ganoderma lucidum, intervienen en el tratamiento de

hipercolesteolemia; el hongo, es tratado de forma estandarizada, con sustratos para el cultivo

que no cambien sus propiedades biológicas (Meneses María E., 2016).

Debido a sus beneficios que promueven la salud y las acciones terapéuticas, existe una

demanda creciente de G. lucidum en el mercado. Actualmente, para obtener grandes cantidades

de cuerpos fructíferos para su uso comercial en la preparación de alimentos saludables y

medicamentos, el cultivo artificial de G. lucidum es ampliamente utilizado en China, Japón y

Corea a escala comercial. Como el consumo de G. lucidum depende en gran medida de sus

beneficios saludables y medicinales, que, a su vez, dependen de los componentes activos, a

saber, polisacáridos y triterpenoides, su contenido en los cuerpos de frutas se ha convertido en

una gran preocupación para los investigadores, cultivadores y consumidores. Sin embargo, se

ha informado que el contenido de polisacáridos y triterpenoides dentro de los cuerpos

fructíferos de G. lucidum fueron muy bajos, a menudo alrededor de 0.5% y 1.0%,

7
respectivamente; esto limita los beneficios de promoción de la salud y la eficacia terapéutica

de este hongo (Liyun Ye, 2018).

Metabolitos Secundarios

Los componentes químicos se pueden dividir en metabolitos primarios y secundarios.

Los primeros son abundantes, y colaboran en el desarrollo fisiológico del hongo. Los

metabolitos secundarios son los derivados de los primarios, sin embargo en el reino fúngico,

estos son limitados. Entonces a pesar de contar con limitadas cantidades de estos, tenemos la

presencia de algunos importantes. Los metabolitos secundarios principales en el hongo G.

lucidum son: triterpenos, alcaloides, aminoácidos libres, lactonas y azúcares reductores

(Velasquez Arévalo & Zaravia Argomedo , 2014).

El compuesto mejor estudiado en el hongo G. lucidum, es el ganoderol B, un compuesto

oxigenado derivado del lanostano, esctructuralmente cuenta con 30 átomos de carbono, tres

enlaces dobles en C9, C11 y C14, y con oxigenación en C3, C15, C26 y C27; esta estructura

posee una actividad bilógica en la inhibición de síntesis de colesterol, hipotensiva,

hepatoprotectora y antiviral. Además de un aumento en la actividad citotóxica (Salgado et. al,

2016)

Resultados esperados

Los resultados esperados del proyecto integrador “Extracción del Ganoderol B, un

metabolito secundario del hongo Reishi (Ganoderma lucidum Curtis) y evaluación de su efecto

inhibidor con el enzima alfa-glucosidasa, para ayudar a la reducción de los niveles de glucosa

acumulada en sangre” son los siguientes

 Contar con un protocolo de extracción y purificación, de bajo costo, que permita la

extracción de terpenos del hongo Reishi.

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 Presentar resultados que establezcan que el consumo de hongos Reishi disminuyen los

niveles de azúcar en sangre

 Establecer que la cantidad aconsejable de consumo en una ingesta de hongos Reishi

puro molido y bien procesado sea alrededor de 2 a 7 gramos por día.

En función de esto, se ha planteado un conjunto de investigaciones bibliográficas y

procesos que permitan obtener resultados con un gasto económico moderado en relación a los

experimentos que se desean realizar

8. Viabilidad

8.1 Alcance del proyecto

El proyecto está elaborado con el fin de solucionar el problema de los altos niveles de

glucosa en sangre en grupos de personas en específico, como lo son: los adultos jóvenes que

bien pueden ser estudiantes o trabajadores, que como ya hemos mencionado, por cuestiones

relacionadas con sus apretados horarios, no disponen del tiempo necesario para alimentarse de

manera correcta e ingieren comidas poco saludables, por otra parte para solucionar cuestiones

como el consumo poco mesurado de energizantes con altísimos niveles de azúcar. También

entra como posible enfoque el caso de los niños que tienden, por su propia edad, a consumir

alimentos chatarra y golosinas en gran cantidad, lo cual puede contribuir con la diabetes

infantil. El estudio a pesar de tener como enfoque a los seres humanos, será desarrollado en

ratas de laboratorio para probar primeramente la hipótesis de que la enzima alfa glucosidasa

ayudará a disminuir el nivel de glucosa en sangre. El tiempo preestablecido para la realización

del proyecto es de aproximadamente 4 meses, esto solamente la parte práctica, y la

investigación teórica al respecto tomará un tiempo similar.

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8.2 Determinación del Enfoque

Mediante el presente estudio pretendemos dar a la gente una alternativa saludable y

práctica para mantener una buena salud en base a la ingestión de un suplemento alimentario,

que podrían ser alimentos comunes con una dosis del extracto de hongo Reishi, de esta manera

tienen una opción práctica y rápida para minimizar los efectos de la comida poco saludable que

se ingiere diariamente debido al agitado estilo de vida actual.

8.3 Análisis de situación

En el presente proyecto de investigación actualmente no se cuentan con la infraestructura

necesaria para la producción de hongos Reishi. Nuestro cultivo será un éxito o un fracaso

dependiendo la sepa que utilicemos para realizar la siembra. La mejor cepa con la cual podemos

trabajar es con el hongo que se encuentra en su ambiente natural, pero si no tienes acceso a un

Ganoderma natural, puedes conseguirlo en un cultivo pretri en laboratorio. Lo importante en

este caso es que entre más nueva sea la cepa, mejor será sus características. Otra manera es

comprendo semilla de Ganoderma, esto te evitara el paso hacer la semilla y podrás concentrarte

solamente en el proceso de cultivo

En condiciones de laboratorio se podría inocular con un sustrato con la semilla y

sellamos las bolsas para garantizar su inocuidad, normalmente esto proceso se realizar en

cámaras de flujo laminar (las cuales no se posee ), aunque hay opciones para mantenerlas

estériles

Los factores que queremos controlar para facilitar el desarrollo del hongo ganoderma son

la humedad, temperatura, luz y oxígeno. El cultivo de hongos es una mímica a la naturaleza

tratando de acortar los ciclos para obtener frutos lo antes posible, aunque Ganoderma es nativo

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de regiones subtropicales y tropicales, y su temperatura de cultivo es de 30°c para crecimiento

optimo, es posible cultivarlo en temperaturas menores.

9. Factibilidad

9.1 Operativa

Este proyecto es factible gracias a la colaboración de los integrantes del mismo: Joseph

Quinga, Carlos Esparza, Luis Leiva y Jean Pierre Mejía, al igual de la colaboración de los

docentes de la Universidad de la Fuerzas Armadas ESPE especializados en el área de interés

como: Mónica Jadán PhD., Patricia Jiménez PhD., Blanca Naranjo; a cargo de las materias de

Proyecto integrador II A, Bioquímica II y Fitoquímica respectivamente, quienes van a otorgan

su ayuda, conocimiento y experiencia durante la realización de nuestro proyecto.

9.2 Técnica

Este proyecto es factible en cuanto a equipos de extracción y laboratorios de la

Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE para realizar la metodología antes mencionada,

únicamente se requiere hacer la reservación de cada laboratorio con anticipación y se tendrá el

acceso a los mismos; los insumos necesarios son aplicables dado que los procedimientos son

conocidos.

9.3 Económica

De acuerdo a un análisis exhaustivo con respecto a los costos de materiales, equipos,

reactivos, insumos, imprevistos y en caso que la universidad no facilite el laboratorio el costo

del proyecto tendría un valor total de: 2783.22

Materiales

11
Cantidad Descripción Precio Unitario Precio total

4 Caja de Guantes desechables 6.50 26.00

10 Algodón 2.00 20.00

15 Jeringuillas 0,75 11,25

60 Tubos de tapa roja 3.00 180.00

1 Recipiente de poliuretano 3.00 3.00

2 Tarro de alcohol 5.30 10.60

1 Piseta 27.00 27.00

2 Fundas de hielo 4.50 9.00

10 Caja de Papel para cromatografía 25,00 250.00

2 Gradillas 2.00 4.00

1 Caja de cristal de cromatografía 480.00 480.00

2 Desinfectante de manos 5.00 10.00

3 Mortero 16.00 48

Reactivo

1 Metanol 100.00 100.00

1 Acetato de Etilo 130.00 130.00

1 Reactivo de Benedict 95,87 95,87

12
1 Ácido pícrico 125,90 125,90

1 Kit de glucosa 40,70 40,70

Insumos

3 Paquete de etiquetas 1.50 4.50

4 Recipientes de eliminación 3.00 12.00

3 Bandejas para coloración 4.00 12.00

1 Rollo de papel toalla 3.50 3.50

2 Recipiente contenedor de muestras 15.00 30.00

sanguíneas

Otros

-- Movilidad -- 200.00

-- Alimentación -- 100.00

-- Gastos personales -- 200.00

Total estimado: 2133.32

Imprevistos: 6500,54 X 0,10= 550,05 650,05

Total 2783.32

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1. Cronograma

2018 – 2019
ACTIVIDAD MESES
ES
SEPTIEMBR DICIEMBR
ABRIL MAYO JUNIO JULIO AGOSTO
E
OCTUBRE NOVIEMBRE ENERO FEBRERO MARZO
E
Elección del
x
tema
Definición del
tema hipótesis,
planteamiento x
del problema y
justificación.
Elaboración
del marco x x
teórico
Finalización
x x
del perfil
Presentación
de informe x
final
Recolección de
x
muestra
Compra de
insumos x
necesarios
compra de
x
ratas

secado de
x
muestra

Maceración
con acetato de x
etilo

14
Obtención de
metabolitos x
secundarios

Fraccionamien
to de los
x
extractos
totales

Obtención de
x
terpenos

Evaluación del
efecto
biológico de
x x x x x
los metabolitos
extraídos en
ratas Wistar

Evaluación
x x x x
sanguínea

Elaboración
del informe x
final

Presentación
x
de resultados

Exposición x

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2. Bibliografía

Castillo, L. (2012). Glycemic levels in medical-educational. México D.F: Servicio Social

Instituto Nacional de Neurología y Neurocirugía “Manuel Velasco Suarez”.

De León, I. (2016). CARACTERIZACIÓN FISICOQUÍMICA Y EVALUACIÓN DEL

RENDIMIENTO DE ACEITE FIJO DE CACAO CRIOLLO (Theobroma cacao L.) A

ESCALA LABORATORIO UTILIZANDO LOS MÉTODOS DE MACERACIÓN

ESTÁTICA Y MACERACIÓN DINÁMICA CON REFLUJO. San Carlos: Universidad

San Carlos de Guatemala.

González, M. (2016). Alimentos funcionales obtenidos a partir de hongos nutraceuticos.

Pereira: Universidad tecnológica de Pereira.

Macedo, G. (2008). Hábitos alimentarios en adolescentes de la Zona Urbana de Guadalajara,

México . Guadalajara: Universidad de Guadalajara.

Yépez, M. (2017). Bebidas energetizantes. Quito: Sistemas Médicos USFQ.

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